固相萃取-高效液相色谱法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1

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超高效液相色谱-大体积流通池荧光法检测奶及奶制品中的黄曲霉毒素M1

毒素Ｍ。进行提取，经离心后，取上清液用磷酸盐缓冲液稀释，过黄曲霉毒素Ｍ免疫亲和柱进行净化及浓缩；采
用Ｖ（甲醇）：Ｖ（乙腈）一５０：５０及纯水作为流动相，经ＵＰＬＣＢＥＨＣ１８柱（１００ｍｍＸ２．１ｍｍ，１．７“ ｍ）分离．结
ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１４，Ｃｈｉｎａ２．ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅ
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｄｘｂｎｓｂ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃａＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８ — ９２０９．２０１２．１１．６１２
超高效液相色谱一大体积流通池荧光法检测奶及
ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｌａｒｇｅｖｏｌｕｍｅｆｌｏｗｃｅｌ１．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈ＠ａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆
浙江文学学报（农业与生命科学版）３９（２）：１９１～１９６，２０１３
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆ＬｉｆｅＳｃｉ．）

HPLC法测定乳制品中的黄曲霉毒素M_1

实际添加量 ( g 8059
0. 8119
0. 8023
0. 6955
0. 6621
0. 6525
0. 6154
0. 6435
0. 6100
回收率 (%) 104. 9 101. 7 101. 2 105. 0 106. 0 105. 5
RSD ( % ) 2. 0
2. 6 标准物质测定及国际实验室能力测试结果取黄曲霉毒素 M1 阳性的奶粉标准物质 30 g( 真值为 0 084 g kg) , 1 式 3 份平行样, 分别按供试品溶液制备方法操作, 测得结果为0 081 12、0 083 07、0 083 61 g kg, 3 次测定结果均在允许范围内, 与真值相接近。采用此方法参加由英国著名实验室 FAPAS 举行的国际实验室能力测试, 以奶粉为测试样品( Test Round 0492) , 结果令人满意。 2 7 样品测定结果从超市随机购买了 103 种牛奶, 按本文所述方法进行检验, 测定结果为: 阳性样品数 68 件, 阳性率 66% , 污染水平范围 0 004~ 0 1 g L , 中位值为: 0 02 g L。目前我国规定黄曲霉毒素 M1 的限量标准为 0 5 g kg。[ 2] 据此, 上述检测的样品均符合规定, 说明目前上海牛奶市场中黄曲霉
33 5
食品卫生法#第 33 条第 4 项食品卫生监督职责中明确规定, 对食品生产经营企业的新建、扩建、改建工程的选址和设计进行卫生审查, 并参加工程验收。由于缺乏预防性卫生监督管理办法或其他配套的规章和规范性文件, 该项工作在河北甚至全国一直没有得到很好的开展。尽快出台与餐饮业预防性卫生监督相关的政策法规, 可有效避免餐饮业基础设施及结构布局建成后改造难的现象, 解决餐饮业卫生许可时出现的结构布局不合理, 各项配套设施不完善的问题, 促进餐饮业的卫生许可及监督管理工作。

综述牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法

摘要：黄曲霉毒素M1具有强毒性和致癌性，严重危及摄入机体生命安全。

本文从理化性质、限量标准、检测方法比较等方面探讨牛奶中AFM1的情况，为提高牛奶质量安全提供信息依据。

关键词：牛奶 AFM1；检测方法1 理化性质黄曲霉毒素 M1（Aflatoxin M1，AFM1），分子式为 C 17H12O7，熔点（裂解温度）299℃，是黄曲霉毒素中一种二氢呋喃杂萘邻酮衍生物。

研究表明，AFM1是黄曲霉毒素B1（AFB1）的羟基化衍生物，即由AFB1转化而成。

它常温下呈片状结晶，溶于乙腈、甲醇、氯仿、丙酮等极性有机溶剂，非极性溶剂（乙醚、正己烷、石油醚等）不溶解。

AFM 1 的化学结构稳定，耐热耐酸。

AFM 1 毒性和致癌性均强，是已知的20种黄曲霉毒素中毒性最强的，仅次于AFB1，相当于5倍的氰化钾，40倍的砒霜。

经机体吸收后，作用于肝脏，易引起肝肿瘤和肝癌。

2 牛奶中AFM1限量标准AFM1是牛奶质量安全风险评估的主要危害因子，各国分别制定牛奶中AFM1限量。

其中欧盟各国对婴幼儿配方牛奶限量为0.025 μg/kg，我国规定婴儿乳品限量值为不得检出，牛乳中AFM1限值为0.5 μg/kg[1]。

3 检测方法目前牛奶中AFM1检测方法主要有薄层色谱分析法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱法（LC-MS）和快速检测法。

3.1 TLC法TLC法为定性半定量法。

利用黄曲霉毒素M1在365nm波长下发出蓝紫色荧光的特性，提取、浓缩、分离样品，在薄层板上显示荧光，对照标准品的荧光强度，定量含量。

此法为AFM1的经典方法，设备简单，适用于大规模的筛查研究，缺点为半定量方法，试验步骤多，干扰因素多且因接触AFM1有安全危害。

3.2 HPLC法利用免疫亲和柱或C18柱反复进行萃取和洗脱，分离试样中的AFM1，结合荧光检测器定量含量。

方法为：100ml试样加热至40℃，加入1.0gNaCl，5000r/min离心15min，50ml清澈液缓慢过免疫亲和柱或C18柱，10ml水、4ml乙腈洗脱备用。

乳与乳制品中黄曲霉毒素检测研究进展

乳与乳制品中黄曲霉毒素检测研究进展摘要：本文综述乳与乳制品中黄曲霉毒素检测的研究进展。

黄曲霉毒素对食品安全构成威胁，因此准确、快速、灵敏的检测技术至关重要。

传统检测方法和先进技术（如生物传感器、质谱技术和分子印迹技术）在黄曲霉毒素检测中得到应用。

然而，仍需解决样品前处理、灵敏度、特异性等问题。

黄曲霉毒素的风险评估与监控对保障食品安全至关重要。

展望未来，发展更高效、可靠的检测技术将促进食品安全和乳制品产业质量提升。

关键词：乳，乳制品，黄曲霉毒素，检测，生物传感器，质谱技术，分子印迹技术，风险评估1引言黄曲霉毒素是由黄曲霉属真菌产生的有毒次生代谢产物，广泛存在于各种食品中。

乳与乳制品作为重要的食品来源，也可能受到黄曲霉毒素污染。

目前，黄曲霉毒素检测是食品安全研究的关键领域之一。

传统检测方法有限，但近年来，生物传感器、质谱技术和分子印迹技术等新型方法不断涌现，为乳制品产业的发展和食品安全提供新的解决方案。

然而，检测技术仍面临着一些挑战，包括样品处理复杂和检测灵敏度等方面。

本文旨在全面综述乳与乳制品中黄曲霉毒素检测的研究进展，为食品安全监管和乳制品行业发展提供科学依据。

2. 黄曲霉毒素检测方法2.1 传统检测方法2.1.1 高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）高效液相色谱法是一种广泛用于黄曲霉毒素检测的传统方法。

该方法利用样品中黄曲霉毒素与特定色谱柱上的固定相之间的相互作用，在不同条件下分离和定量黄曲霉毒素。

HPLC方法具有高灵敏度和准确性，但可能需要复杂的前处理步骤，并且需要昂贵的仪器设备。

2.1.2 气相色谱法（Gas Chromatography，GC）气相色谱法也被广泛应用于黄曲霉毒素的检测。

该方法将样品中的黄曲霉毒素蒸发成气态，并通过气相色谱仪分离和检测。

GC方法对样品的净化要求较高，但具有高分辨率和灵敏度。

2.1.3 薄层色谱法（Thin-Layer Chromatography，TLC）薄层色谱法是一种简单、经济且快速的黄曲霉毒素检测方法。

乳制品中黄曲霉毒素M1的测定

乳制品中黄曲霉毒素M1
样品信息：
分子式：C17H12O7
CAS ：6795-23-9
化学结构：
用途：为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质.他的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。

色谱条件：
仪器：福立高效液相色谱仪(FL2200)；色谱柱：Ultimate XB-C18，250×4.6mm，5um，柱温：30℃；
定量方法：外标法工作站：FL9500工作站
流动相：25%乙腈水；
流速：1.0ml/min；检测器：安捷伦荧光检测器发散波长：435nm 激发波长：365nm 进样量20ul：
样品前处理：
依据GB 5413.37—2010乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定进行实验。

典型谱图和分析结果：
浓度为0.04ppm 的黄曲霉毒素M1标样图
标准曲线图
某乳制品中黄曲霉毒素M1的测定试样图典型配置：
名称规格数量液相色谱仪等度，手动或自动进样器1套
色谱柱反相C18，4.6×250mm，5μm1根
溶剂过滤器全玻璃质，配0.45μm有机和水系过滤膜1套
超声波清洗器功率，100W以上1套
一次性针筒5ml1盒
针式过滤头0.45μm有机和水系过滤各1包乙腈4L，色谱级1瓶
二次蒸馏水可用哇哈哈纯净水替代大量洗耳球1只
容量瓶10ml10个。

高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的含量

高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的含量周贻兵;林野;李磊;王娅芳;刘利亚【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2014(000)015【摘要】采用高效液相色谱荧光法测定牛奶中的黄曲霉毒素M1。

牛奶中的黄曲霉毒素M1用乙腈超声提取，离心，上清液浓缩后用50 mL PBS缓冲液稀释，过免疫亲和层析柱净化，10%甲醇水溶液10 mL淋洗柱，2 mL甲醇洗脱，洗脱液氮吹干后，用10%乙腈水溶液1 mL蜗旋溶解残渣，过0.22μm滤膜，上机测定。

对加入乙腈比例、淋洗液及洗脱液进行了优化，结果表明：m 牛奶：V 乙腈=1：2有效的沉淀蛋白避免了过柱堵塞问题，提高了过柱效率。

用10%甲醇水溶液淋洗免疫亲和柱，能有效的去除掉杂质，避免了洗脱液成浑浊现象。

该方法的线性范围宽，回收率为89.1%~93.5%，相对标准偏差在6.5%~9.7%之间，检出限为0.01μg/kg，低于1/10现行食品安全国家标准对食品中黄曲霉毒素M1的限量标准，符合检测要求，适用于对牛奶中黄曲霉素素M1的检测。

【总页数】3页(P96-98)【作者】周贻兵;林野;李磊;王娅芳;刘利亚【作者单位】贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳550004;贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳550004;贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳550004;贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳550004;贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳550004【正文语种】中文【相关文献】1.免疫亲和柱-高效液相色谱紫外法检测牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1 [J], 陈冬东;代汉霞;彭涛;姚佳;王昕;张建新;里南;王雄2.超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1 [J], 谭洪涛;简兵云3.超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法测定牛奶中黄曲霉毒素M1比较 [J], 张振宇;柴磊;李明4.高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的不确定度评定 [J], 陈梦; 邹小龙; 范蕾; 姜川; 陈卫平; 卢光英; 饶琛; 章小洪5.用免疫亲和层析法净化、高效液相色谱法测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M_1的含量 [J], 王雄;王晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

固相萃取-高效液相色谱荧光法测定液态奶制品中的黄曲霉毒素M1和B1

固相萃取-高效液相色谱荧光法测定液态奶制品中的黄曲霉毒素M，和B/童圆2张惠贤1周有祥1龚艳1夏虹1彭立军1彭西甜W冯钰锜2 (1.湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，武汉430064; 2.生物医学分析化学教育部重点实验室，武汉大学化学系，武汉430072)摘要：建立了固相萃取-髙效液相色谱荧光法测定液态奶制品中的黄曲霉毒素M i和氏的方法。

液态奶制品样品用乙腈-正己烷提取，盐析分层，浓缩后经黄曲霉毒素专用固相萃取柱净化富集，以髙效液相色谱荧光法对样品中黄曲霉毒素 M i和氏进行分离分析。

在0.1〜50.0滋g/kg范围内黄曲霉毒素的质量浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数的平方大于0.999 6。

黄曲霉毒素吣和氏在低、中、髙3个浓度的加标回收率分别在69.5%〜81.6%和73.0%〜87.9%之间，日内日间相对标准偏差低于13.3%。

在最优条件下对5种不同的液态奶制品样品进行了加标回收实验，表明该方法具有很好的适用性，可用于各种液态奶制品中黄曲霉毒素M t和氏的分析。

关键词：液态奶；黄曲霉毒素；固相萃取；髙效液相色谱荧光法黄曲霉毒素（AFT)主要是由黄曲霉和寄生曲霉等产生的天然次生代谢产物，目前已分离鉴定的黄曲霉毒素达20多种，主要是黄曲霉毒素B k B2、Gi、G2、M i和M2等。

饲料的主要原料是玉米、豆粕等，它们易受到黄曲霉毒素的污染，而奶牛吃了被黄曲霉毒素B i污染的饲料，在体内黄曲霉毒素Bi 转化成Mi，进而污染产出的牛奶。

由于黄曲霉毒素具有致癌、致畸及致基因突变等危害，其中W B1毒性最强，世界各国纷纷制定食品及奶制品中黄曲霉毒素的卫生限量标准加以控制。

我国规定人类消费的乳及乳制品中黄曲霉毒素M1含量不能超过0.5滋g/kg，婴幼儿配方及辅助食品中黄曲霉毒素 B1含量不能超过0.5滋g/kg[1]。

由于儿童和老人是牛奶消费的重要人群，因此加强对黄曲霉毒素M i和 B i的检测，对于保护人类健康具有重要意义。

牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的快速测定

牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的快速测定张鹏;张艺兵;王晶;王雄【期刊名称】《中国乳品工业》【年(卷),期】2002(030)006【摘要】采用免疫亲和柱--荧光光度法快速测定了牛乳及乳制品中黄曲霉毒素M1.试样经过离心、脱脂、过滤后,滤液经过键合有黄曲霉毒素M1特殊抗体的免疫亲和柱净化,此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一的识别能力,黄曲霉毒素M1键合在分离柱中的抗体上.用甲醇与水之比为10:90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去;以甲醇与水之比为80:20的混合液通过分离柱洗脱;加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度.衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M1,检测低限为0.1μg/kg;在0.1～1.0μg/kg范围内,回收率为89.6%～96.1%,变异系数为0.52%～5.8%,分析一个样品的时间小于30min,分析过程中不使用黄曲霉毒素M1标准物质.结果表明,本方法具有准确、简单、快速、安全等优点,可以满足少量和批量样品的检测需要.【总页数】3页(P30-32)【作者】张鹏;张艺兵;王晶;王雄【作者单位】青岛出入境检验检疫局,山东,青岛,266002;青岛出入境检验检疫局,山东,青岛,266002;国家标准物质研究中心,北京,100013;北京中检维康技术有限公司,北京,100044【正文语种】中文【中图分类】TS252.7【相关文献】1.在线固相萃取富集-高效液相色谱法快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1 [J], 丁俭;李培武;李光明;王秀嫔;马飞2.免疫亲和柱-高效液相色谱紫外法检测牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1 [J], 陈冬东;代汉霞;彭涛;姚佳;王昕;张建新;里南;王雄3.免疫亲和柱高效液相色谱法快速测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2 [J], 李佐卿;章再婷;谢东华;康继韬;孙大为4.建立牛奶中黄曲霉毒素M1含量的超高效液相快速测定法 [J], 王安波;孙思;杨梅;汪俭;刘文锋5.超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法测定牛奶中黄曲霉毒素M1比较 [J], 张振宇;柴磊;李明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1

HPLC法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1作者：白文静吴新欣刘谦等来源：《安徽农业科学》2015年第06期摘要[目的]建立高效液相色谱法测定乳制品中黄曲霉毒素M1的测定方法。

[方法]供试乳制品经提取、净化后用高效液相色谱法测定其中黄曲霉素M1的含量。

[结果]黄曲霉毒素M1在2～10 ng/ml范围内线性良好，相关系数r=0.995 9，平均回收率为96.7%，检出限为0.4μg/kg。

[结论]研究所用方法简单准确，稳定性和重现性较好，可用于乳制品中黄曲霉毒素M1含量的测定。

关键词乳制品；黄曲霉毒素M1；高效液相色谱法；含量测定中图分类号S879.1文献标识码A文章编号0517-6611（2015）06-270-02黄曲霉毒素在1993年被世界卫生组织（World Health Organization，WHO）癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer）划定为Ⅰ类致癌物（明确的人类致癌物），是一种毒性极强的剧毒物质，其毒性是氰化钾的10倍，主要表现为致癌、致畸、致突变[1] 。

黄曲霉毒素M1对热非常稳定，299 ℃才会被破坏，在一般烹调温度、巴氏杀菌或者高温杀菌条件下几乎都不会被破坏[2]。

哺乳动物在摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，在体内的肝微粒体单氧化酶系催化下，被羟基化生成的二次毒性代谢产物为黄曲霉毒素M1[3]。

黄曲霉毒素M1在进入人体或动物体后，除了抑制DNA、RNA合成外，也会抑制肝脏蛋白质合成，导致人体中毒[4]。

该毒素主要危害的部位在肝脏，其危害主要表现在损害组织器官、引发动物及人类的肝癌、肾癌和胃癌等抑制免疫机能[5]，其毒性是氰化钾的10倍、砒霜的68倍。

黄曲霉毒素M1一部分从尿和乳汁中排出，一部分存在于动物细胞的可食部分如肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见[6]。

牛乳及其制品是易受黄曲霉毒素M1污染的食品之一，对牛奶中黄曲霉毒素M1准确定量（如我国规定牛奶中黄曲霉毒素M1的最大残留限量为0.5 μg/kg[7]），了解真实污染水平，对维护人群健康具有重要意义。

牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法

牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法食品质量与安全王婉婷摘要：采用免疫亲和柱—荧光光度法快速测定和微细柱快速检测方法测定牛乳中黄曲霉毒素M1，方法具有准确、简单、快速、安全等优点，可以满足少量和批量样品的检测需要。

关键词：牛奶；黄曲霉毒素M1；快速检测Rapid detecting aflatoxin m1 in milkStudent majoring in Food Quality and Safety WangWantingAbstract:Aflatoxin M1 i n milk are extracted and separated by immunoaffinity column and Micro column for rapid detection methodKey words: milk ;rapid detecting aflatoxin M1 ;aflatioxin M1 immunoaffinity column一．前言近代研究表明当奶牛食用饲料中含有黄曲霉素Bl时,牛奶和其他乳制品会含有黄曲霉素Ml ［1］。

黄曲霉毒素Ml的毒性和致癌性与黄曲霉毒素Bl的基本相似。

由于牛乳及其制品是人类特别是婴儿的主要食品，因此各国对其限量的要求十分严格。

我国及许多国家规定牛奶及奶制品中黄曲霉毒素Ml的含量不得超过0.5ug\kg；所以，快速、方便、准确的检测方法在牛奶的检测中十分重要，二．主要检测方法2.1免疫亲和柱—荧光光度法快速测定2.1.1测定原理：试样经过离心、脱脂、过滤后，滤液经过键合有黄曲霉毒素Ml 特殊抗体的免疫亲和柱净化，此抗体对黄曲霉毒素Ml具有专一的识别能力，黄曲霉毒素Ml键合在分离柱中的抗体上。

用甲醇与水之比为10：90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去；以甲醇与水之比为80：20 的混合液通过分离柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度。

衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素Ml。

乳品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1的测定

固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1迪马科技摘要：建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。

样品经乙腈提取，ProElut AFT固相萃取柱净化，以正己烷和三氟乙酸衍生后，通过Diamonsil C18(2)色谱柱分离，流动相为水、乙腈和异丙醇，梯度洗脱，流速1 mL/min，荧光检测器检测，激发波长365 nm，发射波长435 nm，外标法定量。

结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5 μg/L范围内线性关系良好。

样品加标回收率在80%~100%之间，相对标准偏差1.58%~4.21%，方法检出限为牛奶：0.02~0.06 μg/kg，奶粉：0.04~0.12 μg/kg。

Determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction - high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC) Abstract：To establish the method for determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction with high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC). The samples were extracted with acetonitrile, then purified with ProElut AFT column, derived with hexane and trifluoroacetic acid, and separated on Diamonsil C18(2) column, mobile phase is water、acetonitrile and 2-propanol with a flow rate of 1 mL/min, detected by fluorescence detector, EX: 360nm、Em: 435nm, quantified by external standard method. The result indicated that the calibration curves showed good lineaarities for aflatoxins in the range of 0.01-5 μg/L. The spiked recoveries were in the range of 80%-100% with relative standard deviations of 1.58%-4.21%, the limits of determination were 0.02-0.06 μg/kg in milk and 0.04-0.12 μg/kg in milk powder.黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。

高效液相色谱测定乳制品中黄曲霉毒素M1

1 材料和方法
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260 超高效液相色谱仪（配荧光检测器）（美国 Agilent 公司）；3-18KS 高速冷冻离心机（德国 Sartorius 公司）；纯水净化仪（杭州永洁达净化科技有限公司）； ME3basic 振荡器（IKA 公司）。
关键词：FM1 是哺乳动物摄入被黄曲霉毒素 B1（Aflatoxin B1，AFB1）污染的饲料后通过在体内经羟基化作用转化成的代谢产物。AFM1 对光、热和酸都非常稳定，主要存在于动物的可食部分，如牛奶、肝、蛋类等，其中以牛奶最为常见，是目前发现的毒性、致癌性极强的天然有毒物，它能够对人及动物的肝脏组织产生破坏，严重时会导致肝癌甚至死亡。由于牛乳及其乳制品是人类（尤其是婴幼儿）的主要食品，乳制品营养丰富，能够增强人体免疫力，受到很多国家的重视。因此建立简便快捷高效的检测方法十分重要。
色谱柱；柱温 35 ℃；流速 1 mL/min （衍生剂：0.3 mL/min），进样量 50 μL；流动相为甲醇∶水 =54 ∶ 46 （V ∶ V）。荧光检测器，激发波长 360 nm，发射波长 440 nm。
1.2.3 提取方法称取 5 g 混合均匀的试样于 50 mL 离心管中（乳粉、特殊膳食等加入热水 , 涡旋混匀）。加入 10 mL 甲醇，涡旋 3 min。置于 4 ℃、6 000 r/min 下离心 10 min，将适量上清液或滤液转移至烧杯中，加 40 mL 水备用。将上述样液移过免疫亲和柱。收集全部洗脱液。在 50 ℃下氮气缓缓地将洗脱液吹至 1 mL 以下，用水定容至 1.0 mL，涡旋 30 s 混匀，0.22 μm 滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。

高效液相色谱测定牛奶中黄曲霉毒素M_1

【方法测定】〔文章编号〕1004—8685(2001)06—0683—01高效液相色谱测定牛奶中黄曲霉毒素M1张鹏1,张瑜2(1青岛出入境检验检疫局,青岛266002;2美国雅培制药公司)〔中图分类号〕　R155.5+7 〔文献标识码〕　A　黄曲霉毒素(aflatoxin,AFT)是一类由真菌产生的二次毒性代谢产物,现已证实有数十种存在形式。

由于黄曲霉毒素具有致癌、致畸及致基因突变等危害[1],尤其随着近年来国际贸易中非关税壁垒的广泛使用,世界各国包括我国在内纷纷制订了食品及牛奶中黄曲霉毒素的卫生限量标准加以控制,其中最低限量达0.05μg/kg[2]。

黄曲霉毒素在牛奶及奶制品中,通常以M1的形式存在,AFT M1是AFT B1在生物体内的羟化产物,世界卫生组织(WH O)将AFT M1列为ⅡB类可疑致癌物。

由于儿童和老人是牛奶消费的重要人群,因此加强对AFT M1的检测,对于保护人类健康具有重要意义。

国际上检测AFT M1多为薄层色谱法[3-4],方法操作比较繁琐且检出低限不能满足某些国家的卫生限量要求。

本文提出了以免疫亲和柱(immunoaffinity,I AC)净化结合反相高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素的新方法。

1　材料与方法111　仪器及色谱条件　Agilent HP1100高效液相色谱仪配1100荧光检测器;LichroC ART C18柱,4×125mm,5μm;流动相为乙腈:水(25:75,V/V),流速1.0m L/min;荧光检测器激发波长365nm,发射波长440nm;进样量100μL。

112　试剂和器材　甲醇,乙腈均为色谱纯;水为MI LLIPORE 高纯水;免疫亲和柱:AF LA M1,美国VIC AM产品。

AFT M1标准品为SIG M A产品,储备液浓度为10μg/ml;标准工作液:移取适当体积标准储备液,以10%乙腈溶液依次稀释至0.5、1.0、2.0、4.0ng/m L。

免疫亲和柱高效液相色谱法快速测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2

免疫亲和柱高效液相色谱法快速测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2李佐卿;章再婷;谢东华;康继韬;孙大为【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2005(041)006【摘要】采用单克隆抗体免疫亲和技术作为直接从样品中分离提取黄曲霉毒素的特效手段,提取液挥干后,经衍生用HPLC荧光检测器测定.对鲜奶和高脂奶粉(脂肪含量25%)在0.01,0.05,0.1和0.1,0.5,1.0 μg·L-1水平对黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2测定平均回收率(n=10)为66.0%～97.0%;相对标准偏差(n=10)为1.04%～14.0%.方法的检出限低于0.01 μg·L-1(鲜奶), 0.1 g·kg-1(奶粉).【总页数】3页(P406-408)【作者】李佐卿;章再婷;谢东华;康继韬;孙大为【作者单位】宁波出入境检验检疫局,宁波,315012;宁波出入境检验检疫局,宁波,315012;宁波出入境检验检疫局,宁波,315012;宁波出入境检验检疫局,宁波,315012;宁波出入境检验检疫局,宁波,315012【正文语种】中文【中图分类】O657.17【相关文献】1.日立高效液相色谱仪柱后光照衍生法同时测定牛奶中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1 [J], 石欲容;甄蕊2.芝麻酱中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定——免疫亲和柱净化光化学柱后衍生-高效液相色谱法 [J], 康翠欣;汪芳芳;周原;桂才华;杨永3.免疫亲和柱净化液相色谱柱后光化学衍生法测定调味品中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1 [J], 徐小存; 胡银燕4.免疫亲和柱净化液相色谱柱后光化学衍生法测定调味品中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1 [J], 徐小存; 胡银燕5.免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-HPLC同时测定藿香正气水中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量 [J], 蒋玉芳;陈宗良;周玲娜;赵静芳;陈桂茜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

牛奶中黄曲霉毒素M1的测定能力验证方法研究

牛奶中黄曲霉毒素M1的测定能力验证方法研究发布时间：2021-10-08T08:25:23.842Z 来源：《科学与技术》2021年第29卷15期作者：韩世忠[导读] 黄曲霉毒素M1是一种毒性极强的剧毒物质，牛奶是易受黄曲霉毒素M1污染的食品种类。

韩世忠河南金测检测技术服务有限公司，河南郑州450000摘要黄曲霉毒素M1是一种毒性极强的剧毒物质，牛奶是易受黄曲霉毒素M1污染的食品种类。

通过参加能力验证，利用高效液相色谱法对牛奶试样中黄曲霉毒素M1进行测定。

结果表明，在线性系列浓度范围为0.2~4.0 ng/mL时，R2=0.9999；三个添加水平的黄曲霉毒素M1平均回收率在87.3%~95.5%，能力验证结果显示，两个牛奶测试样品z值分别为-0.1和-0.4，能力验证结果满意，说明该检测方法准确、可靠，适于牛奶中黄曲霉毒素M1的测定。

关键词牛奶、黄曲霉毒素M1、能力验证图分类号 S859.3 文献标识码：B黄曲霉毒素M1（AFM1）于1993年被世界卫生组织癌症研究机构划定为I类致癌物质，是一种毒性极强的剧毒物质，牛乳及其制品是易受黄曲霉毒素M1污染的食品之一[1]。

牛乳中黄曲霉毒素M1的存在，主要是奶牛食用了受黄曲霉毒素污染的饲料，经乳畜体内羟化酶转化而成[2]。

目前牛乳中黄曲霉毒素M1的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、免疫亲和柱-荧光光度法、酶联免疫吸附法、双流向酶联免疫吸附法、放射免疫法、免疫胶体金法等[3]。

本文通过能力验证，利用高效液相色谱法对牛奶试样中黄曲霉毒素M1进行测定，研究方法的准确性和可靠性，以提高实验室的整体检测水平。

1 材料与方法1.1材料1.1.1样品测试样品为牛奶，由中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供（编号21-H977、21-F208）。

黄曲霉毒素M1标准溶液浓度10 μg/mL，由坛墨质检科技股份有限公司标准物质中心提供，证书编号：2622011。

液相色谱串联质谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1不确定度分析

分析与检测黄曲霉毒素M1（AFM1）是含有二呋喃环的氧杂萘邻酮，是由黄曲霉毒素B1羟基化衍生而来[1]。

AFM1对酸、光及热都很稳定，主要存在于动物的可食部分，比如蛋类、牛奶、肝脏等，其中以牛奶最为常见，目前已经成为乳制品质量安全风险评估的主要危害因素[2]。

AFM1是目前发现的致癌性较强的毒素之一，它能够很大程度上破坏人及动物的肝脏组织，对人体产生肝肾等毒性，也存在致畸、致癌、致突变等风险，严重时会导致死亡[3]。

本文参照JJF 1135-2005《化学分析测量不确定度评定》[4]、JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[5]，JJG 646-2006《移液器检定规程》[6]和JJG 196-2006《常用玻璃量器检定规程》[7]，依据GB 5009.24-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定》（第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法）[8]分析了牛奶中黄曲霉毒素M1含量检测的不确定度，以期为实验室质量控制提供有力的依据，同时也为其他真菌毒素类物质测定的不确定度分析提供参考。

1　材料与方法1.1　仪器与试剂Agilent 6470串联四极杆液相色谱质谱仪（配制ESI源）；ME503T电子天平（d=0.001 g）；黄曲霉毒素M1标准品（10.0 μg/mL，纯度≥99%，阿尔塔）；13C17-黄曲霉M1标准品（BZYX483）（0.507 μg/mL，纯度≥99.9%，ROMER）。

1.2　方法1.2.1　标准溶液配制准确移取黄曲霉毒素M11.00 mL于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成1 µg/mL的标准储备溶液。

准确移取标准储备溶液1.00 mL至10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得到100.0 ng/mL的标准工作液。

准确移取13C17-黄曲霉毒素M11.00 mL，用乙腈定容至10 mL，配制成50.7 ng/mL的同位素内标工作液。

牛乳中黄曲霉毒素M1检测方法的研究进展

２０２１年第３期（总第３８２期）畜禽业试验研究牛乳中黄曲霉毒素Ｍ１检测方法的研究进展杨　帅（武汉轻工大学，湖北武汉４３００２３）摘　要：牛乳是人们日常饮食中，最为常见的食物之一，其所含有的矿物质、蛋白质等营养元素，能够起到强身健体等作用。

但是，在牛乳中，同样也存在一些有毒物质，如果没有及时消杀，会直接影响到人们的饮食安全与身体健康。

其中，黄曲霉毒素Ｍ１是牛乳中最常见、最危险的毒素，其诱变性、致畸性、致癌性非常强。

因此，需要应用有效的检测方法，精准确定牛乳中是否存在或残留黄曲霉毒素Ｍ１，为后续的消杀工作提供帮助。

基于此，首先针对牛乳中黄曲霉毒素的种类、Ｍ１的来源、危害等信息做出介绍，并对当下检测该毒素的相关方法展开深入、细致的分析。

关键词：牛乳；黄曲霉毒素Ｍ１；检测方法ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８－０４１４．２０２１．０３．００８　引言当前，我国对于牛乳的消费不断增长，牛乳已成为人们最为常见的食物之一。

但是，牛乳中所含有的黄曲霉毒素Ｍ１属于一种剧烈毒素，其诱变、致畸、致癌等性质会直接威胁到人们的身体健康与饮食安全。

由此可见，必须要充分了解检测黄曲霉毒素Ｍ１的相关方法，从而确保人们饮用牛乳的安全性，减少不必要的损失。

　概念阐述１．１　黄曲霉毒素的种类黄曲霉毒素，属于一种代谢毒副产物，通常通过５种真菌属而产生，即麦角菌属、青霉菌属、镰刀菌属、链格孢属以及曲霉属。

黄曲霉毒素存在于饲料与食物中，为曲霉菌属中特异曲霉、寄生曲霉以及黄曲霉所产生的一种次级代谢产物［１］。

对黄曲霉毒素分离鉴定，可以发现，现存的种类达到１０余种，天然生成的黄曲霉毒素主要包含黄曲霉毒素Ｇ２、黄曲霉毒素Ｇ１、黄曲霉毒素Ｂ２、黄曲霉毒素Ｂ１４种。

１．２　黄曲霉毒素Ｍ１的来源牛乳中所蕴含的黄曲霉毒素Ｍ１，主要是由于奶牛在产奶以前服食过受到黄曲霉毒素Ｂ１所污染的饲料，并且通过消化道代谢，致使羟基化代谢产物的出现，进而造成此毒素的感染。

固相萃取-高效液相色谱法同时测定牛奶中残留的9种磺胺类药物

（ ! ! "#$%&’( )*+’,*% $+- .+/012’&*+ )1+’1, 3*, 4*51/’&2 6+&5$% 7,*-#2’/ ，8&+&/’,( *3 69,&2#%’#,1 ， :1&;&+9 !"""#$ ，)<&+$ ；# ! )*%%191 *3 =1’1,&+$,( 81-&2&+1 ，)<&+$ 69,&2#%’#,$% >+&?1,/&’( ， :1&;&+9 !"""%& ，)<&+$ ；’ ! @<$+9<$& .+/’&’#’1 3*, ’<1 )*+’,*% *3 69,*2<15&2$%/ ，@<$+9<$& #"!!"’ ，)<&+$ ）
长期食用有 !D8 残留的食品对人类的健康有害［ ) ］。我国已规定磺胺二甲基嘧啶在牛奶中的最大残留限量为 !% ! A B C 。 , , 对于牛奶中磺胺类药物残留的分析主相萃取 ! 高效液相色谱法同时测定牛奶中残留的 # 种磺胺类药物
［ *, ］胺类药物为 *, ! 1 < ( ，这就要求检测牛奶样品中
!" 实验部分
! ! !" 仪器与试剂 ! ! +,-./* $’#, !##’ 高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器； %012, 离心机； $) 孔固相萃取装置（美国 %34.567 公司）； # *+ 小柱（ 879: ;53-. ， ",, 21 < % 2( ），使用前用 $ 2( 甲醇、 $ 2( 磷酸盐缓冲液活 %=’;(#> 公司， ",, 21 < 化；氨基固相萃取小柱： % 2( ，使用前用 $ 2( 甲醇、 $ 2( 乙酸乙酯活化。 ! ! 磺胺嘧啶（ %? ）、磺胺噻唑（ %@ ）、磺胺二甲基嘧啶（ %$ $ ）、磺胺甲氧哒嗪（ %$’ ）、磺胺间甲氧嘧啶（ %$$ ）、磺胺甲 ! 唑（ %$A ）、磺胺氯哒嗪（ %#’ ）、磺、磺胺喹!啉（ %B ）标准品购胺二甲氧嘧啶（ %?$ ）于美国 %012, 公司。磺胺类药物的储备液用甲醇配制，于 ) C 下避光保存；其工作液由储备液用洗脱液稀释而成，现用现配。乙腈、甲醇均为色谱纯（ D0*E./ 公司），其余试剂为分析纯。样品购于石家庄、天津和太原的超市。 ! ! #" 色谱分离条件 ! ! 色谱柱为 F9./-*05 >?%!% # *+ 柱（ $", 22 - ). ’ 22 ， " !2）。流动相 ) 为水 ! 乙酸（体积比为 ### / *）；流动相 8 为甲醇 ! 乙腈（体积比为 %" / ’" ）；梯度洗脱条件： 8 相在 %) 209 内从 *, G 线性增加到 ", G ，再在 * 209 内降至 *, G ，保持 % 209 ；流速为 *. , 2( < 209 。进样量为 ), ! ( ；检测波长为 $(, 92 ；柱温为 $" C 。 ! ! $" 样品前处理 ! ! 准确吸取 *, 2( 牛奶样品于 ", 2( 聚四氟乙烯离心管中，加入 *, 2( ,. ", 275 < ( 磷酸二氢钾缓冲液（ 4& (. , ），摇匀后在 " C 条件下以 *, ,,,

应用高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素

分析与检测
应用高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素
□ 汪恩婷邹振宇杨皓杨京重庆市计量质量检测研究院
摘要：黄曲霉毒素是一类常见的有害霉菌毒素，长期食用含黄曲霉毒素的食物会引发人体癌变。本文对利用高效液色相谱法检测食品中黄曲霉毒素的材料、方法及检测结果进行分析，给相关研究人员提供参考。
关键词：高效液色相谱法；食品；黄曲霉毒素
有实验显示，若取 6 份 20 g 相同大米，检测出的黄曲霉毒素 B1 浓度分别为 5 μg/kg、5 μg/kg、10 μg/kg、 10 μg/kg、15 μg/kg、15 μg/kg，检测后回收率在 82.4% ～ 88.6%。若取 40 μg/kg 黄曲霉毒素 B1 标准液进行 6 次平行试验，得到峰面积分别为 1 065、1 068、1 071、1 072、1 074、 1 075，从而算出精确度为 0.4[2]。
2 高效液色相谱法检测黄曲霉毒素
高效液色相谱法在黄曲霉毒素的检测中应用广泛。黄曲霉毒素经过衍生后，用高效液色相谱法与荧光检测相结合进行检测，检测的效果最好、灵敏度高。检测过程中，利用乙腈等作为流动相，并利用四元泵将缓冲液将溶剂注入色谱柱中，样品中的不同组分经过分离可通过检测系统检测含
黄曲霉毒素广泛存在于各种粮油食品及坚果食品中。由于黄曲霉毒素具有极强的毒性及致癌性，长期食用含有黄曲霉毒素的食物会对人体和家畜带来较大的危害。利用高效液色相谱法检测黄曲霉毒素能够显著提高检测的灵敏度。目前，黄曲霉毒素的结构、特点、性质等信息已经被研究透彻，但就我国的技术条件来说，传统的检测方法达不到国际规定的要求，因此急需进行相关检测方法的研究。
量。在应用高效液色相谱法检测时，首先用三氯甲烷、甲醇等溶剂对检测样本进行处理，提取出样本中的黄曲霉毒素，通过净化及衍生化后，置于反相色谱柱中，使用荧光检测器对其进行全面的检测分析。利用外标法分析系统各组分的峰高及面积，通过标准曲线即可准确定量。试验中，为了提高样本的纯度，减少各种杂质对检结合使用，从而实现对样本中黄曲霉毒素的特异性和活跃性的检测。当黄曲霉毒素进入免疫亲和柱中时，会发生免疫亲和反应，使得黄曲霉毒素被吸附在免疫亲和柱中的固体支持物上。然后向柱中加入提取融合剂，其中的抗体与黄曲霉毒素融合将其提取出来。检测结束后，使用清水就能将免疫亲和柱里的样本残留清除干净，然后再使用洗脱剂清除黄曲霉毒素残留。

超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法测定牛奶中黄曲霉毒素M1比较

2019年1月下摘　要：采用免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法和胶体金快速定量法测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量，用这两种方法测定添加不同浓度黄曲霉毒素M1的牛奶，两种方法测定黄曲霉毒素M1牛奶样品的测定结果相对偏差小，相关性好。

胶体金快速定量法检测简便快速，能用于大批量样品的快速筛查。

关键词：牛奶；黄曲霉毒素M1；超高效液相色谱-串联质谱；胶体金快速定量1　前言黄曲霉毒素M1（AFM1）是由常见的黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的代谢产物，其物理化学性质稳定。

哺乳类动物摄入被AFB1污染的饲料后，在体内羟基衍生转化成AFM1。

AFM1的危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。

牛奶中的黄曲霉毒素主要来源于饲料。

黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物。

我国规定牛奶中黄曲霉毒素 M1含量不得超过0.5 μg/kg。

2　材料与方法2.1　材料与仪器PBS 清洗缓冲液（Charm公司）；AFM1、AFM1-13C17标准液（Romer公司）；AFM1免疫亲和柱（Romer公司）；玻璃纤维滤纸（Whatman公司）；ROSA黄曲霉毒素M1胶体金快速定量检测条（Charm公司，检测限0.5μg/kg）。

UPLC-Xevo TQ MS型超高效液相色谱-串联质谱仪（Waters公司）；孵育器、读数仪（Charm公司）。

2.2　方法2.2.1　免疫亲和层析净化超高效液相色谱-串联质谱法（1）样品前处理牛奶中的黄曲霉毒素M1含量测定一般按照GB 5009.24-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定》第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法进行测定。

（2）液相色谱条件色谱柱：CORTECS UPLC C18 Column，（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流动相A为乙腈；流动相B为0.2%甲酸水梯度洗脱；柱温为40℃；进样量为5μl。