GSK2606414_1337531-36-8_CoA_MedChemExpress
稳定表达猪δ_冠状病毒S1_蛋白CHO_细胞系的构建与鉴定
河南农业科学，2023，52（6）：131‐138Journal of Henan Agricultural Sciencesdoi ：10.15933/ki.1004‐3268.2023.06.014稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO 细胞系的构建与鉴定孙雪珂1，2，丁培阳3，王思桥1，2，刘思源2，李明慧2，常泽杰2，陈艺兰2，李瑞琪2，张改平1，2，4（1.河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002；2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；3.郑州大学生命科学学院，河南郑州450001；4.江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）摘要：为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV ）S1蛋白的CHO 细胞系，利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S 1转染至CHO 细胞，通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。
利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化，采用间接ELISA 方法检测重组S1蛋白活性。
将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c 小鼠，通过间接ELISA 、间接免疫荧光试验（IFA ）及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。
结果显示，稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO 细胞系成功建立，并获得了纯度高于90%、产量为28.5mg/L 的重组S1蛋白；且重组S1蛋白与PDCoV 阳性血清反应性良好，具有良好的免疫原性，中和效价为1∶128。
综上，成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO 细胞系，且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
关键词：猪δ冠状病毒；S1蛋白；CHO 细胞；稳定表达；蛋白质纯化中图分类号：S855.3文献标志码：A文章编号：1004-3268（2023）06-0131-08收稿日期：2023-01-14基金项目：河南省重大科技专项（221100110600）作者简介：孙雪珂（1997-），女，河南新乡人，在读硕士研究生，研究方向：动物免疫学。
GSK2606414_DataSheet_MedChemExpress
Inhibitors, Agonists, Screening Libraries Data SheetBIOLOGICAL ACTIVITY:GSK2606414 is an orally available and selective PERK inhibitor with an IC 50 of 0.4 nM.IC50 & Target: IC50: 0.4 nM (PERK)In Vitro: GSK2606414 inhibits PERK activation in cells [1].In Vivo: GSK2606414 (50 and 150 mg/kg, p.o.) inhibits the growth of a human tumor xenograft in mice [1].PROTOCOL (Extracted from published papers and Only for reference)Animal Administration: GSK2606414 is formulated in vehicle (0.5% hydoxypropylmethylcellulose, 0.1% Tween 80 inwater, pH 4.8).[1]Exponentially growing BxPC3 tumor cells (10×106 cells/mouse) from cell culture are implanted subcutaneously into the right flank of female nude mice. Sixteen days after implantation, mice with –200 mm 3 tumors are randomized into various treatment groups (n = 8 mice/group). Animals are orally treated with vehicle (0.5% hydoxypropylmethylcellulose, 0.1% Tween 80 inwater, pH 4.8), compound at 50 or 150 mg/kg, b.i.d. for 21 days. Tumor volume is measured twice weekly with calipers and calculated using the following equation: tumor volume (mm 3) = (length × width 2)/2. Results are represented as percent inhibition on completion of dosing, which is 100[1–(average growth of drug–treated population)/(average growth of vehicle–treated control population)]. Statistical analysis is performed using a two–tailed t test.References:[1]. Axten JM, et al. Discovery of 7–methyl–5–(1–<[3–(trifluoromethyl)phenyl]acetyl>–2,3–dihydro–1H–indol–5–yl)–7H–pyrrolo[2,3–d]pyrimidin–4–amine (GSK2606414), a potent and selective first–in–class inhibitor of protein kinase R (PKR)–like endoplasmic reticuluProduct Name:GSK2606414Cat. No.:HY-18072CAS No.:1337531-36-8Molecular Formula:C 24H 20F 3N 5O Molecular Weight:451.44Target:PERK Pathway:Cell Cycle/DNA Damage Solubility:DMSO: ≥ 31 mg/mLCaution: Product has not been fully validated for medical applications. For research use only.Tel: 609-228-6898 Fax: 609-228-5909 E-mail: tech@ Address: 1 Deer Park Dr, Suite Q, Monmouth Junction, NJ 08852, USA。
实时定量PCR测定治疗性HBV_DNA疫苗工程菌的质粒拷贝数
广东药科大学学报Journal of Guangdong Pharmaceutical University Sep,2023,39(5)实时定量PCR测定治疗性HBV DNA疫苗工程菌的质粒拷贝数陈孟璋，何星垚，林汉森（广州广药益甘生物制品股份有限公司，广东广州511495）摘要：目的比较不同的定量方法和总DNA制备方法对实时定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）测定治疗性HBV DNA疫苗工程菌的质粒拷贝数（plasmid copy number,PCN）的影响，为建立快速简便的治疗性HBV DNA 疫苗工程菌的PCN测定方法提供参考。
方法通过试剂盒提取法、Triton X-100煮沸法和培养基煮沸法分别制备总DNA样品用于qPCR检测，使用绝对定量方法和相对定量方法计算不同制备方法样品的PCN，并对测定结果进行统计学分析。
结果试剂盒提取法制备的样品经绝对定量和相对定量计算PCN，结果分别为43.10±4.02和42.92±3.98，显著低于Triton X-100煮沸法的结果（69.32±6.51和68.58±6.42）以及培养基煮沸法的结果（75.73±7.46和76.15±7.50）。
任一样品制备方法，比较其绝对定量和相对定量结果，差异均无统计学意义。
结论qPCR的绝对定量和相对定量计算方法都适用于治疗性HBV DNA疫苗工程菌PCN测定，Triton X-100煮沸法更适合于总DNA模板制备。
关键词：HBV疫苗；DNA疫苗；实时定量PCR；质粒拷贝数中图分类号：R392.1文献标识码：A文章编号：2096-3653（2023）05-0087-06DOI:10.16809/ki.2096-3653.2023051703Determination of plasmid copy number of therapeutic HBV DNA vaccine engineered strain by real-time quantitative PCRCHEN Mengzhang*,HE Xingyao,LIN Hansen(Guangzhou Guangyao Yigan Biological Products Co.,Ltd.,Guangzhou511495,China)*Corresponding author Email:**************Abstract:Objective To compare the effects of different quantitative methods and total DNA preparation methods on the plasmid copy number(PCN)determination of therapeutic HBV DNA vaccine engineered strain by real-time quantitative PCR(qPCR),so as to provide reference for the establishment of a rapid and simple method for the PCN determination of therapeutic HBV DNA vaccine engineered strain.Methods Total DNA samples were prepared for qPCR by kit extraction method,Triton X-100boiling method and medium boiling method, respectively.The PCN of samples prepared by different methods was calculated by absolute and relative quantification methods,and the results were statistically analyzed.Results The absolute and relative quantification results of PCN of samples prepared by kit extraction method were43.10±4.02and42.92±3.98, respectively,which were significantly lower than those obtained by Triton X-100boiling method(69.32±6.51) and medium boiling method(75.73±7.46).There was no significant difference between the absolute and relative quantitative results of any sample preparation method.Conclusion Both the absolute and relative quantitative methods of qPCR are suitable for the determination of PCN of therapeutic HBV DNA vaccine engineered strain, and the Triton X-100boiling method is more suitable for the preparation of total DNA template.Key words:HBV vaccine;DNA vaccine;real-time quantitative PCR;plasmid copy number收稿日期：2023-05-17基金项目：广东省重大科技专项（2012A080204009）作者简介：陈孟璋（1985－），男，硕士，制药工程师，主要从事生物医药研发和临床试验研究，Email：**************。
不同亚型CHO_宿主细胞对抗体表达的影响
生物技术进展 2023 年 第 13 卷 第 5 期 698 ~ 703Current Biotechnology ISSN 2095‑2341进展评述Reviews不同亚型CHO 宿主细胞对抗体表达的影响曹辉 ， 董静 ， 贾宇 ， 江一帆*华北制药集团新药研究开发有限责任公司，抗体药物河北省工程研究中心，抗体药物研究国家重点实验室，石家庄 050015摘要：CHO 细胞作为宿主细胞广泛应用于生物药工业化生产中。
其中，CHO -K1、CHO -DG44和CHO -S 是最常见的3种亚型。
虽然这些亚型是从共同的原始CHO 细胞分离出来的，但在不同的实验室或生物医药公司、研究人员、培养基或培养方式下连续传代、驯化和保存，使得CHO 细胞积累了大量变异，导致宿主细胞应用于抗体药生产时会在细胞生长状态、抗体表达量及以糖型为代表的质量属性方面表现出较大差异。
综述了CHO 细胞不同亚型的染色体差异、生长状态、表达差异以及糖型差异，以期为抗体药物研发中宿主细胞的选择提供参考。
关键词：CHO 细胞；抗体；表达量；糖型DOI ：10.19586/j.2095‑2341.2023.0064中图分类号：Q28, R392-33 文献标志码：AEffects of Different Sources of CHO Host Cells on Antibody ExpressionCAO Hui ， DONG Jing ， JIA Yu ， JIANG Yifan *State Key Laboratory of Antibody Drug Development ， Hebei Engineering Research Center of Antibody Medicine ， New Drug Research and Development Co. Ltd ， North China Pharmaceutical Corporation ， Shijiazhuang 050015， ChinaAbstract ：CHO cells comprise a variety of lineages including CHO -K1， CHO -DG44 and CHO -S ， which have been widely used in the industrial production of biological drugs. All CHO cell lines share a common ancestor ， however ， during the process of cell passage cultivation ， cell domesticated ， and preservation by different laboratories or companies ， substantial genetic heterogeneity among them has been produced ， that showed great differences in cell growth state ， antibody titer ， glycosylation and other product quality attributes. This article reviewed the difference in chromosome ， growing status and expression ， and glycoform in different sources ofCHO host cells ， which was expected to be helpful in host cell selection during antibody drug research and development process.Key words ：CHO cells ； monoclonal antibody ； antibody titer ； glycosylation生物药物在国际医药市场中占据主导地位，截至2023年，全球范围内已有100多个抗体药物被批准上市，近1 200个抗体药物处于不同临床试验阶段［1］。
茶多酚对人脂肪来源间充质干细胞成骨分化的影响
茶多酚对人脂肪来源间充质干细胞成骨分化的影响王华1，齐玉成-杨云芳-赵艺洋2,王慧1，陈培1，杨旭芳1(1.牡丹江医学院，黑龙江牡丹江157011；2.南方医科大学第一临床医学院，广东广州510515)摘要：目的探讨茶多酚(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchy^-mal stem cells,hADSCs)成骨分化的影响。
方法利用胶原酶消化法和贴壁筛选法从人脂肪组织中分离、培养及扩增hADSCs,倒置显微镜下观察各代hADSCs的形态学特点;利用流式细胞术检测各代hADSCs免疫学表型;取P3代细胞进行成骨诱导分化，实验分三组，即未诱导组、常规成骨诱导组与EGCG组(常规成骨诱导+5^mol/L EGCG),14d后，镜下观察细胞形态学改变及碱性磷酸酶(ALP)染色。
结果体外分离、培养的hADSCs形态均一;流式细胞术结果显示hADSCs具备间充质干细胞的免疫学表型，即CD44、CD73、CD105阳性;成骨诱导14d后部分细胞由长梭形变成多角形，细胞呈现聚集趋势；ALP染色显示EGCG组呈强阳性。
结论成功的从脂肪组织中分离培养出了hADSCs,EGCG能加强其成骨分化能力，这将为骨质疏松症的临床药物开发提供新的思路，亦为组织工程骨的构建提供丰富可靠的种子细胞来源。
关键词：EGCG；人脂肪来源间充质干细胞;成骨分化中图分类号：R595.2文献标识码：A文章编号：1001-7550(2021)01-0001-04Effect of EGCG on osteogenic differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cellsWANG Hua et al(Mudanjiang Medical University,Mudanjiang157011,China)Abstract:Objective To explore the effect of tea polyphenol EGCG on the osteogenic differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells(hADSCs) .Methods To isolate,culture and amplify hADSCs from human adipose tissue by collagenase digestion and adherent screening methods, the morphological characteristics of each passage of hADSCs were observed under an inverted microscope.The immunophenotype of each generation of hADSCs was detected by flow-cytometry.P3passage cells were taken for osteogenic induction and differentiation,and were divided into three groups:non-induced group, conventional osteogenic induction group and EGCG group(conventional osteogenic induction with+5Rmol/L EGCG).After14days,morphological changes and alkaline phosphatase(ALP)staining were observed under the microscope.Results The morphology of hADSCs isolated and cultured in vitro was uni-form.The results of flow cytometry showed that hADSCs had the immunophenotype of mesenchymal stem cells,such as CD44,CD73and CD105.After14days of osteogenic induction,some cells changed from long spindle shape to polygonal shape,and the cells showed aggregation trend.ALP staining showed strong positive in EGCG group.Conclusion hADSCs have been successfully isolated and cultured from adipose tissue.EGCG can enhance the osteogenic differentiation ability of hADSCs,which will provide a new idea for the clinical drug development of osteoporosis and provide an abundant and reliable source of seed cells for the construction of tissue-engineered bone.Key words:EGCG;human adipose-derived mesenchymal stem cells；osteogenic differentiation随着人口老龄化,骨质疏松症已成为影响人们生活质量的主要因素之一⑷。
影响因子_Chem2012
Mark Rank Abbreviated Journal Title ISSN JCR Data More Information (linked to journal information)Total Cites Impact5-YearFactor ImpactFactor NATURE0028-0836********.2836.235SCIENCE0036-807548083631.20132.452P NATL ACAD SCI USA0027-84245042439.68110.4721CHEM REV0009-266510370240.19742.0542NAT MATER1476-11223924232.84136.7323CHEM SOC REV0306-00123591828.7628.0984ACCOUNTS CHEM RES0001-48423966421.6422.5075NAT CHEM1755-4330526020.52420.5336ALDRICHIM ACTA0002-5100110016.09116.8827NANO TODAY1748-0132217015.35516.0788ANNU REV PHYS CHEM0066-426X665714.1317.489ADV MATER0935-96487986013.87712.81310ANGEW CHEM INT EDIT1433-785120986213.45513.19511NANO LETT1530-69847528713.19813.84312COORDIN CHEM REV0010-85452506212.1112.74413SURF SCI REP0167-5729370211.69618.09514ACS NANO1936-0851*******.77411.17115MED RES REV0198-6325309610.710.0316J PHOTOCH PHOTOBIO C1389-5567165410.3612.45817ADV FUNCT MATER1616-301X2850310.1799.9218J AM CHEM SOC0002-78634083079.9079.76619NAT PROD REP0265-056857749.799.67120ENERG ENVIRON SCI1754-569250879.6110.81321PROG INORG CHEM0079-637914959.3338.33322ANNU REV ANAL CHEM1936-13278769.04811.80623PROG SURF SCI0079-681617288.6368.08824SMALL1613-6810151818.3498.26225ADV COLLOID INTERFAC0001-868664148.128.37226CURR OPIN COLLOID IN1359-029444788.017.83727ADV CARBOHYD CHEM BI0065-23188517.643 5.5628CHEM SCI2041-652016977.5257.54529CATAL REV0161-494027377.59.92730ANNU REV CHEM BIOMOL1947-54381587.2947.29431CHEM MATER0897-4756699267.286 6.94932ADV ORGANOMET CHEM0065-30559517 6.63633NANO RES1998-01242017 6.977.46134CHEMSUSCHEM1864-56313040 6.8277.17135GREEN CHEM1463-926212023 6.32 6.76136TRAC-TREND ANAL CHEM0165-99366620 6.273 6.87337J PHYS CHEM LETT1948-71854695 6.213 6.217 38CHEM COMMUN1359-7345105562 6.169 6.082 39ADV SYNTH CATAL1615-415014629 6.048 5.904 40J CATAL0021-951733570 6.002 6.201 41J MATER CHEM0959-942846166 5.968 5.992 42INT REV PHYS CHEM0144-235X1533 5.967 6.977 43CHEM-EUR J0947-653954127 5.925 5.866 44NANOSCALE2040-33643187 5.914 5.914 45ORG LETT1523-706068838 5.862 5.558 46ANAL CHEM0003-270095262 5.856 5.983 47J CONTROL RELEASE0168-365926071 5.7327.112 48LAB CHIP1473-019713729 5.67 6.497 49APPL CATAL B-ENVIRON0926-337320525 5.625 6.052 50BIOSENS BIOELECTRON0956-566320029 5.602 5.637 51BIOMACROMOLECULES1525-779721280 5.479 5.646 52CARBON0008-622327798 5.378 6.008 53J MED CHEM0022-262356481 5.248 5.321 54J CHEM THEORY COMPUT1549-96188327 5.215 5.673 55PROG NUCL MAG RES SP0079-65651765 5.214 6.296 56CHEMCATCHEM1867-38801502 5.207 5.207 57FARADAY DISCUSS1364-549853725 4.687 58BIOCONJUGATE CHEM1043-180213657 4.93 5.224 59CURR MED CHEM0929-867311387 4.859 4.806 60J PHYS CHEM C1932-744760782 4.805 5.049 61CRYST GROWTH DES1528-748319082 4.72 4.877 62J CHEM INF MODEL1549-959611209 4.675 4.305 63INORG CHEM0020-166982190 4.601 4.553 64J COMPUT CHEM0192-865122334 4.583 4.795 65ANAL CHIM ACTA0003-267038343 4.555 4.144 66J CHROMATOGR A0021-967360179 4.531 4.362 67CHEM-ASIAN J1861-47284472 4.5 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3.696 3.652 92ACS CHEM NEUROSCI1948-7193310 3.676 3.676 93ADV CATAL0360-05641395 3.667 5.04 94FOOD CHEM0308-814636842 3.655 4.268 95CARBOHYD POLYM0144-861715055 3.628 3.987 96PHYS CHEM CHEM PHYS1463-907631819 3.573 3.931 97EXPERT OPIN THER PAT1354-37761563 3.571 2.122 98ULTRASON SONOCHEM1350-41774594 3.567 3.83 99GOLD BULL0017-15571139 3.517 3.162 100STRUCT BOND0081-59931940 3.475 6.315 101FOOD HYDROCOLLOID0268-005X5607 3.473 3.46 102COLLOID SURFACE B0927-77658715 3.456 3.354 103CURR ORG SYNTH1570-1794665 3.434 3.842 104J CHEMINFORMATICS1758-2946179 3.419 3.419 105CHEMPHYSCHEM1439-423510354 3.412 3.553 106J COMB CHEM1520-47663046 3.408 2.893 107CATAL TODAY0920-586122303 3.407 3.584 108ACS MED CHEM LETT1948-5875511 3.355 3.355 109J INORG BIOCHEM0162-01349265 3.354 3.495 110EUR J MED CHEM0223-523411332 3.346 3.509 111EUR J ORG CHEM1434-193X18591 3.329 3.289 112ELECTROPHORESIS0173-083517540 3.303 2.917 113J BIOL INORG CHEM0949-82573803 3.289 3.488 114J NANOPART RES1388-07644770 3.287 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5.1443.267309.70.016877.4672.15578950.26226 4.0612.8982002 5.40.513933.372.082955 4.20.34576 5.0592.1791517.70.04173.2063.2588.70.009037.8051.631114120.12069 3.5842.12524 6.80.00678 2.7330.37516 6.60.00367 3.3871.51453340.112652.9391.86531767.50.816772.7922.61172 5.70.01594 2.9722.049548 1.90.01802 2.6940>10.00.00081 2.9341.0520 3.10.0052 3.930.51290.00413 3.9451.221430 3.20.072332.5070.633797.80.01312 2.3720.829707.40.00919 2.2640.3336>10.00.00074 1.6142.8483280.90.00453 2.4890.4297>10.00.00219 2.9011.41724 1.40.000932.9691.637673 6.40.15823 1.910.52>10.00.00074 1.8340.918122 2.30.01112 2.3841.1142012.40.01339 1.8641.09442 4.20.03184 1.4971.022138 5.60.01667 1.8071.405529 1.40.024172.072 1.5033408 5.50.24077 1.547 1.003398 4.10.04809 1.4850.842389.60.04417 1.5691.0882527 4.30.12631 1.571 1.75127.10.004032.549 1.29416973.90.1688 1.527 1.187653 1.40.01164 1.561 1.48516804.90.18767 1.411 0.93313287.70.17541 1.5470.915331 6.70.04644 1.6491.143538 3.60.05012 1.7050.858471 5.40.04732 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1.159 0.8941061 3.90.051860.961 0.69669 1.40.00158 1.21405>10.00.00072 1.57 0.7321483 4.70.079720.839 0.64835 4.90.028380.744 0.91231440.11162 1.241 0.70896 2.90.005410.609 0.964197 4.70.009170.739 0.28257.30.002590.91611980.00341 1.67 0.825234 5.40.011580.756 0.716524 4.20.021180.7390.43848 4.40.002050.9771.4250 1.50.000460.805 0.71410 4.50.04139 1.1870 4.50.008370.668 0.45566870.04130.919 0.793179 1.30.00205 1.044 0.635222 6.80.015560.791 0.484672 3.50.026580.705 0.766789 4.80.049630.8180.424413 6.90.029650.6261.018111 5.60.01044 1.028 0.287669 3.80.015170.929 0.796368 5.20.03430.799 0.20986 3.20.001390.839 0.58143 6.50.013621 0.441195 5.40.009240.65 0.795171 1.60.001670.422 0.6142647.70.010820.673 0.21414>10.00.004512.295 0.734943.90.002830.6860.765226 3.30.014480.8530.4644018.60.025550.6821.052213 4.90.013750.659 0.5487>10.00.01419 1.433 0.6410467.80.070860.835 0.47215 5.80.008280.868 0.6764449.50.023950.793 0.605583 5.20.036290.663 0.310>10.00.00060.798 0.686185 5.30.005860.592 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0.30427650.011510.675 0.5575198.10.032360.622 0.531271 6.80.01050.542 0.3713267.50.020820.69 0.1503.90.001480.557 0.6211774.90.008970.574 0.37777 1.40.000560.519 0.325756 2.80.015320.517 0.658584>10.00.024370.447 0.4051265.80.006880.602 0.6922089.50.008880.572 0.451010>10.00.078030.694 0.401404>10.00.017360.539 0.51319590.007720.464 0.7552050 3.80.097330.507 0.376165 3.30.006880.645 0.66712>10.00.00110.509 0.4782497.40.017690.585 0.3366606.60.036250.587 0.5871098.60.00970.678 0.3982017.80.010420.532 0.974265 5.60.011680.86 0.575120 3.70.005470.581 0.3184918.50.029120.67 0.328274>10.00.010820.469 0.26411090.003750.484 0.4863257.70.015030.544 0.237257 5.10.005680.505 0.3831811 5.30.077130.549 0.29290 6.70.012010.475 0.2563950.001450.383 0.448163 5.60.008040.74 0.4131267.20.004260.402 0.4064617.20.019290.3870.46126 5.50.006040.602 0.2781807.30.008730.496 0.15645>10.00.001770.415 0.2139480.004840.536 0.29100 5.90.003030.562 0.511319>10.00.034280.619 0.318371 5.40.010620.649 0.2145 3.70.005160.354 0.275204 6.70.007280.481 0.454476 4.80.011950.353 0.422161 4.80.006940.423 0.466146 6.60.004980.398。
基于GEO_和TCGA_数据库对肺腺癌差异表达基因的生物信息学分析
第 49 卷第 6 期2023年 11 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.6Nov.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230612基于GEO和TCGA数据库对肺腺癌差异表达基因的生物信息学分析叶汇, 孙哲, 周丽婷, 齐雯, 叶琳（吉林大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室，吉林长春130021）［摘要］目的目的：采用生物信息学方法筛选影响肺腺癌（LUAD）的关键基因，分析其生物学功能及其对LUAD预后的影响。
方法方法：于高通量基因表达（GEO）数据库下载GSE118370和GSE136043芯片数据，癌症基因组图谱（TCGA）数据库筛选LUAD相关数据。
采用R软件分析共同表达的差异表达基因（DEGs）。
采用clusterProfile R包对DEGs进行基因本体（GO）功能富集分析，DAVID数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络。
采用Cytoscape筛选连接度排名前10位的关键基因，GEPIA数据库和人类蛋白质图谱（HPA）数据库分析正常肺组织和LUAD组织中关键基因mRNA和蛋白表达情况及不同分期LUAD组织中关键基因表达情况。
关键基因免疫浸润分析和生存分析获取关键基因表达与患者生存期的相关关系。
结果：共筛选DEGs 428个。
GO分析，LUAD的DEGs在主要富集于上皮-间质转化（EMT）等生物过程（BP）方面、细胞基部等细胞组分（CC）方面和细胞外基质（ECM）结构形成等分子功能（MF）方面。
KEGG分析，LUAD的DEGs主要富集于细胞因子受体相互作用通路等方面。
筛选DNA拓扑异构酶Ⅱα（TOP2A）、果蝇纺锤体异常基因（ASPM）、细胞周期蛋白B1（CCNB1）、人类细胞分裂周期相关基因8（CDCA8）、含杆状病毒IAP重复序列蛋白5（BIRC5）、苏氨酸激酶（AURKA）、驱动蛋白超家族成员20A（KIF20A）、中心体相关蛋白55（CEP55）、着丝粒蛋白F（CENPF）和微管组织因子（TPX2）为关键基因。
一种细胞间通信的新的信号分子——Microvesicle运输的microRNA
一种细胞间通信的新的信号分子——Microvesicle运输的microRNA梁宏伟;陈熹;曾科;张辰宇【摘要】Microvesicle(MV)是机体内的细胞在正常和病理状态下都会分泌的直径在30～1000 nm之间的微小囊泡.细胞把特异的生物活性分子如蛋白质、mRNA 等包裹到MV中,这些生物活性分子会通过MV被运输到相应的受体细胞以调节受体细胞的生物功能.这种由MV介导的细胞间信息传递在一些生理和病理过程中扮演着十分重要的作用.近期研究表明MV中包含microRNA(miRNA),并且通过MV 的运输,这些miRNA会被运送入靶细胞以调控靶细胞相关基因的表达.本文就MV 运输的miRNA在细胞间通信的功能做一总结.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2010(002)006【总页数】7页(P417-423)【关键词】Microvesicle;MicroRNA;细胞间通信;外泌体【作者】梁宏伟;陈熹;曾科;张辰宇【作者单位】南京大学医药生物技术国家重点实验室,南京,江苏210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,南京,江苏210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,南京,江苏210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,南京,江苏210093【正文语种】中文【中图分类】R3Microvesicle（MV）是机体内细胞在正常和病理状态下都会分泌的直径在30～1000 nm之间的微小囊泡[1,2]。
多数研究者用MV来指代具有细胞间信号传递功能的囊胞[3,4]。
体内和体外的实验都证明MV可以由网织红细胞[5]、B细胞[6]、T细胞[7]、树突细胞[8]、肥大细胞[9]、上皮细胞[10,11]和肿瘤细胞[12,13]等多种细胞分泌。
细胞把特异的生物活性分子如蛋白质、mRNA等包裹到MV中，被运输到相应的受体细胞并调节受体细胞的生物功能。
这种由MV介导的细胞间信息传递在一些生理和病理过程中扮演着十分重要的作用[14～17]。
IgA_肾病患者肾组织、血清、尿液C4d水平与病情和疗效的关系
IgA 肾病患者肾组织、血清、尿液C 4d 水平与病情和疗效的关系王真硕1，李艳存2，李巧英31 北京积水潭医院检验科，北京100035；2 北京市大兴区中西医结合医院肾内科；3 北京市大兴区中西医结合医院急诊内科摘要：目的 探讨肾组织、血清、尿液中人补体片段4d （C 4d ）水平对IgA 肾病（IgAN ）患者病情、疗效及预后的评估价值。
方法 选取原发性IgAN 患者214例，采用经皮肾穿刺活检术取肾组织，免疫组化法检测C 4d 表达情况；采集患者血清和尿液，ELISA 法检测C 4d 水平。
比较肾组织、血清及尿液C 4d 不同表达水平患者的临床病理资料。
给予ACEI /ARB 药物联合免疫抑制剂治疗6～8个月后观察疗效，采用Spearman 相关分析法分析肾组织、血清、尿液C 4d 表达与治疗效果的相关性。
于随访截止日对患者进行肾功能CDK 分期，比较不同分期患者肾组织、血清、尿液C 4d 表达水平差异。
结果 肾组织C 4d 表达阳性76例、阴性138例，血清C 4d 水平为（1 270.27 ± 332.99）ng /mL ，尿液C 4d 水平为（297.53 ± 45.53）ng /mL 。
与肾组织C 4d 阴性患者比较，肾组织C 4d 阳性患者24 h 尿蛋白定量更高，血白蛋白更低（P 均<0.05）；与血清C 4d 低水平患者比较，血清C 4d 高水平患者24 h 尿蛋白定量更高，血白蛋白更低（P 均<0.05）；与尿液C 4d 低水平患者比较，尿液C 4d 高水平患者MAP 、24 h 尿蛋白定量、Scr 更高，eGFR 、血白蛋白更低（P 均<0.05），且病理分期更为严重。
治疗后214例患者完全缓解143例，部分缓解28例，无反应（无效+终末期肾病）43例。
相关性分析显示，肾组织、血清、尿液C 4d 水平升高与IgAN 患者的治疗效果呈负相关（r s 分别为-0.234、-0.270、-0.324，P 均<0.01），其中尿液C 4d 与治疗效果的相关性最强。
SCI_Chem 影响因子
Abbreviated JournalTitle(linked to journal information)Total CitesImpact Factor5-YearImpactFactor Immediacy Index综合1Nature 0028-0836********.59738.1599.2432Science0036-807550848931.02733.587 6.6913P Natl Acad Sci Usa 0027-84245349519.73710.583 1.893化学综合1Chem Rev 0009-266511259641.29845.79514.3352Nat Mater 1476-11224634835.74942.3768.4113Nat Nanotechnol 1748-33872192031.1736.011 5.8764Chem Soc Rev 0306-00124764624.89230.1817.9975Prog Mater Sci 0079-6425592123.19422.3337.2176Nat Chem 1755-4330865221.75723.02 5.5327Accounts Chem Res 0001-48424211220.83324.633 5.2958Nano Today 1748-0132294417.68918.1920.7849Annu Rev Mater Res 1531-7331525916.17914.4950.66710Surf Sci Rep 0167-5729411515.33322.2817.7511Adv Mater 0935-96489195214.82913.86 2.55712Mat Sci Eng R 0927-796X 485013.90218.9740.66713Angew Chem Int Edit 1433-785122989413.73413.56 2.95914Annu Rev Phys Chem 0066-426X 700213.36518.121 4.13815Nano Lett 1530-69848843113.02514.132 2.47116Acs Nano 1936-0851*******.06212.524 1.9417Energ Environ Sci 1754-56921284911.65312.462 3.08718Coordin Chem Rev 0010-85452560111.01612.257 2.29419J Am Chem Soc 0002-786343128610.67710.237 2.16420Nat Prod Rep 0265-0568660910.17810.072 2.38521Adv Energy Mater 1614-6832199510.04310.05 2.11822Adv Funct Mater 1616-301X 347589.76510.342 1.81523Med Res Rev 0198-632532979.5839.978 1.81124Npg Asia Mater 1884-40493019.0428.556 2.41425Annu Rev Anal Chem 1936-132711498.612.2830.69626Top Curr Chem 0340-102255078.456 6.205 4.27327Chem Sci 2041-652048458.3148.33 2.77128Chem Mater 0897-4756746518.2387.627 1.12329J Photoch Photobio C 1389-556720268.06911.9520.7530Small 1613-6810181377.8238.084 1.42931Prog Photovoltaics 1062-799545357.7127.023 3.22332J Control Release 0168-3659297557.6338.078 1.13633Annu Rev Chem Biomol 1947-54383317.5127.512 1.04534Int Mater Rev 0950-660822557.487.1491.188RankISSNJCR Data35Chemsuschem1864-563150567.4757.951 1.189 36Prog Solid State Ch0079-678614747.429 3.3380 37Nano Res1998-012430317.3927.8010.979 38Prog Surf Sci0079-681619047.1369.140.273 39Adv Carbohyd Chem Bi0065-23188337.133 5.8460.75 40Green Chem1463-926215554 6.828 6.992 1.269 41Adv Organomet Chem0065-3055841 6.758.9410 42Curr Opin Colloid In1359-02944670 6.6297.0360.884 43J Phys Chem Lett1948-71858575 6.585 6.651 1.301 44Top Organometal Chem1436-60021152 6.384 1.762 45Chem Commun1359-7345122728 6.378 6.226 1.53 46Catal Rev0161-49402529 6.37510.1750.889 47Trac-Trend Anal Chem0165-99367327 6.351 6.7610.92 48Nanoscale2040-33647835 6.233 6.262 1.167 49Adv Colloid Interfac0001-86867115 6.1698.01 1.32 50Org Lett1523-706073440 6.142 5.563 1.572 51Mater Today1369-70213769 6.0718.677 1.977 52Prog Nucl Mag Res Sp0079-65651993 6.022 6.065 1.389 53Crit Rev Solid State1040-8436744 5.9477.3681 54Carbon0008-622332742 5.868 6.35 1.197 55Chem-Eur J0947-653960788 5.831 5.623 1.241 56Appl Catal B-Environ0926-337323011 5.825 6.0310.965 57J Catal0021-951734516 5.787 6.249 1.025 58Wires Comput Mol Sci1759-0876570 5.738 5.738 3.518 59Lab Chip1473-019716485 5.697 6.136 1.256 60Anal Chem0003-270096794 5.695 5.7690.948 61J Med Chem0022-262359227 5.614 5.383 1.225 62Adv Synth Catal1615-415015502 5.535 5.323 1.109 63Curr Opin Solid St M1359-02862508 5.4387.3290.913 64Biosens Bioelectron0956-566322068 5.437 5.389 1.105 65J Chem Theory Comput1549-961811067 5.389 5.936 1.067 66Biomacromolecules1525-779724209 5.371 5.750.721 67Acs Catal2155-54351461 5.265 5.265 1.222 68Adv Catal0360-05641399 5.25 5.2860 69Chemcatchem1867-38802718 5.181 5.3070.941 70Mrs Bull0883-******** 5.024 5.590.569 71Acs Appl Mater Inter1944-82448635 5.008 5.040.683 72Electroanal Chem0070-977837757.50.25 73J Comb Chem1520-47662925 4.933 3.10274Int Rev Phys Chem0144-235X1524 4.92 5.595 2.231 75J Phys Chem C1932-744778595 4.814 5.1520.738 76Pharm Res-Dordr0724-874119035 4.742 5.0460.735 77Cryst Growth Des1528-748322310 4.689 4.8730.869 78Sol Energ Mat Sol C0927-024818447 4.63 5.205 1.215 79J Chromatogr A0021-967363419 4.612 4.5820.71480Inorg Chem0020-166985446 4.593 4.5510.956 81Bioconjugate Chem1043-180213900 4.58 4.7960.768 82Chem-Asian J1861-47286084 4.572 4.488 1.04683J Org Chem0022-326396723 4.564 4.135 1.101 84Anal Chim Acta0003-267039448 4.387 4.3440.684 85Chem Rec1527-89991375 4.377 4.814 1.533 86Int J Plasticity0749-64195276 4.356 4.70.862 87J Chem Inf Model1549-959611250 4.304 4.0670.795 88Langmuir0743-7463106920 4.187 4.4160.793 89Organometallics0276-733339735 4.145 3.653 1.004 90Ultraschall Med0172-46141247 4.116 2.723 1.286 91J Flow Chem2062-249X61 4.091 4.091 1.143 92Curr Med Chem0929-867312773 4.07 4.4710.627 93Struct Bond0081-59931899 4.068 4.24894Mar Drugs1660-33971871 3.978 3.9110.428 95Analyst0003-265416152 3.969 3.9040.785 96Acta Mater1359-645434860 3.941 4.3950.781 97Soft Matter1744-683X15943 3.909 4.35 1.013 98Crystengcomm1466-803312988 3.879 4.0690.863 99Acs Chem Neurosci1948-7193634 3.871 3.9570.729 100Nanotechnology0957-448434133 3.842 3.8380.697 101Org Electron1566-11995856 3.836 4.0210.63 102J Comput Chem0192-865124682 3.835 4.4010.847 103Phys Chem Chem Phys1463-907640969 3.829 3.976 1.052 104Faraday Discuss1359-66405758 3.821 4.148 2.369 105Dalton T1477-922638660 3.806 3.8890.947 106Catal Sci Technol2044-47531079 3.753 3.753 1.024 107Sci Technol Adv Mat1468-69962352 3.752 3.6440.235 108Chembiochem1439-42279616 3.74 3.670.78 109Curr Top Med Chem1568-02664850 3.702 3.8850.655 110Chem Res Toxicol0893-228X10785 3.667 4.0130.807 111Anal Bioanal Chem1618-264221971 3.659 3.7560.727 112Acs Comb Sci2156-8952379 3.636 3.6360.596 113Corros Sci0010-938X18210 3.615 4.0160.757 114J Phys Chem B1520-6106119722 3.607 3.7020.66 115J Am Soc Mass Spectr1044-03058760 3.592 3.5030.925 116J Cheminformatics1758-2946315 3.59 3.6710.314 117Org Biomol Chem1477-052018355 3.568 3.490.952 118Ultrasound Obst Gyn0960-76928490 3.557 3.7080.756 119Colloid Surface B0927-776510312 3.554 3.4170.707 120Int J Hydrogen Energ0360-319933119 3.548 4.0860.584 121Sensor Actuat B-Chem0925-400529909 3.535 3.6680.527 122Dyes Pigments0143-72087664 3.532 3.4330.897 123Expert Opin Ther Pat1354-37761742 3.525 2.5230.6 124Ultrason Sonochem1350-41775008 3.516 3.708 1.234125J Phys Chem Ref Data0047-26894996 3.5 3.7790.391 126Eur J Med Chem0223-523414818 3.499 3.8490.541 127Talanta0039-914026966 3.498 3.7330.531 128Food Hydrocolloid0268-005X6307 3.494 3.5250.953 129Drug Des Dev Ther1177-8881377 3.4860.256 130Carbohyd Polym0144-861718471 3.479 3.9420.665 131Microchim Acta0026-36724743 3.434 2.8830.5 132Appl Catal A-Gen0926-860X27726 3.41 3.910.506 133J Mech Phys Solids0022-509610460 3.406 3.7460.784 134Pure Appl Chem0033-454513333 3.386 3.1150.382 135Micropor Mesopor Mat1387-181115134 3.365 3.4140.869 136J Biol Inorg Chem0949-82574011 3.353 3.3550.713 137Chemphyschem1439-423511279 3.349 3.3880.768 138Eur J Org Chem1434-193X19346 3.344 3.1370.746 139Food Chem0308-814641375 3.334 4.0720.589 140Acs Med Chem Lett1948-58751087 3.311 3.3180.699 141Future Med Chem1756-89191081 3.31 3.2450.933 142J Nat Prod0163-386419898 3.285 3.2670.787 143Electrophoresis0173-083516985 3.261 2.8690.479 144Bioanalysis1757-61801318 3.253 3.0440.723 145J Mass Spectrom1076-51745573 3.214 3.2270.495 146J Inorg Biochem0162-013410014 3.197 3.430.672 147J Mol Catal A-Chem1381-116917999 3.187 3.3190.496 148J Colloid Interf Sci0021-979744929 3.172 3.390.747 149J Anal Atom Spectrom0267-94777362 3.155 2.9530.725 150Sep Purif Rev1542-2119222 3.154 3.5430.3 151J Pharm Sci-Us0022-354917986 3.13 3.3850.6 152Eur J Inorg Chem1434-194816310 3.12 2.9510.728 153Cement Concrete Res0008-884613854 3.112 3.7460.441 154Curr Org Chem1385-27283953 3.039 3.2220.253 155Isr J Chem0021-21481263 3.025 1.9460.478 156Mar Chem0304-420368723 3.3150.466 157Catal Today0920-586123325 2.98 3.4640.515 158Phytomedicine0944-71135244 2.972 3.2580.401 159New J Chem1144-054610014 2.966 2.920.698 160J Pharmaceut Biomed0731-708514648 2.947 2.8530.562 161Photoch Photobio Sci1474-905X4541 2.923 2.810.538 162Catal Commun1566-73679190 2.915 3.3280.535 163Mater Design0261-30699587 2.913 2.8050.703 164J Agr Food Chem0021-856176046 2.906 3.2880.417 165Bioorgan Med Chem0968-089624911 2.903 3.1510.617 166Crit Rev Anal Chem1040-8347979 2.892 3.690.591 167Microchem J0026-265X3428 2.879 2.85 1.048 168Mini-Rev Med Chem1389-55752893 2.865 2.9210.496 169Mol Divers1381-19911289 2.861 3.090.44170Chemmedchem1860-71793723 2.835 3.0750.788 171J Mol Catal B-Enzym1381-11774943 2.823 2.8050.542 172Scripta Mater1359-646219677 2.821 3.1450.534 173Adv Phys Org Chem0065-3160391 2.818 2.609174Electroanal1040-039710646 2.817 2.8620.462 175Fuel Process Technol0378-******** 2.816 3.4930.49 176Tetrahedron0040-402052981 2.803 2.8990.636 177Beilstein J Org Chem1860-53971405 2.801 2.4750.386 178J Phys Chem A1089-563955641 2.771 2.8560.658 179J Ethnopharmacol0378-874121278 2.755 3.3220.519 180Org Process Res Dev1083-61604311 2.739 2.6670.808 181J Supercrit Fluid0896-84466044 2.732 3.1380.472 182Medchemcomm2040-2503690 2.722 2.7220.603 183Adv Inorg Chem0898-******** 2.714 3.3780.25 184J Electroanal Chem1572-665721687 2.672 2.6760.545 185Int J Photoenergy1110-662X945 2.663 2.240.671 186Synlett0936-521417034 2.655 2.4520.604 187Environ Chem1448-25171390 2.652 2.701 1.075 188Opt Mater Express2159-3930593 2.616 2.6220.815 189Anti-Cancer Agent Me1871-52061386 2.610.239 190Top Catal1022-55284896 2.608 2.7080.238 191J Sep Sci1615-93068094 2.591 2.6380.296 192Anal Biochem0003-269739746 2.582 2.9690.558 193Rsc Adv2046-20691816 2.562 2.5670.695 194J Anal Appl Pyrol0165-23705102 2.56 3.0740.447 195Nanoscale Res Lett1931-75733998 2.524 2.7830.2980951-419813285 2.509 2.6110.49 196Rapid Commun Mass Sp196Sci Adv Mater1947-2935553 2.509 2.5610.301 198React Funct Polym1381-51484515 2.505 2.6530.282 199J Chem Technol Biot0268-25756796 2.504 2.4790.573 200Synthesis-Stuttgart0039-788117999 2.5 2.3840.615 201Microsc Microanal1431-92762043 2.495 3.0770.276 202J Chromatogr B1570-023220776 2.487 2.90.319 203Phytochem Analysis0958-03441895 2.48 2.280.292 204Adv Heterocycl Chem0065-2725888 2.478 2.6170.455 205Chem Biol Drug Des1747-02771940 2.469 2.4090.511 206Int J Mol Sci1422-00674706 2.464 2.7320.313 207Ultrasound Med Biol0301-56297839 2.455 2.8440.251 208Gold Bull0017-15571073 2.434 3.1220.04 209Molecules1420-30497552 2.428 2.6790.329 210Plasmonics1557-1955877 2.425 2.9880.525 211J Photoch Photobio A1010-603013061 2.416 2.6910.299 212Tetrahedron Lett0040-403973763 2.397 2.3760.561 213J Alloy Compd0925-838839264 2.39 2.1610.629 214Phys Status Solidi-R1862-62541437 2.388 2.4320.527215Fluid Phase Equilibr0378-******** 2.379 2.3380.544 216Solvent Extr Ion Exc0736-******** 2.375 2.6090.345 217Beilstein J Nanotech2190-4286309 2.374 2.3740.573 218Plant Food Hum Nutr0921-96681569 2.358 2.7620.25 219Acta Pharmacol Sin1671-40835577 2.354 2.5210.596 220Planta Med0032-094311009 2.348 2.4620.304 221Appl Clay Sci0169-13175590 2.342 2.7980.337 222Bioorg Med Chem Lett0960-894X33460 2.338 2.4270.584 222Macromol Mater Eng1438-74922983 2.338 2.3920.509 222Mol Inform1868-1743344 2.338 2.3460.347 225Russ Chem Rev+0036-021X3092 2.299 2.8130.204 226J Chem Thermodyn0021-96145905 2.297 2.2560.735 227Constr Build Mater0950-06187337 2.293 2.8180.391 228Chemometr Intell Lab0169-74394880 2.291 2.4320.253 229Biophys Chem0301-46224822 2.283 2.0940.649 230Arab J Chem1878-5352299 2.2660.343 231J Ginseng Res1226-8453349 2.2590.34 232Materials1996-19441176 2.247 2.3380.222 233Catal Lett1011-372X9373 2.244 2.2610.351 234Theor Chem Acc1432-881X5484 2.233 3.1510.812 235Fitoterapia0367-326X4706 2.231 2.1390.349 236Mater Lett0167-577X23419 2.224 2.3220.489 237Food Addit Contam A1944-00495142 2.22 2.4420.508 238J Biomol Screen1087-05712357 2.207 2.0890.719 239Platin Met Rev0032-1400735 2.194 2.4760.579 240J Nanopart Res1388-07645724 2.175 2.7210.222 241J Mater Sci0022-246131538 2.163 2.10.543 242Adv Quantum Chem0065-3276869 2.161 1.6940.308 242Colloid Polym Sci0303-402X5657 2.161 2.1140.433 244Chem Phys Lett0009-261455163 2.145 2.150.485 244J Ind Eng Chem1226-086X2264 2.145 1.9550.329 246Tetrahedron-Asymmetr0957-416611707 2.115 2.1430.384 247Appl Surf Sci0169-433231193 2.112 2.0990.33 248Synthetic Met0379-677913916 2.109 2.1020.334 249Colloid Surface A0927-775718414 2.108 2.3330.333 249Mat Sci Eng A-Struct0921-509340513 2.108 2.3490.307 251J Anal Toxicol0146-47602660 2.107 1.7580.429 252Solid State Nucl Mag0926-20401202 2.1 2.0570.711 253J Food Compos Anal0889-15753737 2.088 2.7430.19 254J Environ Monitor1464-03254378 2.085 2.1370.322 255Mater Chem Phys0254-058417174 2.072 2.3950.286 256J Pept Sci1075-26171942 2.071 1.8280.434 257Phytother Res0951-418X8059 2.068 2.4380.444 258Nano-Micro Lett2150-5551205 2.057 1.910.35 259Solid State Ionics0167-273820728 2.046 2.5640.26260Carbohyd Res0008-621514176 2.044 2.1780.357 261J Solid State Chem0022-459618166 2.04 2.2950.392 262Curr Org Synth1570-1794673 2.038 2.9140.76 263Ultrasonics0041-624X3651 2.028 2.0540.456 264Smart Mater Struct0964-17267120 2.024 2.3770.289 265Inorg Chem Commun1387-70036416 2.016 1.8810.434 266Appl Organomet Chem0268-26052866 2.011 1.9220.272 267Electrochem Solid St1099-00628883 2.01 2.0260.596 268J Chem Eng Data0021-956815169 2.004 2.1150.295 269Comb Chem High T Scr1386-207314532 1.9750.268 269J Organomet Chem0022-328X217932 1.9920.527 271Thermochim Acta0040-603111408 1.989 2.0460.327 272J Mol Model1610-29403157 1.984 2.3010.378 273J Therm Anal Calorim1388-61509934 1.982 1.7420.243 274Int J Fatigue0142-11235248 1.976 1.9740.352 275J Vib Control1077-54631649 1.966 1.7360.672 276Chem Phys0301-010412935 1.957 2.0590.592 277J Mater Process Tech0924-013618426 1.953 2.1760.332 277Sensors-Basel1424-82207082 1.953 2.3950.321 279Biomed Chromatogr0269-38792861 1.945 1.8150.385 280J Fluorine Chem0022-11394998 1.939 1.9490.465ArticlesCited Half-life Eigenfactor ®Metrics ScoreArticleInfluenc e® Score8699.6 1.5750820.8448329.7 1.3598717.71238018 1.55663 4.8921768.20.2266114.294141 5.20.2278819.481121 3.70.1543615.607390 3.50.178418.8542370.015018.643126 2.40.054018.927207 6.50.108177.90837 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1.603 14797.80.17236 1.533 8907.80.09182 1.35 404 4.40.04405 1.352 239.20.00403 2.705 448 4.10.05929 1.252 507 3.50.04948 1.865 480 5.30.05919 1.416 315 1.30.00585 1.6362>10.00.00057 1.543 255 2.10.01222 1.495 116 6.20.01779 2.376 953 2.30.03563 1.2844>10.00.00016 2.2160 5.10.006940.708137.90.00319 2.303 3283 3.40.34957 1.353 2798.70.02859 1.299 773 3.90.057280.943 493 5.30.04212 1.304 11447.10.090460.92115617.50.124780.98 259 5.70.03346 1.295 372 2.80.02555 1.219 1289>10.00.12482 1.03 7277.10.06585 1.03830 5.80.00343 1.39794 6.80.01439 1.685 303 6.60.019140.892 2119 6.70.21487 1.164 9987.10.059110.76263 3.40.002370.436140.000190.962 475 5.50.03101 1.1898.60.00225 1.225 194 2.50.00680.908 817 6.60.031350.985 68170.09849 1.714 1358 2.50.073 1.334 1194 2.60.032550.749 10720.00309 1.26 1021 4.40.12987 1.194 459 3.20.02416 1.192 2618.90.03446 1.396 1804 3.70.15067 1.296 1418.60.01298 1.609 1709 4.50.08330.842 327 1.30.00320.94181 4.90.00904 1.23 327 4.70.03579 1.258 17750.0131 1.044 2597.10.02119 1.078 877 4.30.068460.99799 1.40.001410.915 449 6.30.028910.786 16157.50.18356 1.081 22860.020170.96535 1.90.00176 1.224 1160 3.80.055440.914 201 6.30.017610.949 426 4.10.025740.772 2120 3.70.074070.708 1016 5.80.054290.757 321 5.50.013530.63690 3.30.006210.726 184 4.80.010070.73123>10.00.00228 1.513 610 3.80.032170.72 842 5.40.057730.829 213 5.40.01270.77439 2.40.001731002 4.80.033670.729 208 4.30.00930.537 5247.60.043570.93 116>10.00.02104 1.812 173>10.00.013330.936 589 5.30.032210.807 108 6.10.009190.931 487 4.70.03951 1.142 76450.047770.779 1666 5.20.091160.854 193 1.80.004620.921 120 2.20.004670.894 3338.70.027140.756 4327.10.027040.625 19520.003610.533 194 6.90.011710.909 2597.30.013360.716 266 6.80.026850.752 87080.070140.869 2187.70.01310.75610 5.60.00062 1.012 4189.20.026590.815 622 5.20.034970.666 1709.90.01712 1.222 178 5.80.009120.836 907.70.00320.65258>10.00.01221 1.371 4877.30.041850.896 187 5.60.009820.662 338 6.50.019280.711 443 6.30.026840.651 20850.01330.806 409 4.50.027060.735 774 3.20.034350.762 15287.90.107180.745 739 5.40.053960.715 227.60.001180.774 105 5.10.007480.647 129 4.90.00780.74475 3.50.002990.639212 3.70.013920.784 201 5.60.009290.599 500 6.30.06138 1.238 >10.00.00042 1.049 290 6.10.019640.625 251 5.60.017330.895 12498.40.075460.68 241 2.20.005560.628 1341 6.70.120620.829 651 6.90.026690.572 224 5.10.010210.672 290 5.30.013220.702 194 1.60.002660.7278>10.00.000620.792 314>10.00.019270.649 32830.001390.381 520 6.30.034550.62153 5.20.004350.904 200 1.30.002460.856 109 3.70.00563143 5.80.013670.825 439 4.20.025470.66 441>10.00.03210.853 17290.80.002020.494 1527.40.009010.741 624 2.40.016810.714 337 6.40.02850.71 173 1.90.002010.614 124 6.30.008010.593 2207.60.010810.602 4708.20.028730.596 221 5.20.00853 1.29 4957.50.036490.714 967.20.003150.52311>10.00.000450.543 184 3.50.006730.588 1064 2.80.017560.666 2437.60.014140.744 257.10.002380.868 105130.022770.574 10130.003550.834 2518.20.017620.63 16669.90.081330.508 1478 4.10.10840.548 14830.008560.8753427.80.015630.587 559.80.002470.6496 1.50.001250.668648.10.002270.561 178 6.20.010850.6 247>10.00.011750.526 202 5.20.013550.701 1484 5.40.069550.546 116 6.40.005740.60572 2.10.00140.58954>10.00.004010.856 351 6.60.011110.57 960 3.90.021660.681 1549.50.006150.597 5790.008180.646 6720.0008353 2.30.00061176 2.60.005320.633 1947.80.016490.569 223 5.60.014960.968 25280.006360.457 1626 5.50.049760.537 1977.10.008730.585 128 5.40.00580.57919>10.00.001080.734 650 3.70.017210.673 9419.10.050830.59113>10.00.00130.598 21090.007690.475 906>10.00.066080.687 350 3.90.005590.396 2247.80.01640.479 1789 5.50.074220.539 419>10.00.014550.491 579 6.80.034280.585 11717.30.084950.73 918.60.003920.471 458.60.00220.655 100 6.20.007370.666 335 5.10.012850.644 964 5.50.038290.59199 5.20.004810.478 302 6.60.012460.48640 2.10.000610.345 392>10.00.021350.719339>10.00.01560.489 5138.90.025150.615 50 4.50.001620.659 1368.50.005580.639 353 5.90.018730.713 495 4.80.011170.321 1147.60.003960.391 156 6.70.022520.706 508 6.50.027410.476 82 5.10.003380.472 410>10.00.020760.421 400>10.00.012770.531 463 4.70.008250.53 728 5.70.012880.253 2367.10.012090.669 180 3.80.004490.45 360>10.00.018270.679 2957.80.035210.653 950 3.40.026580.586 218 5.20.006840.446 2547.50.007820.487。
抗体公司
赛信通（上海）生物试剂有限公司
上海市浦东南路1101号远东大厦514室，200120 info@cst www.cst 2158356288 公司总部: 美国
Established in Beverly, MA in 1999, Cell Signaling Technology (CST) is a privatelyowned company with over 400 employees worldwide. We are dedicated to providing innovative research tools that are used to help define mechanisms underlying cell function and disease. Since its inception, CST has become the world leader in the production of the highest quality activationstate and total protein antibodies utilized to expand knowledge of cell signaling pathways. Our mission is to deliver the world's highest quality research tools that accelerate progress in biological research and personalized medicine. 总引用数为4670，来自于1966篇文章。最常引用的试剂包括： Akt, ERK2, ERK1, p38, Akt1。
AbD Serotec (BioRad)
高效液相色谱-串联质谱法测定贻贝中腹泻性贝类毒素的含量
ｐ ｒ ｒ ａ ｃ ｉ ｉ ｃｒｍ ｔ ｒｐ ｙｔｎｅ ａｓｓｅｔ ｍｅ ｙ （ Ｐ Ｃ ＭＳ ） Ｓ ｅｆ ｈｓｍｐｅｗ ｓｅｔ ｃ ｄ ｂ ０ ｅ ｏｍ ｎ ｅｌ ｕｄ ｈｏ ａ ｇａｈ － ｄｍ ｍ ｓ ｐｃ ｏ ｔ ｆ ｑ ｏ ａ ｒ ｒ Ｈ Ｌ － ／ ． ｈｌ ｓ ａ ｌ ａ ｘ ａｔ ｙ８ ％ ＭＳ ｌ ｉ ｒ ｅ
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８ ７４２５１ 种贝类毒素在２ ～ ０ ｇ 范 围内线性 良好 ；在４ １． ５ ．。２ ／ ０８０ ／ Ｌ 个添加水平下Ｏ Ａ的 回收率为７ ． ～８ ． ， Ｓ ９５ ％ ８６ Ｒ Ｄ为 ％ ８４ ％～１．％； Ｔ 一 的回收率为８ ．％～９ ．％， Ｓ 为４２ ％ ～ ． ％。 ．３ ０４ Ｄ Ｘ １ ３ ８ １ ２ Ｒ Ｄ ．２ ６５ ４ 方法灵 敏度高 ， 定量 限为００ ｍ ／ｇ 来 自市 ． ｇ 。 ２ ｋ 场 和产地的４ 个贻贝样 品残 留分析发现 ， 个样 品检 出腹泻性贝类毒 素， ５ 有４ 检出率为８ ％。 ． ９
211132698_猪δ冠状病毒辅助蛋白研究进展
·综述·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：猪δ冠状病毒（PDCoV ）是一种新发现的猪肠道冠状病毒，可引起新生仔猪的腹泻、呕吐、脱水、死亡，而且具有跨种感染潜能，给养猪业和公共卫生构成了巨大威胁。
冠状病毒的辅助蛋白（accessory protein ）是一类功能特殊的蛋白，不同属甚至同属不同种的冠状病毒编码的辅助蛋白数量、同源性均存在较大差异，具有属或种特异性。
虽然辅助蛋白是冠状病毒增殖非必需的，但在调控宿主天然免疫、病毒复制与致病性中发挥重要作用。
目前，已证实PDCoV 至少编码3个辅助蛋白，而且近年来在PDCoV 辅助蛋白的功能研究方面取得了显著进展。
本文简要介绍了PDCoV 辅助蛋白的鉴定及其在免疫调控和致病性中的作用，并对今后的研究进行了展望。
关键词：猪δ冠状病毒；辅助蛋白；感染；免疫抑制；致病性中图分类号： S852.651文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）01-0213-09Research Progress on A ccessory Proteins of Porcine DeltacoronavirusZHANG Huichang 1,2, FANG Puxian 1,2, FANG Liurong 1,2, XIAO Shaobo 1,2(1. State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070,China; 2. The Cooperative Innovation Center for Sustainable Pig Production, Wuhan 430070, China)收稿日期：2020-09-03基金项目：国家自然科学基金重点项目（31730095）作者简介：张蕙畅，女，硕士研究生，预防兽医学专业通信作者：肖少波，E-mail：*************猪δ冠状病毒辅助蛋白研究进展张蕙畅1,2，方谱县1,2，方六荣1,2，肖少波1,2（1.华中农业大学动物医学院 农业微生物学国家重点实验室，武汉430070；2.湖北省生猪健康养殖协同创新中心，武汉430070）2023,31(1):213-221Abstract: Porcine deltacoronavirus (PDCoV) is a newly discovered Porcine intestinal coronavirus, which causes diarrhea, vomit, dehydration and death in newborn piglets. Importantly, PDCoV has the potential of cross-species infection, posing a huge threat to public health. Accessory proteins encoded by Coronavirus are a unique set of proteins with special functions. These accessory proteins encoded by different genera, or even by the same genus and different species of Coronavirus vary in number and homology, making them genus or species specifi c. Though accessory proteins are dispensable for replication of Coronavirus in vitro , they play important roles in regulating innate immunity, viral proliferation and pathogenicity. PDCoV has been confi rmed to encode three accessory proteins, and remarkable progress has been achieved on their functions during the past few years. In this review, we briefl y introduced the research progress on PDCoV accessory proteins, including their identifi cation, functions on regulating antiviral innate immune and pathogenicity. We also discussed the future research on PDCoV accessory proteins.Key words: Porcine deltacoronavirus; accessory protein; infection; immunosuppression; pathogenicity· 214 ·中国动物传染病学报2023年2月猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV）是一种有囊膜、不分节段的单股正链RN A 病毒，属于套式病毒目冠状病毒科δ冠状病毒属成员，病毒粒子呈球形，直径约为120~180 nm，表面分布有放射状的纤突[1]。
广藿香DXS_基因克隆及表达分析
㊀山东农业科学㊀２０２４ꎬ５６(４):２８~３５ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２４.０４.００４收稿日期:２０２３－１１－０８基金项目:广东省中医药局科研项目(２０２４１１７７)ꎻ广东省重点领域研发计划项目(２０２０Ｂ０２０２２１００２)作者简介:曾晴(２０００ )ꎬ女ꎬ湖南益阳人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为中药资源开发与品质评价ꎮＥ－ｍａｉｌ:２７１９０４１４５３＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:张宏意(１９７７ )ꎬ女ꎬ浙江舟山人ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ主要从事药用植物资源与育种研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｄｒｉｚｚｌｅｚｈｙ＠１６３.ｃｏｍ广藿香ＤＸＳ基因克隆及表达分析曾晴ꎬ严雅玲ꎬ严寒静ꎬ何梦玲ꎬ张宏意(广东药科大学中药学院ꎬ广东广州㊀５１０００６)㊀㊀摘要:１－脱氧－Ｄ－木酮糖－５－磷酸合酶(ＤＸＳ)是调控萜类合成途径中ＭＥＰ途径的第一个关键酶ꎬ为探究广藿香ＤＸＳ基因参与其主要萜类成分广藿香醇合成调控的分子机制ꎬ本研究依据本课题组前期获得的转录组ＤＸＳ基因序列ꎬ以广藿香ｃＤＮＡ为模板ꎬ克隆得到ＰｃＤＸＳ基因ꎬ对其进行生物信息学分析ꎬ构建ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ原核表达载体诱导蛋白表达ꎬ并采用荧光实时定量ＰＣＲ法检测广藿香根㊁茎㊁叶㊁芽中ＤＸＳ基因表达情况ꎮ结果表明ꎬ从广藿香叶中克隆到开放阅读框全长为２１５１ｂｐ和１９０８ｂｐ的ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因序列ꎬ分别编码７１６㊁６３５个氨基酸ꎮ预测ＰｃＤＸＳ１蛋白分子量７８.３３ｋＤａꎬ为稳定非跨膜非分泌蛋白ꎬ主要定位于叶绿体ꎻＰｃＤＸＳ２蛋白分子量６７.９２ｋＤａꎬ为不稳定非跨膜非分泌蛋白ꎬ主要定位于叶绿体ꎮＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２均含有ＤＸＰ＿ｓｙｎｔｈａｓｅ＿Ｎ㊁Ｔｒａｎｓｋｅｔ＿ｐｙｒ和Ｔｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ＿Ｃ结构域模块ꎬ属于ＤＸＳ超家族ꎮＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２分别与半枝莲㊁糙苏的ＤＸＳ基因序列具有较高同源性ꎮ使用异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷(ＩＰＴＧ)诱导的ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２融合蛋白主要在沉淀中表达ꎮＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因表达量均在根中最低ꎬＰｃＤＸＳ１基因在叶中显著高表达ꎬＰｃＤＸＳ２基因在叶㊁芽㊁茎中高表达ꎮ本研究结果可为后续深入研究ＤＸＳ基因在广藿香萜类化合物合成途径中的生物学功能及广藿香萜类代谢途径的基因调控奠定基础ꎮ关键词:广藿香ꎻ１－脱氧－Ｄ－木酮糖－５－磷酸合酶(ＤＸＳ)ꎻ基因克隆ꎻ生物信息学分析ꎻ表达分析中图分类号:Ｓ５６７.２:Ｑ７８１㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２４)０４－００２８－０８ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤＸＳＧｅｎｅｆｒｏｍＰｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ(Ｂｌａｎｃｏ)Ｂｅｎｔｈ.ＺｅｎｇＱｉｎｇꎬＹａｎＹａｌｉｎｇꎬＹａｎＨａｎｊｉｎｇꎬＨｅＭｅｎｇｌｉｎｇꎬＺｈａｎｇＨｏｎｇｙｉ(ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀１￣Ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ(ＤＸＳ)ｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｋｅｙｅｎｚｙｍｅｔｏｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅＭＥＰｐａｔｈｗａｙｉｎｔｈｅｔｅｒｐｅｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐａｔｈｗａｙ.ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＤＸＳｇｅｎｅｐａｒｔｉｃｉ￣ｐａｔｉｎｇｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍａｉｎｔｅｒｐｅｎｏｉｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔꎬｐａｔｃｈｏｕｌｉａｌｃｏｈｏｌꎬｉｎｐａｔｃｈｏｕｌｉ(Ｐｏｇｏｓｔｅ￣ｍｏｎｃａｂｌｉｎ)ꎬｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅＤＸＳｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｂｔａｉｎｅｄｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｂｙｏｕｒｒｅｓｅａｒｃｈｇｒｏｕｐ.ＰｃＤＸＳｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇｐａｔｃｈｏｕｌｉｃＤＮＡａｓｔｅｍｐｌａｔｅꎬａｎｄｔｈｅｎａｎａｌｙｚｅｄｂｙｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｍｅｔｈｏｄ.ＴｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ￣２８ａ￣ＰｃＤＸＳｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｏｉｎｄｕｃｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎬａｎｄｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＸＳｇｅｎｅｉｎｒｏｏｔｓꎬｓｔｅｍｓꎬｌｅａｖｅｓａｎｄｂｕｄｓｏｆｐａｔｃｈｏｕｌｉ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰｃＤＸＳ１ａｎｄＰｃＤＸＳ２ｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｉｔｈｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２１５１ｂｐａｎｄ１９０８ｂｐｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍｌｅａｖｅｓｏｆｐａｔｃｈｏｕｌｉꎬｅｎｃｏｄｉｎｇ７１６ａｎｄ６３５ａｍｉｎｏａｃｉｄｓꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＰｃＤＸＳ１ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄｔｏｈａｖｅ７８.３３ｋＤａｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔꎬａｎｄｗａｓａｓｔａｂｌｅꎬｎｏｎ￣ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅａｎｄｎｏｎ￣ｓｅｃｒｅｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｐｒｉｍａｒｉｌｙｌｏｃａｌｉｚｅｄｉｎｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ.ＰｃＤＸＳ２ｐｒｏｔｅｉｎｈａｄ６７.９２ｋＤａｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔꎬｗｈｉｃｈｗａｓａｎｕｎｓｔａｂｌｅꎬｎｏｎ￣ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅａｎｄｎｏｎ￣ｓｅｃｒｅｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｍａｉｎｌｙｌｏｃａｌｉｚｅｄｉｎｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ.ＰｃＤＸＳ１ａｎｄＰｃＤＸＳ２ｃｏｎｔａｉｎｅｄＤＸＰ̠ｓｙｎｔｈａｓｅ̠ＮꎬＴｒａｎｓｋｅｔ̠ｐｙｒａｎｄＴｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ̠ＣｄｏｍａｉｎｍｏｄｕｌｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏＤＸＳｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ.ＰｃＤＸＳ１ａｎｄＰｃＤＸＳ２ｈａｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｉｎｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗｉｔｈＤＸＳｇｅｎｅｓｏｆＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｒｂａｔａａｎｄＰｈｌｏｍｉｓｕｍｂｒｏｓａ.ＰｃＤＸＳ１ａｎｄＰｃＤＸＳ２ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｉｓｏｐｒｏｐｙｌ￣β￣Ｄ￣ｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ(ＩＰＴＧ)ｗｅｒｅｍａｉｎｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ.Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖ￣ｅｌｓｏｆＰｃＤＸＳ１ａｎｄＰｃＤＸＳ２ｇｅｎｅｓｗｅｒｅｔｈｅｌｏｗｅｓｔｉｎｒｏｏｔｓ.ＰｃＤＸＳ１ｇｅｎｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｌｅａｖｅｓꎬｗｈｉｌｅＰｃＤＸＳ２ｇｅｎｅｗａｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｌｅａｖｅｓꎬｂｕｄｓａｎｄｓｔｅｍｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｒｏｏｔｓ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｃｏｕｌｄｌａｙｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｉｅｓｏｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＤＸＳｇｅｎｅｉｎｔｅｒｐｅｎｏｉｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐａｔｈｗａｙａｎｄｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｅｒｐｅｎｏｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｐａｔｈｗａｙｉｎｐａｔｃｈｏｕｌｉ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎꎻ１￣Ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ(ＤＸＳ)ꎻＧｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇꎻＢｉｏｉｎ￣ｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓꎻＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ㊀㊀广藿香[Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ(Ｂｌａｎｃｏ)Ｂｅｎｔｈ.]是唇形科刺蕊草属草本植物ꎬ原产于东南亚ꎬ引种至我国成为岭南道地药材ꎬ是一种具有重要药用价值和广泛工业生产应用价值的经济作物ꎬ具有芳香化浊㊁和中解暑的功效[１]ꎬ是藿香正气丸㊁二妙丸㊁午时茶颗粒等中成药的主要原料ꎮ已检测到广藿香地上部分含有１７４种化学成分ꎬ其中萜类最多ꎬ达６６种ꎬ另有黄酮㊁类固醇㊁吡喃酮㊁多糖等多种生物活性成分[２]ꎬ因而具有抗菌㊁抗炎㊁抗诱变㊁抗细胞凋亡㊁抗ＨｅｐＧ１９癌细胞增殖等多种药理活性[３－４]ꎮ广藿香提取物广藿香油全球年产可达２０００吨[５]ꎬ常被用于各类芳香疗法以舒缓压力㊁减轻疲劳㊁改善失眠㊁缓解焦虑等ꎬ还因气味宜人被广泛应用于香水㊁肥皂㊁化妆品等化工领域[６]ꎻ另外ꎬ在畜禽领域ꎬ广藿香提取物作为饲料添加剂也展现出巨大潜力[７]ꎮ广藿香醇是广藿香挥发油的首要成分ꎬ其生物合成途径有两条ꎬ分别是定位于细胞质的甲羟戊酸(ｍｅｖａｌｏｎａｔｅꎬＭＶＡ)途径和定位于叶绿体的甲基赤藓糖－４－磷酸(ｍｅｔｈｙｌｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ￣４￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅꎬＭＥＰ)途径[８－９]ꎮＭＶＡ途径主要负责倍半萜㊁三萜和橄榄苦苷甾体的合成ꎬ而广藿香醇为三环倍半萜类化合物ꎬ因此在关于广藿香醇的分子调控和生物合成中ꎬ针对ＭＶＡ途径关键基因的作用已经进行了较多研究[１０]ꎮＭＥＰ途径除合成单萜㊁二萜㊁四萜还合成植物激素㊁光合色素[１１－１２]ꎮＭＶＡ和ＭＥＰ途径均可产生戊烯基焦磷酸(ＩＰＰ)及其异构体二甲基烯丙基焦磷酸(ＤＭＡＰＰ)ꎬ这两种物质是合成萜类化合物的共同前体物质ꎮ１－脱氧－Ｄ－木酮糖－５－磷酸合酶(ＤＸＳ)是ＭＥＰ途径的第一个酶ꎬ催化丙酮酸和３－磷酸甘油醛生成１－脱氧木酮糖－５－磷酸(ＤＸＰ)[１２]ꎮＤＸＳ家族可分为３个不同的亚家族 ＤＸＳ１㊁ＤＸＳ２和ＤＸＳ３ꎬ这３种类型的ＤＸＳ蛋白在保守基序组成㊁二级结构和三级结构方面具有高度相似性[１３]ꎮＤＸＳ不仅在植物萜类生物合成过程中发挥着重要调控作用ꎬ还在许多生理过程中起着重要作用ꎬ如光合作用㊁植物激素调节㊁逆境抗性和病原体防御等ꎮ过表达马尾松ＰｍＤＸＳ可以显著提高其类胡萝卜素㊁叶绿素ａ㊁叶绿素ｂ含量和ＤＸＳ活性[１４]ꎬ瞬时转化过表达天竺葵的ＧｒＤＸＳ基因能增加次生代谢物天竺葵精油中单萜和倍半萜化合物含量[１５]ꎬ提示ＤＸＳ基因在萜类生物合成途径中具有重要调控作用ꎮ迄今ꎬＤＸＳ基因已经在银杏[１６]㊁乌头[１７]㊁穿心莲[１８]㊁桔梗[１９]㊁荆芥[２０]等多种植物中完成克隆和初步研究ꎬ而从广藿香中探究ＤＸＳ基因的内容鲜见报道ꎮ本研究基于课题组前期获得的转录组数据克隆了广藿香ＤＸＳ基因ꎬ并对其进行生物信息学分析及在广藿香不同部位的表达分析ꎬ以期为今后深入研究该基因在萜类化合物代谢中的功能奠定基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料本研究所用植物材料经广东药科大学中药学院严寒静教授鉴定为唇形科刺蕊草属植物广藿香[Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ(Ｂｌａｎｃｏ)Ｂｅｎｔｈ.]ꎬ培育于广东药科大学中药学院ꎮ采集生长６个月的广藿香叶片液氮速冻ꎬ于－８０ħ超低温冰箱保存ꎬ用于ＲＮＡ提取与基因克隆ꎮ选取生长６个月状态良好的广藿香根㊁茎(第２㊁３对叶之间)㊁叶(第２对叶)㊁芽ꎬ经液氮速冻后置于－８０ħ冰箱ꎬ用于ＲＮＡ提取及组织特异性表达ｑＲＴ－ＰＣＲ分析ꎮＤＨ５α感受态细胞㊁ＢＬ２１(ＤＥ３)表达菌株㊁ｐＥＴ２８ａ原核表达载体均购自北京庄盟国际生物９２㊀第４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀曾晴ꎬ等:广藿香ＤＸＳ基因克隆及表达分析基因科技有限公司ꎮ１.２㊀试验方法１.２.１㊀ＲＮＡ提取与ｃＤＮＡ链合成㊀将广藿香叶片样品经液氮研磨后ꎬ采用天根植物总ＲＮＡ提取试剂盒提取总ＲＮＡꎬ使用超微量紫外分光光度计ＵＶ２４５０测定其浓度和纯度ꎬ用１％琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ完整性ꎮ使用ＴａＫａＲａ的ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔｗｉｔｈｇＤＮＡＥｒａｓｅｒ反转录试剂盒合成ｃＤＮＡ第一链ꎮ１.２.２㊀基因克隆㊀根据课题组前期获得的转录组数据得到广藿香ＰｃＤＸＳ基因的ＣＤＳ序列ꎬ设计特异性引物(表１)ꎬ以反转录得到的ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增ꎮＰＣＲ反应体系:ｃＤＮＡ１μＬꎬ上游引物ＰｃＤＸＳ－Ｆ１μＬꎬ下游引物ＰｃＤＸＳ－Ｒ１μＬꎬＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＭａｘＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ２５μＬ㊁ｄｄＨ２Ｏ补足至５０μＬꎮＰＣＲ反应程序:９８ħ１０ｓꎬ５５ħ５ｓꎬ７２ħ１２ｓꎬ３５个循环ꎻ７２ħ２ｍｉｎꎮＰＣＲ产物经１％琼脂糖凝胶电泳鉴定后切胶回收ꎬ并检测浓度及纯度ꎬ使用庄盟ＺＴＯＰＯ－Ｂｌｕｎｔ/ＴＡ快速克隆试剂盒进行ＴＡ克隆ꎻ转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞ꎬ经菌液ＰＣＲ鉴定ꎬ挑取阳性克隆ꎬ送广州擎科生物科技股份有限公司测序ꎮ表１㊀引物序列引物名称用途引物序列(５ᶄ－３ᶄ)ＰｃＤＸＳ１－Ｆ基因克隆ＡＴＧＧＣＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＴＧＣＣＡＧＡＡＣＣＰｃＤＸＳ１－ＲＴＣＡＧＡＧＣＡＴＣＡＡＴＴＧＡＡＧＡＧＣＧＴＣＧＰｃＤＸＳ２－ＦＡＴＧＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＴＡＡＧＧＰｃＤＸＳ２－ＲＴＴＡＧＧＡＣＡＴＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＣｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ１－Ｆ构建原核表达载体ＧＡＣＡＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＣＧＣＧＧＡＡＴＧＧＣＴＴＣＴ￣ＧＴＴＴＣＴＴＧＣＣＡＧＡＡＣＣｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ１－ＲＣＧＡＣＧＧＡＧＣＴＣＧＡＡＴＴＣＧＧＡＧＡＧＣＡＴ￣ＣＡＡＴＴＧＡＡＧＡＧＣＧＴＣＧＣＧｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ２－ＦＧＡＣＡＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＣＧＣＧＧＡＡＴＧＡＡＡＡＡＣ￣ＣＴＣＡＣＴＧＣＴＡＡＧＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ２－ＲＣＧＡＣＧＧＡＧＣＴＣＧＡＡＴＴＣＧＧＡＧＧＡＣＡＴ￣ＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＣＣＴＣＣＣＴＡＧ１８Ｓ－ＦｑＲＴ－ＰＣＲＴＣＡＡＣＣＡＴＡＡＡＣＧＡＴＧＣＣＧＡＣＣ１８Ｓ－ＲＴＴＴＣＡＧＣＣＴＴＧＣＧＡＣＣＡＴＡＣＴＣＣｑ－ＰｃＤＸＳ１－ＦＣＧＡＧＡＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＴＧＣｑ－ＰｃＤＸＳ１－ＲＧＡＣＣＡＣＣＡＣＡＡＣＴＴＣＴＴＣＡＴＣＧｑ－ＰｃＤＸＳ２－ＦＧＴＧＡＴＴＡＴＧＡＴＴＧＣＴＴＣＧＧＴＧＣＴｑ－ＰｃＤＸＳ２－ＲＡＴＧＧＣＴＴＣＧＴＡＴＧＣＴＴＧＡＣＣＴＧ１.２.３㊀生物信息学分析㊀依照对应的生物信息学在线工具(表２)对广藿香的ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２进行序列分析ꎮ从ＮＣＢＩ上进行Ｂｌａｓｔ比对ꎬ获得ＰｃＤＸＳ同源序列ꎬ利用ＭＥＧＡ.１１邻接法构建进化树ꎬＢｏｏｔｓｔｒａｐ值设置为１０００次重复ꎮ表２㊀在线工具、用途及网址在线工具用途网址ＥｘＰＡＳｙＰｒｏｔＰａｒａｍ蛋白质理化性质分析ｈｔｔｐｓ://ｗｅｂ.ｅｘｐａｓｙ.ｏｒｇ/ｐｒｏｔｐａｒａｍ/ＥｘＰＡＳｙＰｒｏｔＳｃａｌｅ疏水性分析ｈｔｔｐｓ://ｗｅｂ.ｅｘｐａｓｙ.ｏｒｇ/ｐｒｏｔｓｃａｌｅ/Ｐｌａｎｔ－ｍＰＬｏｃ亚细胞定位预测ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｃｓｂｉｏ.ｓｊｔｕ.ｅｄｕ.ｃｎ/ｂｉｏｉｎｆ/ｐｌａｎｔ￣ｍｕｌｔｉ/ＤｅｅｐＴＭＨＭＭ跨膜结构预测ｈｔｔｐｓ://ｄｔｕ.ｂｉｏｌｉｂ.ｃｏｍ/ＤｅｅｐＴＭ￣ＨＭＭＳｉｇｎａｌＰ－６.０信号肽预测ｈｔｔｐｓ://ｓｅｒｖｉｃｅｓ.ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ.ｄｔｕ.ｄｋ/ｓｅｒｖｉｃｅｓ/ＳｉｇｎａｌＰ￣６.０/ＮＣＢＩＣＤＳｅａｒｃｈ保守结构域分析ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ/ｃｄｄ/ｗｒｐｓｂ.ｃｇｉＳＯＰＭＡ二级结构预测ｈｔｔｐｓ://ｎｐｓａ￣ｐｒａｂｉ.ｉｂｃｐ.ｆｒ/ｃｇｉ￣ｂｉｎ/ｎｐｓａ＿ａｕｔｏｍａｔ.ｐｌ?ｐａｇｅ＝ｎｐｓａ％２０＿ｓｏｐｍａ.ｈｔｍｌＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ三级结构预测ｈｔｔｐｓ://ｓｗｉｓｓｍｏｄｅｌ.ｅｘｐａｓｙ.ｏｒｇ/１.２.４㊀原核表达㊀设计ＰｃＤＸＳ基因与包含ｐＥＴ－２８ａ载体酶切位点的同源臂引物(表１)ꎬ构建ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ原核表达载体ꎮＰｃＤＸＳ基因引入ｐＥＴ－２８ａ载体同源臂反应体系为:ＴＡ－ＰｃＤＸＳ重组质粒１μＬꎬ上游引物ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ－Ｆ１μＬꎬ下游引物ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ－Ｒ１μＬꎬＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＭａｘＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ２５μＬꎬｄｄＨ２Ｏ补足至５０μＬꎮＰＣＲ反应程序:９８ħ１０ｓꎬ５５ħ５ｓꎬ７２ħ１２ｓꎬ３５个循环ꎻ７２ħ２ｍｉｎꎮ采用全式金ＢａｍＨⅠ酶将ｐＥＴ－２８ａ载体进行单酶切线性化ꎮＰＣＲ产物及酶切产物经１％琼脂糖凝胶电泳鉴定后切胶回收ꎬ将产物根据庄盟ＳＥ无缝克隆和组装试剂盒连接转化ＤＨ５α感受态细胞ꎬ菌液经ＰＣＲ鉴定ꎬ挑取阳性克隆ꎬ送广州擎科生物科技股份有限公司测序ꎮ将ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ质粒转化蛋白表达菌株ＢＬ２１(ＤＥ３)ꎬ经ＰＣＲ鉴定ꎬ挑取阳性菌液摇菌后ꎬ在５ｍＬ菌液中添加异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷(ＩＰＴＧ)至浓度分别为０.２５㊁０.５㊁０.７５㊁１.０ｍｍｏｌ Ｌ－１ꎬ１６０ｒ ｍｉｎ－１摇床㊁１６ħ培养１２ｈꎬ使用细胞破碎仪(ＡＭＰ２５％ꎬ开５ｓꎬ关５ｓ)破碎２ｍｉｎꎬ离心收集上清液和沉淀ꎬ进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳检测ＰｃＤＸＳ蛋白表达情况ꎮ１.２.５㊀荧光定量ＰＣＲ表达分析㊀以转录合成的ｃＤＮＡ为模板ꎬ１８Ｓ为内参基因ꎮ根据ＰｃＤＸＳ基因的测序结果ꎬ使用Ｐｒｅｍｉｅｒ５.０设计ｑＲＴ－ＰＣＲ引物(表１)ꎮ实时荧光定量ＰＣＲ采用２０μＬ反应体系:２ˑＴＢＧｒｅｅｎＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑⅡ１０μＬꎬｃＤ￣ＮＡ１.５μＬꎬ上㊁下游引物各０.４μＬꎬｄｄＨ２Ｏ７.７μＬꎮ扩增程序:９５ħꎬ３０ｓꎻ９５ħ５ｓꎬ６０ħ３０ｓꎬ０３山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５６卷㊀４０个循环ꎮ每个部位进行３次生物学重复ꎬ每个样品３个技术重复ꎮ采用２－әәＣｔ法计算ＰｃＤＸＳ基因在广藿香不同组织部位根㊁茎㊁叶㊁芽中的相对表达量ꎮ采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９.５软件进行单向方差多重比较分析数据ꎬ利用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ作图并用字母标记法标记差异显著性ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因克隆提取广藿香总ＲＮＡꎬ琼脂糖凝胶电泳显示有清晰条带ꎬ经超微量紫外分光光度计ＵＶ２４５０测定浓度和纯度合格ꎬ可用于后续实验ꎮ通过使用基因特异性引物ꎬ成功克隆获得两条序列长度为２１５１ｂｐ和１９０８ｂｐ的序列(图１)ꎬ测序结果与转录组序列相似度分别高达９９.９５％和１００％ꎬ分别编码７１６个和６３５个氨基酸ꎬ命名为ＰｃＤＸＳ１和ＰｃＤＸＳ２ꎮＭ:ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒꎻ１:ＰｃＤＸＳ１基因ＰＣＲ扩增产物ꎻ２:ＰｃＤＸＳ２基因ＰＣＲ扩增产物ꎮ图１㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因克隆２.２㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２蛋白理化性质分析经ＰｒｏｔＰａｒａｍ预测分析ꎬＰｃＤＸＳ１蛋白分子式为Ｃ３４７３Ｈ５４９６Ｎ８４０Ｏ１０３８Ｓ３９ꎬ为亲水且稳定的弱酸性蛋白ꎻＰｃＤＸＳ２蛋白分子式为Ｃ３００９Ｈ４７９０Ｎ８４０Ｏ８９９Ｓ２５ꎬ为亲水不稳定的弱酸性蛋白(表３)ꎬＰｒｏｔＳｃａｌｅ分析也表明ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２均为亲水性蛋白(图２)ꎮ两蛋白均定位在叶绿体ꎮ表３㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ１蛋白理化性质蛋白氨基酸数分子量/ｋＤａ正电残基个数负电残基个数等电点亲水性总平均值(ＧＲＡＶＹ)脂肪系数不稳定系数跨膜区域信号肽ＰｃＤＸＳ１７１６７８.３３８４６６５.７８－０.０２８９２.３５３９.３５无无ＰｃＤＸＳ２６３５６７.９２７１６５６.３６－０.０４４９１.４５４２.８４无无正值表示疏水ꎻ负值表示亲水ꎮ图２㊀ＰｃＤＸＳ１(Ａ)㊁ＰｃＤＸＳ２(Ｂ)蛋白亲疏水性预测２.３㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２保守结构域及二级和三级结构分析ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２蛋白保守结构域分析结果显示ꎬ两者都属于ＤＸＳ超家族ꎬ含有从Ｎ端到Ｃ端的ＤＸＰ＿ｓｙｔｈａｓｅ＿Ｎ㊁Ｔｒａｎｓｋｅｔ＿ｐｙｒ和Ｔｒａｎｓｋｅｔｏ￣ｌａｓｅ＿Ｃ结构域模块(图３)ꎮＰｃＤＸＳ１蛋白二级结构中无规则卷曲占比最高ꎬ为３９.８０％ꎬ还含有３７.８５％的α－螺旋㊁１５.９２％的折叠延伸链㊁６.４２％的β－折叠ꎻＰｃＤＸＳ２蛋白中占比最高的是α－螺旋ꎬ为４１.８９％ꎬ还含有１５.５９％的折叠延伸链㊁８.０３％的β－折叠㊁３４.４９％的无规则卷曲(图４)ꎮ通过ＳＷＩＳＳＭＯＤＥＬ构建了两蛋白的三级结构ꎬ对ＰｃＤＸＳ１蛋白ꎬ以叶绿体ＤＸＰＳ为模板ꎬ序列一致性５５.７８％ꎬＧＭＱＥ得分为０.６４(０~１范围内数值越大表明预期质量越高)ꎬＧＭＥＡＮ得分为１３㊀第４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀曾晴ꎬ等:广藿香ＤＸＳ基因克隆及表达分析０.６７(分数趋近于０反映 类似原生 的结构ꎬ低于－４.０的 ＱＭＥＡＮ 分数表示模型质量较低)ꎬ可视为获得了良好的ＰｃＤＸＳ１蛋白三级结构模型ꎮ对ＰｃＤＸＳ２蛋白ꎬ以番茄ＤＸＳ１为模板ꎬ二者的相似度高达９１.０２％ꎬＧＭＱＥ得分为０.９０ꎬ该模型可较好地预测ＰｃＤＸＳ２蛋白的三级结构(图５)ꎮ图３㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２蛋白保守结构域分析结果２.４㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因系统进化分析使用ＭＥＧＡ１１构建ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２与其他物种ＤＸＳ基因的系统发育树ꎬ结果(图６)显示ꎬＰｃＤＸＳ１与半枝莲ＤＸＳ(ＭＫ０３５０４０.１)聚为一支ꎬＰｃＤＸＳ２与糙苏ＤＸＳ(ＫＵ３１７５０８.１)聚为一支ꎬ亲缘关系较近ꎮＰｃＤＸＳ１和ＰｃＤＸＳ２之间存在系统发育距离ꎬ可能存在功能差异ꎮ蓝色表示α－螺旋ꎻ红色表示β－折叠ꎻ绿色表示β－转角ꎻ紫色表示无规则卷曲ꎮ图４㊀ＰｃＤＸＳ１(Ａ)㊁ＰｃＤＸＳ２(Ｂ)蛋白的二级结构图５㊀ＰｃＤＸＳ１(Ａ)㊁ＰｃＤＸＳ２(Ｂ)蛋白的三级结构Ｃａｍｅｌｌｉａｓｉｎｅｎｓｉｓ:山茶花ꎻＡｃｔｉｎｉｄｉａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ:猕猴桃ꎻＰｒｕｎｅｌｌａｖｕｌｇａｒｉｓ:夏枯草ꎻＧａｒｄｅｎｉａｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ:栀子ꎻＰｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａ:马尾松ꎻＴｈｕｊａｐｌｉｃａｔａ:北美乔柏ꎻＡｑｕｉｌａｒｉａｓｉｎｅｎｓｉｓ:土沉香ꎻＰｈｌｏｍｉｓｕｍｂｒｏｓａ:糙苏ꎻＴａｒａｘａｃｕｍｋｏｋ￣ｓａｇｈｙｚ:橡胶草ꎻＷｉｔｈａｎｉａｓｏｍｎｉｆｅｒａ:南非醉茄ꎻＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｒｂａｔａ:半枝莲ꎻＬｙｃｉｕｍｒｕｔｈｅｎｉｃｕｍ:枸杞ꎻＰｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓｂａｒｂａｔｕｓ:左手香ꎮ图６㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因系统发育进化树２３山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５６卷㊀２.５㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２原核表达分析将ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２基因引入同源臂与ｐＥＴ－２８ａ线性化载体连接ꎬ测序分析结果同克隆序列一致ꎬ表明成功构建ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ１㊁ｐＥＴ－２８ａ－ＰｃＤＸＳ２原核表达载体ꎮＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２蛋白分子量分别为７８.３３ｋＤａ和６７.９２ｋＤａꎬ加上Ｈｉｓ标签后蛋白大小分别约为８４.６ｋＤａ和７６.１ｋＤａꎮ将重组质粒转化ＢＬ２１(ＤＥ３)菌株ꎬ挑取阳性菌在１６ħ条件下分别用０.２５㊁０.５０㊁０.７５㊁１.０ｍｍｏｌ Ｌ－１ＩＰＴＧ诱导表达１２ｈꎬ经细胞破碎仪破碎㊁离心㊁ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳检测ꎬ结果(图７)显示ꎬ在沉淀中分别有８４.６ｋＤａ和７６.１ｋＤａ的蛋白条带ꎬ说明ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２重组蛋白被成功诱导表达ꎬＰｃＤＸＳ２重组蛋白表达较少ꎬ主要在沉淀中表达ꎬＩＰＴＧ浓度变化对蛋白表达无明显影响ꎮＭ:ＢｌｕｅＰｌｕｓ®ＩＩＰｒｏｔｅｉｎＭａｒｋｅｒ(１４~１２０ｋＤａ)ꎻ１㊁３㊁５㊁７㊁９:分别为０㊁０.２５㊁０.５０㊁０.７５㊁１.００ｍｍｏｌ Ｌ－１ＩＰＴＧ诱导重组蛋白表达后的破碎菌体上清ꎻ２㊁４㊁６㊁８㊁１０:分别为０㊁０.２５㊁０.５０㊁０.７５㊁１.０ｍｍｏｌ Ｌ－１ＩＰＴＧ诱导重组蛋白表达后的破碎菌体沉淀ꎮ图７㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２原核表达分析的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测结果２.６㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２表达的组织特异性分析结果(图８)显示ꎬＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２在广藿香根㊁茎㊁叶㊁芽中均有表达ꎮ其中ꎬＰｃＤＸＳ１在叶中表达量最高ꎬ在芽和茎中表达量也较高ꎬ均显著高于在根中的表达量ꎻＰｃＤＸＳ２在茎㊁叶㊁芽中的表达量相当ꎬ且均显著高于在根中的表达量ꎮ柱上不同小写字母表示组织间差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ图８㊀ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２在广藿香不同部位中的表达差异３㊀讨论目前已从多种植物中挖掘出ＤＸＳ基因ꎬ并对其在萜类化合物生物合成过程中的功能进行了研究ꎬ但ＤＸＳ基因对广藿香萜类代谢调控的影响尚未见研究报道ꎮＤＸＳ基因家族具有较高的保守性[２１]ꎬ多含有ＤＸＰ＿ｓｙｔｈａｓｅ＿Ｎ㊁Ｔｒａｎｓｋｅｔ＿ｐｙｒ和Ｔｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ＿Ｃ结构域模块[２２]ꎮ本研究从广藿香中克隆出两个ＤＸＳ基因(ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２)ꎬ均包含该３个保守结构域模块ꎬ符合ＤＸＳ基因家族结构特征ꎮＤＸＳ亚家族中ꎬＤＸＳ１被认为是管家基因[２３]ꎬＤＸＳ１蛋白主要在叶绿体中表达ꎬ是合成光合色素和植物激素所必需的[２４]ꎬ在植物叶片和茎的叶绿体以及果实的有色质体中大量表达[１２]ꎻＤＸＳ２蛋白位于非光合作用质体中ꎬ参与一些防御反应特异的萜类化合物的合成ꎬ优先在植物根的成熟体中表达[１２]ꎻＤＸＳ３蛋白的表达与参与胚胎后发３３㊀第４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀曾晴ꎬ等:广藿香ＤＸＳ基因克隆及表达分析育和繁殖的基因相关[２５]ꎮ本研究结果显示ꎬＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２在广藿香根㊁茎㊁叶㊁芽中均有表达ꎬ且主要在地上部表达ꎬ在根中的表达量较低ꎬ尤其ＰｃＤＸＳ１在叶中显著高表达ꎬ符合ＤＸＳ１在光合组织中活跃的特征ꎻ亚细胞定位预测显示主要定位在叶绿体ꎬ说明ＰｃＤＸＳ１和ＰｃＤＸＳ２可能在叶绿体中发挥作用ꎮ原核表达是常见的表达外源蛋白的分子生物技术ꎬ大肠杆菌(Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)具有生长周期短㊁易于培养及遗传操纵的特点ꎬ是产生重组蛋白的重要宿主ꎬ优化重组蛋白的生物合成至关重要ꎬ常通过改变菌株的培养参数增加蛋白的表达和溶解度ꎬ用于生产重组蛋白[２６－２７]ꎮ对毛果杨ＤＸＳ蛋白进行诱导表达ꎬ在沉淀物中检测到ＰｔＤＸＳ靶蛋白[２８]ꎮ陈文意等[２９]考察了２０㊁３０ħ下ꎬ０.２５ｍｍｏｌ Ｌ－１和０.５ｍｍｏｌ Ｌ－１ＩＰＴＧ诱导的广藿香Ｐｃ￣ＪＡＲ１融合蛋白表达ꎬ发现２０ħ㊁０.２５ｍｍｏｌ Ｌ－１ＩＰＴＧ诱导下表达菌诱导蛋白在沉淀中更高表达ꎬ说明温度和ＩＰＴＧ浓度影响蛋白表达ꎮ本研究利用０.２５㊁０.５㊁０.７５㊁１.０ｍｍｏｌ Ｌ－１ＩＰＴＧ诱导ＰｃＤＸＳ１㊁ＰｃＤＸＳ２重组蛋白在ＢＬ２１(ＤＥ３)中表达ꎬ结果表明两蛋白主要在沉淀中表达ꎬ表达量与ＩＰＴＧ浓度无明显关联ꎬＰｃＤＸＳ２重组蛋白在同样条件下表达量较少还可能与诱导温度和时间有关ꎮ研究发现ꎬＤＸＳ基因的表达水平一般与ＭＥＰ途径直接调控的萜类含量呈正相关ꎬ过表达薰衣草ＤＸＳ基因显著促进薰衣草精油中单萜化合物的积累[３０]ꎻ二萜类丹参酮是丹参的主要生物活性成分ꎬ丹参ＳｍＤＸＳ１和ＳｍＤＸＳ２的过表达显著增强其根系中丹参酮的积累[３１]ꎮ同时ꎬＤＸＳ基因也调控ＭＶＡ途径萜类化合物合成ꎬ其表达水平会影响ＭＶＡ途径萜类含量水平的高低ꎬ如沉默甘草ＤＸＳ基因促进了甘草毛状根中三萜类物质甘草酸的合成ꎬ而过表达ＤＸＳ基因则导致甘草酸含量下降[３２]ꎻ使用ＤＸＳ基因抑制剂氯马松(ＣＬＯ)处理檀香幼苗ꎬ倍半萜檀香醇的含量没有降低[３３]ꎮ４㊀结论本研究从广藿香中克隆得到ＰｃＤＸＳ１和ＰｃＤＸＳ２基因ꎬ其全长分别为２１５１ｂｐ和１９０８ｂｐꎬ分别编码７１６个和６３５个氨基酸ꎬ均定位于叶绿体ꎬ均为亲水性㊁非跨膜㊁非分泌蛋白ꎻＰｃＤＸＳ１蛋白为稳定蛋白ꎬＰｃＤＸＳ２蛋白为不稳定蛋白ꎬ均具有ＤＸＳ基因家族典型特征ꎮ原核表达分析发现两蛋白均受ＩＰＴＧ诱导表达ꎬ且主要在沉淀中表达ꎬ表达水平在不同ＩＰＴＧ浓度间无明显差异ꎮ两基因在广藿香根㊁茎㊁叶㊁芽中均有表达ꎬ但在根中的表达量均较低ꎬＰｃＤＸＳ１主要在叶中表达ꎬＰｃＤＸＳ２在茎㊁叶㊁芽中的表达量均较高且相当ꎮ这为深入研究ＤＸＳ基因在调控广藿香萜类化合物合成中的作用奠定基础ꎮ为此ꎬ本课题组已构建ＤＸＳ基因的过表达载体和沉默载体ꎬ期望通过进一步研究揭示其表达与广藿香有效成分积累之间的关系ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典[Ｍ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０:４６.[２]㊀ＸｕＦＦꎬＣａｉＷꎬＭａＴꎬｅｔａｌ.Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｕｓｅｓꎬｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌꎬｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎꎬｐｈａｒｍａ￣ｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ:ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０２２ꎬ５０(３):６９１－７２１.[３]㊀ＰｅｎｇＸＪꎬＡｎｇＳꎬＺｈａｎｇＹＺꎬｅｔａｌ.ＣｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｗｉｔｈａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍＰｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ(Ｂｌａｎｃｏ)Ｂｅｎｔｈ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０２２ꎬ１０:９３８８５１. [４]㊀ＦａｔｉｍａＳꎬＦａｒｚｅｅｎＩꎬＡｓｈｒａｆＡꎬｅｔａｌ.Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｒｅｖｉｅｗｏｎｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｐａｃｈｙｐｏｄｏｌ:ａｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｏｆａｎａｒｏｍａｔｉｃｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔＰｏｇｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎＢｅｎｔｈ.[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０２３ꎬ２８(８):３４６９.[５]㊀ＶａｎＢｅｅｋＴＡꎬＪｏｕｌａｉｎＤ.ＴｈｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｏｆｐａｔｃｈｏｕｌｉꎬＰｏｇ￣ｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＦｌａｖｏｕｒａｎｄＦｒａｇｒａｎｃｅＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１８ꎬ３３(１):６－５１.[６]㊀ＳｗａｍｙＫＭꎬＳｉｎｎｉａｈＲＵ.Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｒｅｖｉｅｗｏｎｔｈｅｐｈｙ￣ｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＰｏｇ￣ｏｓｔｅｍｏｎｃａｂｌｉｎＢｅｎｔｈ.:ａｎａｒｏｍａｔｉｃｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｏｆｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１５ꎬ２０(５):８５２１－８５４７. [７]㊀高阳ꎬ杜鑫ꎬ马雪ꎬ等.广藿香提取物在动物生产中的应用[Ｊ].黑龙江畜牧兽医ꎬ２０２３(２１):４９－５３.[８]㊀ＣｈａｐｐｅｌｌＪ.Ｔｈｅｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｏｆｉｓｏｐｒｅ￣ｎｏｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ１９９５ꎬ１０７(１):１－６. [９]㊀ＲｏｈｍｅｒＭ.Ｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆａｍｅｖａｌｏｎａｔｅ￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙｆｏｒｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｂａｃｔｅｒｉａꎬａｌｇａｅａｎｄｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔＲｅｐｏｒｔｓꎬ１９９９ꎬ１６(５):５６５－５７４. [１０]张婵ꎬ姚广龙ꎬ张军锋ꎬ等.广藿香百秋李醇分子调控及合成生物学研究进展[Ｊ].生物技术通报ꎬ２０２１ꎬ３７(８):５５－６４.[１１]ＡｒｅｎｄｔＰꎬＰｏｌｌｉｅｒＪꎬＣａｌｌｅｗａｅｒｔＮꎬｅｔａｌ.Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｉｏｌｏｇｙｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌａｎｄｎｅｗ￣ｔｏ￣ｎａｔｕｒｅｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓｉｎｐｈｏｔｏｓｙｎ￣ｔｈｅｔｉｃｏｒｇａｎｉｓｍｓ[Ｊ].ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１６ꎬ８７(１):１６－３７.４３山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５６卷㊀[１２]ＧａｎｊｅｗａｌａＤꎬＫｕｍａｒＳꎬＬｕｔｈｒａＲ.Ａｎａｃｃｏｕｎｔｏｆｃｌｏｎｅｄｇｅｎｅｓｏｆｍｅｔｈｙｌ￣ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ￣４￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｐａｔｈｗａｙｏｆｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎ￣ｔｈｅｓｉｓｉｎｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＣｕｒｒｅｎｔＩｓｓｕｅｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ１１(ｓ１):３５－４５.[１３]ＴｉａｎＳＫꎬＷａｎｇＤＤꎬＹａｎｇＬꎬｅｔａｌ.Ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗｏｆ１￣Ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｉｎｔｅｒｐｅｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅ￣ｓｉｓｉｎｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｉｏｎꎬ２０２２ꎬ９６:２２１－２３５. [１４]ＬｉＲꎬＣｈｅｎＰＺꎬＺｈｕＬＺꎬｅｔａｌ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ(ＤＸＳ)ｇｅｎｅｒｅｌａｔ￣ｅｄｔｏｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＰｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０２１ꎬ２２(２):８４８.[１５]ＪａｄａｕｎＪＳꎬＳａｎｇｗａｎＮＳꎬＮａｒｎｏｌｉｙａＬＫꎬｅｔａｌ.Ｏｖｅｒ￣ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＸＳｇｅｎｅｅｎｈａｎｃｅｓｔｅｒｐｅｎｏｉｄａｌｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅａｃｃｕ￣ｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｒｏｓｅ￣ｓｃｅｎｔｅｄｇｅｒａｎｉｕｍａｎｄＷｉｔｈａｎｉａｓｏｍｎｉｆｅｒａ:ａｃ￣ｔｉｖｅｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｐｌａｓｔｉｄｉｓｏｐｒｅｎｏｇｅｎｉｃｐａｔｈｗａｙｉｎｔｈｅｉｒｂｉｏ￣ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ[Ｊ].ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉａＰｌａｎｔａｒｕｍꎬ２０１７ꎬ１５９(４):３８１－４００. [１６]ＧｏｎｇＹＦꎬＬｉａｏＺＨꎬＧｕｏＢＨꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘ￣ｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＤＸＳｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅꎬｔｈｅｆｉｒｓｔｃｏｍｍｉｔｔｅｄｅｎ￣ｚｙｍｅｏｆｔｈｅ２￣Ｃ￣ｍｅｔｈｙｌ￣Ｄ￣ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ４￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＰｌａｎｔａＭｅｄｉｃａꎬ２００６ꎬ７２(４):３２９－３３５.[１７]ＳｈａｒｍａＥꎬＰａｎｄｅｙＳꎬＧａｕｒＡＫ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａ￣ｎａｌｙｓｉｓｏｆＤＸＳ１ｇｅｎｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＡｃｏｎｉｔｕｍｂａｌｆｏｕｒｉｉＳｔａｐｆ[Ｊ].ＡｃｔａＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉａｅＰｌａｎｔａｒｕｍꎬ２０１６ꎬ３８:２３３.[１８]ＳｒｉｎａｔｈＭꎬＳｈａｉｌａｊｉＡꎬＢｉｎｄｕＢＢＶꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１￣Ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ(ＤＸＳ)ｉｎＡｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓｐａｎｉｃｕｌａｔａ(Ｂｕｒｍ.ｆ)Ｎｅｅｓ[Ｊ].Ｍｏｌ.Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ.ꎬ２０２１ꎬ６３:１０９－１２４. [１９]董楠ꎬ余函纹ꎬ刘梦丽ꎬ等.桔梗ＤＸＳ基因的原核表达㊁亚细胞定位和酶活性分析[Ｊ].药学学报ꎬ２０２３ꎬ５８(４):１０５９－１０６８.[２０]林谷音ꎬ周佩娜ꎬ尹梦娇ꎬ等.荆芥１－脱氧－Ｄ－木酮糖－５－磷酸合成酶基因克隆及生物信息学分析[Ｊ].中草药ꎬ２０２１ꎬ５２(２):５２７－５３７.[２１]毛积鹏ꎬ黄林旺ꎬ郝静ꎬ等.植物ＤＸＳ基因的系统发育和分子进化分析[Ｊ].生物学杂志ꎬ２０２２ꎬ３９(２):２３－２８. [２２]陈国德ꎬ饶丹丹ꎬ韩豫ꎬ等.土沉香萜类合成相关ＤＸＳ和ＤＸＲ基因鉴定㊁进化和表达分析[Ｊ/ＯＬ].分子植物育种ꎬ２０２３:１－１１[２０２３－０４－１７].ｈｔｔｐ://ｋｎｓ.ｃｎｋｉ.ｎｅｔ/ｋｃｍｓ/ｄｅ￣ｔａｉｌ/４６.１０６８.Ｓ.２０２３０４１７.１５２０.０１６.ｈｔｍｌ.[２３]ＷａｌｔｅｒＭＨꎬＨａｎｓＪꎬＳｔｒａｃｋＤ.Ｔｗｏｄｉｓｔａｎｔｌｙｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｅｎ￣ｃｏｄｉｎｇ１￣ｄｅｏｘｙ￣ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｓ:ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｉｎｓｈｏｏｔｓａｎｄａｐｏｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ￣ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｎｇｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｒｏｏｔｓ[Ｊ].ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌꎬ２００２ꎬ３１(３):２４３－２５４. [２４]ＫｉｍＢＲꎬＫｉｍＳＵꎬＣｈａｎｇＹＪ.Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｓｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].Ｂｉ￣ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２００５ꎬ２７(１４):９９７－１００１.[２５]Ｌｕｎａ￣ＶａｌｄｅｚＬꎬＣｈｅｎｇｅ￣ＥｓｐｉｎｏｓａＭꎬＨｅｒｎáｎｄｅｚ￣ＭｕñｏｚＡꎬｅｔａｌ.Ｒｅａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ５￣ｐｈｏｓ￣ｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｆａｍｉｌｙｓｕｇｇｅｓｔｓａｐｏｓｓｉｂｌｅｎｏｖｅｌｆｕｎｃｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤＸＳｃｌａｓｓ３ｐｒｏｔｅｉｎｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０２１ꎬ３１０:１１０９６０. [２６]ＧｏｐａｌＧＪꎬＫｕｍａｒＡ.Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉ￣ｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ[Ｊ].ＴｈｅＰｒｏｔｅｉｎＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１３ꎬ３２:４１９－４２５.[２７]ＰｏｕｒｅｓｍａｅｉｌＭꎬＡｚｉｚｉ￣ＤａｒｇａｈｌｏｕＳ.Ｆａｃｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｈｅｔｅｒｏｌｏ￣ｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎＥ.ｃｏｌｉｈｏｓｔ[Ｊ].ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＭｉ￣ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ２０２３ꎬ２０５(５):２１２.[２８]ＷｅｉＨꎬＭｏｖａｈｅｄｉＡꎬＸｕＣꎬｅｔａｌ.ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｔＤＸＳｅｎ￣ｈａｎｃｅｓｓｔｒｅｓｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＰｏｐｌａｒｓ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１９ꎬ２０(７):１６６９.[２９]陈文意ꎬ邓文静ꎬ严寒静ꎬ等.广藿香ＪＡＲ１基因的克隆及原核表达[Ｊ].时珍国医国药ꎬ２０２２ꎬ３３(６):１４５１－１４５５. [３０]Ｍｕñｏｚ￣ＢｅｒｔｏｍｅｕＪꎬＡｒｒｉｌｌａｇｅＩꎬＲｏｓＲꎬｅｔａｌ.Ｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｅｎｈａｎｃｅｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓｐｉｋｅｌａｖｅｎｄｅｒ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏ￣ｇｙꎬ２００６ꎬ１４２(３):８９０－９００.[３１]ＺｈｏｕＷꎬＨｕａｎｇＦꎬＬｉＳꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒ￣ｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｗｏ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇꎬ２０１６ꎬ３６:１２４.[３２]杨林ꎬ汪逗逗ꎬ田少凯ꎬ等.甘草ＤＸＳ基因过表达及表达沉默对甘草酸生物合成的影响研究[Ｊ].药学学报ꎬ２０２１ꎬ５６(７):２０２５－２０３２.[３３]ＣｈｅｎＸＨꎬＺｈａｎｇＹＹꎬＹａｎＨＦꎬｅｔａｌ.Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１￣ｄｅｏｘｙ￣Ｄ￣ｘｙｌｕｌｏｓｅ￣５￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ(ＤＸＳ)ｉｎＳａｎｔａｌｕｍａｌｂｕｍＬ.[Ｊ].Ｇｅｎｅꎬ２０２３ꎬ８５１(３０):１４６７６２.５３㊀第４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀曾晴ꎬ等:广藿香ＤＸＳ基因克隆及表达分析。
GSK2606414_Cell Cycle_PERK_CAS号1337531-36-8说明书_AbMole中国
分子量451.44溶解性（25°C ）
DMSO 90 mg/mL 分子式C H F N O Water <1 mg/mL CAS 号1337531-36-8Ethanol 19 mg/mL
储存条件
3年 -20°C 粉末状
生物活性
GSK2606414是一种可口服的、有效的选择性PERK 抑制剂，IC50为0.4 nM ，对PERK 的选择性比对其它EIF2AK 的作用至少高出100倍。
GSK2606414抑制A459细胞中的PERK 自磷酸化，IC50<0.3 μM 。
不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA 指南）
小鼠
大鼠兔豚鼠仓鼠狗重量 (kg)0.020.15 1.80.40.0810体表面积 (m )0.0070.0250.150.050.020.5K 系数
3
6
12
8
5
20
动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) ×
动物 B 的K 系数动物 A 的K 系数
例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的K 系数（3），再除以大鼠的K 系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg 。
GSK2606414 目录号M2734
化学数据
2420352m m m m m。
教你看懂基因检测中的那些变异
教你看懂基因检测中的那些变异随着基因检测技术的迅速发展和普及应⽤，越来越多的⼈开始接触到了基因检测。
报告中成堆成串的字母数字专业名词，单个看都认识，合着⼀起看就不认识了。
那么这期我们就从这个点来切⼊，教你看懂基因变异。
学会了这期，看懂报告中的变异内容就轻⽽易举了。
前⾔“突变是指核苷酸序列永久性改变，多态性是指⼈群频率超过1%的变异。
这两个术语已经错误地与致病性和良性结果关联起来，因此，建议使⽤“变异”加以下五个修饰词替代上述两个术语:致病性的、可能致病性的、意义不明确的、可能良性的或良性的。
”——ACMG指南根据HGVS（⼈类基因组变异协会）变异命名法以及ACMG指南，建议使⽤“变异”这个中性词来描述核苷酸的改变。
正确完整的变异结果描述应该包含基因名称，变异的位置，转录本及外显⼦，还有核苷酸的改变以及氨基酸改变。
01变异前缀变异的前缀⽤于指出变异位于哪种序列中：“g.”表⽰基因组序列，如g.455G>T。
“c.”表⽰Coding（编码）DNA序列，如c.455G>A。
“m.”表⽰线粒体DNA序列，如m.766T>C。
“n.”表⽰⾮编码RNA序列。
“r.”表⽰RNA序列，如r.76a>u。
“p.”表⽰蛋⽩质序列，如p.Lys76Asn。
3’规则对于突变的所有描述，最靠近参考序列3'端的描述优先考虑;应⽤于所有关于基因组，基因，转录本，蛋⽩的相关突变描述。
这句话怎么理解呢？序列从5’端向3’端读取，描述靠近3’端的变化。
例如：CTAGAGGTC这段序列变异为CTAGGTC，我们优先描述为缺失后⾯的AG，⽽不是前⾯的AG。
通俗地讲就是“能往下读就往下读，读不动了再说”。
02变异描述的总体规范1、表述符号“>”（⼤于号）表⽰碱基替换，如c.123G>A。
“del”表⽰缺失，如c.76delA。
“dup”表⽰重复，如c.76dupA。
“ins”表⽰插⼊，如c.76_77insG。