大肠杆菌表达的重组人BMP-2和hBMP-4成熟肽大规模制备方法的比较

大肠杆菌表达的重组人BMP-2和hBMP-4成熟肽大规模制
备方法的比较
王涛;陈苏民;陈南春;赵伟钦;张晓楠
【期刊名称】《第四军医大学学报》
【年(卷),期】2006(027)018
【摘要】目的:大规模制备人骨形成蛋白成熟肽(hBMP-m):hBMP-4m和hBMP-2m.方法:两种工程菌株分别含有能够高表达hBMP-4m和hBMP-2m的质粒,分别导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵和诱导表达,离心收集菌体,悬浮所收集的菌体,裂菌,洗涤4次.预先取少量样品进行探索实验后,全部包涵体分别用8 mol/L尿素缓冲液溶解,上Sepharose SP-FF阳离子柱.结果:发酵菌液A600 nm 值分别为28.8和26.3.SOS-PAGE电泳后吸光度扫描表明hBMP-4m占细菌总蛋白量的40.0%,hBMP-2m占细菌总蛋白量的47.2%.洗涤4次后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的82.9%,hBMP-2m占蛋白量的84.5%.上Sepharose SP-FF阳离子柱后,分别收集0.35 mol/L NaCl和0.20 mol/L NaCl洗脱部分,获得纯度为96%的hBMP-4m及纯度为95%的hBMP-2m.其收获量分别为1.30 g/L发酵液和1.25 g/L发酵液;收得率分别为34.33%和34.81%.结论:大规模制备hBMP-4m和hBMP-2m时,使用相同的发酵程序及相近的纯化方法,都能够得到较好的收得率、较高的收获量和纯度.
【总页数】3页(P1652-1654)
【作者】王涛;陈苏民;陈南春;赵伟钦;张晓楠
【作者单位】第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西
安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033
【正文语种】中文
【中图分类】R392.33
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