PNH

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2014-PNH诊疗常规(林艳娟组)

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）诊断与治疗规范福建医科大学附属协和医院血液科福建省血液病研究所一、PNH定义及发病机制：阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH) 是一种由于体细胞Xp22.1上PIG—A基因突变导致获得性造血干细胞克隆性疾病。

发病机制：造血干细胞PIG—A基因突变，使部分或完全血细胞膜糖化磷脂酰肌醇（plycophosphatidyl-inositol，GPI）锚合成障碍，造成血细胞表面GPI 锚连蛋白缺失（该等锚连蛋白有多种，主要为补体调节蛋白C3转换酶衰变加速因子(DAF，CD55)和反应性溶血膜抑制物(MIRL，亦称膜攻击复合物抑制因子，CD59)缺乏）。

细胞灭活补体等能力减弱，从而引起细胞容易被破坏，发生溶血等。

临床主要表现为不同程度的发作性血管内溶血、阵发性血红蛋白尿、骨髓造血功能衰竭和静脉血栓形成。

二、PNH的诊断（一）筛查PNH克隆的指征(1)无明显原因的血管内溶血性贫血：尤其有Hb尿，含铁血黄素尿；(2)不明原因的溶血伴有缺铁性贫血，补铁治疗效果不佳；胆石症伴缺铁性贫血(3)Coombs试验阴性的溶血性贫血，伴缺铁和乳酸脱氢酶(LDH)升高；溶血性贫血伴反复发作咽下困难或疼痛、腹痛和胃肠道症状；(4) 骨髓衰竭症：AA、MDS的患者；不明原因的血细胞减少症；(5)反复发作的静脉血栓，以少见的肝静脉、肠系膜静脉、脑静脉、皮肤静脉血栓形成，特别伴有血细胞减少或血管内溶血；（二）诊断PNH的实验室检测项目1、常规检测项目1)血常规及凝血功能；2)多部位骨髓穿刺检查；骨髓活检3)生化全套4)甲状腺功能5)病毒学检测（肝炎、EB、CMV等）6)贫血测定7)尿常规和尿含铁血黄素试验8)风湿免疫性疾病相关抗体9)血清EPO水平10)细胞遗传学11)血浆游离血红蛋白和结合珠蛋白水平12)特异性补体溶血试验：Ham试验、糖水试验、蛇毒因子溶血试验、微量补体敏感试验；13)流式细胞术检测外周血成熟红细胞和成熟粒细胞CD55和CD59有无缺失，CD59敏感度高于CD5514)影像学检查（胸部X线或CT、腹部B超）和心电图。

PNH 11.23

诊断和鉴别诊断
二、鉴别诊断
1. 再生障碍性贫血
AA特点：全血细胞减少，网织红细胞减少，骨髓有核细胞增生减低，约30-40%的AA可伴PNH克隆。
PNH特点：PNH为慢性血管内溶血病，可有血红蛋白尿，可全血细胞减少，网织红细胞增多，骨髓增生活跃，以红系增生为主，血管内溶血的证据， CD55/CD59减缺细胞比例大于10%。
慢性肾功能衰竭可发生在血红蛋白尿后数年，由以下原因所致：（1）血色素和铁所致的肾小管坏死（2）肾静脉血栓致肾脏灌注减低（3）色素管型导致肾小管阻塞
临表现
二、血细胞减少可以是一系、两系或全血细胞减少。血细胞的减少可由血细胞的破坏及骨髓造血衰竭所致。贫血：以贫血为首发症状占56.7%。程度不同。
溶血、造血衰竭和铁丢失均可导致贫血。感染：中性粒细胞减少；粒细胞功能缺陷所致。出血：血小板减低。
三、血栓
临床表现
部位：血栓发生患者预后极差。可发生在典型和不典型部位。常发生于肝静脉，其次为肠系膜、脑静脉及下肢深静脉，也可发生在动脉。
症状体征：腹腔静脉血栓：腹部肿胀，腹水，黄疸，腹痛。脾静脉血栓：脾区疼痛,血小板突然下降。脑静脉血栓：头痛,视力变化，言语困难，肌张力下降，。
体核型异常，骨髓原始细胞比例增多（5-19%）。 PNH-MDS综合征：部分MDS病人可检测到PNH克隆（CD55/CD59减缺细胞）。
PNH病人也可转化为MDS。
AA-PNH-MDS相互关系图
AA
AA-MDS综合症低增生MDS意义不明血细胞减少症
PNH MDS
AA-PNH综合症 AA-PNH-MDS综合症 PNH-MDS综合症
确立溶血的病因及鉴别诊断确立是否存在溶血及溶血部位确立是否存在贫血

PNH

阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）是一种获得性造血干细胞良性克隆性疾病，产生的成熟红细胞膜存在缺陷，对补体异常敏感而被破坏，引起血管内溶血。

阵发性睡眠性血红蛋白尿，简称PNH，是一种获得性红细胞膜缺陷引起的慢性溶血。

其特点为常在睡眠后解酱油色或葡萄酒色尿。

可伴全血细胞减少、感染和血栓形成。

本病虽少见，但近年来有增多趋势。

我国北方多于南方。

半数以上发生在20-40岁青壮年。

男性多于女性，与遗传及种族无关。

本病起病隐袭缓慢，呈慢性过程，以贫血、出血为首发症状者较多，以血红蛋白尿起病者较少。

且本病可与再生障碍性贫血相互转化。

中位数生存期约10年，也有长达20年以上。

治疗主要为对症及支持治疗，防治并发症。

国内患者主要死亡原因为出血及感染。

PNH患者的护理措施1、在重型期，病人严格卧床休息。

在病情稳定后可适当活动。

2、注意饮食的选择：宜选择高蛋白、富含维生素、易消化的食品。

高热或消化道出血病人应选择无渣半流或流质饮食，如稀饭、面条等。

消化道大出血时应禁食。

3、注意做好心理护理：一般病人的精神负担重，做好心理护理至关重要。

病人亲属及医护人员要关心体贴病人，鼓励病人树立战胜疾病的信心。

做好仔细耐心的解释工作，使病人主动配合治疗及护理工作。

4、注意保持口腔清洁：嘱病人饭后漱口，多饮水，必要时用含抗生素的漱口液。

若口腔内有溃疡或炎症可局部涂抹药膏。

5、搞好病人的清洁卫生工作：因出汗、发热、皮肤可并发疖肿，应注意皮肤的清洁卫生，勤给病人洗澡，更换内衣。

长期卧床病人应定时翻身，以防止褥疮发生。

临床表现1.睡眠后酱油样或葡萄酒色尿发作史。

2.贫血及出血，出血少见且轻。

3.感染和发热。

4.黄疸、肝脾轻度肿大。

5.血栓形成。

诊断依据一、ＰＮＨ诊断标准：1.临床表现符合ＰＮＨ。

2.实验室检查：酸化血清溶血试验（ＨAｍ试验）、糖水试验、蛇毒因子溶血试验、尿潜血或尿含铁血黄素试验中凡符合下述任何一种情况，即可诊断。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断与治疗中国专家共识

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５３－２７２７．２０１３．０３．０２４
及疗效。例如将ＰＮＨ红细胞根据ＣＤ５５、ＣＤ５９的缺乏程度可以分为三型：Ｉ型（补体敏感度正常）、Ⅱ型（中度敏感）、
通信作者：邵宗鸿，Ｅｍａｉｌ：ｓｈａｏｚｏｎｇｈｏｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｎ
万方数据
guide.Байду номын сангаас
注：Ｇ：粒细胞；Ｍ：单核细胞；ａ分子标志用于检测ＧＰＩ锚链蛋白缺乏的细胞，其余分子标志用于设门。具体荧光选择可以不同，不同试剂荧光颜色也可以不同。４色、５色、６色的检测方式敏感性高，效果良好，如ＦＬＡＥＲ／ＣＤ２４／ＣＤｌ５／ＣＤ４５。如对单核及粒细胞进行５色分析，则需要准备２个试管。如以ＣＤ４５／ＣＤｌ５／ＳＳＣ标记通常可区分粒细胞与单核细胞，但若更好在分选单核细胞则需要准备另一支试管进行ＣＤ３３设门。ＰＮＨ：阵发性睡眠性血红蛋白尿症
史堡直渲堂苤查！！！！生！旦筮丝鲞笠！塑垦！也』旦！坐！！！！：丛！堡！！！！！：！！！：丝。盟旦兰
・标准与讨论・
阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断与治疗中国专家共识
中华医学会血液学分会红细胞疾病（贫血）学组
为进一步提高我国阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）的诊治水平，中华医学会血液学分会红细胞疾病（贫血）学组在广泛征求有关专家意见的基础上，参考国内外有关文献，达成以下我国ＰＮＨ诊断和治疗共识。一、ＰＮＨ定义及发病机制ＰＮＨ是一种由于体细胞ｘｐ２２．１上ＰＩＧ—Ａ基因突变导致的获得性造血干细胞克隆性疾病。其发病机制包括造血干细胞ＰＩＧ—Ａ基因突变，使部分或完全血细胞膜糖化磷脂酰肌醇（ｄｙｃｏｐｈｏｓｐｈａｌｉｄｙｌ—ｉｎｏｓｉｔｏｌ，ＧＰＩ）锚合成障碍，造成血细胞表面ＧＰＩ锚连蛋白缺失，细胞灭活补体等能力减弱，从而引起细胞容易被破坏，发生溶血等。临床主要表现为不同程度的发作性血管内溶血、阵发性血红蛋白尿、骨髓造血功能衰竭和静脉血栓形成。二、ＰＮＨ诊断（一）筛查ＰＮＨ克隆的指征１．以血红蛋白尿、尿含铁血黄素阳性和（或）血清游离血红蛋白增高为主要表现的血管内溶血。２．无法解释的溶血伴有铁缺乏、腹痛或食管痉挛、血栓栓塞、血小板减少和（或）白细胞减少。３．Ｃｏｏｍｂｓ试验（一）、无明显肝脾肿大、极少见红细胞碎片、非感染性溶血性贫血。４．骨髓衰竭症：①怀疑或确诊的再生障碍性贫血或低增生性贫血；②难治性血细胞减少伴一系发育异常；③不明原因的血细胞减少症。５．不同寻常的血栓形成：①非常见部位血栓形成：肝静脉（Ｂｕｄｄ—Ｃｈｉａｒｉ综合征）、其他腹腔内静脉（门静脉、脾静脉等）、海绵窦、皮肤静脉；②伴有溶血征象的血栓形成；③伴有全血细胞减少的血栓形成。（二）需常规随访ＰＮＨ克隆的患者确诊ＰＮＨ患者，应常规监测ＰＮＨ克隆变化，若病情稳定，可每年监测１次；出现任何临床或血液学参数变化时应缩短监测间隔。出现溶血和血栓，若可靠的实验室检查未证实ＰＮＨ克隆存在，则无需密切监测ＰＮＨ克隆。（三）诊断ＰＮＨ的实验室检测项目１．常规检测项目：（１）血常规及凝血功能：红细胞计数、血红蛋白含量、网织红细胞百分比；白细胞计数、血小板计数；成熟红细胞形态［有无异形和（或）红细胞碎片］、有无幼稚红细胞。血浆纤维蛋白原、Ｄ一二聚体水平等。（２）多部位骨髓穿刺：至少包括髂骨，若髂骨骨髓增生不良，应进行胸骨穿刺。骨髓涂片分析：造血组织增生程度；粒、红、淋巴细胞形态和不同阶段百分比；巨核细胞数目和形态；／Ｊ、粒造血细胞面积；是否有异常细胞等。（３）骨髓活检：至少取２ｃｍ骨髓组织（髂骨）标本用以评估骨髓增生程度、各系细胞比例、造血组织分布情况，以及是否存在骨髓浸润、骨髓纤维化等。（４）肝功能：特别是血清胆红素（直接、问接）水平及血清乳酸脱氢酶水平。（５）肾功能、甲状腺功能、电解质以及病毒学检查（包括肝炎病毒、ＥＢＶ、ＣＭＶ等）。（６）血清叶酸和维生素Ｂ１２水平。（７）尿常规检查及尿含铁血黄素试验（实际检测的是脱落的肾小管上皮细胞中的含铁血黄素）。（８）风湿免疫性疾病相关抗体。（９）血清ＥＰＯ水平。（１０）细胞遗传学：常规核型分析，必要时进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）以及遗传性疾病筛查（儿童或有家族史者推荐做染色体断裂试验）。（１１）血浆游离血红蛋白和结合珠蛋白水平。（１２）特异性补体溶血试验：Ｈａｍ试验、糖水试验、蛇毒因子溶血试验、微量补体敏感试验，这些试验敏感度和特异度均不高。（１３）流式细胞术检测外周血成熟红细胞和成熟粒细胞ＣＤ５５和ＣＤ５９有无缺失：目前已经发现了２０余种蛋白在ＰＮＨ患者血细胞表面表达缺乏，如衰变加速因子（ＤＡＦ，ＣＤ５５）、反应性溶血膜抑制物（ＭＩＲＬ，ＣＤ５９）、Ｃ８结合蛋白（ＨＲＦ）、内毒素受体（ＣＤｌ４）、低亲和力Ｆｃ受体（ＣＤｌ６）及尿激酶型纤溶酶原激活剂受体（ｕＰＡＲ，ＣＤ８７）等。应用流式细胞术检测ＧＰＩ锚连蛋白缺失细胞数量是诊断ＰＮＨ最直接、最敏感的方法。ＰＮＨ克隆累及造血细胞依次为粒细胞、单核细胞、红细胞、淋巴细胞，骨髓ＰＮＨ克隆出现比外周血早，网织红细胞略早于成熟红细胞。建立ＰＮＨ诊断至少有一系及以上细胞的两种ＧＰＩ锚连蛋白缺失。ＣＤ５９敏感度要高于ＣＤ５５，ＣＤ５９一粒细胞可最早被检出，有早期诊断价值，且不受输血影响。对ＰＮＨ克隆锚连蛋白的不同缺失程度进行量化，可以对ＰＮＨ进行分型，以便进一步了解并监测病情进展

7.中国PNH疾病登记研究10152014

International PNH Interest Group (I-PIG) – provides guidelines on diagnosis and management of PNH
References: 1. Borowitz MJ et al; Clinical Cytometry Society. Cytometry B Clin Cytom. 2010;78:211-230. 2. Parker C et al; International PNH Interest Group. Blood. 2005;106:3699-3709.
FLAER- GPI Anchor Binding Marker
80.1% of granulocytes lack GPI proteins
References: Data Source: Dahl-Chase Diagnostic Services.
CD59 – GPI Anchored Protein
References: 1. Borowitz MJ et al; Clinical Cytometry Society. Cytometry B Clin Cytom. 2010;78:211-230. 2. Parker C et al; International PNH Interest Group. Blood. 2005;106:3699-3709.
• 全球发病率仅为1.3/百万人口 • 一个患者承担着其他一百万健康人群的风险 • 我国北方牡丹江地区1985-1994年流行病学调查显示：PNH发
病率仅为每百万人口中1.3-2.8人，患病率为每百万人口9.1人
3
阵发性睡眠性血红蛋白尿症: 一个慢性破坏性、威胁生命的疾病

PNH-阵发性睡眠性血红蛋白尿的流式细胞术检测解读

做20~30份正常人血样划定阳性区（Ⅰ区）范围同型阴性对照界定Ⅲ区范围，中间的区域即为Ⅱ区。
根据CD59可以将PNH细胞分为3型 1型细胞 CD59完全阳性正常细胞 2型细胞 CD59部分阳性补体中度敏感细胞 3型细胞 CD59完全阴性补体敏感细胞

意义
PNH 克隆见于淋巴增殖性疾病
检测病种 NHL HD CLL ALL HCL 例数 87 55 红细胞 CD55/CD59 49 缺失检率 9.2% 22 4
(Hematol J 2001，2: 33)
PNH克隆见于浆细胞病
检测红细胞 CD55/CD59 缺失
病种检测例数 MM 62 WM 7 MGUS 6 HCD 2 合计 77 缺失例数 (%) 6 2 1 1 10 (12.9%)
(Int J Hematol 2002, 75 :40)
FLAER
嗜水气单胞菌溶素变异体(FLAER)。 1998年Diep等报道嗜水气单胞菌(HEC)毒素能特异地与细胞膜上GPI锚连蛋白结合，随后立即聚合成多具体，插入细胞膜脂质双层，在膜上形成孔洞致溶破。 PNH细胞缺乏GPI蛋白而抵抗毒素保持细胞完好。
李智伟
PNH
(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria)
是一种罕见的获得性克隆造血干细胞疾病。但近年来有增多趋势。我国北方多于南方。半数以上发生在20-40岁青壮年。男性多于女性，与遗传及种族无关。本病起病隐袭缓慢，呈慢性过程，以贫血、出血为首发症状者较多，以血红蛋白尿起病者较少。
相当密切，可以相互转化且并存 AA→PNH较多(15%)，PNH→AA少 20%`~30% PNH可伴骨髓再障 AA(ATG治疗后)→PNH 10~31% AA-PNH综合征 16.5%(我国) 50%AA外周血或骨髓可检出PNH克隆 AA→PNH 生存率要高于PNH→AA MDS-RA 如捡出PNH克隆者预后好，且ATG(人胸腺细胞免疫球蛋白)治疗有效。 PNH对AA和MDS的“自然治疗”，而“AA救了 PNH” 。

pnh肾损害

陕西省中医医院肾病科
并发症
感染血栓胆石症、慢性胆囊炎、胆汁性肝硬化肾衰竭输血性血色病、白血病、淋巴瘤、骨髓纤维化 PNH AA
陕西省中医医院肾病科
实验室检查
血象：全血细胞减少，网红轻中度增高骨髓：增生活跃，部分患者似再障表现，骨髓铁减少或缺乏尿：隐血阳性，尿含铁血黄素试验（Rose试验）阳性特异血清学试验：筛选试验——糖水试验确诊试验——酸化血清溶血试验（Ham试验）辅助试验——热溶血试验，蛇毒因子溶血试验测定补体调节蛋白CD55、CD59，CD59-＞5%为异常
陕西省中医医院肾病科
肾小管管腔内大量脱落细胞碎片（PAS 染色，×400）
陕西省中医医院肾病科
陕西省中医医院肾病科
间质弥漫性重度纤维化（MASSON 染色，×200）
陕西省中医医院肾病科
治疗原则
一般治疗原则消除诱因药物治疗原则
消除异常克隆——Allo-BMT
刺激骨髓造血——雄激素，EPO，G-CSF，GM-CSF
陕西省中医医院肾病科
病因
睡眠时血流缓慢，血浆PH值下降、C3激
活易发病。
诱因：
感染尤其病毒感染，如病毒性感冒药物有铁剂、 APC 、鲁米那、氯丙嗪、磺胺、呋喃坦丁等其它，如输血、手术、剧烈运动、精神紧张、饮酒、喝醋、妊娠、月经等
陕西省中医医院肾病科
发病机制
GPI后天缺乏 GPI生成障碍 GPI基因突变
陕西省中医医院肾病科
鉴别诊断
再障缺铁性贫血营养性巨幼细胞贫血骨髓异常增生综合征自身免疫溶血性贫血
陕西省中医医院肾病科
临床分型
频发型：≤2月偶发型：＞2月不发作型：＞2年

高灵敏pnh检测内容

高灵敏pnh检测内容1.引言1.1 概述概述部分：高灵敏PNH检测的背景和意义PNH，即原发性免疫性血红蛋白尿症（Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria），是一种罕见的血液系统疾病。

患者的红细胞表面缺少CD55和CD59两种补体调节蛋白，导致对自体免疫攻击的敏感性增加，从而引发一系列的有损红细胞的反应，如溶血、血栓形成等。

此病主要表现为夜间的血红蛋白尿，伴随着贫血和血栓的临床现象。

高灵敏PNH检测就是在患者的血液样本中，通过对红细胞进行特定的免疫分析方法，检测CD55和CD59在红细胞表面的表达情况，进而确定患者是否患有PNH，以及对疾病的监测和评估。

与传统的PNH诊断方法相比，高灵敏PNH检测具有更高的准确性和敏感性，可以有效地早期发现PNH的存在，为患者提供更早的治疗和干预机会。

高灵敏PNH检测的意义在于提供了一种可靠的手段来诊断和监测PNH疾病。

通过该检测方法，可以在患者还未出现明显症状之前，及时发现PNH的存在，从而提前采取必要的治疗措施。

此外，高灵敏PNH检测还可以帮助医生评估疾病的严重程度和进展情况，为制定个体化的治疗方案提供依据。

对于PNH患者及其家属来说，高灵敏PNH检测可以提供一种心理上的安慰，让他们更好地了解疾病，并采取积极的态度面对治疗和康复。

随着科技的发展和研究的深入，高灵敏PNH检测方法和技术也在不断更新和完善。

相信在未来，高灵敏PNH检测能够为PNH疾病的早期发现和治疗提供更加精准和可靠的手段，为患者的健康带来更大的福祉。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以根据具体情况进行编写，以下是一个示例：文章结构:本文主要分为引言、正文和结论三部分。

引言部分概述了文章的背景和意义，介绍了本文的结构和目的。

正文部分包含了高灵敏pnh检测的背景和意义，以及相关的方法和技术。

结论部分对高灵敏pnh检测的重要性进行总结，并展望了其未来的发展。

引言部分将为读者提供一个整体的了解。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症克隆筛查及补体抑制剂治疗监测中国专家共识(2024年版)解读PPT课件

03
缺乏完善的PNH监测体系，难以对患者病情进行持续、有效的
监测和评估。
未来发展断创新
随着生物技术的不断发展，未来有望出现更为精准、有效的PNH诊疗技术。
个体化治疗成为趋势
针对不同患者的具体情况，制定个体化的治疗方案将成为未来PNH治疗的重要方向。
3
政策支持力度加大
03 补体抑制剂治疗原理及药物选择
补体系统激活机制简述
补体系统是由多种血浆蛋白和细胞膜蛋白组成的复杂网络系统，可通过经典途径、旁路途径和MBL途径被激活。
补体系统激活后，可产生一系列具有生物学活性的片段，如C3a、C5a、C5b-9等，参与机体的免疫应答和炎症反应。
在阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）中，由于红细胞膜上CD59等补体调节蛋白的缺失，导致红细胞对补体攻击的敏感性增强，从而发生血管内溶血。
争议问题探讨及未来研究方向
争议问题
目前对于PNH的发病机制、诊断标准和治疗方案仍存在一些争议和不确定性。例如，部分PNH患者可合并再生障碍性贫血（AA），给诊断和治疗带来挑战。
未来研究方向
未来需要进一步深入研究PNH的发病机制、新型治疗药物的研发和临床试验、以及针对不同患者群体的个性化治疗方案等。
特异性抗体检测
利用特异性抗体识别异常克隆的造血干细胞或红细胞，提高诊断的敏感性和特异性。
免疫分型技术
结合多种免疫标记物对细胞进行分型，有助于准确判断克隆性造血的来源和类型。
新型生物标志物探索
microRNA表达谱分析
检测microRNA在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者中的表达变化，寻找新的生物标志物。
随着国家对罕见病领域的重视程度不断提高，未来有望出台更多针对PNH等罕见病的政策支持。

阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的诊断指南(流式细胞术)

流式细胞术诊断并监测阵发性睡眠性血红蛋白尿症和相关疾病指南背景：阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种特殊的获得性克隆性造血干细胞疾病，该疾病是由于PIGA基因体细胞突变，导致连接细胞膜的GPI相关锚蛋白缺失所致。

流式细胞术是检测GPI相关锚蛋白缺失的方法之一，同时也是诊断PNH所必需的检测指标。

然而到目前为止，对于运用流式细胞术检测GPI相关锚蛋白缺失方法还没有标准化、规范化。

方法：在本论文中，我们将提出一致方案，介绍运用流式细胞术检测PNH的规范程序。

结果：我们通过临床症状和对数据的分析、结果报告对病例提出综合意见。

但分析中，主要集中在对分析过程的重要性。

本文将区分常规分析（定义为：缺失细胞占1％或更多）和高灵敏度的分析（缺失细胞仅占小于0.01％的PNH细胞）。

其中如何设计抗体组合和设门对这两种分析都是非常重要的，本文将做详细介绍。

我们将通过对白细胞和红细胞的检测，以及各自的检测优势来讨论并评估PNH患者人群。

我们目前提供的步骤仍需要进一步完善，使其成为高灵敏度的检测技术，包括需要明确：试剂浓度；PNH克隆细胞在正常人群的发生率（背景），并讨论此技术的缺点，因为此缺陷将可能影响到结果解释。

结论：本论文可适用于对PNH感兴趣和刚开始建立检测PNH克隆细胞的实验室，使其建立一个比较完善的实验流程；也可用于已开展此检测项目，以提高其该实验室检测技术和报告水平。

背景阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）是一种罕见的造血干细胞疾病，该疾病自19世纪初即被确认为一个具有独特临床症状的疾病（1,2）。

在疾病的发展过程中，PNH有三个显着的临床特点，但是这三个特点的个体差异很大（3-5）。

首先，以补体介导的血管内溶血为主要临床表现，包括：吞咽困难，嗜睡，勃起功能障碍（ED），慢性肾功能衰竭，肺动脉高压，贫血，和血红蛋白尿。

其次，具有形成血栓的倾向，该血栓不仅可发生在四肢，还好发于具有特殊部位，如肝门（Budd - Chiari综合征），脾，肠系膜静脉。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症

阵发性睡眠性血红蛋白尿症概述阵发性睡眠性血红蛋白尿症（Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）是一种获得性血红包膜缺陷病，由于血细胞膜的锚固蛋白-糖化肌醇磷脂（GPI）减少活缺乏是红细胞对补体溶血敏感性异常增高而有慢性血管内溶血，伴阵发性加剧和血红蛋白尿，临床病人常有贫血和血红蛋白尿发作，部分病人办白细胞和血小板减少。

我国PNH发病男性较多，发病年龄较轻，苯丙常见并发症为感染、贫血性心脏病、胆结石、慢性胆囊炎，少见并发症为溶血危象、血栓及栓塞，个别病人可并发DIC。

概述阵发性睡眠型血红蛋白尿症以贫血、黄疸及血红蛋白尿为主要表现，属中医学的“虚劳”“黄疸”范畴，本病多由素体亏虚，复感湿热外邪；或由脾胃虚损，湿浊内生，郁而化热，湿热相搏，伤及气血，而出现黄疸及气血梁旭之证。

治疗方法一、辨证选方1.气血两虚症候：面色晄白活萎黄，气短乏力，头晕心悸，神疲懒言，或皮肤、白睛轻度黄染，唇淡，舌体胖，舌质淡，苔白，脉细。

辨析：①辩证：本症多见于持续小量溶血、贫血较突出的状况，以面色黄白，心悸气短，舌淡胖脉细为辩证要点。

病位在脾胃，波及气血，其性属虚。

②病机：脾胃为气血生化之源，脾胃虚弱则气血生化乏源，故出现面色晄白或萎黄、气短乏力，头晕心悸，神疲懒言，唇舌色淡，脉细等气虚血亏征象。

脾失健运，水湿不化，阻碍气机，湿邪郁久化热，湿热相搏，可出现黄染。

治法：益气养血。

方剂：八珍汤（《正体类要》）或补中益气汤（《脾胃论》）加减。

黄芪20g，党参10g，白术10g，当归10g，熟地10g，茯苓10g，甘草10g。

湿热未清，加茵陈10g、泽泻10g。

2.脾肾两虚症候：面色无华，四肢无力，腰酸腿软，夜尿频数，便溏，食纳不佳，畏冷，舌体胖，舌质淡，舌苔白，脉沉细。

辨析：①辩证：本证主要见于以贫血为主而黄疸不明显的患者，以面色无华，四肢无力，腰酸腿软，便溏，畏冷是本证辨证要点。

病位在脾肾，其性属虚。

PNH

ห้องสมุดไป่ตู้
• CD55，也称为衰变加速因子，主要作用是加速膜结合C3转化酶的破坏。
• 其他因素导致补体激活（手术、感染、炎症）时溶血加重。
病理生理
PNH临床表现
• 贫血：溶血及骨髓衰竭所致。 • 血栓：最严重的并发症及致死的最常见的病因静脉血栓多于动脉血栓。常见部位为腹部（肝静脉血栓并发BCS最常见）和大脑静脉。DVT、肺栓子、皮肤栓塞也较常见。 • 平滑肌肌张力障碍：腹痛、食管痉挛、吞咽困难、勃起障碍等。
阵发性睡眠性血红蛋白尿症（Paroxysmal Nocturnal Hemaglobinuria, PNH）
北京清华长庚医院血液科 2015.2.25
历史
• 1882年 Dr Paul Strübing描述了以为29岁男性，表现为乏力、腹痛、严重的夜间发作的血红蛋白尿； Strübing推测溶血发生于血管内，因为血红蛋白尿发作后患者的血浆会变成红色。 • 1925年， Enneking引入了阵发性睡眠性血红蛋白尿症这一病名。 • 1937年，Thomas Ham报道PNH红细胞在酸化的正常血清中孵育时会发生溶血反应，这也是第一个PNH的诊断实验 Ham test。
病理生理
病理生理
• GPI锚连蛋白超过150种。 • 造血干细胞上存在超过12种GPI锚连蛋白，包括血型抗原、黏附分子、补体调节蛋白以及气单胞菌溶素原受体。其中补体调节蛋白CD59和 CD55的缺失是引起PNH相关临床表现的主要原因。 • CD59通过阻断C9的聚集直接抑制膜功击复合物的形成。
室和临床证据(同时伴有骨髓衰竭证据，再障或低危MDS，使用
高敏感的流式细胞检测手段可见<1%的GPI-中性粒细胞)。
PNH治疗
1. 控制和减轻血红蛋白尿发作：泼尼松20-40mg/d。发作停止后应逐渐减量。持续严重溶血发作者可短期试用泼尼松1mg/kg/d。 2. 有条件者可使用补体抑制剂。

实验诊断名词解释5

中毒颗粒:中性粒细胞前沿中出现较粗大，大小不等，分布不匀的深紫色或蓝黑色颗粒，常伴有空泡出现，见于较严重的化脓性感染及大面积烧伤。
血块退缩:血液凝固后，血小板释放出血块回缩酶，使血块退缩。
血清总胆红素：结合胆红素与非结合胆红素的总和.
亚铁血红素: 血红蛋白色素部分，由铁原子及原卟啉区组成。
血小板聚集试验(platelet aggregation test，PAgT)是在富血小板血浆中加入诱聚剂(ADP、肾上腺素、凝血酶、花生四烯酸等)，血小板由于发生聚集反应其血浆的浊度减低，透光度增加。
血栓病：血栓类疾病是一组因各种原因使血液在血管内或心脏中，流动的液体变为凝固的固体,致使血流发生不同程度受阻后所形成的综合病征。
酸化溶血试验(acid serum hemolysis test)又称Ham试验:PNH患者的红细胞对补体敏感性增高，在酸化的血清中(pH6．6～6．8)，经37℃孵育，易溶血。此法较敏感，假阳性较少。
3p实验：即plasma protamine paracoagulation test的缩写, 中文叫血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验,其原理为受检血浆中加入硫酸鱼精蛋白溶液,如果血浆中存在可溶性纤维蛋白单体与纤维蛋白降解产物的复合物时,则鱼精蛋白使其解离释出纤维蛋白单体,自行聚合成肉眼可见的纤维状物,为阳性结果,可见于DIC的早,中期,阴性可见于正常人,晚期DIC
Tamm-Horsfall protein ：是尿液中含量最多的蛋白质，由亨利氏伴升枝粗段以及远曲小管近端的上皮细胞分泌，对上皮细胞具有保护作用
尿沉渣检查: 用显微镜对尿沉淀物进行检查，识别尿中细胞、管型、结晶、细菌、寄生虫等，对泌尿系疾病的诊断、定位、鉴别诊断、预后具重要意义。

溶血的检验(1)

血浆高铁血红素白蛋白检测
原理：血浆中游离的血红蛋白可被氧化为高铁血红蛋白，再分解为珠蛋白和高铁血红素，后者先与血红蛋白结合，血红蛋白消耗完后，再与白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白，与硫化铵形成一个易识别的铵血色原，用光谱仪观察结果，于绿光区558nm处有一最佳吸收区带。
参考范围：阴性
应用评价：血管内溶血时，血浆中游离血红蛋白大量增加，血浆中可检测出高铁血红素白蛋白，血清中出现高铁血红素白蛋白是溶血严重的指标。
参考范围：0-40mg/L
应用评价： 1.明显增高是判断血管内溶血的指征。蚕豆病、PNH、
冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、溶血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高。 2.血管外溶血、红细胞膜缺陷不增高。
血清结合珠蛋白检测
原理：血清结合珠蛋白检测（Hp）是在待测血清中加入一定量的血红蛋白液，使之与待测血清中的结合珠蛋白形成Hp-Hb复合物。通过电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未结合的Hb分开，测定Hp-Hb复合物的量，可测得血清中结合珠蛋白的含量。
二、参考范围：健康人直接和间接抗人球蛋白试验均阴性。
三、临床意义：
自身免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血和血型不合引起的输血反应、药物性免疫性溶血、冷凝集素综合征、阵发性冷性血红蛋白尿等直接抗人球蛋白试验阳性，当抗体与红细胞结合后，有过剩抗体时直接和间接试验均阳性。
红细胞寿命测定
原理：红细胞寿命测定将标记放射性核素的红细胞注入血循环后，逐日观察其消失率，记录成活曲线，计算出红细胞寿命。
参考范围：0.5-1.5gHb/L 应用评价：1.减低：常见于各种溶血，尤其是血管内溶
血。严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单核细胞增多症等Hp也明显减低，此时不能以此指标判断有无溶血。

阵发性睡眠性血红蛋白尿演稿PPT课件

脏病。
预防措施制定和执行情况评估
01
02
03
04
提高免疫力
通过合理饮食、适当锻炼等措施提高患者免疫力，减少感染
风险。
抗凝治疗
根据患者病情给予抗凝药物，降低血栓形成风险。
保护肾功能
定期监测肾功能指标，及时发现并处理肾脏损害。
纠正贫血
积极给予输血、促红细胞生成素等治疗，纠正贫血状态。
处理方法选择及效果评价
自我护理技能培训
教授患者如何在家中自我监测病情、合理饮食、避免诱发因素等自我护理技能，以减轻症状并降低复发风险。来自心理干预措施实施和效果评估
个性化心理评估
针对患者的具体情况，进行个性化的心理评估，了解他们的情绪
状态、心理需求和应对方式。
心理干预措施
根据评估结果，制定相应的心理干预措施，如认知行为疗法、放松训练、家庭治疗等，以帮助患者缓解焦虑、抑郁等负面情绪，
患者生活质量改善
关注患者的心理健康和生活质量，介绍了相关的心理干预和社会支持措施。
未来发展趋势预测
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个体化治疗方案的制定
随着精准医学的发展，未来将为阵发性睡眠性血红蛋白尿患者制定更加个体化的治疗方案。
多学科协作诊疗模式的推广
强调多学科协作在阵发性睡眠性血红蛋白尿诊疗中的重要性，预测未来这一模式将得到更广泛的应用。
阵发性睡眠性血红蛋白尿演稿ppt课件
目录
• 阵发性睡眠性血红蛋白尿概述 • 阵发性睡眠性血红蛋白尿检查方法 • 阵发性睡眠性血红蛋白尿治疗方法
目录
• 并发症预防与处理策略 • 患者教育与心理支持工作部署 • 总结回顾与展望未来发展趋势
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阵发性睡眠性血红蛋白尿概述