临检课件

3mm
WBC WBC
WBC
WBC
1mm
排除异常标本的干扰
（1） 计数红细胞时，同时计入了 白细胞和网织红细胞，严重贫血时 甚至计入了有核红细胞。 白细胞数量过高（＞ 100×109/L） 时，则需要对计数 结果进行校正。
（2）自家凝集素和球蛋白的影响
缩小计数域误差的有效方法就是尽 量扩大计数范围和数量，尽量将CV控 制在5%以内。根据Poisson公式推断， 欲将误差控制在5%以内，至少需要计数 400个红细胞，因此要求计数5个中方格 的红细胞。
保证试剂质量
（1）文-齐液应以蒸馏水（不能用去离子水） 配制，外观淡黄色、透明、无沉淀，溶液变 浑浊、变绿均不能再用。 （2）以纯蒸馏水调“0”，此转化液A=0。 （3）用本试剂处理血液标本，5min时应将 Hb（不包括SHb和HbCO）完全转化。 （4）用该试剂转化定值的溶血液，在校准 的仪器上测定，所得结果与定值之差 ≤±2%。
甲醇：溶解染料 ME ；固定细胞的形态；提高 对染料的吸附作用。
2．染色原理
物理吸附、化学亲和
染色影响因素：
（1）pH对细胞染色的影响：
细胞各种成分多属蛋白质，由于蛋白 质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定。 在偏酸时正电荷（H＋）增多，易与伊 红结合，染色偏红。 在偏碱时负电荷增多，易与美蓝或天 青结合，染色偏蓝。 （2）染料贮存时间愈久，染色效果愈好。 染液贮存，必须加塞，以防止甲醇挥发和 被氧化成甲酸。 （3）加入甘油,防止甲醇挥发，染色清晰。
4．红细胞内出现异常结构 （ 1 ） 嗜碱性点彩红细胞（ basophilic stippling cell ）：重金属损伤细胞膜 使嗜碱性物质凝集。嗜碱性物质变性， 血红蛋白合成过程中，原卟啉与亚铁结 合受阻，以铅的作用最为明显，常作为 铅中毒诊断筛选指标。

珠蛋白具有种属特异性，其合 成与氨基酸排列受独立的基因编码 控制。人类珠蛋白肽链有两大类， 即α类链与非α类链，非α类链包括β、 γ、δ、ε等。
不同时期血红蛋白的种类和肽链组合
时期
种类
肽链
比例
α2γ2 胎儿 fetal hemoglobin 时期 （HbF） α2β2 成人 Hemoglobin A（HbA） 时期 Hemoglobin A2 α2δ2 （HbA2）
二 血涂片的染色
（一）染料：
碱性 酸性 复合
瑞氏染色法
（二）染色方法： 吉姆萨染色法
瑞-吉染色法
1．瑞氏染色法

染色原理 染料组成：
酸性染料伊红（eosin, E-） 碱 性 染 料 亚 甲 蓝 （ methylene blue, M+；又名美蓝）组成复合染料。
M+CL- + Na+E - → ME + NaCL
4．积极搞好IQC及EQA
1. 自我控制：
如果5个中方格所计得红细胞数目之 间相差20个以上，则应重新充池计数。
红细胞数量正常的标本，两次红细胞 计数相差不得超过5%。
变异百分数评价法 适用于人数较多时 （>30人）或市、区集体考核 两差比值评价法： 双份计数标准差评价法：
参考值：
见书22页
临床意义：
【质量保证】
（1）瑞氏染液质量 （2）染色时间与染液浓度 （3）染色过程 （4）冲洗染液 （5）脱色与复染

第二章 血液一般检验
第一节 红细胞检查
一、红细胞计数
red blood cell, RBC Erythrocyte, Ery
起源于骨髓造血干细胞（colony forming unit-spleen，CFU-S） 主要生理功能：通过细胞内的血 红蛋白来实现的。
（ 6 ） 棘 红 细 胞 (acanthocyte) ： 见于遗传性或获得 性β -脂蛋白缺乏 症；于脾切除后、 酒精中毒性肝脏疾 病、尿毒症。 棘红细胞应与皱缩 红细胞（也称锯齿 状红细胞）区别 （ crenated cell, echinocyte）。
（7） 缗钱状红细胞(rouleaux formation)： 见于血浆中纤维蛋白原和免疫球蛋白增高性等 疾病。 （ 8 ） 裂 红 细 胞 (schistocyte) ： 红 细 胞 碎 片 （ cell fragments ） ， 有 各 种 形 态 如 刺 形 (burr)、盔形(helmet)等。见于弥漫性血管内 凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生 成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。 正常人＜2%。 （ 9 ）红细胞形态不整 (poikilocytosis) 在某 些感染或严重贫血时多见，最常见于巨幼细胞 性贫血。


2．SDS—Hb法

优点：操作简便，结果稳定可靠，精密度 高，试剂无公害，为HiCN法的替代方法。

缺点：SDS的质量难于保证，且由于其毫 摩尔消光系数尚未确定，故仍须依赖HiCN 法定值的溶血液制备工作曲线或校正仪器， 间接得到Hb浓度。SDS易破坏白细胞
质量保证：
1. 标本 2．器材及试剂 3. 技术操作 消毒、采血、稀释、混匀等 要求与红细胞计数相同。 对HbCO高的标本: 4. 废弃物
检测原理：
1．手工显微镜法 2．血液分析仪法
方法学评价：优缺点及适用范围
质量保证：
1. 避免技术误差 2. 纠正仪器误差（器材、稀释液） 3. 缩小分布误差（计数域误差）
红细胞计数
2ml稀释液 充分混匀
10ul血液 充池、静止 镜下计数
计算：RBC/L=N×5×10×106×200
Neubauer计数盘
检测原理：
HiCN测定法
红细胞被溶血剂破坏，释放出Hb， 除SHb外各种Hb被高铁氰化钾氧化成高 铁血红蛋白（methemeglobin，Hi）。 Hi与CN-结合成稳定的棕红色氰化高铁 血红蛋白（ HiCN ）。该物质在540nm 波长有最大吸收峰，根据吸光度值可直 接或间接得到血红蛋白浓度。
HiCN转化液： WHO和我国卫生部临床检 验中心推荐使用文-齐液
第三节 血涂片制备与染色
一 血涂片的制备
（一）载玻片要求 （二） 血涂片制备方法
一张良好血涂片的标准是：
厚薄适宜、头体尾分明、细 胞分布均匀、边缘整齐、两侧 及两头留有空隙。
几种血涂片效果比较
血涂片分布 不均主要原 因： (1)推片边 缘不齐(A) (2)用力不 均(B、G) (3)载片不 清洁(F) (4)角度太 大（C、D） (5)血滴散 开不合格 （ E、 H）
（5）试剂保存于棕色玻璃瓶内，不 得使用塑料试剂瓶；可冷藏（贮存 于4℃冰箱可延长有效期），但不能 冰冻，防止因丢失CN－而导致血红 蛋白转化不完全。

KCN按规定保管和使用 废液处理： 稀释、加次氯酸钠、敞口放置


参考值：
见书P25
【临床意义】

利用血红蛋白作为衡量贫血程度指标： Hb＜120（女＜110g/L）轻度贫血； Hb＜90g/L为中度贫血； Hb＜60g/L为重度贫血； Hb＜30g/L为极重度贫血。
当RBC＜1.5×1012/L；Hb＜ 45g/L时，应考虑输血。
分析贫血时：综合分析 注意分析影响检验结果的因素
三、红细胞形态检查
检测原理及方法学评价：

显微镜分析法： 计算机图像分析： 血液分析仪：
质量保证：
检验人员要求 镜检部位选择 镜检完整规范 减少人为因素
选择细胞分布均匀的区域：
2．吉姆萨染色法

染色原理： 吉姆萨（Giemsa）染料由天青、伊 红组成，其原理和瑞氏染色基本相同， 但吉姆萨染色法对细胞核着色较好， 结构显示更清晰，而对胞浆和中性颗 粒则染色略显不足。
3．瑞-吉姆萨染色
【原理】 将瑞氏染料和吉姆萨染料按一定比例 混合后对细胞进行染色，其染色原理 同瑞氏和吉姆萨染色法，但染色效果 更佳，因为其综合了瑞氏和吉姆萨染 色法的优点。
方法学评价：
全血铁法 比重法、折射仪法 血气分析法 比色法
氰化高铁血红蛋白法 比 色 法 十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）
碱羟高铁血红素（AHD575） 叠氮高铁血红蛋白（HiN3） 溴代十六烷基三甲胺（CTAB）


1．氰化高铁血红蛋白法 优点： 简便、快速，除SHb外，可于5min 内将所有血红蛋白全部转化，结果稳定可靠。 试剂容易保存，便于质控。 参考方法。 缺点：①KCN有剧毒②血标本中白细胞和球 蛋白偏高时可致反应液浑浊③HbCO转化慢 ④不能测定SHb 。

各种病理因素导致RBC、血红蛋白 或血细胞比容低于参考值下限，称为 贫血（anemia）。
常 生成减少 见 破坏过多 原 丢失（失血） 因
药物也可引起贫血：
二、血红蛋白测定
（hemoglobin，Hb或HGB）
血红蛋白的结构
construction of hemoglobin
血红素（heme） 血红蛋白 珠蛋白（globin）
小红细胞
大红细胞

巨红细胞

红细胞大小不均
2．红细胞形状改变 (1) 球 形 红 细 胞 (spherocyte) 见于遗传性和 获得性球形红 细 胞 增 多 症 （如自免溶贫 或直接理化损 伤如烧伤等）。
（2） 椭圆形红细胞(elliptocyte)： 见于遗传性椭圆形细胞增多症、大 细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓 纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫 血。正常人血液约占1%。
增多 生理变化 减低
病理变化
生理性增多：

高原生活、长期吸烟、重体力活动者红细胞、血 红蛋白偏高。 毛细血管血测定结果较静脉血高10%～15% 同1d内上午7时结果最高。



某些药物（如肾上腺素、糖皮质激素等）和情绪 波动也可引起红细胞一过性增加。