教2016004丁苯酞通过改善微血管预防肾血管性高血压性脑卒中

人工寒潮促发脑卒中有两个机制。一个是血压的增加。据报道，对于老年人来说，室温每增加1°C，收缩压和舒张压分别下降1.3/0.6mmHg。室外平均温度每增加1°C，收缩压和舒张压分别下降0.8/0.3mmHg。大量的Meta分析数据显示舒张压每升高5mmHg，卒中的风险增加34%，冠心病的风险增加21%。所以，血压的增加是应对寒潮的反映，结果却导致卒中的高风险。另一个机制是凝血状态的改变。纤维蛋白原与身体的核心温度和环境温度呈明显的负相关，这导致了卒中的高风险。虽然短时期的寒冷暴露不能明显增加纤维蛋白原的水平，但它依然是值得考虑的可能机制。
3.2丁苯酞减少冷诱导卒中
3.2.1生理参数
丁苯酞组、阿司匹林组和实验对照组的血压分别为…，组间无统计学差异，然而假手术组血压为…明显低于实验各组，有统计学差异。相应各组的体重为…，无统计学差异。
3.2.2降低脑梗死发生及减少脑梗死体积
相比于实验对照组，丁苯酞治疗组明显降低脑梗死的发生，并且优于阿司匹林组。相比于实验对照组，丁苯酞治疗组明显减少脑梗死的体积。各组间脑出血和混合性中风的发生和损害大小均无统计学差异。
3.1冷诱导中风
经受寒潮3天后，32.99%的高血压大鼠发生了缺血性中风（脑梗死），脑出血或混合性卒中。Fig.1A,B.展示脑组织病理学改变。梗死脑组织苍白、水肿，大多位于枕叶，一些位于顶叶、额叶、颞叶及其他部位。TTC染色见梗死脑组织呈白色，正常脑组织着红色。电镜下用H＆E染色证实脑梗死和脑出血。梗死部位可见坏死，灶内见细胞碎片、核固缩、格子细胞等，病灶与周围存活组织分界清楚，灶周有胶质细胞、炎性细胞和巨噬细胞。有的局部坏死组织脱落。出血脑组织完全破坏，其中只剩红细胞。混合性中风定义为梗死和出血的结合。
4.讨论
大量证据表明 , 绝大多数脑卒中的发病都有预测（诱发）因素,其中环境和或身体状态的急剧变化（均可能成为导致发病的重要诱因）, 如季节变化（除外温度急剧下降)、过劳 、不健康的饮食、情绪激动、嗜酒等。 我们将被提及到的预测因素引发的卒中易感生理状况统称为卒中前状态。若能控制诱因,在某种程度上则有希望减少卒中的发生，相反，这些因素均能引发卒中。本实验中，我们设计人工寒潮引发脑卒中的动物模型，发现丁苯酞预防性给药能够降低脑梗死的发生和脑梗死体积，改善微血管灌注数目。
4.1模型评价
预防卒中的研究须有良好的动物模型。基于大量流行病学调查显示卒中的发作有季节变化性，在气温变化剧烈的冬春季节明显多发，特别在温差变化较大的寒潮更易发生，卒中与温度下降的关系也被我们以前的实验所证实。由于环境控制箱的使用, 我们可以控制温度和湿度，也可以产生昼夜的周期性变化。人工模拟寒潮，重复性温度迅速下降诱发高血压大鼠产生中风。寒潮3天后，32.99%的高血压大鼠产生中风，病例调查证实有3种子类型。从气象角度看，该方法的优点在于创造与人工条件相关的脑卒中动物模型，且可用于卒中的预防性研究。该方法操作简单、易行。
综上所述 ,通过反复寒潮诱发易卒中型肾血管性高血压大鼠产生中风，应用此模型发现丁苯酞通过改善微循环而起到预防缺血性脑卒中的发生，将其作为缺血性脑卒中的候选药物值得考虑。
我们发现高血压各组间，由vwF标记的微血管数量高于FITC标记的血管数目，这可能说明了高血压大鼠的脑组织上存在有一些功能不良或关闭的血管。正常血压大鼠的大脑中动脉阻塞模型中,也会出现明显的微循环受损,其机制可能有病灶周围组织水肿压迫微血管,白细胞黏附于受损部位或激活状态的血管内皮细胞以及纤维蛋白在血管内的沉积。而高血压又会因为自动调节功能丧失而加重中风后脑微血管的损伤。这解释了为什么高血压大鼠可以通过冷诱发促发中风，而血压正常的大鼠则不能。
3.2.3增加微血管灌注数目
高血压后微血管的灌注数目明显减少，然而，相比于实验对照组和阿司匹林组，丁苯酞治疗组微血管数目明显增加。FITC荧光标记血管数目见表(Fig.2A–D，Table 4)。用血管内皮细胞特异性标志物，vwF证实微血管，可见呈黄褐色，微血管内层横断面呈圆形或椭圆形，纵切面呈丝状。丁苯酞治疗组的微血管vwF染色数目为…，阿司匹林组为…。
4.2丁苯酞效果
丁苯酞是一种治疗中风的新制剂，通过多种机智减少脑缺血性损伤。然而，丁苯酞对于卒中的预防作用尚不清楚。阿司匹林是被批准和广泛使用的预防脑卒中的药物，我们对比了其余丁苯酞的疗效。研究结果表明丁苯酞能够显著降低缺血性中风的发生率并且改善病灶大小（脑梗死体积），然而，相比于对照组，阿司匹林治疗组没有表现出任何差异性。
2.方法
2.1肾血管性高血压大鼠动物模型
2.2寒潮诱发脑卒中
2.3分组和给药方法
2.4组织学
2.5图像分析
2.6数据分析
3.结论
总共招募280只高血压大鼠，10只在治疗中死亡，最后有270只完成实验。总共78只大鼠发生脑卒中，其中33只表现出易激惹症状，24只表现少动伴有腹泻和呼吸一，一大部分幸存者都经历了不同程度的残疾。对于中风，因为没有有效的治疗方法除了超早期溶栓，所以预防中风是最值得关注的问题。中风好发于气温急剧变化的冬春季节，尤其是当气温迅速下降的时候。中风与寒潮之间的关系已被我们此前的动物研究所证实。
丁苯酞是治疗卒中的新制剂，通过多种机制减轻缺血性脑损伤，包括改善微循环、抗血小板、抗炎活动。然而，其预防中风的效应尚不清楚。本研究中，我们建立了冷诱导卒中动物模型，在一定程度上通过反复迅速降温模拟人工寒潮，探究丁苯酞预防卒中的疗效。由于高血压是中风的最危险的因素之一，并且大多数卒中病人患有血管病，所以我们将易卒中型肾血管性高血压大鼠应用于本研究。
3.2.4改善微血管形态
实验对照组的微血管损害最为严重，管腔狭窄，一些被微栓子堵塞或者是微血管内大量的沉淀物。内皮细胞肿胀、破碎，从管腔脱落，细胞间的紧密连接受损，基底膜扭曲、破裂。相比于对照组，治疗组的微血管形态要好，尤其是丁苯酞治疗组的微血管结构基本完整，管腔内仅有少量红细胞。
脑的微血管是指外径在300um(内径100um)以内的血管系统,即毛细血管及和它连接的微动脉及微静脉。微血管供应脑组织生理代谢所需的氧气和营养，且有助于恢复局灶性脑缺血的局部血流。因此，理解中风后微血管的病理变化和寻求改善微循环作为治疗目标非常重要。高血压后脑微血管灌注数目减少，微血管的结构破坏。然而，vwF免疫组化染色发现丁苯酞治疗组脑微血管总数明显增加，更重要的是发现微血管结构相对完整。FITC标记的微血管灌注数目增加。研究发现丁苯酞治疗给药通过改善脑血流、抗血小板和抗炎可以减少脑梗死，同样表明丁苯酞预防性给药可以通过改善微循环降低脑梗死的发病率，减少脑梗死体积。此外，由于新生血管可以保护局灶性脑缺血的脑组织，还不能否定丁苯酞通过刺激血管新生增加脑微血管灌注数目。