InhibitoryEffectof16FungicidesonPersimmonAnthracno
21种杀菌剂对6种蔬菜病原菌的离体抑制效果
收稿日期：2020-05-30；修回日期：2020-08-29基金项目：国家现代农业产业技术体系广西创新团队（nycytxgxcxtd-10-04）作者简介：秦小芳，女，在读硕士研究生，从事植物病害及其研究。
E-mail ：**************通信作者：袁高庆，女，副教授，从事植物病害及其防治研究。
E-mail ：***************我国是蔬菜的主要生产大国之一，现有蔬菜种植面积超过2000万hm 2，蔬菜种类齐全，资源丰富[1]。
大多数蔬菜种类生长周期短，复种指数高，对水分需求量大，该环境下也适宜多种病害发生，导致损失严重。
在多种蔬菜病原中，立枯丝核菌（Rhi-zoctonia solani ）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxyspo-rum ）、茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum ）均能在多种蔬菜的整个生育期侵染，引起全株萎蔫，影响蔬菜的收成甚至造成绝产[2-5]；瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum ）和胡萝卜软腐果胶杆菌（Pectobac-terium carotovorum subsp .carotovorum ）常直接造成茄果类和瓜果类蔬菜果实腐烂。
其中，瓜果腐霉还可引起多种蔬菜苗期猝倒病，蔓延速度快，易导致成片死苗现象[6-7]；黄单胞菌（Xanthomonas ）是全球最重要的植物病原细菌之一，其中野油菜黄单胞菌野油菜致病变种（X.campestris pv.campestris ）能引起十字花科蔬菜黑腐病，危害叶片、叶球和球茎[8]。
以上6种病原菌寄主范围广，对农业生产影响大，需要采用综合防治措施降低损失。
其中，化学防治在保障蔬菜产业发展中发挥重要作用。
由于化学21种杀菌剂对6种蔬菜病原菌的离体抑制效果秦小芳，张泽优，吴小刚，林纬，黎起秦，袁高庆（广西大学农学院南宁530004）摘要：为减少农药使用量，选用高效且广谱的杀菌剂，采用菌丝生长速率法和最低抑制浓度法测定21种杀菌剂对6种蔬菜病原菌的抑制效果。
益生菌或可预防对食物过敏
益生菌或可预防对食物过敏
2014年09月02日18:36 来源：《中国科学报》
原标题：益生菌或可预防对食物过敏
日前，美国芝加哥大学病理系的研究者发现，向小鼠的胃肠道引入梭菌属细菌能保护这些小鼠不受花生致敏作用的影响，这提示类似的方法可能提供食物过敏的疗法。
据《美国国家科学院院刊》消息，为了研究改变的胃肠道细菌对食物的免疫应答的影响，美国芝加哥大学病理系食物过敏教授、资深研究作者纳格勒及其同事诱导了小鼠的食物过敏原致敏。
当暴露在花生过敏原中的时候，体内没有定居细菌的无菌小鼠，以及在出生时给予抗生素从而减少胃肠道细菌的小鼠，比拥有正常胃肠道细菌群的小鼠产生了针对花生的更高水平的抗体，这表明这种细菌可能提供针对食物过敏的一定程度的防护。
获得了肠道接种梭菌的无菌以及经过抗生素处理的小鼠不再表现出对花生的敏感性，这提示梭菌调控了针对花生过敏的防护。
基因表达分析揭示出了梭菌诱导了细胞因子白细胞介素-22的制造，减少了小鼠肠的渗透性，导致了更少的过敏原到达血流中。
该研究者说，研究结果提示益生菌疗法可能预防或治疗对食物的过敏反应。
（潘玉）。
果胶与多酚相互作用机制及其对食品加工特性影响的研究进展
张璇，赵文，高哲，等. 果胶与多酚相互作用机制及其对食品加工特性影响的研究进展[J]. 食品工业科技，2024，45（1）：378−386.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023030201ZHANG Xuan, ZHAO Wen, GAO Zhe, et al. Research Progress on the Interaction Mechanism of Pectin and Polyphenol and Their Effect on Food Processing Characteristics[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(1): 378−386. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023030201· 专题综述 ·果胶与多酚相互作用机制及其对食品加工特性影响的研究进展张 璇1，赵 文1,2，高 哲1，李美娇1，吴梦颖1，周 茜1,*（1.河北农业大学食品科技学院，河北保定 071000；2.河北省农产品加工工程技术研究中心，河北保定 071000）摘 要：果胶和多酚共存于植物性食品体系中。
除天然存在的果胶-多酚复合物外，在受到加热、高压、干燥等外力作用的食品加工过程中，两者会快速且自发地进行相互作用。
果胶与多酚之间的相互作用会影响食品的理化性质和功能特性。
本文总结了果胶与多酚相互作用的机制、内部和外部多重影响因素、主要的研究方法并结合 Langmuir 和Freundlich 常见的等温吸附模型对果胶与多酚之间的吸附行为进行描述和定量表征。
此外还探讨了两者相互作用对食品加工特性及多酚生物可利用性的影响，分析了该领域的研究方向和发展趋势。
关键词：果胶，多酚，相互作用，等温吸附模型，生物可利用性本文网刊:中图分类号：TS255.1 文献标识码：A 文章编号：1002−0306（2024）01−0378−09DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2023030201Research Progress on the Interaction Mechanism of Pectin and Polyphenol and Their Effect on Food Processing CharacteristicsZHANG Xuan 1，ZHAO Wen 1,2，GAO Zhe 1，LI Meijiao 1，WU Mengying 1，ZHOU Qian 1, *（1.College of Food Science and Technology, Hebei Agricultural University, Baoding 071000, China ；2.Engineering Technology Research Center for Agricultural Product Processing of Hebei, Baoding 071000, China ）Abstract ：The pectin and polyphenols that co-exist in plant-based food systems form complexes in natural conditions and interact quickly and spontaneously during food processing due to external forces, such as heating, high pressure, and drying.The interaction can affect the physicochemical properties and functional properties of foods. This review summarizes the mechanisms, multiple internal and external influencing factors, and main research methods involved in pectin and polyphenol interaction, while their adsorption behavior is described and quantitatively characterized using the isothermal adsorption model commonly used by Langmuir and Freundlich. In addition, the impact of pectin and polyphenol interaction on food processing characteristics and polyphenol bioavailability is also discussed, and the future research prospects and development trends in this field are analyzed.Key words ：pectin ；polyphenol ；interactions ；isothermal adsorption models ；bioavailability果胶是一种酸性杂多糖，广泛存在于蔬菜、水果和谷物等植物细胞壁中，在人类健康中发挥着重要的作用[1]。
球囊菌侵染对意大利蜜蜂幼虫肠道免疫与解毒相关基因表达及蛋白质、脂质和糖类含量的影响
6种食品防腐剂对金黄色葡萄球菌抑菌效果及肠毒素基因表达的影响
※生物工程葚品科学2016, Vol.37, No.21 1516种食品防腐剂对金黄色葡萄球菌抑菌效果及肠毒素基因表达的影响王琼，唐俊妮*汤承，陈娟(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041)摘要：目的：探索6种食品防腐剂一亚硝酸盐、苯甲酸钠、e-聚赖氨酸、壳聚糖、茶多酚、Nisin对1株引起食 物中毒的金黄色葡萄球菌S A003的抑菌作用，以及对该菌株所含不同肠毒素基因在m R N A水平表达的影响。
方法：按照G B 2760—2014《食品添加剂使用标准》限量标准的质量浓度，分别添加6种不同的防腐剂在金黄色葡萄球菌 S A003初始接菌量约为105C F U/m L的T S B液体培养基中，37 °C培养24 h后进行菌落计数；同时收集菌体用于R N A提 取，将提取的R N A进行反转录后，采用荧光定量聚合酶链式反应方法检测各肠毒素基因在m R N A水平上的相对表达 量。
结果：在国标最大限量条件下，不同添加剂对金黄色葡萄球菌S A003的抑菌作用强弱顺序分别为：Nisin>茶多 酚>壳聚糖>e-聚赖氨酸>苯甲酸钠>亚硝酸盐。
6种防腐剂均能抑制肠毒素sea、sed、seg、se/、se/y、se/ra、se/r 和基因在转录水平上的表达，但作用效果存在差异。
结论：在T S B液体培养基中添加一定剂量的防腐剂不仅能 抑制金黄色葡萄球菌的生长，还能够显著降低肠毒素基因的表达量。
关键词：食品防腐剂；金黄色葡萄球菌；肠毒素基因；表达Inhibitory Effect of Six Food Antiseptics on the Growth and Staphylococcal Enterotoxin (SE) Gene Expression ofStaphy/ococcus aureusW A N G Qiong,T A N G Junni*,T A N G C h e n g,C H E N Juan(College of Life Science and Technology,Southwest University for Nationalities,C h e n g d u610041, China)Abstract:Objective:T o explore the inhibitory effect of six food antiseptics(nitrite,sodium benzoate,e-polylysine,chitosan, polyphenols,and nisin)on the growth of Staphy/ococcus aureus S A003, a strain capable of causing food poisoning,as well as on the expression of enterotoxin genes by this strain at the m R N A level.Methods:According to the national standard(G B 2760—2014) concentration limits,aqueous solutions of six different preservatives were prepared and added into T S B m e d i u m inoculated with about105C F U/m L of S.aureus S A003. All cultures were shaken at150 r/min at37 C.After24 h,the colonies of the cultures treated by different preservatives were counted,respectively.At the same time,the cells were collected for R N A extraction and reverse transcription.The fluorescence quantitative P C R was used to detect the relative expression level of each enterotoxin gene at the m R N A level.Results:At the G B m a x i m u m concentration limits,the inhibitory effects of different additives on the growth of S.aureus S A003 were nisin> polyphenols> chitosan> e-polylysine> sodium benzoate> nitrite.All six preservatives could inhibit the expression of sea,sed,seg,s e i,s e l j,selm,s e/r and s e/u genes at the transcriptional level and their effects were significantly different.Conclusion:Adding preservatives in liquid m e d i u m not only inhibited the growth of S.aureus,but also significantly reduced the expression of staphylococcal enterotoxin genes.K e y w o r d s:food antiseptics;Staphy/ococcus aureus;enterotoxin genes;expressionD O I:10.7506/spkx1002-6630-201621026中图分类号：T S207.4 文献标志码：A文章编号：1002-6630 (2016) 21-0151-06引文格式：王琼，唐俊妮，汤承，等.6种食品防腐剂对金黄色葡萄球菌抑菌效果及肠毒素基因表达的影响[J].食品科学，2016, 37(21): 151-156. D O I:10.7506/spkx1002-6630-201621026. http://w w W A N G Qiong,T A N G Junni,T A N G C h e n g,et al.Inhibitory effect of six food antiseptics on the growth and staphylococcal enterotoxin (S E)gene expression of Staphy/ococcus aureus[J].F o o d Science, 2016, 37(21): 151-156. (in Chinese with English abstract)D0I:10.7506/spkx1002-6630-201621026. http://w w 收稿日期：2016-01-04基金项目：国家自然科学基金面上项目（31371781);四川省应用基础项目（2014J Y0253);教育部“新世纪人才支持计划”项目（N C E T-11-0847)作者简介：王琼（1990—)，女，硕士研宄生，研宄方向为畜产品加工与安全。
蜂蜜的抗菌机理及其抗菌效果的影响因素
天然产物研究与开发NATURAL PRODU CT RESEARCH AND DEVELOPM ENT 2004 Vol 116 No 14收稿日期:2003-04-28 接受日期:2003-09-12 *通讯作者T el:86-571-86971952;E -mail:flhu@蜂蜜的抗菌机理及其抗菌效果的影响因素朱 威 胡福良*李英华 詹耀锋(浙江大学动物科学学院 杭州 310029)摘 要 利用蜂蜜的抗菌特性治疗各种疾病或创伤是蜂蜜开发中一个比较热门的方向。
本文对蜂蜜可能的抗菌机理以及蜂蜜中的抗菌组分作了阐述,对影响蜂蜜抗菌效果的因素以及蜂蜜抗菌特性的医学应用进行了探讨。
关键词 蜂蜜;抗菌;过氧化氢;高渗;敷料THE ANTIBACTERIAL MECHANISM AND THEAFFECTED FACTORS OF HONEYZHU Wei,HU Fu -liang *,LI Ying -hua,ZHAN Yao -feng(Colle ge of A nimal Sciences,Zhej iang Univ ersity ,Hangzhou 310029,China)Abstract Using the antibacterial property of natural honey to cure the w ound,hurt,ulcer and other diseases attracted much attention.This paper discussed the mechanism of the possible an -tibacterial activity and component of honey.Possible factors to affect the antibacterial activity and the application of honey w ere also discussed.Key w ords honey;antibacterial;osmosis;perox ide hydrogen;dressing 蜂蜜具多种药理功能,其药用价值的开发利用研究已有很长历史。
毒胡萝卜素诱导内质网应激对小鼠调节性T细胞免疫功能的影响
及ＥＲＳ￣Ｈ关信 号通路 的影 响。方法 采用 免疫磁珠分 离法分选ＢＡＬＢ／ｃ／］￣鼠脾脏 Ｔｒｅｇ，流式 细胞术检测其 分选纯度 。采用
流式 细胞术检测 Ｔｒｅｇ叉 头翼 状螺旋 转录 因子 （Ｆｏｘｐ３）及细胞 毒性Ｔ细胞 相关抗原 ４（ＣＴＬＡ．４）表达的 时间及剂量效 应关 系。
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测 细胞ＥＲＳ信号通 路相关分 子葡萄糖 调节 蛋 白７８（ＧＲＰ７８）、真核细胞 转录起始 因子２ｃ￣（ｅｌＦ２ａ）、磷 酸化
ＦＥＮ Ｇ Ｚｈｅｎ—ｚｈｅｎ ，ＬＩＵ Ｙｉｎｇ Ｊ Ｄ ＯＮ Ｇ Ｎ ｉｎｇ ，ＹＵ Ｙａｎ ，Ｍ Ａ Ｔａｏ Ｊ ＹＡＯ Ｙｏｎｇ—ｒｕｉｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００５２，Ｃｈｉｎａ Ｔｒａｕｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ ＰＬＡ Ｇｅｎｅｒａｆ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｑｉｎｇｌ ０００４８，Ｃｈｉｎａ．
ｅＩＦ２ｃ￣（ｐ．ｅｌＦ２ｅ￣）、转录激活 因子４（ＡＴＦ４）表达／活化水平 。将Ｔｒｅｇ单 独或与效应 Ｔ细胞 （Ｔｅｌ１）共培养 ，采用流 式细胞术 检测 Ｔｅ 的 增殖活性 ，ＥＬＩＳＡ法检Ｎ Ｔｒｅｇ￣细胞介素 （ＩＬ）．１０和转 化生长 因子（ＴＧＦ）．ｐ生成 以及共培 养上清 中ＩＬ．２、ＩＬ．４、干扰 素
［关键词］ 调节 性Ｔ细胞 ；免疫功 能 ；内质９２．１２
［文献标 志码］ Ａ
［文章编号］ ０５７７．７４０２（２０１８）０６—０４５９．０６
［ＤＯＩ］ １０．１ １８５Ｓ／ｊ．ｉｓｓｎ．０５７７ ７４０２．２０１８．０６．０２
绿薄荷精油对温和气单胞菌群体感应现象及其腐败特性的抑制作用
绿薄荷精油对温和气单胞菌群体感应现象及其腐败特性的抑制作用梅永超1，李婷婷2,*，刘 楠1，王当丰1，赫彬彬1，励建荣1,*（1.渤海大学食品科学与工程学院，生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心，辽宁锦州 121013；2.大连民族大学生命科学学院，辽宁大连 116600）摘 要：本研究以紫色杆菌Chromobacterium violaceum 026（CV026）为检测指标，结合气相色谱-质谱定量检测信号分子，研究绿薄荷精油对温和气单胞菌群体感应现象及其腐败特性的影响。
结果表明：在亚抑菌剂量下，绿薄荷精油具有降低紫色杆菌CV026产紫色菌素的能力，其剂量为2 μL/mL时，对紫色菌素的抑制率达56.17%；绿薄荷精油对温和气单胞菌N-酰基高丝氨酸内酯的分泌及某些腐败特性的表达，如生物被膜的形成、胞外蛋白酶活力和细菌迁移（群集和泳动），均有抑制作用；随着绿薄荷精油剂量的升高，抑制效果更趋明显，并且呈现剂量依赖性。
可见，绿薄荷精油具有良好的群体感应抑制活性，可作为新型的群体感应抑制剂用于延长水产品货架期。
关键词：绿薄荷精油；温和气单胞菌；群体感应；抑制作用Effect of Spearmint Oil on Quorum Sensing and Spoilage Characteristics of Aeromonas sobriaMEI Yongchao1, LI Tingting2,*, LIU Nan1, WANG Dangfeng1, HE Binbin1, LI Jianrong1,*(1. National & Local Joint Engineering Research Center of Storage, Processing and Safety Control Technology for Fresh Agriculturaland Aquatic Products, College of Food Science and Engineering, Bohai University, Jinzhou 121013, China;2. College of Life Science, Dalian Minzu University, Dalian 116600, China)Abstract: In this paper, the effect of spearmint oil on quorum sensing and spoilage characteristics of Aeromonas sobria was studied. For this purpose, we firstly assessed the inhibitory impact of spearmint oil on the violacein-producing ability of Chromobacterium violaceum 026 (CV026). The signal molecule was detected by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The results showed that spearmint oil could reduce the violacein production of CV026 at sub-minimum inhibitory concentrations. When the concentration of spearmint oil was 2 μL/mL, the inhibitory rate of violacein was 56.17%. The secretion of N-acyl-homoserine lactones (AHLs) and some spoilage characteristics such as biofilm formation, extracellular protease activity and bacterial motility of Aeromonas sobria were inhibited by spearmint oil effectively and dose-dependently. These results showed that spearmint oil could be developed as a quorum sensing inhibitor to enhance the shelf life of aquatic products.Keywords: spearmint oil; Aeromonas sobria; quorum sensing; inhibitory effectsDOI:10.7506/spkx1002-6630-201815003中图分类号：TS201.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2018）15-0017-07引文格式：梅永超, 李婷婷, 刘楠, 等. 绿薄荷精油对温和气单胞菌群体感应现象及其腐败特性的抑制作用[J]. 食品科学, 2018, 39(15): 17-23. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201815003. MEI Yongchao, LI Tingting, LIU Nan, et al. Effect of spearmint oil on quorum sensing and spoilage characteristics of Aeromonas sobria[J]. Food Science, 2018, 39(15): 17-23. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201815003. 收稿日期：2017-03-28基金项目：国家自然科学基金面上项目（31471639）；国家自然科学基金青年科学基金项目（31301572）第一作者简介：梅永超（1994—），男，硕士研究生，研究方向为水产品贮藏加工及质量安全控制。
盐胁迫下丛枝菌根真菌(AMF)对紫花苜蓿生长的影响
盐胁迫下丛枝菌根真菌(AMF)对紫花苜蓿生长的影响作者：张璐张倩叶宝兴来源：《山东农业科学》2010年第03期摘要:采用盆栽受控试验法,设置无盐胁迫(0.046%)、轻度盐胁迫(0.2%)和重度盐胁迫(0.5%)3个盐分水平,研究了不同盐分下丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi, AMF)对紫花苜蓿(Medicago sativa L.)生长量和耐盐性的影响。
结果表明,随盐胁迫程度的增加,相同AMF 处理的紫花苜蓿生长量显著降低(P关键词:盐胁迫;丛枝菌根真菌(AMF);紫花苜蓿中图分类号:S551+.7 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2010)03-0032-06盐渍化是自然生态系统中广泛存在的一种胁迫生境条件,全球盐渍化土地约占耕地总面积的10%,山东省盐渍土总面积为140×104 hm2,约占全国盐碱地面积的6%。
土壤盐渍化严重制约着农业生产,影响了资源与环境的可持续发展。
紫花苜蓿(Medicago sativa L.)是重要的豆科牧草,其营养、饲用价值居于各种牧草之首,同时叶片具有排盐机制,具有较强的耐盐性[1～3],在沿海滩涂地区广泛分布,是改良盐碱地的理想材料。
如何利用和开发盐渍化土壤,提高盐胁迫下紫花苜蓿的耐盐性和产量日益受到重视[4～6]。
丛枝菌根真菌(AMF)广泛存在于盐渍化土壤生态环境,陆地生态系统中约90%的高等植物都能与之形成菌根共生体[7]。
很多研究表明,AMF能降低植物根系pH值,增加土壤团粒结构,降低钠离子对植物的毒害,促进宿主植物生长,提高其适应盐胁迫的能力[8～12]。
盐胁迫条件下,AMF 对植物的促进作用被认为是对植物形态、生理和生物化学等多方面影响的综合结果[13]。
前人围绕紫花苜蓿耐盐品种的筛选展开深入细致的研究,以提高紫花苜蓿盐胁迫下的产量[1～3],但至于AMF能否提高紫花苜蓿耐盐性鲜见报道。
基于肠道菌群探究贻贝提取物对食物诱导的系统低度炎症的干预作用
基于肠道菌群探究贻贝提取物对食物诱导的系统低度炎症的干预作用摘要部分人群过量食用荔枝、辣椒和食品添加剂可以引起系统低度炎性“上火”，但机制尚不明确，且高效控制方法缺乏。
现有合成抗炎药物具有明显不良反应，而贻贝作为天然安全的海洋源抗炎活性物质，应用于系统炎症的控制潜力巨大，但其抗炎效果及其控制机制尚待探明。
本研究通过构建肠道菌群人源化小鼠模型，筛选出食物致炎人源化菌群小鼠模型并探讨其机制；并以贻贝提取物对致炎模型小鼠进行干预。
通过生物化学、组织化学及生物信息学等手段测定小鼠血浆中LPS、炎性因子水平、肠道菌群谱和肠壁通透性水平，探究“上火”食物致炎及贻贝提取物抑炎作用及其机制。
结果如下：1、构建肠道菌群人源化小鼠（HFA）模型可一定程度模拟志愿者肠道菌群通过给小鼠灌胃志愿者粪便菌悬液，其肠道菌群在门水平上各组分丰度比例接近于志愿者；在属水平上两组在UPGMA聚类分析可聚为一类；在种水平上志愿者特有的21种菌可以在模型小鼠肠道内定植成功，说明肠道菌群人源化小鼠在一定程度上模拟了志愿者肠道菌群，模型构建成功。
2、高剂量荔枝诱发菌群紊乱改变肠道屏障完整性导致人源化小鼠系统低度炎症辣椒和双乙酸钠诱发小鼠机体产生低度系统炎症反应的程度都不如高剂量荔枝诱发的炎症反应显著。
当小鼠服用了高剂量荔枝提取物后血清中典型促炎因子TNF-α超过了空白对照组的2倍，表明可以产生显著的系统性低度炎症，由高剂量荔枝提取物可以成功构建人源化系统低度炎症小鼠模型。
实验结果显示，高剂量荔枝干预下会使得小鼠肠道的物种丰富程度有明显提高；在门水平上，梭菌门丰度降低较为显著；在属水平上，和其它组间存在显著差异的是巨单胞菌属丰度比例极显著降低了99.32倍、嗜胆菌属丰度比例显著升高了3.43倍。
综合发现，梭菌门、巨单胞菌属和嗜胆菌属可能是过量食用荔枝诱发全身性低度炎症的关键驱动菌群。
此外，高剂量荔枝提取物可导致肠上皮细胞连接复合体增加、肠隐窝增生、杯状细胞耗损等肠粘膜屏障减弱的现象。
219401818_竹笋膳食纤维中结合多酚的提取工艺优化及抗氧化活性分析
冉莎，张甫生，李彬，等. 竹笋膳食纤维中结合多酚的提取工艺优化及抗氧化活性分析[J]. 食品工业科技，2023，44（13）：233−241.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022090198RAN Sha, ZHANG Fusheng, LI Bin, et al. Extraction Optimization and Antioxidant Activity of Bound Polyphenols in Bamboo Shoot Dietary Fiber[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(13): 233−241. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022090198· 工艺技术 ·竹笋膳食纤维中结合多酚的提取工艺优化及抗氧化活性分析冉 莎1，张甫生1，李 彬2，杨金来3，吴良如3, *，郑 炯1,*（1.西南大学食品科学学院，食品科学与工程国家级实验教学示范中心（西南大学），重庆 400715；2.重庆市林业科学院，重庆 400036；3.国家林业和草原局竹子研究开发中心，浙江杭州 310012）摘 要：为探究竹笋膳食纤维（bamboo shoots dietary fiber, BSDF ）中结合多酚最佳提取工艺、多酚组成及其抗氧化活性，本研究以BSDF 为原料，分别对提取时间、提取温度、碱液浓度和液料比4个因素进行单因素实验，在单因素实验基础上，结合Box-Behnken 响应面试验优化BSDF 中结合多酚的提取工艺，并对所提取的结合多酚组分进行了初步鉴定，同时以ABTS 阳离子自由基、DPPH 自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基清除率为指标考察其抗氧化活性。
芒柄花黄素对实验小鼠免疫功能的影响
芒柄花黄素对实验小鼠免疫功能的影响
芒柄花黄素（mangiferin）是一种在芒果中广泛存在的天然黄酮类化合物。
近年来，
研究表明，芒柄花黄素具有多种生物活性，如降血糖、抗氧化、抗炎等作用。
然而，对于
芒柄花黄素对免疫功能的影响，研究尚不多见。
本文旨在探讨芒柄花黄素对实验小鼠免疫
功能的影响。
实验方法：选用健康的C57BL/6小鼠30只，随机分为三组，每组10只。
其中，对照
组给予生理盐水，低剂量组给予芒柄花黄素10 mg/kg，高剂量组给予芒柄花黄素50 mg/kg。
每组小鼠均通过腹腔注射芒柄花黄素或者生理盐水，每周一次，连续8周。
实验结束后，
测定小鼠免疫功能参数，包括外周血白细胞计数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞亚群、
免疫球蛋白等。
实验结果：与对照组相比，芒柄花黄素低剂量组小鼠外周血白细胞计数明显增加
（P<0.05），高剂量组则差异无显著性（P>0.05）。
同时，在芒柄花黄素高剂量组和低剂
量组中，小鼠的巨噬细胞吞噬功能均显著提高（P<0.05）。
对于免疫球蛋白，芒柄花黄素
低剂量组小鼠的IgG、IgM明显增加（P<0.05），而在高剂量组中仅IgM含量增加（P<0.05）。
T淋巴细胞亚群方面，芒柄花黄素高剂量组中CD4+/CD8+比例较对照组显著升高（P<0.05），而在低剂量组中差异无显著性（P>0.05）。
致病菌检验原理纲要
甘氨酸的抗菌性（驹形和男 等1968，选取部分）
甘氨酸浓度 0% 0.2% 0.4% 0.6% 0.8% 1% 2% 5%10%
细菌
枯草杆菌 ++++ ++++ +++ +++ ++ ++ -
-
-
大肠杆菌 ++++ ++++ ++++ ++++ ++ ++ ++ -
-
铜绿假单胞菌 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ -
链球菌
00 0 1 0
0 0 00 0
乳杆菌
00 0 3 3
0 0 00 0
棒杆菌
32 0 1 0
3 1 00 0
微杆菌
00 0 0 2
0 0 00 0
芽孢杆菌
11 0 0 0
0 010 0
酵母
41000
2 0 00 0
合计(菌落数） 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40
注：菌落数为4个猪肉保存样的平均值。
致病菌的生态研究 在致病菌筛选中的应用
国贸食品科学研究所
国家副食品质量监督检验中心
细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选
第31卷 第12期V o l .31 No .12草 地 学 报A C T A A G R E S T I A S I N I C A2023年 12月D e c . 2023d o i :10.11733/j.i s s n .1007-0435.2023.12.009引用格式:木扎帕尔㊃吐鲁洪,乌汉夫,侯 雨,等.细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选[J ].草地学报,2023,31(12):3651-3660T U L UH O N G M u -z h a p a e r ,WU H a n -f u ,H O U Y u ,e t a l .I d e n t i f i c a t i o na n dB i o l o g i c a lC h a r a c t e r i s t i c so f t h eP a t h o -g e nC a u s i n g A z o l l a f i l i c u l o i d e s B l a c k R o ta n di t sE f f e c t i v e A g e n t sS c r e e n i n g [J ].A c t a A gr e s t i aS i n i c a ,2023,31(12):3651-3660细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选木扎帕尔㊃吐鲁洪,乌汉夫,侯 雨,初荧荧,刘 传,霍美竹,崔国文*(东北业大学动物科学技术学院,黑龙江哈尔滨150036)收稿日期:2023-05-15;修回日期:2023-08-16基金项目:中央财政林业科技推广示范资金项目 野大麦种子扩繁与退化盐碱草地生态修复技术推广与示范(黑[2021]T G02) 资助作者简介:木扎帕尔㊃吐鲁洪(1998-),男,维吾尔族,新疆喀什人,硕士研究生,主要从事牧草抗病育种研究,E -m a i l :176********@163.c o m ;*通信作者A u t h o r f o r c o r r e s p o nde n c e ,E -m a i l :c gw 603@163.c o m 摘要:为了明确引起细绿萍黑腐病病原菌种类,研究该病原菌的生物学特性及常用杀菌剂对其菌丝生长的抑制作用㊂形态学结合多基因联合发育分析结果表明,引起细绿萍黑腐病的致病菌为细极链格孢(A l t e r n a r i a t e n u i s s i -m a )㊂生物学特性表明,细极链格孢菌丝生长和产孢的最适温度均为25ħ,全黑暗条件下利于菌丝生长和产孢㊂pH 值在6.0~8.0时更利于其产孢,在C MA 培养基上生长速度最快,而在P S A 培养基上产孢量最大㊂碳源选择上,在丙三醇上生长速度最快,而甘露醇最有利于其产孢;氮源选择上,在硝酸钾上的生长速度最快,且酵母浸膏最有利于其产孢㊂室内药剂毒力测定结果表明,供试5种杀菌剂对细极链格孢菌丝生长均有一定的抑制作用,其中32.5%苯甲嘧菌酯S C 的抑制活性最强,E C 50为0.0012μg ㊃m L -1㊂关键词:细绿萍;细极链格孢;生物学特性;药剂毒力测定中图分类号:S 432.44 文献标识码:A 文章编号:1007-0435(2023)12-3651-10I d e n t i f i c a t i o na n dB i o l o g i c a l C h a r a c t e r i s t i c s o f t h eP a t h o g e nC a u s i n gA z o l l a f i l i c u l o i d e sB l a c kR o t a n d i t sE f f e c t i v eA g e n t s S c r e e n i n gT U L U H O N G M u -z h a p a e r ,W U H a n -f u ,H O UY u ,C H UY i n g -y i n g,L I UC h u a n ,H U O M e i -z h u ,C U IG u o -w e n *(C o l l e g e o fA n i m a l S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,N o r t h e a s tA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,H a r b i n ,H e i l o n g j i a n g Pr o v i n c e 150036,C h i n a )A b s t r a c t :I no r d e r t o i d e n t i f y t h e p a t h o g e n c a u s i n g t h e b l a c k r o t o f A z o l l a f i l i c u l o i d e s ,t h e b i o l o gi c a l c h a r -a c t e r i s t i c s o f t h e p a t h o g e n a n d t h e i n h i b i t o r y e f f e c t o f c o m m o n f u n g i c i d e s o n i t s h y p h a e g r o w t hw e r e s t u d -i e d .T h er e s u l t so ft h e m o r p h o l o g i e sc o m b i n e d w i t h m u l t i -g e n ed e v e l o p m e n ta n a l y s i ss h o w e dt h a tt h e p a t h o g e nc a u s i n g t h e b l a c k r o t o f A z o l l a f i l i c u l o i d e s w a s A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a .B i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f A .t e n u i s s i m a s h o w e d t h a t t h e o p t i m u mt e m p e r a t u r e f o rm y c e l i a l g r o w t h a n d s p o r u l a t i o n o f A .t e n u i s s i -m a w a s 25ħ,a n d i tw a s f a v o r a b l e f o rm y c e l i a l g r o w t ha n ds p o r u l a t i o nu n d e r a l l d a r kc o n d i t i o n s .T h e p H v a l u eo f 6.0~8.0w e r em o r e c o n d u c i v e t o s p o r u l a t i o n .T h e g r o w t hr a t eo f t h e f u n gu sw a s t h e f a s t e s t o n C MA m e d i u m ,a n d t h e s p o r u l a t i o nw a s t h e l a r ge s t o nP S A m e d i u m.I n t h e s e l e c t i o nof c a r b o ns o u r c e ,t h e s t r a i no f t h a t f u ng u s g r e wf a s t e s t i n g l y c e r o l ,whi l em a n n i t o lw a s t h em o s t b e n e f i c i a l t o i t s s po r u l a t i o n .I n t h e s e l e c t i o no f n i t r o ge n s o u r c e s ,t h e s t r a i n g r e wf a s t e s t i n p o t a s s i u mn i t r a t e ,a n d t h e y e a s t e x t r a c tw a s t h e m o s t b e n e f i c i a l t o i t s s p o r u l a t i o n .T h e r e s u l t s o f l a b o r a t o r y t o x i c i t y t e s t s h o w e d t h a t a l l 5f u ng i c i d e s t e s t e dh a d c e r t ai n i n h i b i t o r y e f f e c t s o n t h em y c e l i a l g r o w t h o f A .t e n u i s s i m a ,a m o n g w h i c hB e n z o x ys t r o b i n 32.5%S Ch a d t h e s t r o n g e s t i n h i b i t i o n ,a n dE C 50wa s 0.0012μg ㊃m L -1.T h i sw a s t h e f i r s t r e p o r t t h a t A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a i s a b l e t o c a u s e t h eb l a c k r o t o f A z o l l a f i l i c u l o i d e s i nC h i n a .K e y wo r d s :A z o l l a f i l i c u l o i d e s ;A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a ;B i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s ;T o x i c i t y t e s t草地学报第31卷细绿萍(A z o l l a f i l i c u l o i d e s L a m k)是满江红科(A z o l l a c e a e)满江红属(A z o l l a)蕨类水生植物[1]㊂从德国引入我国,国内分布在长江流域各省,由于细绿萍的抗寒性好,在5ħ时开始生长,在气温-8ħ时,短期也不会发生冻害而死亡,因此在东北三省开始引种试验[2-3]㊂细绿萍亩产高且生长速度快,气温20ħ时2 3天萍产量可翻倍,饲草的营养价值高,适口性好,可以不经过加工就作为饲料给家畜投喂㊂细绿萍具有巨大的市场潜力和产品竞争力,不仅可以在湖泊㊁沼泽㊁池塘等天然水面生长良好,也可以在屋前屋后等空旷场所的简易池塘中种植,不占用耕地,草量大,2亩水面的细绿萍产量可养殖100头猪,1亩水面可养殖200只鹅,并且可满足夏季4个月的草料需求㊂细绿萍营养价值丰富,产草量极高,在东北110~125天生长期内,鲜草产量可高达5.4ˑ105~9.75ˑ105k g㊃h m-2;干物质含量27.94%,粗蛋白14.14%,是猪㊁禽类和鱼等的优良饲草[4-5]㊂作为优良的饲草品种,具有固氮能力强且营养全面等特点,细绿萍中丰富的维生素和矿物质可以改善家禽的免疫力并促进生长发育,提高畜禽品质,增强抗病能力[6-9]㊂细绿萍在农业生产中可以作为优质绿肥,细绿萍可充分吸收水分和光照来增加土壤有机质来增加作物产量[10-11]㊂细绿萍不仅可以作为优质饲草,在水质净化上也起到良好的作用,对含有重金属的工业废水的净化能力很强,净化后的水可接近灌溉水的标准[12-13]㊂因此,细绿萍的饲用价值和生态学价值很高,开发潜力很大㊂随着细绿萍的广泛推广种植,导致病原微生物开始蔓延扩散,致使细绿萍出现发黑腐烂的病症,而明确引起细绿萍黑腐病的病原菌种类是防治该病害的关键㊂本研究对细绿萍植株中分离获得的黑腐病病原菌 细极链格孢(A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a(K u n z e) W i l t s h i r e)进行分离鉴定㊁生物学特性和室内毒力测定的研究,以期为今后细绿萍黑腐病的诊断和防治提供一定的理论支撑㊂1材料与方法1.1供试材料试验病原菌为本实验室2022年从黑龙江省哈尔滨市细绿萍培育田中染病的龙引细绿萍中经组织分离并纯化所得,回接植物为东北农业大学培育的龙引细绿萍㊂1.2病原菌的分离与纯化在实验室条件下,采用常规组织分离法进行病原菌的分离[14]㊂将采集到的细绿萍孢子病样用蒸馏水冲洗干净,自然晾干㊂在超净工作台上,用手术刀切取病健交界处的组织块,并将其置于75%乙醇中浸泡消毒30s,再将其放入0.1%的升汞溶液中2m i n,用无菌水漂洗3次后,放置在已灭菌的滤纸上,待样品表面水分自然晾干,最后将样品放在p H 值为7.0的P D A培养基中,25ħ条件下避光培养3 5d㊂待组织块长出菌落后,采用单胞分离法进行纯化培养[15],并将纯化后的分离物接种于P D A 斜面上培养好后4ħ保存备用㊂1.3病原菌的致病性测定与再分离将病原菌在P D A培养基上25ħ暗培养7d后,根据资料所描述的方法配制孢子悬浮液备用[16]㊂称取25g细绿萍装入容器中,水和孢子悬浮液以9ʒ1的混合,对照组加入同等量的无菌水,25ħ保湿培养7d期间观察并记录细绿萍发病情况㊂对于回接后的具有明显病症的区域进行致病菌分离,再次纯化培养,观察并记录再次分离的菌株和初始菌株之间的差异,完成柯赫式氏法则验证㊂1.4病原菌形态学鉴定将病原菌在P D A培养基上恒温25ħ培养7d 后,观察其菌落长势情况,菌落大小和颜色,在光学显微镜下观察菌丝形态,分生孢子的大小㊁形态特征和着生方式,参照文献[17-20]确定病原菌种类㊂1.5病原菌的分子生物鉴定将病原菌接种在P D A培养基上,在恒温培养箱中25ħ培养7d后,刮取菌落中约150m g的菌丝,采用N u C l e a nP l a n tG e n o m i cD N A K i t试剂盒说明书提取病原菌D N A,以提取的D N A作为P C R 模板,分别用I T S㊁E F-1α和H i s t o n e H3三种通用引物(引物见表1)对提取的D N A进行P C R扩增㊂P C R扩增产物经1.0%琼脂糖检测后由生工生物工程(上海)股份有限公司测序,测序结果通过B l a s t 在N C B I数据库中比对,进行同源比对㊂2563第12期木扎帕尔㊃吐鲁洪等:细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选表1 病原菌的I T S ,E F -1α和H I SH 3基因的P C R 扩增引物T a b l e 1 P C R p r i m e r s f o r a m p l i f y i n g IT S ,E F -1αa n dH i s t o n eH 3g e n e s o f t h e p a t h o ge n 序列名称S e qu e n c e n a m e 引物序列P r i m e r s e qu e n c e I T S 1T C C G T A G G T G A A C C T G C G GI T S 4T C C T C C G C T T A T T G A T A T G CE F -728F C A T C G A G A A G T T C G A G A A G G E F -986R T A C T T G A A G G A A C C C T T A C C H I S -FA G G T C C A C T G G T G G C A A GH I S -R A G C T G G A T G T C C T T G G A C T G 1.6 病原菌的生物学特性的研究1.6.1 不同温度、光照及p H 值对菌丝生长和产孢量的影响 将病原菌置于25ħ恒温培养7d 后,使用直径5m m 的无菌打孔器在菌落边缘打取若干个菌饼,接种于以下不同条件下的P D A 培养基上培养:温度条件设置为5,10,15,20,25,30,35,40ħ共8个温度梯度恒温暗培养;光照条件设置为全天光照(L i g h t ,L )㊁全天黑暗(D a r k ,D )㊁半天光照和半天黑暗(12L /12D )共3种处理25ħ恒温暗培养;使用pH 计和配置好的1%N a O H 和1%H C l 母液,将P D A 培养基的p H 值分别调至4,5,6,7,8,9,10,11共8个梯度25ħ恒温暗培养,以上每种处理条件设置3个重复,7d 后采用十字交叉法对菌落直径进行测量,并利用血球计数板计算产孢量,每组重复3次㊂1.6.2 不同培养基对菌丝生长及产孢量的影响供试培养基为水琼脂培养基(WA ),马铃薯葡萄糖琼脂培养基(P D A ),马铃薯蔗糖琼脂培养基(P S A ),查比克培养基(C D A ),燕麦培养基(OMA ),玉米粉培养基(C MA )[21]㊂使用直径5m m 的无菌打孔器在培养7d 的病原菌菌落边缘打取若干个菌饼,并将菌饼分别转接到供试的几种培养基平板中央,每种培养基设置3个重复,25ħ条件下按暗培养7d ㊂按照上文描述的方法测定并计算病原菌的生长速率和产孢量㊂1.6.3 不同碳源对菌丝生长及产孢量的影响 以C D A 培养基为基础培养基,分别用相同质量的葡萄糖㊁麦芽糖㊁可溶性淀粉㊁羟基纤维素钠㊁丙三醇㊁和D -甘露醇代替其中的蔗糖,配成不同碳源的培养基,以不加蔗糖培养基作为缺碳对照㊂按照上文描述的方法测定并计算病原菌的生长速率和产孢量㊂1.6.4 不同氮源对菌丝生长及产孢量的影响 以C D A 培养基作为基础培养基,分别用相同质量的硫酸胺㊁胰蛋白胨㊁牛肉膏㊁磷酸二氢铵㊁酵母浸膏㊁尿素代替其中的硝酸钾,配成不同氮源的培养基,以不加硝酸钾培养基作为缺氮对照㊂按照上文描述的方法测定并计算病原菌的生长速率和产孢量㊂1.7 病原菌室内药剂毒力测定采用菌丝生长速率法[22]对5种药剂进行室内毒力测定㊂将药剂按照浓度稀释配置,详细浓度见表2㊂5种药剂分别稀释成5个不同浓度梯度,将其放入到灭菌处理完毕融化的P D A 培养基中,调制成药剂比1ʒ9的带药培养基,混匀倒入培养皿中,待其冷却后用5m m 打孔器在事先准备好的致病菌培养皿上打取若干菌饼,每个带药培养皿中央放置1块菌饼,重复5次,以不加药剂的培养基作为对照㊂放置在25ħ的恒温培养箱中培养7d 后,采用十字交叉法测量菌落直径大小,计算药剂对病菌的抑制情况㊂表2 5种杀菌剂的浓度T a b l e 2 C o n c e n t r a t i o n s o f f i v e f u n gi c i d e s 杀菌剂F u n g i c i d e s 生产公司C o m p a n y浓度C o n c e n t r a t i o n /μg ㊃mL -130%吡唑醚菌酯30%P yr a c l o s t r o b i nS C 河南勇冠农业科技有限公司H e n a nY o n g g u a nQ i a o d iA g r D i c u l t u r a lT e c h n o l o g y Co .,L t d .0.100.200.501.002.00苯甲㊃嘧菌酯32.5%B e n z o x ys t r o b i nS C 山东新势立生物科技有限公司S h a n d o n g X i n s h i l i B i o t e c h n o l o g y Co .,L t d .0.501.002.002.505.0030%唑醚㊃戊唑醇30%A z o l e ㊃T e b u c o n a z o l eS C孟州广农汇泽生物有限公司M e n g z h o uG u a n g N o n g H u i Z eB i o t e c h n o l o g y Co .,L t d 0.100.200.501.002.0030%噁霉灵30%H y m e x a z o l S C 四川润尔科技有限公司S i c h u a nR u n e rT e c h n o l o g y C o .,L t d 0.100.200.501.002.0050%多菌灵50%C a r b e n d a z i mS P四川润尔科技有限公司S i c h u a nR u n e rT e c h n o l o g y Co .,L t d 0.100.502.505.0010.001.8 数据分析试验数据采用S P S S22.0和E x c e l 2016进行统计分析及作图,对试验数据进行邓肯氏新复极差法进行差异显著性分析,并以平均值ʃ标准差表示㊂2 结果与分析2.1 细绿萍黑腐病病原菌分离和致病性检测在细绿萍养殖田中调查发现,与健康孢子相比(图1A ),发病初期细绿萍孢子由黄褐色变成黑褐色,3563草地学报第31卷呈点状分布,逐步向周边蔓延(图1B)㊂随着细绿萍孢子不断被侵染,大范围细绿萍逐渐开始病变,最后使植株腐烂发臭,一部分孢子黄化干枯(图1C),从而致使整株死亡,使得细绿萍失去饲用和经济价值㊂通过常规组织分离法对30份发病细绿萍黑腐病样进行分离并纯化,得到10个形态一致的菌落,纯化培养后的分离物合编号为X L P1-X L P10,将代表菌株X L P1接种于活体细绿萍孢子7d后,观察到细绿萍孢子发黑,其中还伴随着部分菌丝包裹细绿萍孢子,发病症状显著(图1D~1F)㊂但与田间发病症状有所区别,这可能是因为实验环境与田间环境之间差别造成的㊂对活体回接后的发病病样再次分离后,获得的菌落形态与X L P1一致,经过柯赫氏法则可以确定菌株X L P1为细绿萍黑腐病的病原菌㊂图1田间和实验室条件下细绿萍黑腐病的症状F i g.1 S y m p t o m s o f A z o l l a f i l i c u l o i d e s b l a c k r o t u n d e r f i e l da n d l a b o r a t o r y c o n d i t i o n s注:图A,D表示健康孢子;图B,C表示田间黑腐病症状;图E,F表示致病性检验症状N o t e:P a n e lAa n dD,h e a l t h s p o r e;P a n e l Ba n dC,s y m p t o m s o f t h e b l a c k r o t i n t h e f i e l d;P a n e l Ea n dF,p a t h o g e n i c i t y v e r i f i c a t i o n s y m p t o m s 2.2病原菌的形态学鉴定将菌株X L P1在P D A培养基上培养7d后即可长满全皿,菌落正面最初为灰白色,具有丰富的棉状气生菌丝,然后变为深灰色,菌落底部呈现棕灰色(图2A)㊂利用光学显微镜观察形态特征,分生孢子通常是呈倒棒状至倒梨状或椭圆形,有1~6个横隔和0~3个纵隔,横隔较厚,顶端有一个短喙㊂分生孢子淡褐色,呈链状,长度测量值为11.7至46.3ˑ5.5至15.1μm(n=50)(图2B~2C)㊂根据Y u等[23]对链格孢菌属的形态描述,并结合菌株的形态学鉴定结果,初步确定菌株X L P1为链格孢菌属(A.t e n u i s s i m a)真菌㊂图2菌落的形态特征,菌丝和分离株的分生孢子F i g.2 M o r p h o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e c o l o n y,h y p h a e a n d c o n i d i a o f t h e i s o l a t e s注:A,菌落;B,分生孢子;C,菌丝N o t e:P a n e lA,C o l o n y;P a n e l B,C o n i d i a;P a n e l C,H y p h a e2.3病原菌的分子生物学特征从获得的10个分离株中挑选有代表性的3个菌株进行系统发育分析(X L P1-X L P3)㊂将3个D N A片段(I T S,E F-1α和H i s t o n eH3)结合基因比4563第12期木扎帕尔㊃吐鲁洪等:细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选对数据建立多基因联合系统发育分析(图3)㊂每个分离物的三个P C R 片段的序列保存在G e n B a n k中,其中I T S 基因序列与细极链格孢(登录号:M F 405157)同源性达到100%(登录号:O Q 474944,O Q 474911,O Q 474912),E F -1α基因序列与细极链格孢(登录号:O N 237475)同源性达到99%(登录号:O Q 538182,O Q 538187,O Q 538186),H i s t o n eH 3基因序列与细极链格孢(登录号:O N 352101)同源性达到100%(登录号:O Q 538183,O Q 538185,O Q 538184)且在系统发育树上聚在一起㊂因此,结合形态特征将这3个菌株鉴定为细极链格孢㊂图3 基于I T S ,E F -1α和H i s t o n eH 3序列的3个分离株的联合基因系统发育关系F i g .3 C o m b i n e d g e n e p h y l o g e n e t i c r e l a t i o n s h i p s o f t h r e e i s o l a t e s o f A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a b a s e d o n I T S ,E F -1αa n dH i s t o n eH 3s e qu e n c e s 2.4 生物学特性2.4.1 温度对病原菌菌落直径和产孢量的影响 不同温度条件下菌株X L P 1的菌落直径和产孢量如图4所示㊂在不同温度条件下,菌株X L P 1菌落直径和产孢量均有显著差异(P <0.05)㊂最适菌丝生长温度为25ħ,培养7d 后菌落平均直径达到89.33m m ,当温度为40ħ时几乎不生长,而在低温条件下依然能较好的生长㊂温度条件在20ħ~30ħ时,可产生较多孢子,产孢的最适温度为25ħ,培养7d 后每毫升培养基上产孢量为6.50ˑ105㊂图4 不同温度对X L P 1菌丝生长和产孢量的影响F i g .4 E f f e c t o f d i f f e r e n t t e m p e r a t u r e s o nm y c e l i a l g r o w t ha n d s po r u l a t i o no fX L P 1注:不同小写字母表示不同处理间差异显著(P <0.05),下同N o t e :D i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r sw i t h i n t h e s a m e p a n e l i n d i c a t e a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e nd i f f e r e n t t e m pe r a t u r e t r e a t m e n t s a t t h e 0.05l e v e l ,t h e s a m e a s b e l o w2.4.2 光照对病原菌菌落直径和产孢量的影响不同光照条件下菌株X L P 1的菌落直径和产孢量如图5所示㊂在不同温度条件下,菌株X L P 1菌落直径和产孢量均有显著差异(P <0.05)㊂全黑暗的条件更有利于菌丝的生长和产孢,全黑暗培养7d 后菌落直径可达74.17m m ,每毫升培养基上产孢量为6.25ˑ105㊂而在全光照培养条件下每毫升培养基上产孢量最少,为3.50ˑ105㊂5563草 地 学 报第31卷图5 不同光照条件对X L P 1菌丝生长和产孢量的影响F i g .5 E f f e c t o f d i f f e r e n t l i g h t c o n d i t i o n s o nm y c e l i a l g r o w t ha n d s po r u l a t i o no fX L P 12.4.3 p H 对病原菌菌落直径和产孢量的影响 不同培养基p H 条件下菌株X L P 1的菌落直径和产孢量如图6所示㊂在p H 值为3~11的培养基上,菌株X L P 1的菌丝均可生长,最适宜菌丝生长和产孢的培养基p H 值均为6~8㊂当培养基p H 值为7时,每毫升培养基上产孢量最高,可到达6.24ˑ105㊂而总体来看偏酸或偏碱环境下病原菌都能生长㊂图6 不同p H 条件对X L P 1菌丝生长和产孢量的影响F i g .6 E f f e c t o f d i f f e r e n t p Hc o n d i t i o n s o nm y c e l i a l g r o w t ha n d s po r u l a t i o no fX L P 12.4.4 培养基对病原菌菌落直径和产孢量的影响不同培养基上菌株X L P 1的菌落直径和产孢量分别如图7所示㊂菌株X L P 1在6种供试培养基上均可生长,不同种类的培养基对菌株X L P 1菌落直径和产孢量均有显著差异㊂病原菌菌丝在W A 和P S A 培养基上生长速度较慢,其中在W A 培养基中菌丝最稀疏,在P D A ,C D A ,O M A 和C M A 培养基上生长速度相对较快,其中在C M A 培养基上生长速度最快,培养7d 后菌落平均直径可达88.67m m ㊂病原菌在P S A 培养基上产孢量最大,培养7d 后每毫升培养基上产孢量可达9.06ˑ105,在W A 培养基上产孢量较低㊂因此,可以推测既没有碳源,也没有氮源的情况下病原菌菌丝无法生长,且几乎不产孢㊂2.4.5 碳源对病原菌菌落直径和产孢量的影响不同碳源条件下菌株X L P 1的菌落直径和产孢量如图8所示㊂7种碳源对菌株X L P 1的菌落直径和产孢量的影响存在显著差异㊂以丙三醇作为碳源时,病原菌菌丝的生长速度最快,培养7d 后菌落平均直径可以达到70.33m m ,而以羟基纤维素钠为碳源的培养基上菌丝生长最慢,菌落平均直径为47.33m m ㊂以甘露醇作为碳源时,病原菌的产孢量最大,培养7d 后每毫升培养基上产孢量为6.83ˑ105,而以可溶性淀粉为碳源的每毫升培养基上产孢量最少,为1.71ˑ105㊂6563第12期木扎帕尔㊃吐鲁洪等:细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选图7 不同培养基对X L P 1菌丝生长和产孢量的影响F i g .7 E f f e c t o f d i f f e r e n tm e d i a o nm y c e l i a l g r o w t ha n d s po r u l a t i o no fX L P1图8 不同碳源对X L P 1菌丝生长及产孢量的影响F i g .8 E f f e c t o f d i f f e r e n t c a r b o n s o u r c e s o nm y c e l i a l g r o w t ha n d s po r u l a t i o no fX L P 1注:C 1,蔗糖;C 2,麦芽糖;C 3,葡萄糖;C 4,羟基纤维素钠;C 5,可溶性淀粉;C 6,甘油;C 7,甘露醇;C 8,对照N o t e :C 1,S a c c h a r o s e ;C 2,M a l t o s e ;C 3,G l u c o s e ;C 4,S o d i u mh y d r o x y c e l l u l o s e ;C 5,S o l u b l e s t a r c h ;C 6,G l yc e r o l ;C 7,M a n n i t o l ;C 8,C K 2.4.6 氮源对病原菌菌落直径和产孢量的影响 不同氮源条件下菌株X L P 1的菌落直径和产孢量如图9所示㊂7种氮源对菌株X L P 1的菌落直径和产孢量的影响存在显著差异㊂以硝酸钾作为氮源时,病原菌菌丝的生长速度最快,培养7d 后菌落平均直径可以达到89.83m m ,而以硫酸铵为氮源的培养基上菌丝生长最慢,菌落平均直径为9.67m m ㊂以酵母浸膏作为氮源时,病原菌的产孢量最大,培养7d 后每毫升培养基上产孢量为3.84ˑ105,而以磷酸二氢铵为氮源的每毫升培养基上产孢量最少,为0.57ˑ105㊂7563草 地 学 报第31卷图9 不同氮源对X L P 1菌丝生长和产孢量的影响F i g .9 E f f e c t o f d i f f e r e n t n i t r o g e n s o u r c e s o nm y c e l i a l g r o w t ha n d s po r u l a t i o no fX L P 1注:N 1,硝酸钾;N 2,硫酸铵;N 3,牛肉提取物;N 4,尿素;N 5,磷酸二氢铵;N 6,酵母提取物;N 7,蛋白胨;N 8,对照N o t e :N 1,P o t a s s i u mn i t r a t e ;N 2,A m m o n i u ms u l p h a t e ;N 3,B e e f e x t r a c t ;N 4,U r e a ;N 5,A m m o n i u md i h y d r o g e n p h o s p h a t e ;N 6,Y e a s t e x t r a c t ;N 7,P e pt o n e ;N 8,C K 2.5 杀菌剂对细极链格孢(A .t e n u i s s i m a )菌丝生长的影响由表3可知,5种杀菌剂对引起黑龙江省细绿萍黑腐病的细极链格孢株的菌丝生长均表现出抑制作用,但不同药剂间的抑制作用有所区别㊂其中32.5%苯甲㊃嘧菌酯的抑制作用最强,E C 50值为0.0012μg㊃m L -1;30%吡唑醚菌酯㊁30%唑醚㊃戊唑醇和30%噁霉灵次之,E C 50值分别为0.6115,0.3371和0.6780μg㊃m L -1;最后是50%多菌灵,E C 50值为4.1870μg ㊃m L -1,抑制作用最弱㊂表3 5种杀菌剂对链格孢菌(X L P 1)菌丝生长的抑制效果T a b l e 3 I n h i b i t i v e e f f e c t o f 5f u n g i c i d e s o nm y c e l i a l g r o w t ho f A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a (X L P 1)单位:μg ㊃m L -1杀菌剂F u n gi c i d e 毒力回归方程V i r u l e n c e r e g r e s s i o ne q u a t i o n 相关系数C o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n tE C 50/μg ㊃m L -130%吡唑醚菌酯30%P yr a c l o s t r o b i nS C y =0.3006x +0.43110.99960.611532.5%苯甲㊃嘧菌酯32.5%B e n z o x ys t r o b i nS C y =0.1631x +0.69330.96170.001230%唑醚㊃戊唑醇30%A z o l e ㊃T e b u c o n a z o l eS Cy =0.1028x +0.68300.99450.337130%噁霉灵30%H ym e x a z o l S C y =0.0700x +0.23310.99950.678050%多菌灵50%C a r b e n d a z i m W Py =0.0407x +0.30220.97334.18703 讨论目前,关于细绿萍病害的报道相对较少,在国外已报到的引起满江红属致病菌主要以立枯丝核菌(R h i z o c t o n i a s o l a n i )为主,在印度㊁伊朗和韩国引起黑腐病㊁褐斑病和褐腐病㊂除此之外核盘菌(S c l e -r o t i n i as c l e r o t i o r u m )和产黄镰孢菌(F u s a r i u mt h a ps i n u m )也可引起满江红属病害,导致萍产量下降[24-28]㊂而在国内关于细绿萍病害的研究较少,李铁成[29]描述了细绿萍腐霉病的发病症状,并提出了防治细绿萍腐霉病的防治建议,但未鉴定病原菌种类及筛选防治杀菌剂㊂本研究利用形态学结合分子生物学的方法鉴定出引起细绿萍黑腐病的链格孢属病原真菌细极链格孢(A .t e n u i s s i m a ),这也是在国内首次报道㊂目前,国内外有较多关于细极链格孢侵染而引起植物病害的研究报道,例如:能引起枣[30]和柿子[31]的黑腐病;魔芋(A m o r p h o ph a l l u s b u l b -i f e r )[32]㊁刺五加(A c a n t h o p a n a xs e u t i c o s u s )[33]㊁太子参(P s e u d o s t e l l a r i a h e t e r o p h yl l a )[34]等多种植物的叶斑病㊂在不同植物中提取的病原菌,其生物学特性也有所区别,细极链格孢的生长和繁殖受外界多种环境因素的影响较大,其中最重要的是温度㊁pH 和碳源㊁氮源等营养物质㊂本研究表明引起细绿萍黑腐病的细极链格孢菌丝生长最适温度均为25ħ,这与张建强等[35-36]研究结果一致㊂尚晓静8563第12期木扎帕尔㊃吐鲁洪等:细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选等[37]认为,细极链格孢在15ħ时产孢量最高㊂而本研究中,细极链格孢在25ħ时产孢量达到最高,表明细绿萍黑腐病病菌孢子耐高温能力可能有所提升㊂不同寄主来源的细极链格孢菌株具有不同的酸碱适应范围,尚晓静等[37]在研究树莓细极链格孢的生物学特性时发现,菌丝最适生长p H值为11.0㊂赵晓霞等[30]报道赞皇枣细极链格孢在p H值10.0时产孢量最大㊂而在本研究中细绿萍细极链格孢的最适菌丝生长和产孢p H值为均为7.0㊂这表明细绿萍细极链格孢具有较宽的适应范围,能在强酸强碱环境条件下活跃生长,这与孟婷婷等[36]报道的结果一致㊂细极链格孢可以利用多种碳源㊁氮源,但在不同寄主上的最适碳源和氮源不同,枸杞细极链格孢能较好的利用甘露醇[38],在氮源的选择上能较好的利用硝酸钾,这与本研究的结果一致,细极链格孢菌丝生长表现为对有机氮和硝态氮的有效利用更好,而对铵态氮的利用效率低㊂而树莓细极链格孢的最适碳源㊁氮源分别为麦芽糖和半胱氨酸[36],芹菜细极链格孢的最适生长碳源为玉米粉[35],与本研究结果不同㊂造成这种差异的原因可能与病原菌的寄主和地理来源不同有关,且与研究人员所选择的碳源和氮源不同相关㊂目前没有对细绿萍黑腐病防治的报道,通过我们对细极链格孢室内毒力测定结果表明,供试5种杀菌剂均具有较好的抑制效果,其中32.5%苯甲㊃嘧菌酯抑菌活性最强㊂袁慧君[39]对梨黑斑病致病菌链格孢(A.t e n u i s s i m a)的研究发现,苯甲㊃嘧菌酯的抑菌效果最好;杨瑾等[40]在研究常见农药对丹参茎基腐病病原菌细极链格孢抑菌效果时发现,吡唑醚菌酯和戊唑醇的抑制菌丝生长的效果最好㊂张建强等[41]筛选针对芹菜叶斑病病原菌细极链格孢药剂发现,甲霜灵对细极链格孢菌丝和孢子的抑制效果都是最好的㊂以上结果均与本试验结果一致㊂我们建议苯甲㊃嘧菌酯作为防治细极链格孢的首选药剂,为了防治长期使用单一药剂导致病原菌产生抗性,其余药剂可以作为备选交替使用,对该病害的田间化学防治效果需要进行进一步验证㊂4结论本文通过采集典型发病地的病样进行病原菌的分离并鉴定,确定引起细绿萍黑腐病的病原菌为黑霉科链格孢属的细极链格孢(A.t e n u i s s i m a)㊂研究结果表明,利于细极链格孢菌菌丝生长的条件:全黑暗条件㊁25ħ㊁培养p H7.0㊁丙三醇碳源㊁硝酸钾氮源㊂利于细极链格孢菌菌丝产孢的条件:全黑暗条件㊁25ħ㊁培养基p H7.0㊁甘露醇碳源㊁酵母浸膏氮源㊂在C MA培养基上细极链格孢菌菌丝生长速度较快,在P S A培养基上产孢量最大㊂细极链格孢菌在多种培养基上均可以生长㊁产孢,可利用多种碳源㊁氮源,对温度的适应性较好,能够适应不同的酸碱环境㊂防治细绿萍黑腐病可选用苯甲㊃嘧菌酯,而吡唑醚菌酯㊁唑醚㊃戊唑醇和噁霉灵作为备选药剂㊂参考文献[1]孙涛,崔国文.优良水生牧草新品种 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木蹄层孔菌乙醇提取物体内抗肿瘤活性及其对荷瘤鼠免疫功能的影响
木蹄层孔菌乙醇提取物体内抗肿瘤活性及其对荷瘤鼠免疫功能的影响【摘要】目的研究木蹄层孔菌乙醇提取物（EEF）的体内抗肿瘤活性及其对荷瘤鼠免疫功能的影响。
方法建立ICR鼠S180肉瘤模型，EEF 3个剂量组灌胃给药，10天后计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数及EEF对荷瘤鼠淋巴细胞转化能力、脾细胞抗体生成能力和NK细胞活性的影响。
结果 100、250、500 mg·kg-1·d-1 3个剂量组的抑瘤率分别为38.5%、41.6%、59.5%，均能提高荷瘤鼠的脾指数，增强荷瘤鼠的淋巴细胞转化能力，脾细胞抗体生成能力，NK细胞活性。
结论 EEF 有明显的体内抗肿瘤活性。
【关键词】木蹄层孔菌；抗肿瘤活性；免疫功能Abstract: Objective To study the anti-tumor effect of ethanol extract of Fomes fomentarius (EEF) in vivo and its influence on immunological function. Methods ICR mice carrying S180 sarcoma were given three different doses of EEF. Ten days later, the tumor-inhibitory rate, spleen index, thymus index, the ability of splenic lymphocyte transformation, the formation of antibody in splenic cells and the activity of NK cells were observed. Results The inhibitory rates in the groups treated with EEF 100, 250 and 500 mg·kg-1·d-1 were 38.5%, 41.6% and 59.5%, respectively. The medicine could also obviously enhance the spleen index, promote the splenic lymphocyte transformation,the antibody formation in splenic cells and the activity of NK cells. Conclusion Extract of Fomes fomentarius has obvious anti-tumor ability in vivo.Key words: Fomes fomentarius; anti-tumor activity; immunological function木蹄层孔菌（Fomes fomentarius）是多孔菌科的一种大型药用真菌。
根际促生菌Enterobactersp.EG16对小白菜生长及硒吸收的影响
刘东昀，袁永强，仇荣亮，等.根际促生菌Enterobacter sp.EG16对小白菜生长及硒吸收的影响[J].农业环境科学学报,2021,40（7）：1420-1431.LIU D Y,YUAN Y Q,QIU R L,et al.Effect of plant growth promoting rhizobacteria Enterobacter sp.EG16on the growth and Selenium uptake of Brassica chinensis L.[J].Journal of Agro-Environment Science ,2021,40（7）：1420-1431.开放科学OSID根际促生菌Enterobacter sp.EG16对小白菜生长及硒吸收的影响刘东昀1，2，袁永强1*，仇荣亮1，2，3，4，王诗忠1，2，3*，黄雄飞1，黄海燕5（1.中山大学环境科学与工程学院，广州510006；2.广东省环境污染控制与修复技术重点实验室，广州510006；3.广东省土壤重金属污染修复工程技术研究中心，广州510275；4.岭南现代农业科学与技术广东省实验室，广州510642；5.河南润友林业技术服务有限公司，郑州450008）Effect of plant growth promoting rhizobacteria Enterobacter sp.EG16on the growth and Selenium uptake of Brassica chinensis L.LIU Dongyun 1,2,YUAN Yongqiang 1*,QIU Rongliang 1,2,3,4,WANG Shizhong 1,2,3*,HUANG Xiongfei 1,HUANG Haiyan 5（1.School of Environmental Science and Engineering,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510006,China;2.Guangdong Provincial Key Lab for Environmental Pollution Control and Remediation Technology,Guangzhou 510006,China;3.Guangdong Provincial Engineering Research Center for Heavy Metal Contaminated Soil Remediation,Guangzhou 510275,China;4.Guangdong Laboratory for Lingnan Modern Agriculture,Guangzhou 510642,China;5.Henan Runyou Forest Technical Service Company,Zhengzhou 450008,China ）Abstract ：To study the interactions between selenium （Se ）and plant growth-prompting rhizobacteria （PGPR ）on plants,batch hydroponic experiments were conducted to analyze the interactions of exogenous Se and the inoculation with Enterobacter sp.EG16,a type of PGPR,ongrowth,physiological metabolism,and Se content of Brassica chinensis L.Results showed that lower Se concentrations were beneficial to the 收稿日期：2020-10-21录用日期：2021-03-03作者简介：刘东昀（1997—），男，广东广州人，硕士研究生，从事矿山环境微生物研究。
不同微量元素对斑玉蕈菌丝生长及酶活的影响
不同微量元素对斑玉蕈菌丝生长及酶活的影响孙淑静;单书凯;李钊锋;郭艳艳;陈文星;胡开辉【摘要】Effects of trace elements on the mycelial growth rate and activities of some enzymes related to substrate degradation of Hypsizigus marmoreus were explored under different cultivation conditions by addition of six trace elements in enriched PDA media and production media. The results showed some metal ions ( Mn2+, Ca2+, Mo6+and Fe2+) could significantly accelerate the mycelial growth in enriched PDA media with the concentration of 100, 60, 500 and 100 mg?L-1 , respectively. Adding Fe2+and Cu2+in pro-duction media had remarkable promoting effects on mycelial growth. Zinc ion inhibited the growth of mycelia whenit was added to production media. Copper ion supplementation ( 100mg?kg-1 ) in production media was most beneficial to the activities of laccase, manganese peroxidase and lignin peroxidase ( reaching 39.83, 19.17 and 9.58 U?mL-1 , respectively) . However, there were no sig-nificant effects of all trace elements on the activities of cellulase and xylanase. It suggested that different trace elements had different effects on the mycelial growth of H.marmoreus and the activities of its related enzyme in different substrates.%通过在PDA加富培养基和生产培养基中添加6种微量元素,探索不同条件下微量元素对斑玉蕈菌丝生长及基质降解有关酶的酶活的影响.结果表明:PDA加富培养基中添加100、60、500、100 mg?L-1的微量元素Mn2+、Ca2+、Mo6+、Fe2+,显著促进菌丝生长;生产培养基中添加100 mg?kg-1的Fe2+和Cu2+对菌丝生长有明显的促进作用,添加100 mg?kg-1 Zn2+对菌丝生长有抑制作用;生产培养基中添加100 mg?kg-1的Cu2+显著提高漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶的酶活,其酶活分别达到39.83、19.17和9.58 U?mL-1 .表明每种微量元素对纤维素酶和木聚糖酶酶活的影响不显著,在不同培养基中不同微量元素对斑玉蕈的菌丝生长及酶活的影响不同.【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(044)006【总页数】7页(P639-645)【关键词】斑玉蕈;微量元素;菌丝生长速度;酶活【作者】孙淑静;单书凯;李钊锋;郭艳艳;陈文星;胡开辉【作者单位】福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002【正文语种】中文【中图分类】S63低脂肪、低热量的珍稀名贵食用菌[13].但斑玉蕈在生产过程中生产周期较长(120－150 d) ,菌体生长速度慢 ,原料利用率低 ,从而增加了生产成本 ,影响了生产企业的效益[14－15].本研究通过探索微量元素对斑玉蕈新品种闽真1号在不同培养基质中菌丝生长和基质利用相关酶酶活的影响 ,为斑玉蕈实验室菌丝培养及通过微量元素调节菌丝生长速度、提高基质降解效率方面的研究提供依据.近年来 ,利用深层培养的真菌菌丝体来富集和转化微量元素方面的研究引起人们关注[1－2],但微量元素对食用菌菌丝及酶活的影响的研究相对较少.微量元素对食用菌菌丝的生长速度和子实体的分化、发育、产量与品质方面有重要影响[3－4].微量元素还是某些酶的必要因子 ,食用菌木质素降解酶系高效降解食用菌培养基中的木质素 ,为食用菌菌体的生长提供营养 ,促进菌体和子实体的生长发育[5－7].同时酶活的高低可以衡量菌丝的代谢能力[8],从而反映菌株对基质的降解能力 ,影响食用菌的生产周期.因此 ,探索微量元素对食用菌菌丝生长、木质素降解酶系酶活的影响 ,对提高基质木质素的降解率、缩短食用菌生产周期、提高生物学效率具有重要意义.已有微量元素对平菇[9]、金针菇[10]、猴头菌[11]等生长发育的影响的相关研究报道.郭艳艳等[12]对不同营养条件下斑玉蕈的菌丝生长及与基质利用相关的酶的产酶特性进行了研究.但微量元素对斑玉蕈在不同培养基质中菌丝生长发育及基质利用相关酶酶活影响的研究尚未见报道.斑玉蕈Hypsizygus marmoreus(Peck)H.E.Bigelow又名玉蕈 ,属伞菌目口蘑科玉蕈属 ,是一种高蛋白、1.1 材料1.1.1 供试菌株斑玉蕈闽真1号 ,由福建农林大学微生物工程实验室提供.1.1.2 培养基 PDA加富培养基包括200 gűL－1马铃薯、20 gűL－1葡萄糖、3gűL－1酵母粉、3 gűL－1蛋白胨、1.5 gűL－1KH2PO4、1.5 gűL－1MgSO4ű7H2O、20 gűL－1琼脂,pH自然；生产培养基包括71%棉籽壳、23%麦麸、5%玉米粉、1%生石灰 ,含水量65%.1.2 方法1.2.1 试验设计向PDA加富培养基中分别添加10 gűL－1的MnSO4űH2O、无水CaCl2、Na2M oO4ű 2H2O、ZnCl2、FeSO4ű7H2O、CuSO4ű5H2O溶液 ,使其在PDA加富培养基中终浓度分别为20、60、100、500 mgűL－1,即每种微量元素设置4个浓度梯度.向生产培养基中分别添加MnSO4űH2O、无水CaCl2、Na2MoO4ű2H2O、ZnCl2、FeSO4ű7H2O、CuSO4ű 5H2O ,使其在生产培养基中的终浓度为100 mgűkg－1.以不添加以上物质为对照 ,每个处理设3个重复.1.2.2 菌株生长速度的测定将待测菌株分别接种于PDA加富培养基、含Mn2＋、Ca2＋、Mo6＋、Zn2＋、Fe2＋、Cu2＋微量元素的培养基平板上 ,每种培养基做3个重复 ,置于24℃恒温培养箱中培养.从第3天起每隔1 d测其菌丝生长速度.将待测菌株分别接种于生产培养基及含Mn2＋、Ca2＋、Mo6＋、Zn2＋、Fe2＋、Cu2＋微量元素的培养基试管中 ,每种培养基做3个重复 ,置于24℃恒温培养箱中培养 ,从第10天起每隔10 d测其菌丝生长速度.1.2.3 粗酶液的提取分别将接种前以及菌丝长10、20、30、40 d时试管中的栽培料全部取出(接种前试管栽培料为32 g) ,在粉碎机里将其粉碎 ,混匀后 ,称取10 g 置250 mL三角瓶中 ,然后加入50 mL无菌水 ,置于24℃、110 rűmin－1的摇床中浸提2 h ,过滤离心 ,取其上清液 ,即为粗酶液.1.2.4 漆酶活性的测定参照吴涓等[16]的方法 ,取2.7 mL HAc-NaAc缓冲液(pH＝4.5)、0.1 mL 1 mmolű L－1ABTS溶液、0.2 mL粗酶液 ,在30℃下 ,测定反应开始前3 min的D420nm增量.设3个重复 ,以灭活15 min的粗酶液作为空白对照.1.2.5 锰过氧化物酶酶活的测定参照周金燕等[17]的方法 ,取1.5 mL酶液 ,含有终浓度为0.4 mmolűL－1的愈创木酚、0.1 mmolűL－1的H2O2、0.2 mmolűL－1的MnSO4及50 mmolűL－1的琥珀酸钠缓冲体系(pH＝4. 5) ,以0.1 mmolűL －1的H2O2启动反应.在40℃下 ,测定反应开始前3 min的D465nm增量.设3个重复 ,以灭活15 min的粗酶液作为空白对照.1.2.6 木质素过氧化物酶酶活的测定参照荚荣等[18]的方法 ,取1.5 mL 0.2 molűL －1酒石酸钠缓冲液(pH＝3.0)、1.0 mL15 mmolűL－1藜芦醇、0.6 mL酶液 ,以0.1 mL 15 mmolűL－1H2O2启动反应.在40℃下 ,测定反应开始前1 min的D310nm的增量.设3个重复 ,以去离子水作为空白对照.1.2.7 纤维素酶酶活的测定参照赵玉萍等[19]的方法 ,在具塞试管中加入(50±1)mg 滤纸、1 mL酶液和1 mL 100 mmolűL－1HAc-NaAc缓冲液(pH＝4.6) ,置于50℃恒温水浴锅中保温1 h ,取出后立即加入3 mL DNS溶液 ,沸水显色5 min ,冷却至室温 ,加蒸馏水定容至25 mL ,测D520nm值.设3个重复 ,以灭活15 min的粗酶液作为空白对照.1.2.8 木聚糖酶酶活的测定参照刘苹等[20]的方法 ,在具塞试管中加入1.5 mL1%(体积分数)木聚糖溶液、0.5 mL酶液 ,置于50℃恒温水浴锅中保温20 min ,取出后立即加入3 mL DNS溶液 ,沸水显色5 min ,冷却至室温 ,加蒸馏水定容至10 mL ,测D550nm值.设3个重复 ,以灭活15 min的粗酶液作为空白对照.1.2.9 数据处理数据统计分析采用DPS 7.05数据处理软件 ,采用单因素方差分析法进行差异显著性检验.2.1 不同微量元素对菌丝生长的影响2.1.1 PDA加富培养基平板上菌丝的生长速度由图1、2可知 ,在PDA加富培养基平板上 ,不同微量元素对闽真1号菌丝生长的影响不同 ,同一微量元素在不同浓度下对闽真1号菌丝生长的影响也不同. Mn2＋、Ca2＋、Mo6＋、Fe2＋对菌丝的生长有促进作用 ,其添加量分别为100、60、500、100 mgűL－1时 ,菌丝直径分别为7.18、7.15、7.28、7.13 cm ,与对照(6.92 cm)相比差异显著；Cu2＋对菌丝生长有明显的抑制作用 ,当其质量浓度为20 mgűL－1时 ,菌丝直径为5.74 cm ,与对照(6.92 cm)相比差异极显著；Zn2＋对菌丝生长影响不大 ,只有当其质量浓度为500 mgűL－1时对菌丝生长有显著的抑制作用.2.1.2 生产培养基中菌丝的生长速度在生产培养基中添加100 mgűkg－1不同金属离子 ,由表1和图3可知:在第36天 ,Mn2＋、Fe2＋、Cu2＋对菌丝生长有显著的促进作用 ,Zn2＋对菌丝生长有抑制作用 ,在添加30和36 d后 ,菌丝高度分别为4.93、6.70 cm ,与对照(6.82、8.33 cm)相比 ,差异显著；而Ca2＋、Mo6＋对菌丝生长的影响不显著.表明在PDA加富培养基上添加不同微量元素对闽真1号菌丝生长的影响是不同的 ,特别是Cu2＋对不同营养条件下菌丝生长速度影响的差异性较大.2.2 不同微量元素对酶活的影响2.2.1 不同微量元素对漆酶酶活的影响生产培养基中 ,在菌丝生长起始阶段检测不到漆酶；当菌丝长至第30天时 ,添加Mn2＋、Ca2＋、Mo6＋、Fe2＋、Cu2＋的生产培养基中可以检测到漆酶 ,但酶活较低；当菌丝生长40 d后 ,漆酶酶活增大；添加Mn2＋和Fe2＋后漆酶酶活分别为18.67和19.68 UűL－1,与对照(17.00UűL－1)相比差异显著(P<0.05).添加Ca2＋、Mo6＋和Zn2＋抑制漆酶酶活 ,漆酶酶活分别为1.25、2.42和1.00 UűL－1,与对照(17.00 UűL－1)相比差异显著(P<0.05).添加Cu2＋的生产培养基中 ,漆酶酶活最高 ,为39.83 UűL－1,是对照的2.34倍.由此可知,100 mgűkg－1的Cu2＋对漆酶的分泌有促进作用 ,是漆酶的一个激活剂.2.2.2 不同微量元素对锰过氧化物酶活酶活的影响由图4可看出 ,在菌丝生长初期检测不到锰过氧化物酶；当菌丝长至第20天时 ,可以检测到锰过氧化物酶 ,各金属离子对锰过氧化物酶酶活没有显著性影响；随着培养时间的增加 ,锰过氧化物酶酶活逐渐增大.但在整个菌丝生长过程中 ,锰过氧化物酶酶活都比较低 ,与对照相比 ,在第40天添加Cu2＋对锰过氧化物酶酶活有显著的促进作用；而Mn2＋、Ca2＋、Mo6＋、Zn2＋对锰过氧化物酶酶活有显著的抑制作用.2.2.3 不同微量元素对木质素过氧化物酶酶活的影响随着菌丝培养时间的增加 ,木质素过氧化物酶酶活先逐渐升高 ,随后降低.在整个生长阶段 ,木质素过氧化物酶的活性都不高 ,在菌丝生长至第30天时 ,酶活达到最大.添加Cu2＋的培养基中木质素过氧化物酶的活性最高 ,达9.58 UűmL－1,与对照(6.77 UűmL－1)相比差异显著 ,结果见图5.2.2.4 不同微量元素对纤维素酶酶活的影响由图6可看出 ,在整个菌丝生长阶段 ,随着培养时间的增加 ,纤维素酶酶活逐渐增大.与对照相比 ,添加Mn2＋、Ca2＋、Mo6＋对菌丝生长后期纤维素酶酶活有明显的抑制作用；而添加Zn2＋、Fe2＋、Cu2＋对纤维素酶酶活有轻微的促进作用 ,差异不显著.2.2.5 不同微量元素对木聚糖酶酶活的影响在整个菌丝生长阶段 ,随着培养时间的增加 ,木聚糖酶酶活逐渐增大；但在菌丝生长后期 ,酶活会稍微降低 ,各种微量元素对木聚糖酶酶活影响不大.添加Zn2＋、Fe2＋对木聚糖酶活性有显著的抑制作用 ,结果见图7.在整个菌丝生长阶段 ,木聚糖酶酶活比其他酶酶活大 ,表明木聚糖酶对菌丝后期的生长起着非常重要的作用.不同微量元素及同一微量元素在不同浓度下对斑玉蕈的菌丝生长和酶活的影响程度各不相同.PDA加富培养基中添加Zn2＋对菌丝生长影响不大 ,根据王宜磊[21]的报道 ,这有可能是Cl－的影响 ,而选用Zn-SO4会促进平菇菌丝生长.在生产培养基中添加Zn2＋,对菌丝生长有明显的抑制作用 ,这可能是由于所添加的Zn2＋的浓度偏高 ,根据王晓光[22]的报道 ,低浓度的Zn2＋对菌丝体的生长有促进作用 ,但高浓度的Zn2＋对菌丝体的生长有抑制作用.在PDA加富培养基中添加Cu2＋对菌丝生长有明显的抑制作用 ,而在生产培养基中添加Cu2＋对菌丝生长却有显著的促进作用 ,可能是由于在PDA加富培养基中添加Cu2＋的浓度偏高.根据Poitou etal[9]和Hatvani et al[10]的报道 ,低浓度的Cu2＋对菌丝生长起促进作用 ,高浓度的Cu2＋对菌丝的生长则起着抑制作用.在PDA加富培养基中添加Mn2＋,对菌丝生长有明显的促进作用 ,当浓度为100 mgűL－1时 ,促进作用最显著；但向生产培养基中添加Mn2＋对菌丝生长影响不明显.根据Niess et al[11]的报道 ,Mn2＋对糙皮侧耳菌丝的生长有促进作用.但Hatvani et al对香菇的研究[10]表明 ,在培养基中添加3.1 mmolűL－1MnSO4,对香菇菌丝生长有抑制作用 ,使其菌丝生长速度下降了50%.因此 ,Mn2＋对菌株生长速度的影响 ,与菌株的种类和培养菌株的基质都有关系.本研究结果表明 ,铜能提高漆酶的活性 ,这与刘杰在杏鲍菇中的研究一致[23].在菌丝整个生长阶段 ,添加的100 mgűkg－1MnSO4űH2O对锰过氧化物酶酶活大小的影响不明显 ,这可能是由于生产培养基中所添加的锰的浓度偏高.张连慧等[24]研究结果表明Mn2＋对菌体的生长很有利 ,但对菌体产锰过氧化物酶并无显著影响.在生产培养基中添加MnSO4űH2O ,使得木质素过氧化物酶的酶活有所下降.李华钟等[25]研究表明 ,适量的Mn2＋可提高木质素过氧化物酶的活性 ,当大量的Mn2＋被氧化成Mn3＋时 ,会抑制木质素过氧化物酶的表达 ,本研究中所添加的Mn2＋浓度可能偏高.本研究结果也表明 ,Ca2＋对木聚糖酶有激活作用 ,Fe2＋、Zn2＋对木聚糖酶酶活有抑制作用 ,这与赵玉蓉[26]研究金属离子对木聚糖酶活性影响的结果一致.【相关文献】[1]陆晓民 ,李世军.微量元素锌在金针菇培养中的应用研究[J].中国林副特产 ,2006 ,84(5):8－10.[2]王新风.富硒食用菌栽培技术[J].中国食用菌 ,2002 ,21(3):13－15.[3]谢必峰 ,林琳 ,施巧琴 ,等.微量元素对食用菌生理效应的研究[J].中国食用菌 ,1996 ,15(3):11－13.[4]刘雁英 ,李林辉 ,谢富刚 ,等.食用菌子实体分化发育研究进展[J].菌物研究 ,2010 ,8(1):57－62.[5]史留功 ,樊金献 ,朱自学.微量元素对平菇生长的影响[J].农业与技术 ,2007 ,27(6):84－86.[6]闫永亮 ,牛颜冰.不同矿质元素对香菇生长发育影响的研究[J].现代农业科技 ,2008 ,22:11－12.[7]张远琼.微量元素促进金针菇生长的初步研究[J].中国食用菌 ,1995 ,14(2):30－31.[8]张渊 ,王谦 ,张筱梅 ,等.白灵侧耳木质素酶、纤维素酶高活性菌株的诱变选育[J].河北大学学报:自然科学版 ,2005 ,25 (6):654－658.[9]POITOU N ,OLIVIER J M.Effect of copper on mycelium of three edible ectomycorrhizal fungi[J].Agriculture ,Ecosystems and Environment ,1990 ,28:403－408.[10]HATVANI N ,MÈCS I.Effects of certain heavy metal on the growth ,dye decolorization and enzyme activity of Lentinula edodes[J].Ecotoxicology and EnvironmentalSafety ,2003 ,55(2):199－203.[11]陆晓民 ,桂艳华 ,陈义伟.微量元素硒在猴头菇栽培中的应用研究初探[J].中国林副特产 ,2006 ,81(2):23－24.[12]郭艳艳 ,阮玲云 ,冯宏昌 ,等.不同营养条件下斑玉蕈菌丝生长及产酶特性[J].菌物学报 ,2014 ,31(3):697－705.[13]郑峻 ,林友照 ,胡开辉.真姬菇工厂化栽培关键技术[J].福建农业 ,2006 ,8:18－19.[14]胡开辉 ,出小平.外界因子对蟹味菇菌丝特性的影响[J].中国食用菌 ,2008 ,27(2):16－18 ,22.[15]孙淑静 ,颜松 ,胡开辉 ,等.斑玉蕈不同菌种类型的生产性能[J].河南科技大学学报:自然科学版 ,2010 ,31(1):66－69 ,118.[16]吴涓 ,肖亚中 ,王怡平 ,等.蜜环菌胞外漆酶酶活力的分光光度法测定[J].厦门大学学报:自然科学版 ,2001 ,40(4):893－898.[17]周金燕 ,张发群 ,舒远才.愈创木酚法测定锰过氧化物酶活力[J].纤维素科学与技术 ,1993 ,1(1):34－37.[18]荚荣 ,汤必奎 ,张晓宾 ,等.藜芦醇和吐温80对白腐菌产木质素降解酶的影响及在偶氮染料脱色中的作用[J].生物工程学报 ,2004 ,20(2):302－305.[19]赵玉萍 ,杨娟.四种纤维素酶酶活测定方法的比较[J].食品研究与开发 ,2006 ,27(3):116－118.[20]刘苹 ,唐志红 ,李梦玉 ,等.金针菇漆酶活性测定的最佳反应条件及液体培养胞外酶的研究[J].食品科技 ,2012 ,37(6): 14－17.[21]王宜磊 ,邓振旭.Zn2＋对平菇生长发育的影响[J].食用菌 ,1998 ,2:12－13.[22]王晓光 ,曾宪录 ,王绪田 ,等.Cu2＋、Zn2＋浓度对深层培养的松茸菌丝体生长的影响[J].农业与技术 ,1994 ,6:4－6.[23]刘杰.微量元素锰、铜对杏鲍菇相关生理特性的影响[D].福州:福建农林大学 ,2012.[24]张连慧 ,刘卫晓 ,葛克山 ,等.变色栓菌产锰过氧化物酶的条件优化[J].微生物学通报 ,2005 ,32(5):98－102.[25]李华钟 ,章燕芳 ,华兆哲 ,等.黄孢原毛平革菌选择性合成木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶[J].过程工程学报 ,2002 ,2(2):137－141.[26]赵玉蓉 ,金宏 ,陈清华 ,等.金属离子对纤维素酶及木聚糖酶活性影响的研究[J].饲料博览 ,2005(1):1－3.。
石蒜碱对内毒素致炎症小鼠体内体外COX-2的影响
石蒜碱对内毒素致炎症小鼠体内体外COX-2的影响抗晶晶;李桂兰;王期;殷志敏【摘要】The object of this study was to explore the effect of lycorine on LPS-induced COX-2 in vivo and vitro. The mice induced by LPS was used as an acute lung injury(ALI)model. The RAW264.7 cells induced by LPS was used as a cell model. The effect of lycorine was evaluated by Western blot for protein expression of COX-2 in lung tissue as well as in RAW264.7 cells. The results showed that lycorine could inhibit the expression of COX-2 protein in vivo and vitro ob?viously and promote the protein degradation of COX-2 protein in RAW264.7 cells. In conclusion,lycorine couldeffec?tively reduce the protein level of COX-2 induced by LPS in vivo and vitro.%研究石蒜碱对内毒素导致的炎症小鼠体内体外COX-2的影响.通过内毒素诱导的小鼠建立急性肺损伤(ALI)模型,采用内毒素诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,利用Western blot技术检测小鼠肺组织以及RAW264.7巨噬细胞中COX-2蛋白的表达量.结果显示,石蒜碱能够在体内、体外显著抑制内毒素诱导的COX-2的蛋白表达,并加快COX-2蛋白的降解速度.石蒜碱能够有效降低内毒素导致的炎症小鼠体内、体外COX-2的蛋白水平.【期刊名称】《南京师大学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(039)001【总页数】4页(P86-89)【关键词】石蒜碱;内毒素;COX-2;急性肺损伤;RAW264.7巨噬细胞【作者】抗晶晶;李桂兰;王期;殷志敏【作者单位】黄河科技学院医学院生化教研室,河南郑州450063;南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学与生物技术重点实验室,江苏南京210023;南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学与生物技术重点实验室,江苏南京210023;南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学与生物技术重点实验室,江苏南京210023【正文语种】中文【中图分类】R392.5中药石蒜为石蒜科（Amaryllidaceae）植物石蒜（Lycoris radiata Herb）的鳞茎，作为一种传统的药用植物，在临床上有着悠久的应用历史.石蒜碱（Lycorine）是从石蒜鳞茎中分离出的含量较高的生物碱成分，药理作用广泛［1］.环氧化酶-2（COX-2，cyclooxygenase-2）是前列腺素合成过程中的限速酶，已有研究表明，COX-2在小鼠急性肺损伤（ALI）时含量显著增加，COX-2与ALI的发生关系密切［2］.本实验从抗炎角度将石蒜碱应用于ALI小鼠，通过观察小鼠肺组织中COX-2的表达情况，探究石蒜碱对ALI小鼠是否具有保护作用.此外，本研究在体外细胞水平观察石蒜碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中COX-2翻译以及翻译后水平的影响，旨在研究石蒜碱抗炎的作用靶点，为石蒜碱的临床应用和深入研究提供依据.1.1 动物18 g～22 g健康ICR小鼠（购自扬州大学）60只，雌雄各半，实验动物的处理和实验过程是按照中国实验动物管理规定来进行的.1.2 主要试剂石蒜碱（Aladdin），LPS（Sigma），兔抗鼠COX-2多克隆抗体（Santa CruzBiotechnology），兔抗鼠β-actin单克隆抗体（南京巴傲得公司），放线菌酮CHX CA（La Jolla）.1.3 细胞株与培养液小鼠RAW264.7巨噬细胞（中科院上海细胞库）在37℃，5% CO2条件下，用含10%胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）和抗生素（100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素）的DMEM完全培养液（Hyclone公司）培养.1.4 动物分组和给药将小鼠随机分为空白组、阴性对照组、模型组、低、中、高药物剂量组，每组各10只.石蒜碱药物组剂量分别为10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg，阴性对照组剂量为40 mg/kg，连续灌胃3 d，空白组和模型组给予等体积蒸馏水，LPS （37.5 mg/kg）滴鼻造模［3］.1.5 Western blot检测肺组织内COX-2造模24 h后，处死小鼠，剥离左肺，称取一定量的肺组织，加入细胞裂解液冰上匀浆，随后将细胞裂解物在4℃，15，000 g条件下离心15 min.离心结束后，收取上清液并用Bradford法测定每份样品的总蛋白浓度.取等量蛋白进行SDS-PAGE，电泳结束后将蛋白转移至硝酸纤维素膜上（时间100 min，恒流350 mA）.随后用TBS（含5%脱脂奶粉）封闭1 h，TBST洗涤，每次5 min，共洗涤3次.加入一抗，在4℃条件下孵育过夜，抗体孵育过夜后，再用TBST洗涤3次，每次5 min.用Ddy800的荧光二抗孵育30 min，Odyssey红外显像系统观测结果，扫描并计算信号条带密度值.1.6 Western blot检测细胞内COX-2细胞培养结束后，弃去培养RAW264.7细胞的培液，用预冷的1×PBS漂洗2次并弃尽多余的PBS，然后加入预冷的细胞裂解液置于冰上孵育30 min.裂解结束后，按上述1.5中方法检测COX-2.1.7 数据统计分析使用SPSS10.0软件进行两组间t检验，所有数值均表示为(mean±S.D)，并设置多个重复，p<0.05认为有统计学差异.2.1 石蒜碱对ALI小鼠体内COX-2蛋白表达的影响按上述1.4的材料与方法对小鼠进行分组与给药.造模24 h后，处死小鼠，取适量肺组织进行Western blot，结果如图1所示，当小鼠发生ALI时，小鼠肺组织中COX-2水平明显增加（模型组），而石蒜碱能够剂量依赖性地抑制小鼠急性肺损伤时COX-2的表达（低、中、高药物剂量组），当石蒜碱达到40 mg/kg时，COX-2水平显著下降，与模型组比较，差异具有统计学意义.2.2 石蒜碱对小鼠体外细胞中COX-2蛋白翻译水平的影响实验组用5 μmol/L的石蒜碱预敷RAW264.7细胞3 h后加入LPS（100 ng/mL）刺激，对照组单加LPS （100 ng/mL）刺激，分别培养0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h，收取细胞，检测石蒜碱对LPS刺激下COX-2蛋白表达随时间变化的影响.结果如图2所示，在加入石蒜碱（5 μmol/L）的情况下，LPS虽然能时间依赖性地上调COX-2的蛋白水平，但其上调程度与单加LPS刺激相比显著偏低，说明石蒜碱能够在小鼠体外显著下调RAW264.7细胞中LPS诱导产生的COX-2的蛋白水平.2.3 石蒜碱对小鼠体外细胞中COX-2蛋白翻译后水平的影响LPS（100 ng/mL）培养RAW264.7细胞10 h后，加入放线菌酮CHX（1μg/mL，蛋白合成抑制剂）抑制COX-2蛋白的继续合成，观察石蒜碱对COX-2蛋白翻译后水平的影响.结果如图3所示，加入放线菌酮CHX抑制RAW264.7细胞中蛋白质的继续合成后，石蒜碱可促进LPS刺激后产生的COX-2蛋白的降解，从而在翻译后水平调节COX-2蛋白的含量.用LPS（100 ng/mL）培养RAW264.7细胞10 h后，更换新鲜的细胞培养液，LPS对照组加入放线菌酮CHX（1 μg/mL），石蒜碱实验组加入放线菌酮CHX （1 μg/mL）+石蒜碱（5 μmol/L），Western blot检测石蒜碱6 h内对COX-2蛋白降解的影响.结果取3次独立实验的平均值.与单加LPS对照组相比，＊p<0.05.内毒素（LPS）是革兰式阴性菌的主要致病成分，在小鼠体内实验中LPS可引起中性粒细胞在肺内聚集、激活，释放氧自由基、蛋白水解酶，从而导致急性肺损伤（ALI）的发生［4］. COX-2是一种诱导型合酶，是启动炎症反应的关键酶，由其合成的病理性前列腺素可介导炎症反应.正常情况下的肺组织中几乎不表达COX-2，当机体受到致炎因子刺激时，某些细胞，如内皮细胞、血管平滑肌细胞、单核巨噬细胞和成纤维细胞等将被诱导表达COX-2，使COX-2水平以8～l0倍的速度急速增长，引起受损部位炎性前列腺素的合成和聚积，加速炎症反应的进行［5］.石蒜碱是从传统药用植物石蒜鳞茎中分离出的生物碱成分.生物活性实验研究表明，石蒜碱具有抗病毒、抗疟疾、诱导肿瘤细胞凋亡以及抗炎等多种作用［6］.本研究中，我们通过复制LPS诱导的小鼠建立ALI模型，发现当小鼠发生ALI时，小鼠肺组织中COX-2水平明显增加，而石蒜碱能够有效地抑制小鼠急性肺损伤时COX-2的表达，且呈一定的剂量依赖性.在以小鼠巨噬细胞RAW264.7为模型的体外实验中，石蒜碱能够在体外显著抑制LPS诱导的COX-2的蛋白表达，在用放线菌酮CHX抑制RAW264.7细胞中的蛋白表达后，我们发现石蒜碱可加快COX-2蛋白的降解速度.生物体内基因的表达包括转录和翻译等步骤，已有研究表明，石蒜碱不能在转录水平下调COX-2 mRNA的含量［7］，那么石蒜碱是如何下调COX-2蛋白含量的呢？现有文献显示，石蒜碱可显著抑制LPS刺激下诱生型一氧化氮合酶（iNOS）以及NO的产生［8，9］，而iNOS和COX-2的表达有密切联系，NO能够促进COX-2的蛋白表达［10］，当石蒜碱抑制iNOS和NO的产生后就会间接地抑制COX-2的产生，但iNOS和NO对COX-2的影响作用有限，这表明石蒜碱还可能通过其他途径下调细胞中COX-2的蛋白含量，本实验发现石蒜碱可加快COX-2蛋白的降解速度，这表明石蒜碱可以在翻译后水平调节COX-2蛋白的含量，这可以在一定程度上解释为什么石蒜碱没有抑制COX-2基因的转录，却使得COX-2蛋白水平下降.综上所述，我们以COX-2为主要观察指标，发现石蒜碱能够在小鼠体内体外有效抑制LPS刺激下COX-2的蛋白水平，机制上，石蒜碱可能通过促进COX-2蛋白的降解下调COX-2的蛋白水平，表明石蒜碱对LPS致ALI小鼠的保护效应可能与其抑制COX-2有关.由于LPS引起的炎症反应复杂，涉及的分子众多，因而明确石蒜碱抗内毒素机制尚需进行大量深入的研究.【相关文献】［1］秦昆明，李笑，徐昭，等.石蒜碱及其衍生物的药理作用研究概况［J］.北京联合大学学报，2009，23（1）：6-10.［2］张丽娜，龚华，艾宇航.急性肺损伤大鼠肺组织COX-2、NF-κB表达及其相关性的研究［J］.医学临床研究，2007，24（11）：1 872-1 874.［3］SZARKA R J，WANG N，GORDON L，et al. A murine model of pulmonary damage induced by lipopolysaccharide via intranasal instillation［J］. Immunol Methods，1997，202：49-57.［4］TOGNA A R，LATINA V，ORLANDO R，et al. Cigarette smoke inhibits adenine nucleotide hydrolysis by human platelets［J］. Platelets，2008，19（7）：537-542. ［5］李俊英. COX-2在急性肺损伤中的作用［J］.中华急诊医学杂志，2009，18（12）：1 341-1 342.［6］赵明明，熊海蓉，李霞，等.石蒜属植物中石蒜碱的研究进展［J］.河南化工，2010，27（10）：25-27.［7］JINGJING K，YUSHUN Z，XIANG C，et al. Lycorine inhibits lipopolysaccharide-induced iNOS and COX-2 up-regulation in RAW264.7 cells through suppressing P38 and STATs activation and increases the survival rate of mice after LPS challenge［J］.International immunopharmacology，2012，12（1）：249-256.［8］OSAMA B，ABDEL H，TOSHIO M，et al. New crininetype alkaloids with inhibitory effect on induction of inducible nitric oxide synthase from Crinum yemense［J］. J Nat Prod，2004，67（13）：1 119-1 124.［9］YAMAZAKI Y，KAWANO Y. Inhibitory effects of herbal alkaloids on the tumor necrosis factor-balpha and nitric oxide produc⁃tion in lipopolysaccharide-stimulated RAW264 macrophages［J］. Chem Pharm Bull，2011，59：388-391.［10］RAHMAN M A，DHAR D K，EMI Y C，et al. Coexpression of inducible nitric oxide synthase and COX-2 in involvement of COX-2 in the angiogenesis of hepatitis C hepatocellular carcinoma and surrounding liver：possible virus-positive cases［J］. Clin Cancer Res，2001（7）：1 325-1 332.。
荷叶离褶伞发酵液对NaCl胁迫下洋葱根尖细胞有丝分裂的影响
荷叶离褶伞发酵液对NaCl胁迫下洋葱根尖细胞有丝分裂的影响王兴珍;沈昱彤;魏生龙;卯旭辉;贾秀苹;梁根生;王晓琴【摘要】The root tip of Allium cepa L is treated with different concentrations of NaCl for 24 hours and 48 hours. The results shows that low concentrations of NaCl significantly promoted the growth of Allium cepa L, but higher concentrations(≥0.1 mol/L) played a poisoned role on the growth of Allium cepa L and have a dose-effect relationship. while we cultured the different NaCl treated Allium cepa L using diluted Fermentative Fluid of Lyophyllum decastes for 24 hours, the result shows that diluted Fermentative Fluid of Lyophyllum decastes can repair the genetic damage and promote the growth of a short period of time NaCl treated Allium cepa L (24 h), such as decreased micronucleus rate and chromosome aberration rate, increased mitotic index, but have a weak role for a long period of time treated NaCl Allium cepa L(48 h).%研究了荷叶离褶伞发酵液对NaCl胁迫下洋葱根尖细胞有丝分裂的影响。
类胡萝卜素对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响
类胡萝卜素对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响
吴江;林晓霞;刘子贻
【期刊名称】《浙江大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2001(030)005
【摘要】目的:观察类胡萝卜素对巨噬细胞释放一氧化氮(NO)的影响,探讨类胡萝卜素免疫调节作用的机制.方法:选用小鼠腹腔巨噬细胞为对象,观察不同浓度的虾青素和β-胡萝卜素对细胞产生NO的影响.结果:用1 mg/L的内毒素脂多糖刺激巨噬细胞时,2×10-7mol/L和2×10-8 mol/L的虾青素使巨噬细胞释放NO分别下降77%和43%;而浓度相同β-胡萝卜素仅使巨噬细胞释放NO分别下降28%和8%.两者对正常状态的巨噬细胞没有明显影响.结论:类胡萝卜素能抑制受LPS刺激的巨噬细胞释放NO,其免疫调节功能可能与影响NO的产生有关.
【总页数】4页(P211-214)
【作者】吴江;林晓霞;刘子贻
【作者单位】浙江大学医学院;浙江大学医学院;浙江大学医学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q562
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