组织切片制作步骤
病理切片制备
病理切片制备
病理切片的制备主要包括以下步骤：
1. 取材：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
2. 固定：固定分为小块组织固定法、注射灌注固定法、蒸汽固定法。
3. 脱水：用梯度酒精将组织块内的水分置换出来，可以用脱水机自动完成。
4. 包埋和切片：脱水以后进入石蜡包埋，石蜡凝固后，组织就被包在其中，制成蜡块。
然后将蜡块放在切片机上切成4-6微米薄片展开放在玻片上。
5. 染色封固：石蜡切片要经过苏木素-伊红染色，最后切片封固。
此外，在制片过程中，需要注意规范取材部位，准确地按解剖部位取材；选好组织块的切面，根据各器官的组织结构，决定其切面的走向；规范取材使用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动；夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形；选好组织块的切面；规范取材使用的刀剪要锋利等。
以上信息仅供参考，具体步骤和注意事项可能根据不同的制作设备和材料有所差异。
如需了解更多信息，建议咨询病理科医生或查阅专业书籍。
组织病理切片步骤
组织病理切片步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：组织病理切片是临床病理学中一项非常重要的操作步骤，通过对组织标本进行切片、染色和观察，可以帮助医生准确诊断患者的疾病。
下面我们将介绍一下组织病理切片的具体步骤。
1. 标本采集：在进行组织病理切片之前，首先需要进行标本采集。
医生会根据患者的临床症状和检查结果，决定需要进行组织切片检查的部位，并采集相应的组织标本。
常见的标本包括活检标本、手术标本等。
2. 标本固定：采集到的组织标本需要进行固定处理，以保持细胞和组织的形态结构。
常用的固定剂包括福尔马林、4%的中性缓冲福尔马林等。
3. 标本包埋：固定后的组织标本需要进行包埋处理，即将组织标本置于蜡块中，以便进行切片。
包埋可以帮助维持组织的完整性和形态结构。
4. 组织切片：将包埋好的组织标本切割成薄片，即组织切片。
组织切片的厚度通常为3-5微米，切片时需要使用显微镜预先调整刀片角度和大小。
5. 组织染色：切割好的组织切片需要进行染色处理，以凸显组织细胞的形态和特征。
常用的染色剂包括伊红染、嗜酸性粒染、埃曼若染、普鲁斯染等。
6. 组织观察：染色后的组织切片可以放置于显微镜下观察，通过观察组织细胞的形态、核的大小和形态等特征，医生可以进行病理诊断。
7. 病理诊断：最终根据对组织切片的观察和分析，医生可以进行病理诊断，明确患者疾病的类型、程度和预后。
第二篇示例：组织病理切片是病理学检查中的重要步骤之一，通过组织切片的制备，医生可以观察组织的形态结构，从而对疾病进行准确的诊断和鉴别。
下面将介绍一下组织病理切片的步骤。
第一步：标本采集组织病理切片的第一步是采集标本。
医生会根据患者的症状和临床表现，选择合适的部位进行组织采集，通常是通过手术或活检的方式获取组织标本。
采集的标本要求完整、清晰，以确保后续的切片制备质量。
第二步：固定采集到的组织标本需要进行固定处理，以保持组织的结构和形态。
固定的目的是使细胞和组织中的蛋白质、核酸等不能再发生变性、氧化或降解，防止组织腐败和细胞溶解。
组织切片制作方法
组织切片制作方法
组织切片是制备病理学标本的主要方法之一，以下是其制作步骤：
1. 收集组织样本，并在一定时间内将其放入固定液中进行固定。
2. 将组织样本从水中逐渐转移到酒精中进行脱水。
3. 将样本置于包埋剂中，使其逐渐转移到蜡块中。
4. 用切片机将蜡块切割成极薄的切片，并用染色剂染色，以便在显微镜下进行观察和分析。
5. 将切片封入载玻片中。
此外，为了确保切片的质量，需要注意以下几点：
1. 载玻片应干净无油，如有云雾斑点，则不能使用。
2. 切片制作过程中，应将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向。
刀的倾斜度通常为15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为6μm，切成厚度均匀的切片。
3. 切片贴附后，放在空气中稍晾干，然后进行烤片。
烤片的温度以蜡溶解为准，也可以放置60℃烘箱内烘烤过夜。
血块组织、皮肤组织须及时烤片，但脑组织、脂肪组织待完全晾干后才能进行，这样可防止产生气泡而影响染色。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
病理切片制作过程及注意事项
病理切片制作过程及注意事项简介病理切片是病理学中非常重要的工具，它能够帮助医生做出准确的诊断。
本文将详细介绍病理切片的制作过程以及需要注意的事项。
制作过程步骤1：组织取材•选择适当的组织进行切片制作；•确保组织样本取材的准确性和代表性。
步骤2：固定组织•使用合适的固定剂固定组织样本，如福尔马林；•确保固定时间和固定剂的浓度符合要求。
步骤3：脱水与清洁•将固定的组织放入酒精溶液中进行脱水处理；•清洁组织以去除固定剂和杂质。
步骤4：组织包埋•将脱水的组织置于熔蜡中进行包埋；•确保组织完全包裹，避免产生气泡。
步骤5：切片制作•使用专用的切片机将包埋的组织切成薄片；•控制切片的厚度和形状，确保质量。
步骤6：染色•使用合适的染色剂对切片进行染色，如血液样本使用血液染色剂；•控制染色时间和染色剂的浓度，确保染色效果。
步骤7：封片•将切片放在载片上，使用专用胶水将其封闭；•确保切片和载片的牢固性。
步骤8：质量控制•检查切片的质量，包括切片厚度、染色效果等；•确保切片符合病理学的要求。
注意事项注意事项1：安全•在病理切片制作过程中，要注意使用个人防护装备，如手套、口罩等；•避免接触有害化学物质，如福尔马林。
注意事项2：操作规范•按照病理切片制作的标准操作流程进行，确保结果的准确性；•遵守操作规范，减少操作失误的风险。
注意事项3：仪器维护•定期对切片机等相关仪器进行维护保养；•确保仪器的正常工作状态，减少故障的风险。
注意事项4：质量控制•对制作的病理切片进行质量控制，如切片的厚度、染色的均匀性等；•确保制作出的病理切片符合质量要求。
注意事项5：记录保存•对制作的病理切片进行记录，包括样本信息、制作过程、染色方法等；•妥善保存记录，方便后续查阅和追溯。
结论病理切片的制作过程需要经过多个步骤，每个步骤都需要严格操作和控制。
同时，要注意安全、遵守操作规范、定期维护仪器，并进行质量控制和记录保存。
只有这样，才能制作出高质量的病理切片，为病理学的研究和诊断提供可靠的依据。
法医学在法医学病理标本处理中的组织切片制作
法医学在法医学病理标本处理中的组织切片制作答案：法医学在法医学病理标本处理中的组织切片制作是通过将采集的组织样本固定、包埋、切片、染色等步骤，通过显微镜观察细胞结构，从而帮助法医学鉴定案件中的病理变化和死因。
在法医学病理标本处理中的组织切片制作过程中，首先需要采集病理标本，通常是通过活检或尸检获得。
随后，对标本进行固定处理，以保持组织结构的完整性。
然后，将固定后的组织样本进行包埋，即将组织置于蜡块中，使其易于切割。
接下来，使用组织切片机将标本切割成薄片，通常为几微米至几十微米的厚度。
随后，切片进行染色处理，以突出不同的细胞结构和病变特征，便于观察和分析。
通过法医学在法医学病理标本处理中的组织切片制作，法医学家可以通过观察组织切片的细胞结构、细胞核形态、染色质分布等特征，辅助判断病变类型、病理变化和死亡原因。
这对于破解案件真相、保护公共安全、维护司法公正等具有重要的意义。
深入讨论：在法医学病理标本处理中，组织切片制作是法医学鉴定的重要一环。
通过对组织切片的制作，可以帮助法医学家观察病理变化、病变类型、细胞结构等信息，从而为案件的司法鉴定提供客观依据。
不同的染色方法可以突出组织中不同的结构和物质，使得细胞和细胞器在显微镜下更清晰可见。
在实际操作中，法医学家需要严格遵循标本处理的规范和步骤，确保所得到的组织切片质量符合鉴定需求。
特别是在病理判断和诊断方面，组织切片的质量直接影响到法医学鉴定结果的准确性和可靠性。
因此，精细制备和准确染色是关键步骤，需要具备丰富的经验和专业知识。
总的来说，法医学在法医学病理标本处理中的组织切片制作是一项具有挑战性且重要的工作。
通过对病理组织样本的精细处理和观察，可以为法医学鉴定提供关键支持，促进案件的准确处理和司法公正。
组织切片制作步骤
如何做出一张合格的组织切片？一般要先取材→固定→透明→包埋→切片，最后进行染色组化等操作。
本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。
包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。
.冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差，一般用来做原位杂交ISH，免疫荧光IF。
冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。
冰冻包埋步骤较为简洁，固定之后，直接用镊子将样品放置到样品托上，挤压OCT完全包裹组织，放入冷冻机待OCT凝固即可。
凝固后就可以直接切片。
如果不能及时切片，用锡箔纸包装好，放入-80℃存放。
.石蜡切片，一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。
厚度更薄，一般为4um，工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成，更加依赖制作者的经验，需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。
下面是石蜡包埋和切片的具体步骤：一、实验材料动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，ddH2O，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。
二、实验步骤1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。
2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。
PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。
冰冻切片可以直接用丙酮固定。
其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4。
固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。
固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。
关于固定液的选择可以参考这篇文章[1]。
3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。
4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下脱水：30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。
组织病理切片步骤
组织病理切片步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：组织病理学是一门研究疾病的科学，通过对组织和细胞的形态结构进行分析，可以帮助医生做出正确的诊断和治疗方案。
而组织病理切片是组织病理学的重要步骤之一，通过切割组织标本并染色，可以观察组织和细胞的形态结构，进而帮助医生做出诊断。
组织病理切片的步骤是一个繁琐而精细的过程，需要经过多个环节的处理才能得到准确的结果。
下面我们就来了解一下组织病理切片的具体步骤。
1. 标本获取：组织病理学的切片首先需要获得病理标本，这通常通过组织活检或手术取材来完成。
医生会根据患者的病情和需要进行相应的标本获取。
2. 组织固定：标本获取后，需要立即将组织标本放入10%的甲醛或其他固定剂中进行固定，以保持组织形态的完整性。
固定后的组织标本可以长期保存，并且能够在病理切片的过程中保持组织的形态结构。
3. 组织处理：固定后的组织标本需要进行脱水、清洁和浸蜡等处理，以使组织标本透明并且易于切割。
这一步通常需要用到甲醇和乙醇等有机溶剂，以及蜡浸渍处理。
4. 组织包埋：处理完的组织标本需要放入蜡液中进行包埋，以便于切割。
在包埋过程中，需要正确定位组织标本，并使其固定在蜡块中。
5. 组织切割：包埋后的组织标本需要用微切片机切成薄片，厚度通常在3-5微米左右。
切片时需要保持切割的准确性和统一性，以便后续的染色和观察。
6. 组织染色：切割后的组织标本需要进行染色，以显示组织和细胞的形态结构。
常用的染色方法包括赖氏染色、简单染色和特异性染色等。
7. 组织固定：染色后的组织切片需要进行固定，以保持染色的效果。
通常用乙醇和甲醇进行脱水和抗褪色处理。
8. 组织观察：固定后的组织切片可以放入显微镜下进行观察，医生可以通过观察组织和细胞的形态结构来做出诊断。
组织病理切片是一项非常重要的组织病理学技术，通过对组织标本的切割和染色，可以帮助医生做出准确的诊断，并为治疗提供参考。
希望通过以上介绍，您对组织病理切片的步骤有更深入的了解。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
安徽高等院校植物细胞及组织切片标本制作步骤
安徽高等院校植物细胞及组织切片标本制作步骤制作植物细胞和组织切片是植物学和生物学研究中常用的实验方法之一、下面是一般的植物细胞和组织切片制作步骤。
1.实验材料准备-植物标本：选择具有代表性的植物标本，新鲜度较高的嫩叶、茎和根部适合制作细胞和组织切片。
-植物细胞和组织固定剂：常用的固定剂有乙醇、乙酸、福尔马林等。
选择适当浓度的固定剂根据样本的特性来确定。
-切片工具：显微刀片、玻璃切片、切片夹和切片盒等。
-切片染色剂：苏木素、伊红等。
2.样本处理-选择适当大小的植物标本，将其放置在固定剂中固定一段时间，常规处理时间为1-24小时，具体时间根据固定剂浓度和标本的特性来确定。
较硬的组织可选择用150-200mL的固定液浸泡2-12小时，较脆弱的组织可缩短固定时间。
-固定后，将样本从固定剂中取出，用纸巾轻轻擦干外表水分。
3.组织松解-对于较厚的植物组织，需要进行松解以使细胞方便切片观察。
通常，可用腐解溶液进行松解。
常用的腐解溶液有酶解液、盐酸和氯化铁等。
将样本浸泡在腐解溶液中，温度和处理时间根据样本的特性而定，通常需要温和的温度（如37°C）并持续一段时间（如30分钟-4小时），直到细胞组织松解。
4.切片制备-用镊子将处理好的样本取出，用切片钳将样本固定在切片夹上。
夹住样本的位置要仔细选择，以尽量保留较好的细胞和组织结构。
-使用显微刀片沿着横切面或纵切面将样本切割成较薄的切片。
刀片的角度和力度要适中，避免切片过厚或者过薄。
厚度通常为10-20微米。
-将切好的样本放在预先准备好的玻璃切片上。
用切片钳将切片夹住，并用切片盒盖上，防止灰尘和水分进入。
5.切片染色-拿起玻璃切片，将其放在染色剂（如苏木素溶液）中浸泡。
染色时间根据样本和染色剂而定，通常需要15-30分钟。
-取出染色剂，用去离子水或蒸馏水冲洗切片，直到水洗液透明。
-将切片用纸巾轻轻吸干水分，然后放在显微镜玻片上。
6.保存和观察-将切片放在带盖玻片上，用透明胶带黏贴边缘以防止切片移动。
HE组织切片制备标准操作程序
HE组织切片制备标准操作程序一、Purpose 目的保证病理切片质量，以达到准确的病理诊断。
二、Scope范围石蜡包埋组织切片三、Reagents and instrument试剂，仪器苏木素、伊红、切片机、水浴箱。
四、Process工作流程（一）切片1、将切片刀安装在持刀座上；2、将蜡块固定于支持器上；3.、细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接近，旋紧刀座，观察蜡块面是否与刀座相平，如不平须调节支持器，使蜡块面与刀面平行；4、修块（粗切）：用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块全部切到。
修块粗切片的厚度为15-20微米（注意：对于医嘱再次深切片特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片应尽量少修块，以尽量好地获得有关病变的连续性）；5、调节切片厚度调节器（一般为2-4 微米），进行切片。
切出的蜡片应连续成带状，完整无缺，厚度适宜（3-5 微米）、均匀，无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解等；6、以专用镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚薄均匀、干净的蜡片，放入漂片机的温水中（40-50℃左右），使切片全面展开；每切完一个蜡块后必须认真清理水面，不得遗留其它病例的组织碎片以免污染。
7、将蜡片附贴于处理过的载玻片上，蜡片应放在载玻片右2/3处的中央，留出载玻片左1/3的位置用于贴附标签；蜡片与载玻片之间无气泡；为防止蜡片滑落，蜡片的一角（远离组织的）可粘在载玻片边缘上；若一片载玻片上捞两片以上的蜡片，必须把蜡片均匀贴附在载玻片上，保持制片的美观。
8、必须立即在置放了蜡片的载玻片一端（待贴标签处），用铅笔准确清楚地标记其相应的病理号（包括次级号），外借白片，需在每张白片上注明对应的病理号。
9、将置放了蜡片的载玻片呈45度斜置片刻；待载玻上的水分流下后，将其插入专用的染色架中，最后置于恒温箱中烘烤（72℃左右，15分钟），然后即可进行染色。
10、切片注意事项（1）切片前蜡块要冷冻，这样容易切片（甲状腺、淋巴结及胃镜等特殊组织，必须控制冰冻时间）。
组织切片制作步骤
组织切片制作步骤组织病理切片的制作过程组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
一、取材切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色四、脱水经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。
脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡等其他包埋剂浸入组织创造条件。
五、透明透明的目的是将组织内的酒精用矿物油或植物油置换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。
由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，故称这一过程为透明。
六、浸蜡浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。
七、包埋包埋就是将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。
根据需要，包埋的方法常有石蜡包埋法和火棉胶包埋法。
石蜡包埋法：八、组织切片不同的切片制备方法，其切片方法也有较大差别，组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡包埋半薄切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。
常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀仪器等。
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程
1．取材：
器械准备：锋利的手术刀；液氮罐一个或者冰盒；镊子；生理盐水
(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后30min至1h，防止细胞自溶以保证原有的形态学结构，选取胰腺癌导管型腺癌病人高、中、低分化各至少5例（前期未经过放疗、化疗等肿瘤内科专科治疗）。
(2)组织块的大小：所取癌组织/癌旁组织较理想的体积为
(0.3-0.5)cm×(0.3-0.5)m×0.3cm，厚度不大于0.5cm
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 在不影响病理诊断情况下取材，癌旁组织（癌组织旁1-2cm）
(5)保持组织块的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理盐水冲洗干净后再放入液氮或者冰盒中。
(6)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
（7）备注好患者的姓名，性别，年龄，籍贯，住院号，ID号，病理类型及分化程度
1。
组织切片的制作步骤
组织切片制作过程：1.固定：10%甲醛溶液内固定24～28h组织块大小为15×15×5mm2.水洗：流水冲洗24h需用到胶皮管、烧杯、纱布组织块放于烧杯中，用纱布将烧杯口封死，在纱布中间部位留出供胶皮管插入的豁口，胶皮管一头接到水源，另一头插入烧杯中。
有水注入后，尽量让组织块不要沉底。
3.脱水：不同浓度的酒精50%——70%——80%——95%——95%——无水酒精——无水酒精30m-1h 2-4h 2-4h 2h 2h 1h 1h其中70%酒精可以长时间保存，并且在脱水过程中随时可返回70%酒精中。
但是返回后，仍需按顺序进行，即80%开始。
4.透明：无水酒精：二甲苯（1：1）——二甲苯30m 30m透明过程中，在二甲苯中时，需注意观察组织块是否已透明，无需按固定时间来计算。
5.浸蜡与包埋：将石蜡融化后置于52℃～60℃烘箱中二甲苯：石蜡（1：1）——石蜡（1）——石蜡（2）——石蜡（3）30min 30min 30min 30min6.切片：按需要厚度一般将切片机设为5-7um厚，厚度视组织块而定。
7.展片：用水浴锅，将温度设为40℃，用毛笔将切好的蜡片从切片机上卷下，放入水浴锅中。
8.粘片：需准备蛋白甘油，蛋白甘油由鸡蛋蛋清和甘油调配而成，比例为1：1。
先将一滴蛋白甘油涂抹在干净的载玻片上，然后用载玻片从水中将展好的蜡片捞起，平放入烘箱内进行烘干，烘干温度为50℃，时间为12～24h。
9.染色：二甲苯（1）——二甲苯（2）——无水酒精（1）——无水酒精（2）——5-10min 5-10min 5min 3-5min95%酒精（1）——95%酒精（2）——80%酒精——70%酒精——50%酒精——2-3min 2-3min 2min 2min 2min蒸馏水——苏木精——自来水洗——蒸馏水——1%盐酸酒精——自来水蓝化2min 5-15min 2min 2min3-5s 15-30min——蒸馏水——50%酒精——70%酒精——80%酒精——伊红——95%酒精(1)2min 2min 2min 2min 1-2min 2-5min——95%酒精（2）——无水酒精（1）——无水酒精（2）——二甲苯（1）2-5min 5min 5min 5min——二甲苯（2）5-10min10.封片：树胶封片，置于35℃～38℃之间烘干。
组织切片制作步骤
组织切片制作步骤1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为50px×50px×7.5px，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～5px即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～12.5px，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为50px×50px×7.5px。
组织切片制作步骤
组织切片制作步骤
制作过程如下：
1、固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化；
2、脱水：将组织细胞所含水分除去。
此过程还使组织块进一步硬化；
3、透明：用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。
通常用二甲苯为透明剂；
4、浸蜡：在温箱内进行。
已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质；
5、包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋；
6、切片：切片厚度随制片目的而调整；
7、贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。
染色后用树胶、盖坡片封固，可永久保存。
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
法医病理学组织切片制作
3．苏木素的配方①自然氧化（Ehrlieh）苏木素： 苏木精 2g 铵明矾 3g 无水酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中，瓶口罩上数层纱布以防灰尘落入染液，暴露于阳光中或空气中自然氧化（成熟过程），约6周—8周以上，染液配制越久其染色能力越强，可以一次大量配制以备用。
常用脱水剂：溶于水和透明剂的试剂，如酒精、丙酮、正丁醇等。（1）酒精步骤：70％ 80％ 90％ 95％ 100％Ⅰ 100％Ⅱ，一般数小时到12小时，更换一次酒精。 配低浓度酒精时，可用市售95％酒精配制。70％酒精：95％酒精70ml加蒸馏水25ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸馏水至95ml，依次类推。（2）丙酮 脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水1～8小时即可。
（三）蜡的种类：1．蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄故也称为黄蜡，溶点在54℃左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。2．石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。 软蜡：50℃以下的石蜡。硬蜡：溶点在50℃以上的石蜡。两种蜡可以混合在一起使用。石蜡熔点有52℃～54℃，56℃～58℃，58℃～60℃，60℃～62℃。
七、切片工具：切片刀、磨刀机、切片机、水浴锅，干燥箱等；载薄片、手术刀、毛笔、弯镊子、托盘、大平皿（展片使用）、烤片盒、蛋白甘油等。（一）切片机种类：轮转式切片机、滑行式切片机（滑动式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。（二）构造：由四个基本部分组成：刀台、标本台、旋转轮、控制切片厚度的微动装置（标有 l～25或1～50的数字，每一数字代表一个微米）。根据需要调节厚度，一般采用5μm～7μm。蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。
组织切片制作过程
组织切片制作过程一、组织切片技术1、取样：样品长度0.5—1cm，切面光滑（最好一刀切）2、样本处理：取样后立即放入Bowin氏固定液中固定（24—48h一般24h）3、组织冲洗：将组织用纱布或包埋盒包住，装入容器中，兑水冲洗过夜，一般为一夜。
4、组织脱水：70%酒精—80%酒精—85%酒精—90%酒精—95%酒精（各50min）无水酒精I—无水酒精II (各40min)5、组织透明：纯酒精（2）：二甲苯（3）（体积比为2:3混合液）（10min）纯酒精（1）：二甲苯（3）（体积比为1:3混合液）（5min）纯二甲苯(2min)6.透明石蜡和包埋：（两个蜡杯，一个1h,一个1—2h）,烘箱温度65—70℃（蜡的熔点为55—60℃）①接着步骤5马上取出样品后放入第一个蜡杯1h后转移到另一个蜡杯中，在第二个蜡杯中放置时间也为1h。
②包埋：a.制作中昌状包埋盒凹b.j将蜡倒入包埋盒中，然后用加热的镊子夹住样品让人包埋盒中（防止气泡）。
③修块：a.将蜡块修整为长方形或正方形，方便切片b.切片、展片、贴片①切片厚度为5—7μm，刀片要新，勿磨损，先用15—20μm厚度将蜡块修平，然后再将厚度调整到5—7μm②展片：温度调为43—44℃，与刀片相接触的面朝下，等到片子完全摊平（无白点）方可捞出。
（注：载玻片必须用盐酸浸泡清洗干净，无灰尘）③烤片：温度为45℃，烘烤时间为10—20分钟④再将玻片放入烘箱中（37—45℃）数小时，片完全贴住即可。
二、HE染色过程（苏木精—伊红染色）1.脱蜡：①二甲苯I 8min ②二甲苯II 5-8min2.洗去二甲苯：③无水酒精I 3min④无水酒精II 3min3.复水：⑤95%酒精5min—90%酒精5min—80%酒精5min—70%酒精5min—60%酒精5min—50%酒精5min—自来水5min—蒸馏水5min4.核染：⑥苏木紫 8min（染成蓝色）5.洗去苏木紫：⑦自来水 8—10min（拿出片子直接在自来水中冲洗）6.盐酸酒精分色（颜色由蓝变红即可）：⑧醇酸30s—1min(洗去其他细胞器染色，核染较深)注：醇酸配制：浓盐酸0.5—1ml，70%—95%酒精100ml7.蓝化：⑨10min—数小时（由红变蓝，一般半小时即可）将染缸放入盛满自来水的脸盆中，打开水龙头，小流速。
组织切片制作
或水洗） 三、 洗 涤（或水洗） 目的：组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去， 目的：组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去，否则留在 组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。 组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。 原则： 原则： 1、固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。 、固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。 2、固定液为甲醛水溶液或以水配制的可用流水冲洗。 、固定液为甲醛水溶液或以水配制的可用流水冲洗。 3、冲洗的时间与组织的种类，组织块大小和固定时间长 、冲洗的时间与组织的种类， 短有关。 一般10-24h。 短有关。 一般 。 方法：流水缓慢冲洗。小组织可不冲洗， 方法：流水缓慢冲洗。小组织可不冲洗，多次换水浸泡即 可。
七、包 埋 步骤： 步骤： 将熔化好的石蜡倒入包埋框， 将熔化好的石蜡倒入包埋框，用加温的镊子将组织块切 面朝下放入，将准备好的标签放在待凝固的石蜡面上， 面朝下放入，将准备好的标签放在待凝固的石蜡面上，冷 完全凝固后，修整蜡块。 却。完全凝固后，修整蜡块。 包埋温度：与浸蜡的温度接近或高 ℃左右。 包埋温度：与浸蜡的温度接近或高2℃左右。
二、固 定
固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内， 固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内，借助化学 药品的作用使细胞内的蛋白质、脂肪、 药品的作用使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉 淀保存下来。同时，使组织硬化不变形，有利于固定以后的 淀保存下来。同时，使组织硬化不变形， 处理。 处理。
（２）混合固定液 波音(Bouin)氏固定液： 氏固定液： 波音 氏固定液 饱和苦味酸水溶液 75ml 75ml 甲醛 5ml 冰醋酸 渗透迅速，固定均匀，组织收缩小，切片着色良好。 渗透迅速，固定均匀，组织收缩小，切片着色良好。 卡诺氏(Carnoy)固定液： 固定液： 卡诺氏 固定液 60ml 无水乙醇 三氯甲烷（氯仿） 三氯甲烷（氯仿） 30ml 冰醋酸 10ml 可固定细胞浆和细胞核， 适宜染色体的固定. 固定速度快 ，可固定细胞浆和细胞核，尤其适宜染色体的固定. 可固定细胞浆和细胞核 尤其适宜染色体的固定
组织切片流程
组织切片流程常规石蜡包埋社团切片（常规切片）制备的操作流程及要求㈠社团块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。
㈡社团切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不患上有有焰的火，局部环境应有良好的透风和救火设施。
㈢常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间）1．水洗：用水流冲洗已经固定的社团块30min。
2．脱水（常温下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60~120min（2）80%乙醇60~120min（3）95%乙醇Ⅰ60~120min（4）95%乙醇Ⅱ60~120min（5）无水乙醇Ⅰ60~120min（6）无水乙醇Ⅱ60~120min（7）无水乙醇Ⅲ60min［注意事项］①未经充分固定的社团不患上进入脱水程序。
②用于脱水的试剂容积应为社团块总体积的5～10倍以上。
③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。
④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml乙醇可用于500个社团块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。
⑤较大社团块的脱水时间长于较小者，应将两者分隔进行脱水。
⑥社团置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。
⑦丙酮脱水性能强，会使社团块过缩、硬脆，不宜用以替换无水乙醇。
3．透明（1）二甲苯Ⅰ20min（2）二甲苯Ⅱ20min（3）二甲苯Ⅲ20min［注意事项］①二甲苯的容积应为社团块总体积的5～10倍以上。
②社团块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防社团硬、脆），并依不同品类社团及其大小而异；社团出现棕黄或暗红色透明即可。
③二甲苯应及时过滤、更换。
④社团经二甲苯程度适当处理后不显透明时，常提示该社团的固定或脱水不充分，应查找原因并妥帖处理。
4．浸蜡（1）石蜡Ⅰ（45~50℃）60min（2）石蜡Ⅱ（56~58℃）60min（3）石蜡Ⅲ（56~58℃）60min［注意事项］①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70℃）进行，不患上用有焰的火加温。
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徒手切片法：
徒手切片前，应先准备好一个盛有清水的培养皿。
在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料，大拇指应低于食指2～3mm，以免被刀片割破。
材料要伸出食指外约2～3mm，左手拿材料要松紧适度，右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。
然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。
将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，再用右手的臂力（不要用手的腕力）向自身方向拉切。
此时，左手的食指一侧应抵住刀片的下面，使刀片始终平整。
连续地切下数片后，将刀片放在培养皿的水中稍一晃动，切片即漂浮于水中。
当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。
好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整，否则要重新进行切片。
对经检查符合要求的切片，如果只作临时观察，可封藏在水中进行观察。
若要更清楚地显示其组织和细胞结构，可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤，做成永久玻片标本。
徒手切片技巧
如果不想切斜，要注意两点，一个是左手拿的露出来那截要短，尽量只能连续切2刀的样子(一般是可以切4，5刀的），一个是切口一定要水平，同时右手的刀片也要水平，拉刀的时候保持在一个平面上（拉快点容易做到）。
这是根和茎的切法，不过每次的量会有所减少。
对于叶，有三种切法，一个是直接切；一个是卷成管状，当茎来切；还有就是用三层刀片夹起来。
其中，第一种适合于裸子植物那种
针叶，方法要领和上面说的差不多；第二种适合于比较软的叶片，要领是要卷的细，中间的洞不要太大（大了容易斜）；第三种适用于比较坚韧，硬的叶片，绝对要放在载玻片之类的地方，要用划的，凌空切会很不顺，容易切不断。
还有一种特殊的方法是切成小块的先，再夹到萝卜里面（事先挖个洞或切条槽），再一起切，这个适用于全部，根茎叶，软的硬的均可（就是那种针叶不太好用它，我都切不好）。
所以克服柔软就是要注意，想办法使它变厚变硬（对叶：卷，夹，或者垫玻璃；对根茎，夹，或者用左手捏紧一点，捏上面一点，使它不会晃）。
至于弯曲，我觉得不用太在意，要么舍弃掉这一段，要么用手压紧，关键只是上面要平。
还有，如果切含有楞或者有叶脉的部分，一定要从这些地方开始切，先切硬的部分（朝向刀口）。
平时切两到三层差不多，一层的细胞会破损，有空洞；这样也比较适合染色。
徒手切片的优缺点
徒手切片是用手持双面刀片或剃刀，将新鲜材料或预先固定好的材料（切前水洗）切成薄片，不经染色或经简单染色后，用水封片作临时装片观察。
徒手切片法的优点是不需要复杂的设备，方法简便，制片迅速，而且能观察到植物组织的自然色泽和活体结构，常用于研究植物解剖结构、细胞组织化学成分，植物资源鉴定等。
同时，它具有利于临时观察、能够较快的得到结果的优点。
缺点是对于体积过小、太软、太硬的材料则难于切片，而且不能制成连续切片。