毛囊单位体外保存及延期移植的可行性研究

中国协和医科大学
博士学位论文
毛囊单位体外保存及延期移植的可行性研究
姓名：***
申请学位级别：博士
专业：皮肤病与性病学
指导教师：李文忠;张国成
20040501
导师组成员
李文忠研究员
中国协和医科大学皮肤癍研究所
张溪成主任医师
中国协和医科大学皮肤病研究所
邢新主任医师、教授
上海第二军医大学长海医院整形外科
．、＾·，Ｊ－
爨疆螽
雄激素馁秃发是皮肤拜鹩常凳疾病。

自种天巾，香约５溅豹碧睦存在不黼程度莳举秃；在我鬻，有调查鼗示２５－５５爹静舅佳中其惹病率约为２７％（２２－４０％，视城市蕊定）。

由予本瘸豹发生主簧羿始予２０一３０舅佼，雨头发又是一个入健康、年轻和漭力酶象征，嚣潋容荔给悫者造成较大鼢番灌压力，蒸滚疗愿鳌遥蠡斟’。

磊前对箍激素性秃发豹治疗未要鸯药裙涪疗、禳戴穰发＿耱鑫体毛发移禳。

药貔治疗鲡蜀雏｛｝瓣雄黢（Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）豸ｌ辨耀２－潞戆米诺缝尔（Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）等，对早期轻、孛度患者番一定疹效，但停势艨巍垒发胬霹麓落，掰显药物存在一定戆鬻俸用。

对晚囊癃甥，药物治疗缺乏疗效。

戳滗发移蕴治疗秃发狠翠裁有擐学，缀其真正被写ｌ起鬟视黪是Ｏｒｅｎｔｒｅｉｃｈ（１９５９年＞攘遘鼹予雄激素性秃发夔捻疗之后。

尽羲，班罨囊攀位终奄发移禳恐爱霉手术效果较以翁熬移援方法有较大艟改戏；因为它傻愿。

≯更奎夔移楗耪（每令蓼植物只裳ｌ一３根荛发），移蕊磊豹结果簧热接近头皮毛发懿翕然形态，避兔了过去那秘以２—４毪摊酸“标准移援锈”（每令移植物含ｌＯ一２０撮穗发）移植后的不自然簇状毛发。

只要设计会理，毛囊单位笔发移植术可使绝大多数受术老满意（９８％以上）船１。

毽很显然，秘其它移接方法棚比，该手术方法更赞时间并且须有手术曼擞镜或解剖显微镜等设备张分糍毛囊单位移植物。

分离和植入
一千个发右这样的移植物约需４位手术者连续工作４—６小时Ⅲ，其中移植物的分离占了主要时间。

为了保证移被后的成活率，医生努力缩短移糠耪在体筹蠡孽时阕，王佟垂力较大，褥显诲多毛囊氇霆搡捧瓣匆忙而损伤；另一方瑟，医生在制作移植物时病人也要在手术室等候较长的时间“’。

如想～次植入三千个左右这样的移植物以获得较大的移植密度，或者当诊掰酶入ｊ受帮设备有限时，那么阕惩就甄蕊突癫。

一种设想是，如果毛囊单位能在体外特定琢壤下被保存较长时间，并鼠移植厥不明显影响其成活率，那么可开展所谓的延期毛发移植禾。

即可先将供区头皮切下，让韵芋在较究裕的时问内分离所需移攘耪，劳将之探存在一定的璎境中各用。

然舔，在遴兰兹隧谈诖卷学问来，豳手术医生将之植入。

这样每次手术只需一小时左右完成“１。

这样傲的意义有：１）可让医袋有较充裕的时间在盥微镜下仔细分离移檀豹，使毛囊分离时豹接臻率最小；２）搜萃次移禳大塞毛囊擎经（３千个左右）成为熨加可黥，只要患者有足够的供区毛发；３）对医生数网的要求降低，卜２个医生也可开展此术；４）使设备有限的诊所有谭麓借耢于其玄医院静设各蔼汗震既零；５）医生和患者的蹑力可明鼹减小；６）多余的毛囊可以褒一定的时闻内备用。

临床上，在４＂Ｃ下保存皮肤移植物供延期移植是经常应用的，而飘移植物可在冰箱中被保存２周以上“’。

倔和皮肤移植秘相比，滩囊鳇缝构更荛复杂，它是一令囊表皮一阕震复合体掬残豹微墼器富。

所以毛囊在体外保存较长时间后能番可以象皮肤那样保持活性有待实验证实。

２
中国扮零口医科大学博士学蛾论文
在影响港囊体矫保存的诸多因素中，保存溢度帮保存液是其中鞍羹瑟的函素。

对予添度，程西黎豁名发移丰盍手术中，一箴瞧要求将头皮和毛囊移植物鬻时谦存予低溢携环辘（１ｑ℃）戳降低筵体外代谢，傈诞移檬震静成活率。

Ｒａｐｏｓｉｏ等茹１替默罨囊器官蹬养豁方法院较了毛毵分瘸保存在ｌ℃帮室淀下（２６＂Ｃ）５，ｊ、爵籍的活萑，结聚成活率分鬟惫８７％Ｎ８８％，莰鸯锈显统计攀差彝，提示螽罨囊离俸时闽少予５，』、霹，就浚有登要俸常规静低溢裸存。

德穰显然，这个离俸谦存鹣时阉较瘥；麓着体舞铩存嚣雩滴酶延长，瀑度对毛囊潘注觞影噙痤当会运潦表溪宝采。

关予亳囊低灌下较长融瓣髂努豫存蕊磷宠掇遴军撼。

Ｋｕｒａｔａ等轴１黠在４。

Ｃ舔存不嚣簿霹詹豹燕囊以缨熬培莽（黾氯头及努摄鞘舞藏）耪甍囊器窿臻葵懿方法对箕滔往逶嚣了浮绩。

筵罴绦存？天意熬毛囊邈有砉§分可玻培葬熬强戆。

寄趣豹楚，德襄逐将裸襻了？天翡ｌｏ个毛囊接静墼；爨鬣髂态，ｓ个曩鬣毒６个毛囊或溪。

这提示毛囊熬搏努长期僳存黎廷甥移稽是有一定爵裁懿。

遗撼懿跫，链餐在擐鼠中禳入静琵囊数嚣太少，冀绩蒙缺乏最表性。

对予爨襻滚，Ｋｕｒａｔａ等“’琵较了擎令琶囊分别保存予生理盐水、Ｈａｎｋｓ滚、ＤＭＥＭ）ＮＲＰＭＩ－１６４０中不疑露翦怎熬溪牲。

终果毛囊雀保存２连Ｊ，ｊ、酵舞再嚣器宫培养孵，８０－－ｔ００％鲍毛囊喜继续生长熬现象，瑶显生长逮发接避正常毛发；堡篷囊雀保存４８小对以上基聂｛乍器官壤葬时，缝大多数毛囊不再毒生长现象。

安验没能褥擞结论哪一嵇保
存液较理想。

上述文献中，保存后毛囊的活能主要依据毪囊的细胞培养和器官培养，而强萁结果裔较大静不葡，特剐最在不同方法之间；更重要的是，它们均为体外实验，其结果尚有待体内实验加以评估和验证。

为此，我们拟在国、内外相关研究的基确上，戳裸鬣移植的方法为主，从保存溢度和保存液两个关键因素对毛囊单位的体外保存作进一步的探讨，为开麓延麓毛发移植的酉行性撬供实验依据。

参考文献：
１。

ＶｏｇｅｌＪＥ．Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｈａｉｒｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｓｕｒｇｅｒｙ．ＰＩａｓｔＲｅｃｏｎｓｔｒＳｕｒｇ１９９７；１００（７）：１８７５－１８８５．
２．ＢａｒｒｅｒａＡ．Ｍｉｃｒｏｇｒａｆｔａｎｄｍｉｎｉｇｒａｆｔｍｅｇａｓｅｓｓｉｏｎｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓａｆｔｅｒａｓｉｎｇｌｅｓｅｓｓｉｏｎ．ＰｌａｓｔＲｅｃｏｎｓｔｒＳｕｒｇ１９９７；１００（６）：１５２４．３．ＲａｐｏｓｉｏＥ，ＣｅｌｉａＡ，ＰａｎａｒｅｓｅＰ，ｅｔａ１．Ｐｏｗｅｒｂｏｏｓｔｉｎｇｔｈｅｇｒａｆｔｓｉｎｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓｕｒｇｅｒｙ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｅｗｓｔｏｒａｇｅｍｅｄｉｕｍ．ＤｅｒｍａｔｏｌＳｕｒｇ１９９８；２４（１２）：１３４２·１３４５．
４．ＫｕｒａｔａＳ，ＥｚａｋｉＴ，ＩｔａｍｉＳ，ｅｔａ１．Ｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｉｎｇｌｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓｐｒｅｓｅｒｖｅｄａｔ４ｄｅｇｒｅｅｓＣ．ＤｅｒｍａｔｏｌＳｕｒｇ１９９９；２５（１）：２６—２９．５．ＲａｐｏｓｉｏＥ，ＣｅｌｌａＡ，ＰａｎａｒｅｓｅＰ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｏｌｉｎｇｍｉｃｒｏｇｒａｆｔｓｉｎｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓｕｒｇｅｒｙ．ＤｅｒｍａｔｏｌＳｕｒｇ１９９９；２５（９）：７０５—７０７．
摘要
延期毛发移植可行性酶关键楚毛囊离体后皮在一定的时闻内维持糯当昀活性。

影响毛囊体井傈襻对活性的主要潮素怒保存温度移保存液。

本研究以缁胞培养帮裸鬣移植靛方法魄较了毛囊保存予室混（２６。

Ｃ）和低温（０帮４。

Ｃ）状鬣下，戳及在不淄保存液（椿格氏液和蕊Ｅ鹾）中不同时闻麓的潘性。

结果发现：
１）缳轰王一蕊篓…≤捧橇蔑滚童．≥一熬垂囊ｋ薹渣挂褒一墼．．叠煎悫隆羲燕京随禽缒延蕊丽逐潮！艟。

毛囊僚存６莘霹１２小时居，维熬培养显示分掰有９０．３％帮３４．７％翡毛囊存在活槛。

２）馕豢王．垒冀叠．４曼．＿＜．懿掩蕊濂圭．≥一静歪囊ｋ蓑溪！洼攮搀越趣撼藏攘蘸Ｌ援窿在．建：￡熬蓬囊蒸鎏陵灌查墨羔静曩囊。

毛囊探存２４，ｌ、露露，缁脆培养显示０４Ｃ鞠４４Ｃ组分爨寄９６％黎９２％（Ｐ＞０．ｔ）魏毛囊存在潘性；毽保存４８小露以上时，嚣组活蠖均ｊ憝速下降（ｐ＜０．０１一Ｏ。

０５）。

裸鼠移植蔑示，毛囊保存２４小黠磊褥移援到臻鼠时，英５个秀磊懿毛发成活率分剃为８５％和７９％（Ｐ＞Ｏ。

１）；保存４８小眩，１１３天恁，移植轰瓣毛发残漭率明显下蹲（ｐ＜Ｏ。

０ｌ—Ｏ，０５）。

３＞堡亳蓬蕊撬鑫竣蛰熬囊羲溪黢夔．孕娶建隧麓毫。

在林格氏滚襄ＤＭＥＭ保存２４小时鼷熬毛囊，缎您壤募显示，分别寿９４，２％琴１１８６，７％ｆＰ＜０．０１）熬篷囊存在矮牲；移植裂裸箴瓣，分别套８３。

６％积７２。

５％◇＜Ｏ。

０５）的毛囊在漂氯武残滔。

４）筵越蝥蘸垄＝燃！点裹妻蠢数癌盟取攫感凌。

在０。

Ｃ林格氏液
‘
中保存２４小时后的毛囊再回棱到人体的成活率为９６．４％（；．０６／１１０）。

绪论：毛笈移植时应尽鳖将移植物保存于Ｏ４Ｃ的林格氐液中。

延期毛发移檀在～定条传下霹选择应蹙，毽最妊在２４小时痰完成，最迟不能超过４８小时。

ＡＢＳＴＲＡＣＴ
Ｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｄｅｌａｙｅｄｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｓｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｐｒｅｓｅｒｖｅｄｈａｉｒｇｒａｆｔｓｍａｉｎｔａｉｎｓ．ａｔａｎａｃｃｅｐｔｅｄｌｅｖｅｌ。

Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｓｔｏｒａｇｅｍｅｄｉｕｍａｒｅｔｗｏｋｅｙｆａｃｍｒｓｗｈｉｃｈａｆｆｅｃｔｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｐｒｅｓｅｒｖｅｄｇｒａｆｔｓ。

Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｖｉａｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓｐｒｅｓｅｒｖｅｄａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓａｎｄｓｔｏｒａｇｅｍｅｄｉａｆｏｒｖａｒｉｏｕｓｐｅｒｉｏｄｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄｂｙｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｓａｎｄａｔｈｙｍｉｃｍｉｃｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ＋Ｗｅｆｏｕｎｄ：
１）墅曼．Ｙ趣壑羹瞧璺蟪躐窥鹣飘蒙濑剥遵壁建辫彗ｇ随燃ｌｏ￡２芟譬融Ｎ．ｎ．ｇｅ．ｒ＇．ｓ．ｓ．ｏ！．＿ｕｔｊｇ．ｎ１．如魁§最ｓ鲤．§赡Ｉ；【蛋盥．。

ｗｉ也ｉ骢．４一ｈ艘＃乳Ｏｕｔｅｒｒｏｏｔｓｈｅａｔｈｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｂｅｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎ９０．３％ａｎｄ３４．７％ｏｆｔｈｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓｗｈｉｃｈｈａｄｂｅｅｎｐｒｅｓｅｒｖｅｄｆｏｒｏｎｌｙ６ａｎｄ１２ｈｏｕｒｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ。

２）Ｈ曼延．如ｊ！ｉ曲趋．§Ｑｍ建．ｂ§．必黢刺融。

迫．№ｇ鳗蔓艘ｌ螈鹪，＃燃出．煳陧№照ｓ．ａｔ．ｊＱ腿ｔ，熙ｐ歙媳嘲一（．Ｑ一＿ｏｔ．生要）．．鞲凇§Ｙ％．．蝗．蛾幽ｉｌ通一Ｑ￡＿ｈ啦叠瑾ｉｉ照簦§ｓ端蕊．ａｔ。

受篓一臻兢．ｉ；疆辫．壤飙黛鲢照蔓篓，二Ｏｕｔｅｒｒｏｏｔｓｈｅａｔｈｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｂｅｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎ９６％（Ｏ℃）ａｎｄ９２％（４℃）ｏｆｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓｗｈｉｃｈｈａｄｂｅｅｎｐｒｅｓｅｒｖｅｄｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓ（ｐ＞Ｏ．１）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒａｔｅｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｂｏｔｈｔｗＯｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒｏｕｐｓ，ｉｆｔｈｅｆｏｌｌｉｃｌｅｓｈａｄｂｅｅｎｐ聪ｓｅｒｖｅｄｆｏｒ４８ｈｏｕｒｓｏｒｂｎｇｅｒ◇＜０。

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０５）。

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７
…．
一生旦塑塑匡型奎竺攫主兰塑然壅ｔｈｅｍｉｃｅ（ｐ＞０．１）．Ａｌｓｏ，ｔｈｅｒａｔｅｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｈａｒｐｌｙｉｎｂｏｔｈｔｗｏｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒｏｕｐｓｉｆｔｈｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｕｎｉｔｓｈａｄｂｅｅｎｐｒｅｓｅｒｖｅｄｆｏｒ４８
ｈｏｕｒｓｏｒ３ｄａｙｓ；ｂｕｔ巍ｅｒａｔｅｓｗｅｒｅａｌｓｏｈｉｇｈｅｒｉｎｔｈｅ０＊Ｃ
ｇｒｏｕｐ（ｐ＜Ｏ．０ｔｍ０．０５）．
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４）豫…ａｎ越垃撕媲．．－ｏｆ－一ｄｅｌ瓤ｅ．ｄ．．．＿ｈ瘦…．ｔ．ｒａｎｓ．Ｎ．ａ．．ｎ．ｔ．ａｔｊ．９．＿ｎ．…黼照～鱼黼矗§聪鳓§瓤强一璁。

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Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｒｉｎｇｅｒ’ＳｓｏｌｕｔｉｏｎａｔＯ＇Ｃｉｓｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｆｏｒｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｈａｉｒｇｒａｆｔｓｄｕｒｉｎｇｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓｕｒｇｅｒｙ＂，Ｖ～ｑｌｅｎｄｅｌａｙｅｄｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｓａｌｌｏｐｔｉｏｎ，ｉｔｓｈｏｕｌｄｂｅｔｔｅｒｂｅｃｏｍｐｌｅｔｅｄｗｉｔｈｉｎ２４ｈｏｕｒｓａｎｄｎｏｌａｔｅｒｔｈａｎ４８ｈｏｕｒｓ
中国协和医科大学博士学位论文第一部分：
毛囊单位的体外保存研究
９
阁１已经消毒和清洗的头皮。

阁２初步分离好的小头皮片。

参考文献：
１．ＫｕｒａｔａＳ，Ｅｚａｋｉ互ＩｔａｍｉＳ，ｅｔａ１．Ｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｉｎｇｌｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓｐｒｅｓｅｒｖｅｄａｔ４ｄｅｇｒｅｅｓＣ．ＤｅｎｎａｔｏｌＳｕｒｇ１９９９；２５（１）：２６—２９２．ＲａｐｏｓｉｏＥ，ＣｅｌｉａＡ，ＰａｎａｒｅｓｅＰ’ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｏｌｉｎｇｍｉｃｒｏｇｒａｆｔｓｉｎｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓｕｒｇｅｒｙ．ＤｅｒｒｎａｔｏｌＳｕｒｇ１９９９；２５（９）：７０５－７０７３。

ＲａｐｏｓｉｏＥ，ＣｅｌｌａＡ，ＰａｎａｒｅｓｅＢｅｔａ１．Ｐｏｗｅｒｂｏｏｓｔｉｎｇｔｈｅｇｒａｆｔｓｉｎｈａｉｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｕｒｇｅｒｙ．ＤｅｒｍａｔｏｌＳｕｒｇ１９９８；２４（１２）：１３４２＿１３４６
４，ＰｈｉｌｐｏｔｔＭＰ，ＳａｎｄｅｒｓＤＡ，ＫｅａｌｅｙＴ－ＷｈｏｌｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｃｕｌｔｕｒｅＤｅｒｍａｔｏｌＣｌｉｎ１９９６；１４（４）：５９５—６０７
第二节毛囊（单嫂）的分离窝擦存
一、主要设备
１．ＹＪ．８７５型医用净化工作台（苏州长桥净化设备厂）；
２．Ｘ．ＴＢ．Ｂ型双目解剖显微镜（桂林光学仪器厂，１０－－４０倍连续变焦）；
３．眼科显微持针器
４．不锈钢刀片；
５．１１号手术刀柄；
６．１１号无荫尖头刀片（韩国ＡＩＬＥＥ公司）
７．显微外科镊子；
２
８．眼科手术剪；
９．６Ｘ２ｃｍ小木板；
ｌＯ．玻璃培养瓶；
１１．１０００ｍｌ广口双朦傈漩稀；
１２．４＂Ｃ瞽通冰箱；
１３，电热数显恒溢水箱＜ＤＫ．６００登，上海精宏实骏设备有限公司）。

二、主要试剂
１．ＤＭＥＭ（ＰＡＡｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｕｓｔｒｉａ，含高葡萄糖、Ｌ．谷氨酸，不含丙酮酸钠；已经过滤消毒和内毒素测试）；
２．林格氏液。

三、方法
所有操作均在长海医院中心实验室的层流净化工作台内进行。

１。

分离
１）范囊单位豹分离：将小头皮片置于无菌小木扳上，以不锈钢刀片秘１１号刀片在１０倍解剖显微镜下，将其尽快分离成毪囊单位（只采用含ｌ一２个毛囊的毛囊单位），范囊有任何损伤的弃之不用。

分离过程中始终以林格氏液傻小木板保持湿润，以避免黾囊于燥。

２）尊个琵囊的改良分离法¨１：分离铰快捷，１小时可分离出１００个左右的毛囊，具体操作如下：
先将头皮切成３Ｘ１０ｍｍ大小的片段，然后用刀片在真皮和腊肪的交界她将皮肤层去除。

将含有毛球的脂肪组织块放在立体解剖显微
中国协和医科大学博士学位论文
镜下，切面向上。

可以发现毛囊的离断端从脂肪内突出，用小的镊子可以镊住毛囊的外毛根鞘，完整的毛球便可从脂肪内抽出。

分离过程中不能以镊子夹持毛干，以免毛囊受伤而严重影响其生长。

２．保存
将分离得到的毛囊或毛囊单位迅速保存于实验所设计的各种温度和保存液中。

保存温度为０。

Ｃ、４。

Ｃ或２６。

Ｃ。

保存液为林格氏液或ＤＭＥＭ。

０＂Ｃ由冰水混合物方法维持，可将盛放冰水混合物的保温杯再置于４。

Ｃ的冰箱，并需每隔１—２天向杯内添加少量的冰。

４。

Ｃ由普通冰箱提供。

２６。

Ｃ以电热匿温水箱维持。

参考文献：
１．ＰｈｉｌｐｏｔｔＭＰ，ＳａｎｄｅｒｓＤＡ，ＫｅａｌｅｙＴＷｈｏｌｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｃｕｌｔｕｒｅＤｅｒｍａｔｏｌＣｌｉｎ１９９６；１４（４）：５９５－６０７．
第三节毛囊外根鞘细胞培养
一、主要设备
１．ＹＪ一８７５型医用净化工作台（苏州长桥净化设备厂）
２．显微镊子；
３．２４孔一次性培养皿（美国）：
４．Ｃ０２孵箱（美国ＦｏｒｍａＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司，３１１１型）；
５．双目倒置显微镜（Ｌｅｉｃａ，配相机）；
中国协和隧科大学博士学位论文６．ＤＫ一６００型电热恒温数显水箱（上海精宏实验设备有限公司）：７．１０００ｍｌ广圈双层保温桶；
二、主耍试剂
１．Ｄ谶Ｍ（ＰＡＡｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ａｕｓｔｒｉａ；含高葡萄糖、Ｌ．谷氨酸，不含页醐酸钠；经过滤淤毒和内毒素测试）；
２．小牛血清（已灭活）；
３．髓胶（划埘ＲＥＳＣ０分装）；
４。

爱１％胰蛋爨酶；
三、方法
按照实验的设计，将在不同温度和保存液中保存了不同时间后的琵囊，分批分组地进行毛囊外根鞘细胞培养，以比较不同组毛囊的活往。

来翻闻一个病人静毛囊为一撬标本，需麓视分配蚕不阕缝静不蔺保存时象中。

壤养的舆体方法“＿３’如下：
在层流净化工作台内，笔囊先以Ｏ．１％胰蛋白酶处理３分钟，以去除其周围的缩缔组织（以改良法分离的毛囊不需要此步骤）；然后憋单个毪囊移入预先瑟涂毒了睡皎黪２４琵一次。

建塑料培葵霆，每建放毛囊一个。

每孔内含１．０ｍｌＤＭＥＭ培养基，并添加ｌＯ％ｄ、牛血清。

培养皿凝３７＂Ｃ含５％Ｃ０２和９５％空气的Ｃ０２孵箱。

统一于培养７天后，在倒置豢徽镜下瘸察毛囊羚檄鞘缨稳集落形成涛凌并馋露冀记录。

中国协和医科人学博士学位论文
圈３：无菌隔离系统中作裸鼠龟发移植。

图４：植入裸鼠前排列好的毛囊荦位。

中国协和瞵科大学博士学位论文
图５以毛发移植针将毛囊单位檀入裸鼠的皮下爨膜。

参考文献；
１，ＫｕｒａｔａＳ，Ｅｚａｋｉ薯ＲａｍｉＳ，ＴｅｒａｓｈｉＨ，ＴａｋａｙｕｓｕＳ．Ｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｉｎｇｌｅｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓｐｒｅｓｅｒｖｅｄａｔ４ｄｅｇｒｅｅｓＣ。

ＤｅｒｎａａｔｏＩＳｕｒｇ１９９９，２５（１）：２６—２９．
毛囊後不荐出现绍藏生长。

图ｌ：连囊纲骢撼莠时，终根鞘缨腿集落形成的情况
∞
％
跚
加
们
臻
Ｏ
６ｈ
表１．毛囊在４Ｖ和２６。

Ｃ的林格氏液中保存不同时间后作外根鞘细胞培养时可形成细胞集落的毛囊比例。

—～一生旦堕翌堡型查兰熊主兰垡堕塞
鹜１毛囊培莠时努毛校鞘纲稳集落形戒翡情况
表１．毛囊单位保存不同时间后细胞培养时的活性
１００
％
８０
６０
４０
２０
Ｏ
Ｏｈ２４ｈ４８ｈ３天５天７天
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图２Ａ保存盾的毛囊单位移植到裸鼠后５个月时的生长愤况
图２Ｂ从裸鼠中分离出来的毛发。

中国协和医科大学博士学位论文表２．保存不同时间后的毛囊单位移植到裸鼠后的毛发生长情况
附：表１原始数据和统计分析
０ｈ２４ｈ４８ｈ３ｄ５ｄ７ｄ
Ｏ＇Ｃ组１００９６８５６５２８９
（％）（１２０／１２０）（１１５１１２０）（１０２／１２０）（７８１１２０）（３４／１２０、（１１／１２０）４＂Ｃ组９２６０４２１５０
（％）见上（１１０／１２０）（７２／１２０）（５０／１２０）（１８／１２０）（０／１２０）ｆ／１．１４１７．５８１２．２０５．５２９．５３
Ｐ／＞０．１＜０．０１＜０．０１＜０．０５＜Ｏ．０ｌ附：表２原始数据统计分析
２４ｈ４８ｈ３ｄ７ｄＯ＇Ｃ组（％）８５６２３００
（１０６／１２５）（８０／１２９）（３５／１１６）（０１１６７）４＂Ｃ组（％）７９３９１６Ｏ
（９６／１２２）（４８／１２３）（１３／８１）（０／２２Ｉ）ｆ１，１６１２，４ｌ５．４６
Ｐ＞Ｏ．１＜Ｏ．０１＜Ｏ．０５
注：Ｏ＇Ｃ组有一只裸鼠死于术后３８天，内有５１个保存７ｄ后的毛囊４＂Ｃ组有一只裸鼠死于术后７８天，内有４５个保存７ｄ后的毛囊。

～！旦垫塑堕至！查堂堕主堂垡笙壅图１Ａ．保存于林格氏液的毛囊单位（移植前）
图１Ｂ．保存于ＤＭＥＭ的毛囊单位（移植前）
中国协和医科大学博士学位论文
图２．毛囊外根鞘细胞培养
１００
％
８０
６０
４０
２０
０
４８ｈ３ｄ５ｄ７ｄ
表１．保存于０。

Ｃ的林格氏液和ＤＭＥＭ不同时间后作毛囊外根鞘细胞培养时细胞集录形成比例。

——！里塑塑垦型奎兰堡主堂垡堕塞
图３Ａ．保存后的毛囊单位移植到裸鼠后５个月时的生长情况
图３Ｂ．从裸鼠中分离出来的毛发。

表２．在０。

Ｃ的林格氏液和ＤＭＥＭ中保存不同时间后的毛囊单位移植到裸鼠５个月后的毛发成活比例。

附：表１的原始数据
２４ｈ４８ｈ３ｄ５ｄ７ｄ
Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ（％）９４．２８２．５６２５２５．８８．３
（１１３１１２０）（９９／１２０）（７５／１２０）０１／１２０）（１０／１２０）
ＤＭＥＭ（％）８６．７６３．３３４．２１３．３２．５
（１０４１１２０）（７６／１２０）（４１／１２０）（１６／１２０）（３／１２０）ｆ３９１１．１６１９２９５．９５３９９
ｐ０．０４８０．００ｌ０．０００００１５０．０４６
附：表２的原始数据
２４ｈ４８ｈ３ｄ７ｄＲｉｎｇｅｒ’ｓ（％）８３．６６３９３１００
（１０２／１２２）（７６／１１９）（３５／Ｉ１３）（０，２１８）ＤＭＥＭ（％）７２．５３７．５１６９０
（８７／１２０）（４８／１２８）（２１／１２４）（０／２１１）ｆ４３６１７．１５６４６／
Ｐ０．０３７Ｏ００００．０１ｌ，。