微生物的实验室培养学案

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课题1:微生物的实验室培养（导学案）
高二生物组
目标导引
1.通过学习了解培养基的类型、营养成分以及如何制备培养基。

2.通过学习了解消毒
灭菌的原理和方法
3、通过学习你将知道如何用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养
问题指导
一、培养基:阅读课本培养基的相关内容，完成下列问题：
（1）这两种媒体是什么？两者的区别是什么？媒体的目的是什么？
（2）不同的微生物所需要的培养基配方相同吗？培养基的基本成分（主要营养物质）有哪些？为什
大多数媒体都需要这些基本组件吗？
（3）培养基除能为微生物生长提供几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物
生长的哪些要求？
（4）你知道牛肉提取物和蛋白胨能为微生物的生长提供什么营养吗？
二、无菌技术：阅读无菌技术的相关内容，完成下列问题：
（1）获得纯文化的关键是什么？无菌技术的核心是什么？主要有哪些方面？
（2）什么是消毒与灭菌？二者的区别？实验室常用的消毒方法、灭菌方法有哪些？
分别适用于那些用具？
（3）使用干热消毒箱对玻璃器皿进行消毒时，物品不能放置太拥挤。

目的是什么？
（4）请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。

如果需要，请选择合适的方法。

① 培养细菌的培养基和培养皿。

② 玻璃棒、试管、烧瓶和吸管。

③ 实验操作员的手。

④接种环、接种针和其他金属用具。

⑤ 接种室、接种箱、超净工作台⑥ 牛奶、啤酒、果酒等
（5）无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
（6）在丢弃之前，如何处理使用过的培养基？为什么？
三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
（一）阅读有关牛肉提取物蛋白胨固体培养基制备的教科书，思考并回答以下问题：（1）用牛肉提取物蛋白胨固体培养基纯化和培养大肠杆菌的两个阶段是什么？
（2）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤？
（3）称量牛肉提取物和蛋白胨时，我们应该注意什么？
（4）在进行溶化的操作时，加入水、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂的顺序是？为
什么在琼脂熔化的过程中要不断用玻棒搅拌？
（5）阅读倒置板操作的具体步骤，思考以下问题：
①培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？
② 为什么需要让锥形瓶口穿过火焰？
③平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
④ 在倒入培养皿的过程中，如果培养基不小心溅到了培养皿盖和培养皿底部之间，
培养皿还能用来培养微生物吗？为什么？
（二）阅读课本纯化大肠杆菌相关内容，思考回答以下问题：
（1）微生物接种的两种常见方法是什么？这两种方法接种疫苗的目的是什么？微生
物的接种技术是什么？这
些技术的核心是什么？
（2）阅读平面划线法的操作步骤，思考并回答以下问题：
①为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要燃烧接种环？在划线操作结束时，仍
然需要灼烧ａ．接种前用火焰灼烧接种环ｂ．接种前用酒精擦拭双手接种环吗？为什么？
② 烧掉接种环后，为什么要等到冷却后再划线？
③在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
（3）阅读系列稀释操作的步骤，思考如何处理使用的移液管？手术在哪里进行？
（4）阅读涂布平板操作的步骤，操作中要注意哪些问题？第2步应如何进行无菌操作？
（5）将接种培养基和未接种培养基放入37℃培养箱的目的是什么？
四、分析课题结果，思考回答以下问题：（1）怎样检验你制作的培养基是否合格？
（2）如何检查您的疫苗接种操作是否符合无菌要求？
（3）培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。

（4）我们为什么要保存菌株？哪些方法可以用来保存常用菌株？这种方法的缺点是什么？
而对于需要长期保存的菌种可以采用什么方法保存？
课堂基础训练
1、关于微生物的营养，说法正确的是()
a、作为碳源的材料不能同时作为氮源。

B.所有碳源都能提供能源。

C.除水以外的无机物质只提供无机盐。

D.无机氮源也可以提供能量。

2.制备牛肉提取物蛋白胨固体培养基的描述错误（）
a．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌b．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯c．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板d．待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置3、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法a．⑤③②①④⑥b．①②③④⑤⑥c．⑥②③④①⑤d．③④②①⑥⑤4、下列操作与灭菌无关的是()
c、将培养皿倒置，放入培养箱中培养。

D.接种应在酒精灯火焰旁完成。

5.板材标记的正确操作是（）
ａ．用已灭菌的接种环、培养皿、操作过程中不再杀菌
b、通过火焰灭菌打开含有细菌的试管，取出细菌后立即塞住棉塞。

C.迅速将染有细菌的接种环伸入培养皿中，画三到五条平行线。

D.最后，将盘子倒置放入培养箱进行培养
6、有关稀释涂布平板法，叙述错误的是()
a、首先，对细菌溶液B进行一系列梯度稀释。

在适当条件C下培养。

然后将不同稀释度的细菌溶液涂抹在琼脂固体培养基D的表面。

因此，培养基表面可以形成单一菌落
课后拓展训练
1.将接种培养基和未接种培养基放入37℃培养箱的目的是（）a.比较和观察培养基是否被微生物使用；B.比较分析培养基上是否有杂菌；C.无需放置未接种的培养基；D.下次接种时再次使用
2、金黄色葡萄球菌有很强的致病力，还可能引起食物中毒。

下述实验结束后的做法错误的是()
a、烧掉接种环B.接种后用肥皂洗手，用75%酒精棉球擦拭C.加热后倒出带菌培养基D.在高压蒸汽灭菌器中灭菌后倒出带菌培养基3。

高压蒸汽灭菌的原理是（）
a．高压使细菌dna变性b．高压使细菌蛋白质凝固变性c．高温烫死细菌d．高温使细菌dna变性
4.以下是一名学生在培养金黄色葡萄球菌实验中的一些操作步骤，正确的操作步骤是（）a.将牛肉提取物和蛋白胨溶解在培养基中后，直接加入蒸馏水，定容至100ml
b．用1mol/lnaoh，调节ph为5.0～6.0c．用高压蒸气灭菌锅对培养基灭菌ｄ．将接种环在酒精灯上燃烧后，马上伸入菌液中挑取少量菌种5、在一定条件下选取大量乳酸菌所需的条件是（）a．在有氧条件下，缺氮的培养基中，最好是固体培养基b．在有氧条件下，营养丰富的液体培养基中分离c．在无氧条件下，泡菜制作的发酵容器中d．在无氧条件下，变酸的葡萄酒中6、有关倒平板的操作错误的是（）
a、将灭菌培养基放在火焰旁边的桌子上B.使锥形瓶的开口快速穿过火焰C.打开培养皿，将培养皿的盖子倒置在桌子上D.等待盘子冷却凝固，然后倒置放置7。

镀膜板法声明中的错误是（）
a．用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀b．移液管需经过灭菌
c、试管口和移液管应距火焰1~2cm。

D.涂抹时，转动涂抹器，使细菌溶液涂抹均匀
8、为保持菌种的纯净，需对菌种合理保藏。

下列叙述中错误的是（）a.对于频繁使用的菌种，可采用临时保藏的方法b.临时保藏的菌种,一般是接种到试管斜面培养基上c.临时保藏的菌种,容易被污染或产物变异
d、对于长期保存的菌株，可采用低温-4℃保存的方法。