色谱条件的选择
正相色谱条件选择
正相色谱条件选择
正相色谱是一种常用的分离技术，其条件选择对于获得良好的分离效果至关重要。
以下是一些常见的正相色谱条件选择：
1. 流动相选择：正相色谱通常使用非极性溶剂作为流动相，如石油醚、氯仿等。
这些溶剂可以与样品中的极性化合物形成氢键，从而实现分离。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质和目标分析物的极性。
2. 固定相选择：正相色谱的固定相通常是具有不同孔径和表面积的硅胶或聚合物颗粒。
固定相的选择取决于样品的性质和目标分析物的分子大小。
较大的分子通常需要较大的孔径来容纳，而较小的分子则需要较小的孔径来实现更好的分离。
3. 柱温选择：柱温对于正相色谱的分离效果也有一定的影响。
较高的柱温可以提高样品在固定相上的扩散速率，从而加快分离速度。
然而，过高的柱温可能导致样品分解或固定相的降解。
因此，在选择柱温时需要权衡分离速度和样品稳定性。
4. 流速选择：流速决定了样品在色谱柱上的停留时间，从而影响分离效果。
较高的流速可以减少分析时间，但可能导致分离不完全。
较低的流速可以提高分离度，但会增加分析时间。
因此，在选择流速时需要根据样品的性质和分析要求进行平衡。
5. 检测器选择：正相色谱常使用紫外可见光检测器（UV-
Vis）或荧光检测器进行检测。
选择合适的检测器需要考虑目标分析物的吸收或发射特性以及检测器的灵敏度和选择性。
6. 进样量选择：进样量的大小会影响色谱图的分辨率和分离度。
过大的进样量可能导致峰形变宽和分离不完全，而过小的进样量可能降低检测灵敏度。
因此，在选择进样量时需要根据样品的性质和分析要求进行优化。
色谱条件的选择
选择色谱条件的方法
• 1．查文献，学习别人的方法 • 2．文献中没有的新药和新化合物可以使用结构类似化 合物的色谱条件 • 3．自己积累药物分析的色谱条件，从中寻找规律，尤 其是要总结解决问题的方法。把自己积累的方法用于 以后的色谱分析中。
不建议在自己对被分离物质的性质不了解的情况下，自己摸索色谱条件
糖的分离
分析条件：
色谱柱：NH2柱 （15cm× 6.0mm）
（硅胶键合 NH2柱）
流动相：乙腈/水（7/3） 流速：1.0ml/min 柱温：室温 检测器：示差折光 色谱峰：1.丙三醇 3.果糖 5. 蔗糖 7.乳糖 2.木糖 4.葡萄糖 6.麦芽糖
糖的分离
分析条件：
色谱柱：磺化聚苯乙烯Ca型柱 （30cm× 7.9mm） （分离机理为凝胶渗透＋配位交换） 流动相：乙腈/水（7/3） 流速：1.0ml/min 柱温：室温 检测器：示差折光 色谱峰：1.丙三醇 3.果糖 5. 蔗糖 2.木糖 4.葡萄糖 6.麦芽糖
分析条件：
色谱柱：NH2柱 （15cm× 6.0mm）
（硅胶键合 NH2柱，分配色谱）
流动相：乙腈/10mM磷酸缓冲液（pH＝2.6）（3/1） 流速：1.5ml/min 柱温：40℃
检测器：紫外（245nm）
色谱峰：1.异抗坏血酸 2.抗坏血酸
维生素E的分离
分析条件：
色谱柱：SiO2柱 （5cm× 4.6mm）
7.乳糖
色谱柱选择方法
维生素的分离
维生素分为水溶性维生素和脂溶性维生素 水溶性维生素： 维生素B，维生素C，维生素H，维生素P，泛酸等 脂溶性维生素： 维生素A，维生素D，维生素E，维生素K 分离方式： 和脂溶性维生素均可使用反相洗脱法分离。 一些脂溶性维生素可以使用分配色谱法分离
离子色谱分析条件的选择
离子色谱分析条件的选择引言离子色谱分析是一种常用的分析技术，广泛应用于环境监测、食品安全、药物研究等领域。
在进行离子色谱分析前，选择适当的分析条件对于保证分析结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍离子色谱分析条件的选择过程。
柱体的选择离子色谱柱是离子色谱分析的核心部分，它负责分离和保留待测离子。
在选择柱体时，需要考虑以下几个因素：1.样品类型：不同的样品对柱体的要求不同。
常见的离子色谱柱包括强阳离子交换柱、强阴离子交换柱、单一离子交换柱等。
根据样品中离子的性质，选择适合的离子交换柱。
2.pH条件：钟离子交换柱的分离效果与样品的pH值密切相关。
在选择离子柱时，需要根据样品pH值确定柱体的选择。
3.柱体长度：柱体长度影响分离效果和分析时间。
一般来说，柱体越长，分离效果越好，但分析时间也会相应延长。
在实际使用中，根据分离要求和分析时间的限制，选择适当长度的柱体。
流动相的选择流动相是离子色谱中负责运载离子并传递到检测器中进行检测的溶液。
流动相的选择需要考虑以下因素：1.离子强度：离子强度对分离效果有很大影响。
离子强度越大，分离效果越好。
在选择流动相时，需要注意离子强度的调节。
2.pH条件：流动相的pH值也会影响离子的分离效果。
根据样品的pH值选择合适的流动相pH。
3.溶剂选择：流动相的溶剂选择需要根据样品的性质来确定。
一般来说，常用的离子色谱流动相包括水、醋酸溶液、甲醇、乙腈等。
根据样品的特点选择合适的流动相溶剂。
检测器的选择检测器是离子色谱分析的重要组成部分，负责检测离子并生成信号。
在选择检测器时，需要考虑以下几个因素：1.检测灵敏度：不同的检测器对离子的灵敏度有所差别。
根据实际需求选择具有足够灵敏度的检测器。
2.选择性：检测器的选择性直接影响结果的准确性。
一般来说，离子选择性较好的检测器包括阳离子选择性检测器、阴离子选择性检测器等。
3.检测方式：常见的离子色谱检测方式包括电导检测、荧光检测、紫外检测等。
试述气相色谱法色谱条件的选择
试述气相色谱法色谱条件的选择
气相色谱法的色谱条件选择主要包括以下几个方面：
1. 色谱柱选择：色谱柱是气相色谱法的关键部分，合适的色谱柱应具有良好的分离性和高效性。
选择色谱柱时需要考虑样品的性质、分离目标和分析条件等因素，常用的色谱柱包括非极性柱、极性柱和选择性柱等。
2. 柱温选择：柱温是气相色谱法中一个重要的操作条件，它会影响样品在色谱柱上的保留时间
和分离度。
一般通过改变柱温来调节分离效果，通常柱温的选择要考虑到样品稳定性、分离度
和分离速度等因素。
3. 柱衬底选择：柱衬底可以提高色谱柱的稳定性和降低分析物对柱的吸附性，常用的柱衬底材
料有聚硅氧烷和聚脂木素等。
4. 柱流速选择：柱流速是指气相色谱法中气相流速的选择，它会影响分离度和分析时间。
一般
来说，柱流速越高，分析时间越短，但可能会影响分离度。
柱流速的选择要综合考虑分离度、
分析时间和样品浓度等因素。
5. 检测器选择：气相色谱法常用的检测器包括火焰离子化检测器（FID）、热导率检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。
选择合适的检测器要考虑到样品的性质、检测灵敏度和选
择性等因素。
综上所述，气相色谱法的色谱条件选择需要综合考虑样品的性质、分离目标、分析条件和实验要求等因素，通过合理选择色谱柱、柱温、柱衬底、柱流速和检测器等条件，来达到最佳的分
离和分析效果。
气相色谱法色谱条件的选择
气相色谱法色谱条件的选择
气相色谱法（Gas Chromatography, GC）是常用的一种分离和
定性分析方法，其色谱条件的选择对于分析结果的准确性和稳定性至关重要。
以下是一些建议的气相色谱法色谱条件的选择：
1. 色谱柱选择：根据分析物的性质选择合适的色谱柱，如非极性柱、极性柱、离子柱等。
需要注意柱长、内径和填充物粒径的选择，这些参数可以根据分离目标和分析物的性质进行优化。
2. 载气选择：常用的载气包括氮气、氢气和乙烷等。
选择载气时要考虑分析物的挥发性、稳定性以及色谱柱的耐受性等因素。
此外，压力和流速也是需要考虑的参数，可以根据柱长和类型进行调整。
3. 柱温选择：柱温对于色谱分离的效果和分析时间有很大影响。
一般情况下，柱温可以根据分析物的挥发性和热稳定性进行优化，一般在室温至300℃之间选择。
4. 检测器选择：常用的检测器有火焰离子化检测器（Flame Ionization Detector, FID）、热导率检测器（Thermal Conductivity Detector, TCD）、质谱检测器（Mass Spectrometry, MS）等。
选择检测器时要考虑分析物的性质以
及灵敏度、选择性等因素。
5. 标准品选择：根据分析物的特性和分析要求选择合适的标准品，可以是单一化合物的标准品、混合标准品或是内标法等。
综上所述，选择适合的色谱条件是确保气相色谱法分析准确性和稳定性的重要环节，需要综合考虑分析物特性和要求、色谱柱、载气、柱温、检测器和标准品等各方面因素进行优化。
hplc的色谱条件及测定方法 -回复
hplc的色谱条件及测定方法-回复HPLC (High Performance Liquid Chromatography) 是一种分析化学方法，常用于分离、分析和定量各种化合物。
它基于物质在液相中的分配特性，并通过色谱柱分离物质以便后续测定。
HPLC色谱条件的选择对于成功分析非常重要。
色谱条件包括三个主要方面：流动相、色谱柱和检测器。
首先是流动相的选择。
流动相既可以是液体也可以是气体，但在HPLC中常用的是液相。
常见的液相有溶液和溶剂。
溶液是较常用的流动相之一，它由一种或多种溶剂和所需浓度的溶质组成。
选择溶剂可以根据待测物的极性来决定，以便得到合适的保留时间和分离度。
典型的溶剂包括水、乙腈、甲醇、二甲醚等。
在选择时需要考虑溶剂的纯度、稳定性和可溶性等因素。
溶剂也是常用的流动相，特别适用于对气相化合物的分析。
在这种情况下，常用的气相包括氢气、氮气和氦气等。
与液相相比，气相色谱通常具有更高的分析速度和分离效果。
除了流动相，选择正确的色谱柱也是HPLC的关键。
色谱柱的选择取决于待测物的性质和目标分析。
例如，反相色谱柱适用于分离非极性物质，而正相色谱柱适用于分离极性物质。
其他类型的色谱柱包括离子交换色谱柱、凝胶色谱柱以及手性分离柱等。
最后，检测器的选择也是非常重要的。
常见的检测器包括紫外-可见光谱仪（UV-Vis Detector）、荧光检测器（Fluorescence Detector）和质谱仪（Mass Spectrometer）等。
需要根据待测物的性质和要求来选择适合的检测器。
在确定了HPLC的色谱条件后，需要进行测定。
下面是测定方法的步骤：1. 样品准备：首先需要将待测样品溶解在合适的溶剂中，以便在HPLC中进行分析。
可以根据样品的性质选择不同的溶剂并进行适当的稀释。
2. 样品注射：将样品溶液注入到色谱仪的进样器中。
注射量可以根据要求和仪器的规格进行调整。
3. 色谱运行：开启HPLC系统，调节流速和温度等色谱条件。
色谱分析条件的选择【PPT】课件
对于沸点范围较宽的试样，宜采 用程序升温，即柱温按予定的加热
速度，随时间作线性或非线性增加，
增加分离效果。
四.固定相 １.固体固定相－吸附剂 Al2O3 、 SiO2、无定形碳 吸附 ⇌ 脱附
强极性样品选择强极性固定相。 吸附剂必为多孔，表面均匀，吸附力强。
2.液体固定相——固定液＋担体 一般用吸附剂做担体，在担体表面 形成均匀液膜。 溶解 ⇌ 挥发 防止固定液流失，提高其表面积， 按相似相溶解原理选择固定液， 固定液所占固定相比例不能超过５％。
二.进样量、进样时间及气化浓度 进样量一般是比较少的。 液体式样，一般进样0.1~5μl.<10 μl 、用注射器 气体式样，0.1~10ml、一般为10ml、用六通阀。 进样量太多，会使几个峰叠在一起，分离不好。 进样量太少，检测器灵敏度不够，而不出峰。
最大的允许进样量，控制在峰面积 或峰高与进样量呈线性关系的范围内。 进样时间：越快越好。 气化温度：大于沸点，但要低于分解温度。 一般选择气化温度比柱温高30~70度。使 液体试样迅速气化后被载气带入柱内。
dH B 2 C 0 du u
u最佳 B C
图7-5塔板高度与载气线速的关系
U最佳=√B/C 将式代入式得
H 最小 A 2 BC
在实际工作中，为了短分析时间，往往 使流速稍高于最佳流速，u实略大于u最佳，可 加快分析速度。 对于填充柱，N2最佳实用线速为10～12cm/s H2 为15～20cm.s-1
五. 检测器 浓度型；质量型（破坏型） ； １. 热导检测器：TCD 根据不同物质导热系数不同。 不适合分析含水大的样品。 ２.氢火焰离子化检测器（FID）必须 用H2做载气。
３、电子捕获检测器（ECD） 灵敏度高。 放射源 β射线
hplc的色谱条件及测定方法 -回复
hplc的色谱条件及测定方法-回复HPLC的色谱条件及测定方法引言：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种广泛应用于药物分析、环境监测、食品分析等领域的分离技术。
本文将介绍HPLC的色谱条件及测定方法，帮助读者了解HPLC的基本原理和操作流程。
一、色谱条件的选择1.1 色谱柱选择HPLC的色谱柱是核心部件，直接影响分离效果和分析结果。
常用的色谱柱有反相柱、离子交换柱等，选择柱的关键在于样品特性和分析目标。
1.2 流动相选择流动相是指溶液或气体通过色谱柱时携带样品的流体。
常见的流动相有有机溶剂、纯水、缓冲液等。
在选择流动相时，需要考虑样品的溶解度、挥发性以及分离效果。
1.3 优化分离条件优化色谱条件是提高分离效果的关键。
可以通过尝试不同的色谱柱、流动相比例、采用梯度洗脱等手段，来优化色谱条件。
二、HPLC测定方法的建立2.1 样品制备样品的制备涉及到样品的提取、预处理、稀释等步骤。
要确保样品处理的准确性和可重复性，避免样品的损失和污染。
2.2 建立标准曲线标准曲线是通过一系列已知浓度的标准品制备，并经过色谱柱分离与检测得到的响应值和浓度的关系。
通过标准曲线可以得到样品中待测物的浓度。
2.3 保留时间的确定保留时间是指测定物质在色谱柱中停留的时间。
通过调整流动相和柱温等条件，可以获得该物质的准确保留时间。
2.4 定量分析定量分析是根据标准曲线和待测样品的响应值，计算出待测物质在样品中的浓度。
通过内标法、外标法等方法可以提高测定的准确性和可靠性。
三、HPLC测定方法的优化和验证3.1 方法的优化在建立分析方法的过程中，可以通过调整色谱柱、流动相、柱温等条件，来优化方法的选择和分离效果。
并使用质量控制样品和质谱等仪器进行方法的验证和验证。
3.2 方法的验证方法的验证是为了确定分析方法的准确性、可靠性和可重复性。
包括精密度、准确度、线性范围、灵敏度、特异性等指标的验证。
中药成分色谱条件
中药成分色谱条件中药成分色谱条件是指在色谱分析中，为了准确地测定中药中的有效成分，需要选择合适的色谱条件进行分析。
中药成分的复杂性和多样性使得色谱条件的选择非常重要，下面将介绍一些常用的中药成分色谱条件。
一、液相色谱条件液相色谱是一种常用的中药成分分析方法，其色谱条件包括流动相、柱温、检测波长等。
1. 流动相流动相是液相色谱中最重要的参数之一，常用的流动相包括甲醇、乙腈、水等。
在选择流动相时，需要考虑到中药成分的极性、溶解度等因素，以保证中药成分在色谱柱上的良好分离。
2. 柱温柱温是指液相色谱柱的温度，可以影响到中药成分的保留时间和分离度。
一般来说，较高的柱温可以提高中药成分的保留时间，但也可能导致峰形变宽或峰峰基线不稳定。
因此，在选择柱温时需要综合考虑中药成分的特性和分离效果。
3. 检测波长检测波长是指在液相色谱检测时所选择的波长。
常用的检测波长包括254nm、280nm等。
选择合适的检测波长可以提高中药成分的检测灵敏度和特异性。
二、气相色谱条件气相色谱是一种常用于挥发性成分分析的方法，其色谱条件包括进样方式、柱温、载气流速等。
1. 进样方式进样方式是指样品进入气相色谱柱的方式，常用的进样方式包括气相进样和液相进样。
在选择进样方式时，需要考虑到样品的性质和浓度，以保证中药成分能够充分挥发并进入气相色谱柱。
2. 柱温柱温是指气相色谱柱的温度，可以影响到中药成分的保留时间和分离度。
一般来说，较高的柱温可以提高中药成分的保留时间，但也可能导致峰形变宽或峰峰基线不稳定。
因此，在选择柱温时需要综合考虑中药成分的特性和分离效果。
3. 载气流速载气流速是指气相色谱柱中载气的流速，可以影响到中药成分的保留时间和分离度。
一般来说，较高的载气流速可以缩短中药成分的保留时间，但也可能导致峰形变宽或峰峰基线不稳定。
因此，在选择载气流速时需要综合考虑中药成分的特性和分离效果。
以上就是一些常用的中药成分色谱条件。
在实际应用中，根据具体的中药成分和分析要求，还需要对这些条件进行优化和调整，以获得最佳的分析结果。
色谱条件的选择
凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离 离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离 反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离 亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （二醇基水溶性凝胶柱， 蛋白质分析专用柱） 流动相：10mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ） 和0.1MNaCl 流速：1.0ml/min 柱温：室温 检测器：紫外（280nm） 色谱峰：1.谷氨酸脱氢酶 2.乳酸脱氢酶
核酸
用于分析核苷酸）
流动相：20mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ） 480mM磷酸缓冲液（ pH＝6.8 ） 梯度洗脱 流速：1.0ml/min 柱温：45℃ 检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.尿苷酸
3.腺苷酸
2.胞苷酸
4.鸟苷酸
5.尿苷二磷酸 6.胞苷二磷酸 7.腺苷二磷酸 8.尿苷三磷酸
9.鸟苷二磷酸 10.胞苷三磷酸
OH OH
腺嘌呤（核酸碱基）
腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）
腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）
腺嘌呤（核酸碱基）和腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）用阳离子交换柱或反相柱进行分离； 腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）用阴离子交换柱分离，选择合适的流动him-pak WAX－1 （5cm× 4.0mm） （叔氨基阴离子交换柱，
色谱柱的分类
3.根据色谱柱尺寸分类
（1）10cm～50cm内径为制备柱 （2）4cm～8cm内径为标准柱 （3）3cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱 （4）柱长一般为15cm、25cm、30cm；50cm一般用于制 备柱或特殊柱型，5cm一下为快速柱(包括预柱和保护 柱)
色谱柱选择方法
现代仪器分析--GC(5色谱条件选择定性定量).
(Ci ) 样 b（Ai） a 样
2018年9月18日星期 二 40
• 外标法优点： 外标法简便，不需要校正因子，它 适用于日常控制分析和大量同类样 品的分析。 外标法缺点： 进样量要求十分准确，操作条件也 需严格控制。
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(四)内加法
如无适宜的内标物,可以采用内加法。内加法又称叠加法。 可分为两种方法： 1.把待侧组分i的标准品加至待测样品溶液中，测定增加 标准品后的溶液比样品溶液中i组分的峰面积增量，计 算组分i的含量。
2018年9月18日星期 二 11
4. 载气的选 • 载气应用最多是H2、N2和 He气： 择
1. H2 特点：分子量小，热导系数大，粘度 小，在TCD上常用做载气；在 FID上做燃 气； 2. N2 特点：分子量大，扩散系数小，除了 TCD外，其它检测器多用做载气. 3. 氦气与H2性质类似，但安全，价贵
对内标物的要求是： ㈠ 样品中不含有内标物质； ㈡ 峰的位置在各待测组分之间或与之相 近； ㈢ 稳定、易得纯品； ㈣ 与样品能互溶但无化学反应； ㈤ 内标物浓度恰当，使其峰面积与待测 组分相差不太大。
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1.内标标准曲线法
选择一内标物质，以固定的浓度加入 标准溶液和样品溶液中，以抵消实验条件 和进样量变化带来的误差。内标法的校准 曲线,是用Ai／As对Ci作图，其中As为内标 物的峰面积。
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一.峰面积测量方法
峰面积测量的准确与否直接影响定量结果。对 于不同峰形的色谱峰采用不同的测量方法。 （1）对称形峰面积的测量——峰高乘半峰宽法 理论上可以证明，对称峰的面积 A=1.065×h×W1／2
2018年9月18日星期 二 21
色谱条件选择原则
1、液相色谱溶剂怎么选择2、流动相pH 值的选择3、检测波长的选择4、进样浓度的选择5、等度和梯度的选择6、流速的选择1、稀释液的选择答：由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。
因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。
对流动相溶剂的要求是：（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，溶剂不能与固定相互溶，能保证色谱柱的稳定性；必须能溶解样品，且不能产生强溶剂效应，所谓强溶剂效应是指：当样品进样时,有可能出现峰展宽,最佳的样品溶液组成和体积将会保持在10%甚至更低, ,当样品溶剂与流动相溶剂强度不同时,换句话来说，也就是样品未用流动相溶解,有些样品分子溶解在强溶剂（100%ACE）,并随强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,从而导致峰分叉或展宽。
（2）溶剂要与检测器匹配。
对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。
所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。
可以在网上搜索一下溶剂的紫外截止波长。
对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。
（3）高纯度。
由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。
不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。
痕量杂质的存在，将使截止波长值增加50〜100nm。
（4）化学稳定性好。
不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。
5）低粘度。
若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。
常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。
但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。
2、流动相pH 值的选择答：流动相的pH 应保证样品尽量处于一种状态（分子状态或者离子状态），若样品处于的几种状态会导致峰展宽甚至分叉。
以C18 柱做假设。
同时认为化合物在C18 上有较强的保留。
色谱条件选择原则
1、液相色谱溶剂怎么选择2、流动相pH值的选择3、检测波长的选择4、进样浓度的选择5、等度和梯度的选择6、流速的选择1、稀释液的选择答：由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。
因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。
对流动相溶剂的要求是：（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，溶剂不能与固定相互溶，能保证色谱柱的稳定性；必须能溶解样品，且不能产生强溶剂效应，所谓强溶剂效应是指：当样品进样时,有可能出现峰展宽,最佳的样品溶液组成和体积将会保持在10%甚至更低, ,当样品溶剂与流动相溶剂强度不同时,换句话来说,也就是样品未用流动相溶解,有些样品分子溶解在强溶剂(100%ACE),并随强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,从而导致峰分叉或展宽。
（2）溶剂要与检测器匹配。
对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。
所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。
可以在网上搜索一下溶剂的紫外截止波长。
对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。
（3）高纯度。
由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。
不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。
痕量杂质的存在，将使截止波长值增加50～100nm。
（4）化学稳定性好。
不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。
（5）低粘度。
若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。
常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。
但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。
2、流动相pH值的选择答：流动相的pH应保证样品尽量处于一种状态（分子状态或者离子状态），若样品处于的几种状态会导致峰展宽甚至分叉。
以C18柱做假设。
同时认为化合物在C18上有较强的保留。
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组分的挥发度↑，即被测组分在气相中的浓度↑，k↓，tR↓，低
沸点组份峰易产生重叠。
柱温↓，分离度↑，分析时间↑。对于难分离物质对，降低 柱温虽然可在一定程度内使分离得到改善，但是不可能使之 完全分离，这是由于两组分的相对保留值增大的同时，两组 分的峰宽也在增加，当后者的增加速度大于前者时，两峰的 交叠更为严重。
④醇、胺、水等强极性和能形成氢键的化合物的分离， 通常选择极性或氢键性的固定液。
⑤组成复杂、较难分离的试样，比（涂渍量）的选择
配比：固定液在担体上的涂渍量，一般指的是固定液
与担体的百分比，配比通常在5%～25%之间。
配比越低，担体上形成的液膜越薄，传质阻力越小，柱
L1
求出L2
5. 固定相的选择
气－液色谱，应根据“相似相溶”的原则
①分离非极性组分时，通常选用非极性固定相。各组分 按沸点顺序出峰，低沸点组分先出峰。
② 分离极性组分时，一般选用极性固定液。各组分按极 性大小顺序流出色谱柱，极性小的先出峰。
③分离非极性和极性的（或易被极化的）混合物，一般 选用极性固定液。此时，非极性组分先出峰，极性的（或易 被极化的）组分后出峰。
第三章 色谱条件的选择
choice of chromatographic operating condition
❖一、分离度的最佳化 ❖二、色谱柱参数选择 ❖三、操作参数的选择
理想的色谱条件： 在较短的时间内获得较高的分离度，同时还要具
有适当的柱容量。 色谱条件特点：
分离度、分析时间和柱容量三者之间相互制约。 色谱条件的选择依据：
柱长的选用原则是在能满足分离目的的前提下，尽 可能选用较短的柱，有利于缩短分析时间。 填充色谱柱的柱长通常为1－3米。 可根据要求的分离度通过计算确定合适的柱长或实 验确定。
柱长选择方法：先在一个已知长度L1的柱子上初步实 验测得一个R1值，然后根据要求的分离度R2利用下式：
L2
R22 R12
一般要比色谱柱内径大15－20倍以上，否则影响柱效。
柱效：直管>U形管>螺旋管
3、柱内径选择： 内径粗，固定相填充不均匀，A项大，峰扩展严重，
柱效低；柱内径细，峰尖，柱效高； 但柱内径太细会造成填充困难。 一般填充柱内径为：2－6mm，大多3－4mm。
4、柱长选择：
增加柱长对提高分离度有利(分离度R 2正比于柱长L) 但组分的保留时间tR↑,且柱阻力↑,不便操作。
配比 3％
7、载体（担体）的选择
1）粒度：粒度dp大
涡流扩散项A大，传质阻力项 Cg也大，柱效低； 粒度dp小
柱内阻力大， tR↑；
2）筛分范围： 筛分范围窄，载体粒度均匀，容易装填均匀，小，柱效高； 要求担体筛分范围20目。 粒度范围：60－80目（0.28-0.18mm）100目
三、操作参数的选择
理论塔板数如何增加，都不能实现理想分离。
反之，如果两个相邻峰的r21足够大，如r21＝2时，即使
峰扩展很严重，分离也能轻而易举地实现。
因此，当r21较小时，增大r21是改善分离度的最有效的
手段。
思考题：如何提高r21？ 在GC中， r21的大小主要取决于固定相的性质和柱温。
3、理论塔板数n有效对分离度R的影响 n有效增加，R提高，但分析时间延长。 n有效与固定相的性质、柱长及流动相的流速有关。
在色谱流出曲线上, 两峰间距离决定于相应两组分在两相间的 (1)保留值 (2)分配系数 (3)扩散速度 (4)传质速率
()
在气-液色谱分析中, 正确的说法是
()
(1)柱温只影响组分的气化与冷凝; (2)柱温只影响动力学因素
(3)柱温只影响热力学因素; (4)柱温影响动力学因素和热力学因素
在采用低固定液含量柱, 高载气线速下进行快速色谱分析时, 选用哪一 种气体作载气，可以改善气相传质阻力？为什么？
1. 载气种类的选择
载气种类的选择应考虑三个方面：载气对柱效的影响、检 测器要求及载气性质。 载气摩尔质量大，可抑制试样的纵向扩散，提高柱效。载 气流速较大时，传质阻力项起主要作用，采用较小摩尔质量 的载气（如H2，He），可减小传质阻力，提高柱效。 热导检测器需要使用热导系数较大的氢气有利于提高检测 灵敏度。在氢焰检测器中，氮气仍是首选目标。 在载气选择时，还应综合考虑载气的安全性、经济性及来 源是否广泛等因素。
不锈钢柱：坚固耐用、耐高温、耐压，便于同仪器连接；
但化学性质不够稳定，内表面不够光滑，可能与活泼样品 发生作用。
玻璃柱：化学性质稳定，内表面光滑，耐腐蚀，没有 催化效应，适用于分析酸类、含卤和腐蚀性化合物；
但易碎，安装和使用时均需小心。
聚四氟乙烯柱：耐腐蚀，易弯成任一形状，结实；
但不耐高温。
2、柱型及其选择： 填充柱有直管、U形管和螺旋管。 短柱一般用U形管；长管一般用螺旋管，但螺管直径
2. 载气流速的选择
由图可见存在最佳流速（uopt）。实际流速通常稍大于
最佳流速，以缩短分析时间。
H A B Cu u
dH du
-
B u2
C
0
uopt
B C
若忽略A项，则Hmin=2BC
3.柱温的确定
首先应使柱温控制在固定液的最高使用温度（超过该温 度固定液易流失）和最低使用温度（低于此温度固定液以固 体形式存在）范围之内。
分离参数选择一般规则： 首先调整容量因子k值至2－5，复杂混合物为1－10；
其次确定n有效值，即选择合适的固定相和载气流速；
最后再通过r21调整R。
二、色谱柱参数的选择
1、柱材质及其选择： 常见填充柱材质有：不锈钢、玻璃和聚四氟乙烯。
选择依据：样品性质（化学活性、腐蚀性等）、操作条 件（柱温、柱压）；
一般而言，首先要保证分离度和速度，其次是柱容量。
色谱条件选择方法： 理论估计和实验比较相结合。综合考虑确定。
一、分离度最佳化：使R在1.0~1.25范围内
依据:
R＝ n理
4
r21 -1 k r21 1+k
1、容量因子k对分离度R的影响:
时，k1增＋k大k，趋1＋近k 于k 1增，加其，对则分R离增度加影，响但变当小k增，大因到此一容定量程因度子 没必要太大。另一方面，且k增大时，保留时间增长，谱带
效越高，分析速度也越快。
配比较低时，固定相的负载量低，允许的进样量较小。
分析工作中通常倾向于使用较低的配比。
固定液选择要考虑担体表面积和样品沸点，一般
低沸点或气体 样品
配比15％～25％
沸点100C-200C 样品 配比 10％～15％
沸点200C-300C样品 配比5％～10％
沸点 300C样品
液体试样采用色谱微量进样器进样，规格有1μL， 5μL，10μL等。
进样量应控制在柱容量允许范围及检测器线性检测 范围之内。进样要求动作快、时间短。
气体试样应采气体进样阀进样。
在气相色谱分析中, 相邻两组分的分离度与下列哪些参数无关?
(
)
(1)塔板高度(2)塔板数 (3)固定相量(4)检测器灵敏度
50C-100C，即约200C ； 样品沸点300C-450C ，柱温取平均沸点温度以下
150C-200C，即约250C ；
程序升温
4.气化温度的选择
色谱仪进样口下端有一气化器，液体试样进样后， 在此瞬间气化；
气化温度一般较柱温高30－70°C 防止气化温度太高造成试样分解。
5.进样方式和进样量的选择
柱温一般选择在接近或略低于组分平均沸点时的温度。
组分复杂，沸程宽的试样，采用程序升温。
柱温选择一般原则： 1）根据检测器性质选择：色谱柱与检测器处于同一个腔 体中时，T，TCD热丝电阻R，检测器灵敏度S ，因此， 使用TCD时柱温应低些。 2）根据固定液配比选择： T，有利于传质，固定液配比 可大些，反之亦然。 3）根据载气流速选择： T，纵向扩散加剧，应增大载气 流速，以抑制纵向扩散。 4）根据样品沸点选择： 样品沸点100C-200C ，柱温取平均沸点温度，150 C ； 样品沸点200C-300C ，柱温取平均沸点温度以下
一气相色谱柱的操作条件如下：
载气流速 FC (25℃) 40.0 mL/min
柱温
122℃
进口压力 pi
143988Pa
出口压力 p0
102658Pa
保留时间 t (min) 空气 0.24 苯 1.41 甲苯 2.67
乙苯 4.18 异丙苯 5.34
固定液体积 Vs(122℃) 14.1 mL
试计算： (1) 每一种物质的校正保留体积 VR'；
加宽，色谱峰检测难度加大。
结论：一般k=1－10即可，最佳值为2－5。
容量因子调节：
k
组分在固定相中的质量 组分在流动相中的质量
ms mM
容量因子与固定相的性质、厚度及柱温有关。
选择与样品之间作用力大的固定相，k大；
固定液液膜增厚， k增大；
温度降低， k增大；
2、相对保留值r21对分离度R的影响
r21增大，R提高，
r21从1.001
增大了300倍。
1.500，r21r21-1
从10-3
0.333，
思考题： 对于一个分析任务r21越大越好吗？
r21趋近于1时，需要的理论塔板数很大，而r21稍微增
n 大， 有效即可大幅度下降，即柱效提高。
一般当r21<1.1时，首要问题是设法增加r21，否则不管
(2) 每一种物质的分配系数 K；
(3) 每一对相邻组分的相对保留值2,1； (4) 如果这些组分都能完全分开，柱的有效理论塔板数至少是多少？