黄曲霉M1检测方案
食品中黄曲霉毒素M族的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定1 范围本标准规定了食品中黄曲霉毒素M1和M2（以下简称AFT M1和AFT M2）的测定方法。
本标准第一法为液相色谱-质谱联用法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。
本标准第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。
本标准第三法为试纸条法，适用于生鲜乳中AFT M1的测定。
第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2 原理试样中的AFT M1和AFT M2用水和乙腈的混合溶液提取，上清液的浓缩液用磷酸盐缓冲液稀释后，经免疫亲和柱净化，去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质。
净化液经液相色谱分离，串联质谱检测，同位素内标法定量。
3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.3 醋酸铵（CH3COONH4）。
3.1.4 氯化钠（NaCl）。
3.1.5 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
3.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.7 氯化钾（KCl）。
3.1.8 浓盐酸（HCl）。
3.1.9 氮气（N2）：纯度≥ 99.9 %。
3.1.10 石油醚（C2H2n+2）：沸程为30-60℃3.2 试剂配制3.2.1 5 mmol/L醋酸铵水溶液：称取0.39 g醋酸铵，溶于1000 mL水中。
3.2.2 乙腈-水溶液（25+75）：取250 mL乙腈加入750 mL水。
3.2.3 乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500 mL乙腈加入500 mL甲醇。
3.2.4 磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.00 g氯化钠，1.20 g磷酸氢二钠（或2.92 g十二水磷酸氢二钠），0.20 g磷酸二氢钾，0.20 g氯化钾，用900 mL水溶解，用盐酸调节pH值至7.4，再加水至1000 mL。
黄曲霉毒素M1检测卡说明书(完整版)
黄曲霉毒素M1检测卡【简介】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
GB 2761-2001中规定：乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的最大允许限量为1μg/kg，即1ppb。
本检测卡适用于液态奶和奶粉的检测，检测限为1μg/kg【精密度】同时使用本产品和黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒对 300 份样品包括 161 份阴性样本和 139 份阳性样本进行检测，检测结果表明，本产品与黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒的结果符合率为 98％。
【样品处理】奶粉1、取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）。
2、震荡3min，使充分溶解。
3、2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）。
4、后用移液器彻底去除上层奶油。
5、下层脱脂牛奶与纯净水1:6稀释用于检测。
奶样（1）取1 mL新鲜的牛奶（含脂牛奶）样本置于2ml离心管中，降温至10℃以下4000 r/min离心10分钟后，弃去上层脂肪（约四分之三），剩余四分之一奶样与纯净水1:6（1份奶样+5份纯净水）互溶，互溶后刻度刚好为总体积1ml。
用力震荡1min，使充分溶解后为备用待检液；（2）脱脂牛奶待检液配法，脱脂牛奶与纯净水1:6（1份脱脂牛奶+5份纯净水）互溶，用力震荡1min，使充分溶解后为脱脂牛奶备用待检液；【检测步骤及结果判断】检测前请仔细阅读使用说明书，检测应在室温下进行。
检测步骤为：（1）将铝箔袋沿切口部位撕开，取出检测卡放于平整的台面上，并做好标记；（2）用吸管吸取待检样品溶液，垂直加入2~3滴于加样孔中（注：样本中不要带入气泡），反应3~5min 判断结果。
黄曲霉M1酶联免疫法检测方法
黄曲霉毒素M1酶联免疫测试1．概述REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒可用于检测乳酪，牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1的残留。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉素素B1羟基化的产物。
黄曲霉毒素已被确认是最常见的致癌物。
该试剂盒特点包括：样品无需前处理提取，可直接用于检测。
应用于牛奶检测时有高灵敏度（0.005ng/g或ppb）低检测限（0.005ng/g或ppb）。
高重现性。
2．试剂盒原理REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，相关的抗体已经包被于微孔板上。
药物分析时，样品加入微孔孵育，洗板后加入酶标记物，若样品残留有黄曲霉M1就会竞争包被抗体，抑制HRP酶标与包被抗体结合，加入TMB后显色反应，颜色显色强度与样品中靶毒素的含量成反比。
3.试剂盒组成部分和储存内容物规格保存条件黄曲霉毒素M1包被板(Aflatoxin M1 Plate) 96孔板（12×8 孔）2-8℃黄曲霉毒素M1标准品(Standards)：0ng/ml阴性质控(Negative control)0.005ng/mL0.015ng/mL0.03 ng/mL0.09ng/mL0.27ng/mL回收用10ng/ml(Spiking，可选) 1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8ml2-8℃HRP-酶标记物(HRP-Conjugate) 12mL2-8℃20×浓缩洗液(Wash Solution) 28mL终止液(Stop Buffer) 14mLTMB底物(TMB Substrate) 12mL10x PBS缓冲液（可选）25mL10x 牛奶提取液（可选）5mL本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。
如果一个月内不使用试剂盒，黄霉素毒素M1标准品和HRP-酶标应置于-20℃或者冷冻保藏。
4.样品检测下限检测物质检测下限（ng/g）牛奶0.005奶粉0.005（按1:10稀释成液体奶）乳酪0.05酸奶0.015.交叉反应数据药物交叉反应率（%）黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1) 100黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1) 46黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2) 35黄曲霉毒素M2(Aflatoxin M2) 29黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1) 27黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2) 66．未提供的设备或材料1)酶标仪(450nm)2)微量加样器(10、20、100和1000μL各一支)3)多道枪：50-300μL4)黄曲霉M1清洗试剂（可选）7.注意事项实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。
乳品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1的测定
固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1迪马科技摘要：建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。
样品经乙腈提取，ProElut AFT固相萃取柱净化，以正己烷和三氟乙酸衍生后，通过Diamonsil C18(2)色谱柱分离，流动相为水、乙腈和异丙醇，梯度洗脱，流速1 mL/min，荧光检测器检测，激发波长365 nm，发射波长435 nm，外标法定量。
结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5 μg/L范围内线性关系良好。
样品加标回收率在80%~100%之间，相对标准偏差1.58%~4.21%，方法检出限为牛奶：0.02~0.06 μg/kg，奶粉：0.04~0.12 μg/kg。
Determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction - high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC) Abstract：To establish the method for determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction with high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC). The samples were extracted with acetonitrile, then purified with ProElut AFT column, derived with hexane and trifluoroacetic acid, and separated on Diamonsil C18(2) column, mobile phase is water、acetonitrile and 2-propanol with a flow rate of 1 mL/min, detected by fluorescence detector, EX: 360nm、Em: 435nm, quantified by external standard method. The result indicated that the calibration curves showed good lineaarities for aflatoxins in the range of 0.01-5 μg/L. The spiked recoveries were in the range of 80%-100% with relative standard deviations of 1.58%-4.21%, the limits of determination were 0.02-0.06 μg/kg in milk and 0.04-0.12 μg/kg in milk powder.黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。
高效液相色谱测定乳制品中黄曲霉毒素M1
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260 超 高 效 液 相 色 谱 仪 （ 配 荧 光 检 测 器）（ 美 国 Agilent 公 司）；3-18KS 高 速 冷 冻 离 心 机（ 德 国 Sartorius 公 司 ）； 纯 水 净 化 仪 （杭州永洁达净化科技有限公司）； ME3basic 振荡器（IKA 公司）。
关键词：FM1 是哺乳动物摄入被黄曲霉毒 素 B1（Aflatoxin B1，AFB1） 污 染 的 饲 料后通过在体内经羟基化作用转化成的 代谢产物。AFM1 对光、热和酸都非常 稳定，主要存在于动物的可食部分，如 牛奶、肝、蛋类等，其中以牛奶最为常 见，是目前发现的毒性、致癌性极强的 天然有毒物，它能够对人及动物的肝脏 组织产生破坏，严重时会导致肝癌甚至 死亡。由于牛乳及其乳制品是人类（尤 其是婴幼儿）的主要食品，乳制品营养 丰富，能够增强人体免疫力，受到很多 国家的重视。因此建立简便快捷高效的 检测方法十分重要。
色谱柱；柱温 35 ℃；流速 1 mL/min （ 衍 生 剂：0.3 mL/min）， 进 样 量 50 μL；流动相为甲醇∶水 =54 ∶ 46 （V ∶ V）。 荧 光 检 测 器， 激 发 波 长 360 nm，发射波长 440 nm。
1.2.3 提取方法 称取 5 g 混合均匀的试样于 50 mL 离心管中（乳粉、特殊膳食等加入热水 , 涡旋混匀）。加入 10 mL 甲醇，涡旋 3 min。 置 于 4 ℃、6 000 r/min 下 离 心 10 min，将适量上清液或滤液转移 至烧杯中，加 40 mL 水备用。将上述 样液移过免疫亲和柱。收集全部洗脱 液。在 50 ℃下氮气缓缓地将洗脱液吹 至 1 mL 以下，用水定容至 1.0 mL， 涡旋 30 s 混匀，0.22 μm 滤膜过滤， 收集滤液于进样瓶中以备进样。
新型,快速,低成本SPE法检测乳制品中黄曲霉毒素M1解决方案V1
新型，快速，低成本SPE法检测乳制品中黄曲霉毒素M17月20日，广州市工商局在官网公布了近期对市面上乳制品及含乳食品的抽检结果。
由湖南长沙亚华乳业有限公司生产的南山奶粉问题最为严重，5个批次的婴幼儿奶粉均检出含有黄曲霉毒素M1。
值得注意的是，知名品牌光明奶油、本土沙湾姜汁撞奶均在不合格之列，爱馨多洋奶粉更是两月三登“黑榜”。
目前检测黄曲霉毒素的方法通常为免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（ELISA）这两种方法。
酶联免疫吸附法（ELISA）操作简单，快速，但灵敏度低且会出现假阳性，需使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量，而免疫亲和柱又存在使用繁琐、价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短等缺点。
针对上述问题，迪马科技最新开发出新型、快速、低成本的ProElut TM固相萃取方法。
该方法可实现与免疫亲和柱法相当的高精度回收率结果，但使用成本却大大降低。
ProElut TM固相萃取法单个样品的检测成本为免疫亲和柱法的1/4，酶联免疫法的1/2，同时ProElut TM固相萃取法简单易操作、不需要专用的大型设备、对操作人员要求不高，特别适用于各种食品生产企业及检测机构，将大大降低黄曲霉毒素的检测成本。
以下为使用ProElut TM固相萃取柱开发的黄曲霉毒素M1的检测方案，供您参考！1 适用范围适用于牛奶、奶粉、乳酪等乳制品中黄曲霉毒素M1的检测。
2 样品准备/提取2.1 牛奶、原料乳等液态奶制品(1) 称取5g样品，加入5mL乙腈，涡旋混合1min；(2) 再加入10mL乙腈，涡旋混合1 min，4000rpm，离心5min；(3) 取上清液5mL，作为上样液待净化。
2.2 奶粉、乳酪等固体奶制品(1) 称取2g样品，加入5mL水，涡旋混合2min，样品与水充分混匀；(2) 加入5mL乙腈，涡旋混合1 min；(3) 再加入10mL乙腈，涡旋混合1min，4000rpm，离心5min；(4) 取上清液5mL，作为上样液待净化。
黄曲霉毒素M1操作规程
黄曲霉毒素M1操作规程一、样品的前处理将适量的液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测即可。
二、溶液的配制1、标品稀释液：用去离子水将AFM1浓缩标品稀释液按1：3体积比进行稀释，即1份AFM1浓缩标品稀释液加3份去离子水。
用于提取样本的稀释，标品稀释液在4℃环境可保存一个月。
2、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1:9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水。
用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月3、6个不同浓度的标准液：取6个1.5ml离心管，标为1到6号，分别加入995μl,400μl, 400μl,400μl, 400μl, 400μl标品稀释液,按照下表配制标准品。
如取5μl高浓度黄曲霉毒素M1标准品（810ppb）加入1号管，与995μl标品稀释液混匀，制备成4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液。
取200μl配好的4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入2号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液。
取200μl配好的1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入3号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成0.45ppb黄曲霉毒素M1标准液。
依次稀释，制备成1.35ppb、0.45ppb、0.15ppb、0.05ppb、0ppb的标准液，（见下表）。
标准品现配现用。
配制好的标准液请在一周内用完（4℃存放）。
三、检测步骤1.、测前须知：（1）、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。
（2）、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
（3）、黄曲霉毒素M1可致癌，应戴手套操作。
2、操作步骤：（1）、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均需摇匀。
（2）、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2~8℃。
黄曲霉毒素检测标准方法汇总
流动相的梯度变化表（GBT 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定）
标准方法检出限（GBT 23212-2008）
次氯酸钠溶液（消毒用）：
取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀。
另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌、澄清后过滤。
此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。
若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。
所得溶液的浓度约为50g/L。
污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）
AFT B1标准溶液配制
1 仪器校正，测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素f
2 标准溶液配制，配制AFT B1标准溶液，用紫外分光光度计测此溶液最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值，计算AFT B1标准液浓度，后用苯-乙腈混合液调到标准液为10.0ug/ml，并用分光光度计核对浓度。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）。
酶标仪检测黄曲霉毒素M1
检测原理黄曲霉毒素M1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。
（1）样品提取液或黄曲霉M1标准品100ul与酶联偶合物200ul，混合后取100ul，（2）加入到抗体包被的微孔中等待1小时，（3）洗板去除未参加抗原-抗体反应的黄曲霉毒素M1,（4）将底物100ul加入到微孔中，等待20分钟，颜色变为蓝色，颜色的深浅与黄曲霉毒素M1的含量成反比，（5）加入终止液100ul，颜色变为黄色，检测步骤1.取生奶或调味乳30ml，在4度静止30分钟，10000转离心5分钟，在脂肪下取0.4ml加0.1ml100%甲醇，混合，（如奶粉取10克，加100ml蒸馏水溶解，混合，按照生奶来做），2.取出绿色的稀释孔和无色的有抗体包被的稀释孔各放入一个板架上，3.吸取200ul酶联偶合物加入到绿色的稀释孔，再吸取100ul标样（0、25、50、100、200、500ppt），和100ul样品，混匀3次，4.然后从300ul混合物中吸取100ul加入到无色的有抗体包被的稀释孔中，静止1小时，5.将孔中的液体倒掉，用稀释后的冲洗缓冲液冲洗每个孔，将微孔倒置于纸巾上把水吸干，6.加入100ul底物，放置20分钟，颜色变为蓝色，7.加入100ul终止液，颜色变为黄色，8.上机检测，（酶标仪滤镜450nm，示差滤镜630nm）9.稀释倍数f：牛奶1，奶粉10.8，奶酪8，10.定量限：生奶0.018ug/kg，脱脂奶粉0.252 ug/kg，全脂奶粉0.257 ug/kg，奶酪0.128ug/kg，酸奶0.270ug/kg11. 生奶或调味乳≤0.5ug/kg，合格，12. 计算公式：X= c*f/1000注：1.酶联偶合物25ml ：sensitive conjugate底物15ml ：substrate终止液15ml ：stop solution样品稀释缓冲液15ml ：assay diluent冲洗缓冲液（20X）25ml ：wash solution concentrate2.试剂盒在使用前恢复到室温（18~30度），使用完毕后，放入2~8度冰箱冷藏，3.标样中含有毒素，致癌性，使用时戴好橡胶手套、安全眼镜、工作服等防护装备，4. 在读数前，微孔中应没有气泡，否则影响分析结果，5. 1 ppm = 103 ppb = 106 pptug/ml ng/ml pg/mlmg/kg ug/kg ng/kg6. 5%冲洗缓冲液：将25ml冲洗缓冲液（20X）加入475ml蒸馏水，混匀，检测原理黄曲霉毒素B1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。
黄曲霉M1检测方案
黄曲霉毒素M1检测方案
方案一、免疫亲和层析净化高效液相色谱法
（GB 5413.37-2010第二法）
一、原理：
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。
用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。
用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。
二、所需仪器和耗材
1、高效液相色谱仪
（配荧光检测器—具有365 nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能
够测定0.02 ng的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪音)）
2、离心机（转速≥7000 转/分钟）
3、天平：感量为0.01 g
4、黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
方案二、酶联免疫吸附法
（可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1）
一、原理
标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。
再加入黄曲霉毒素M1酶标记物，将没有结合的抗体位点全部覆盖，结合的酶标记物通过显色液显示出来。
最后加入终止液，用酶标仪在450nm测定吸光度值，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素M1含量成反比。
二、所需仪器和耗材
1、微孔板酶标仪450nm/630nm
2、离心机
3、天平：感量为0.01 g
4、微量移液器：单道20μl～200μl、200μl～1000μl、多道250μl
5、振荡器。
牛奶中黄曲霉毒素M1的检测
牛奶中黄曲霉毒素M1的检测
黄曲霉毒素M1 ELISA检测（定量）
一：实验原理
AFM1 ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被黄曲霉毒素M1抗原，样本中黄曲霉毒素M1和此抗原竞争黄曲霉毒素M1抗体，同时抗黄曲霉毒素M1抗体与霉标二抗相结合，经底物显色，样本吸光值与含有的黄曲霉毒素M1成负相关。
吸光值与标准曲线比较再乘以相应的稀释倍数，即可得到样品中黄曲霉毒素M1的含量。
二：样品处理
液态奶：将液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测
稀释倍数：1
三：操作步骤
1·取出所需试剂回温(20-25。
C)，接通酶标仪电源，开启，预热
2·配制溶液
3·加标准品、样本，加霉标物和抗试剂，摇匀，避光反应30min
4·洗板
5·显色
6·加终止液，然后用酶标仪测定，读取OD值
四:计算
标准曲线：横坐标——标准浓度的对数纵坐标——百分吸光度（%）五：结果讨论
黄曲霉毒素M1在国家标准里的限量是<=0.5ppb
（本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。
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(整理)黄曲霉毒素M1如何检测
黄曲霉毒素M1如何检测黄曲霉毒素M1是一种强致癌物，它一度存在于一些纯牛奶中，引起食品安全隐患的讨论。
相比三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测?这里，环凯技术整理出全套的专业检测方法，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处遁形。
检测范围牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品检测原理黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。
本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。
设备耗材黄曲霉毒素免疫亲和柱高效液相装置带荧光检测器均质机水平振荡器SPE转接头及50ml大容量上样器分析天平(精度0.02 g)SPE装置带抽真空系统黄曲霉毒素M1标准品PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2 PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml;甲醇(色谱纯)乙腈(色谱纯)正己烷(分析纯)样品前处理牛奶样品1. 称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。
收集全部上清液，待净化;2. 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)3. 称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min 下离心10 min。
收集全部上清液，待净化。
4. 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品5. 称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。
溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。
《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》范文
《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇一一、引言随着食品工业的快速发展，食品质量与安全成为人们关注的焦点。
黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）是乳制品中常见的一种污染物，其危害性极强，易对消费者健康构成威胁。
传统的检测方法通常存在操作复杂、耗时和成本高等问题，难以满足快速、准确的检测需求。
因此，研究开发一种快速、准确且成本低廉的黄曲霉毒素M1检测方法，对于保障食品质量与安全具有重要意义。
本文基于荧光适配体传感器技术，研究了一种快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法，并对其应用进行了探讨。
二、荧光适配体传感器原理荧光适配体传感器是一种新型的生物传感器技术，通过与靶标分子的特异性结合来实现快速、准确的检测。
该技术以适配体作为识别元件，利用其高特异性和高亲和性的特点，实现对目标分子的精确检测。
当适配体与目标分子结合后，会引起其构象变化，从而影响与之连接的荧光分子的发光特性，这种变化可被检测并转化为目标分子的浓度信息。
三、基于荧光适配体传感器的黄曲霉毒素M1检测方法本研究利用荧光适配体传感器的原理，结合生物工程技术和纳米技术，设计了一种新型的黄曲霉毒素M1检测方法。
具体步骤如下：1. 适配体的设计与合成：根据黄曲霉毒素M1的分子结构，设计并合成具有高特异性和高亲和性的适配体。
2. 传感器制备：将适配体与荧光分子进行连接，制备成荧光适配体传感器。
3. 样品处理：取待测液态奶样品进行处理，如离心、过滤等操作，去除可能干扰检测的物质。
4. 检测：将处理后的样品加入荧光适配体传感器中，观察荧光信号的变化。
5. 结果分析：根据荧光信号的变化程度，结合标准曲线，计算出样品中黄曲霉毒素M1的浓度。
四、方法应用及研究本研究将基于荧光适配体传感器的黄曲霉毒素M1检测方法应用于实际液态奶样品中。
通过对比传统检测方法和本方法的结果，发现本方法具有以下优点：1. 快速：本方法可在短时间内完成检测，大大缩短了检测周期。
《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》范文
《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇一一、引言食品安全问题一直备受社会关注。
其中，黄曲霉毒素M1作为液态奶中的主要污染物之一，具有强烈的致癌性，对人体健康造成极大威胁。
因此，开发一种快速、准确、高效的黄曲霉毒素M1检测方法，对于保障食品质量和安全具有重要意义。
本文提出了一种基于荧光适配体传感器的快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法，并对其应用进行了深入研究。
二、方法概述该方法利用荧光适配体传感器技术，通过特异性识别黄曲霉毒素M1，实现快速、灵敏的检测。
具体步骤包括：样品前处理、荧光适配体传感器制备、荧光检测及数据分析。
（一）样品前处理液态奶样品经过适当稀释后，采用固相萃取法进行净化，以去除样品中的杂质和干扰物质，提高检测的准确性和可靠性。
（二）荧光适配体传感器制备荧光适配体传感器采用生物工程方法制备，包括DNA或RNA适配体的合成、荧光基团的标记及传感器的组装等步骤。
制备好的传感器具有高特异性、高灵敏度和良好的稳定性。
（三）荧光检测及数据分析将处理后的样品与荧光适配体传感器混合，通过荧光检测仪器进行荧光强度检测。
根据荧光强度的变化，结合标准曲线，可快速计算出样品中黄曲霉毒素M1的含量。
三、实验结果（一）方法性能评价通过对比国家标准方法，本文所提方法在检测液态奶中黄曲霉毒素M1时，具有更高的灵敏度和更低的检测限。
此外，该方法操作简便、快速，适合大规模样品的检测。
（二）实际样品检测为验证本文所提方法的实际应用效果，我们对市售液态奶进行了检测。
结果显示，部分样品中黄曲霉毒素M1含量超标，为食品安全监管提供了有力支持。
四、应用研究（一）食品安全监管本文所提方法可广泛应用于液态奶及其他乳制品中黄曲霉毒素M1的快速检测，有助于食品安全监管部门及时发现和处理问题产品，保障消费者权益。
（二）食品安全风险评估通过大量样品的检测和分析，可对食品中黄曲霉毒素M1的污染状况进行评估，为制定科学的食品安全风险评估提供依据。
生乳中黄曲霉毒素M1快速检测方法的比对
Quality Control生乳中黄曲霉毒素M1快速检测方法的比对李 婕，曹学思，杨爱君*，何 瑛，纪坤发，罗少杰广东燕塘乳业股份有限公司，广东广州 510000摘 要：[目的]分析酶联免疫吸附法（ELISA）测定生乳中黄曲霉毒素M1残留量结果的重现性、回收率和精密度，以及胶体金免疫层析法与其结果的呼应度，证实2 种方法联合使用的可行性。
[方法]用胶体金快速检测试纸条对生乳样品中的黄曲霉素M1进行检测，并用黄曲霉毒素M1 ELISA检测试剂盒（鲜奶检出下限为0.018 μg/kg）做对照试验。
[结果]胶体金快速检测试纸条对生乳中不同浓度黄曲霉毒素M1残留量的检测结果呈现梯度效应，并能与ELISA检测试剂盒的定量检测结果呼应。
ELISA法对生乳中黄曲霉毒素M1不同浓度残留量的定量试验结果重现性较好，具有较高的稳定性。
回收率为94.83%～100.53%，RSD值在1.11%～3.01%之间。
[结论]2 种快速检测方法对生乳中黄曲霉毒素M1的测定便捷快速，结果稳定准确、可信度高，可作为乳品企业日常快速进行原奶验收工作的基础数据参考。
关键词：生乳；黄曲霉毒素M1；胶体金免疫层析法；酶联免疫吸附法文章编号：1671-4393（2023）12-0074-06 DOI:10.12377/1671-4393.23.12.150 引言黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）是迄今发现污染农产品毒力最强的一类生物毒素[1]。
常见的有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，其中AFB1的含量与毒力最大[2]。
黄曲霉毒素B1通常存在于花生、玉米、坚果等农副产品中[3]。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的4-羟基衍生物[2]。
它是动物在摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料和食品后在体内产生的代谢物[4]，可致癌、致畸、致突变，其结构为二呋喃环和香豆素，溶于多种有机试剂，如氯仿、乙腈和甲醇等[5，6]，存在于作者简介：李 婕（1989-），女，广东广州人，本科，食品工程助理工程师，研究方向为乳品质量安全检测；曹学思（1997-），女，广东广州人，本科，食品安全工程助理工程师，研究方向为乳品质量安全检测；何 瑛（1987-），女，广东广州人，本科，食品安全高级工程师，研究方向为乳品质量检测和质量保证；纪坤发（1986-），男，广东汕头人，大专，食品安全工程师，研究方向为乳品质量检测；罗少杰（1962-），男，广东江门人，大专，食品技术员，研究方向为乳品质量检测。
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《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇一一、引言随着食品工业的快速发展，食品安全问题日益受到人们的关注。
黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）作为乳制品中的常见污染物，具有潜在毒性及致癌性，对消费者的健康构成了严重的威胁。
因此，对液态奶中黄曲霉毒素M1的快速、准确检测显得尤为重要。
传统的检测方法如色谱法、质谱法等虽然具有较高的灵敏度，但操作复杂、耗时较长，难以满足快速检测的需求。
近年来，荧光适配体传感器因其高灵敏度、快速响应及操作简便等优点，在生物分析、食品安全检测等领域得到了广泛应用。
本文旨在研究基于荧光适配体传感器的快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用。
二、方法本研究采用荧光适配体传感器技术，通过生物分子识别原理实现对黄曲霉毒素M1的快速检测。
首先，设计并合成特异性识别黄曲霉毒素M1的荧光适配体。
然后，将荧光适配体与液态奶样品混合，通过适配体与AFM1的特异性结合，形成适配体-AFM1复合物。
在复合物形成过程中，荧光信号发生变化，通过检测荧光信号的强度变化，即可实现对AFM1的定量检测。
三、实验结果通过实验，我们成功制备了基于荧光适配体传感器的黄曲霉毒素M1检测系统。
该系统具有高灵敏度、快速响应的特点。
在最佳实验条件下，该系统对AFM1的检测范围为XX-XX ng/mL，且具有良好的线性关系。
同时，该系统对其他常见污染物无交叉反应，具有较高的选择性。
此外，我们还对实际液态奶样品进行了检测，结果表明该系统具有良好的实际应用价值。
四、讨论本研究利用荧光适配体传感器技术实现了对液态奶中黄曲霉毒素M1的快速、准确检测。
与传统的检测方法相比，该方法具有以下优点：一是高灵敏度，能够实现对AFM1的微量检测；二是快速响应，能够在短时间内完成检测；三是操作简便，无需复杂的样品前处理步骤；四是具有良好的选择性，能够避免其他污染物的干扰。
因此，该方法在食品安全检测领域具有广泛的应用前景。
牛奶中黄曲霉毒素M1常见检测方法比较
收稿日期:2013-04-21作者简介:万珊(1985-)女,湖北武汉人,助理工程师,主要从事兽药及畜产品检验工作。
黄曲霉毒素(Aflatoxin ,AF)主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物,之所以广受重视是因为它是人类癌症的一个重要的致癌源。
至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有20多种,在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见。
在AF 中,已知毒性大小顺序为AFB1>AFM1>AFG1>AFB2>AFG 。
黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)是动物摄入黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)后在体内经羟基化形成的代谢产物,毒性仅次于AFB1,WHO 将其列为ⅡB 类致癌物。
AFM1主要存在于动物的乳、肾脏、肝脏、蛋、肉和尿中,其中以乳中最为常见。
把发霉的谷物作为饲料,其中的黄曲霉毒素在24h 之后就能进入奶中。
王蕾指出黄曲霉毒素被动物食用后,一部分会蓄积在动物的体内,另外一部分则会转化到乳汁和尿液中,转化率一般为3.45%~11.39%[1],排出AFM1的量为AFB1摄入量的1%~3%[2]。
1黄曲霉毒素M1的基本性质及危害黄曲霉毒素基本结构由一个二呋喃环和一个氧杂萘邻酮组成,前者为其毒性结构,后者可能与其致癌作用有关。
黄曲霉毒素M1一旦产生便很难消除,因为它对光、热和酸都比较稳定,熔点(裂解温度)在299℃。
牛奶常见的3种消毒方法都对它无可奈何。
黄曲霉毒素M1进入人或动物体内后,除抑制DNA 、RNA 合成外,也抑制肝脏蛋白质合成,导致人体中毒。
其危害主要表现在3个方面:损害组织器官;致癌、致畸、致突变,引发动物及人类的肝癌、肾癌和胃癌等[3-5];抑制免疫机能。
其毒性是氰化钾的10倍,砒霜的68倍,主要危害的部位在肝脏。
2牛奶中AFM1的限量牛奶中AFM1限量取决于科学、社会和经济方面的诸多因素,这些因素相互影响、制约,综合地决定牛奶中AFM1限量值。
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黄曲霉毒素M1检测方案
方案一、免疫亲和层析净化高效液相色谱法
（GB 5413.37-2010第二法）
一、原理：
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。
用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。
用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。
二、所需仪器和耗材
1、高效液相色谱仪
（配荧光检测器—具有365 nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能
够测定0.02 ng的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪音)）
2、离心机（转速≥7000 转/分钟）
3、天平：感量为0.01 g
4、黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
方案二、酶联免疫吸附法
（可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1）
一、原理
标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。
再加入黄曲霉毒素M1酶标记物，将没有结合的抗体位点全部覆盖，结合的酶标记物通过显色液显示出来。
最后加入终止液，用酶标仪在450nm测定吸光度值，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素M1含量成反比。
二、所需仪器和耗材
1、微孔板酶标仪450nm/630nm
2、离心机
3、天平：感量为0.01 g
4、微量移液器：单道20μl～200μl、200μl～1000μl、多道250μl
5、振荡器。