不同促透剂对Ex-RAD凝胶体外透皮吸收的影响

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不同促透剂对Ex-RAD凝胶体外透皮吸收的影响
党学良;赵军;李晰;苏静妹;王庆伟
【摘要】目的研究不同透皮吸收促透剂对Ex-RAD凝胶透皮作用的影响.方法采用改良的Franz扩散装置,以体外大鼠腹部皮肤为透皮屏障,0.9%氯化钠溶液为透皮体系接收液,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对Ex-RAD进行测定,考察不同透皮促进剂(薄荷醇、氮酮、冰片、麝香酮)对Ex-RAD凝胶的促渗效果,并优选出最佳促渗剂.结果氮酮对Ex-RAD具有较好透皮促进作用,在实验浓度范围内,随氮酮浓度增大,促透效应越强;麝香酮对Ex-RAD的促透作用较弱,随浓度的增加,促透作用基本无变化;薄荷醇在浓度为1%和3%时显示促透作用,但浓度增加到5%时,反而抑制Ex-RAD的皮肤渗透;1%冰片对Ex-RAD有一定的促透作用,随浓度增大,也表现出抑制渗透作用.结论 4种促透剂中,对于药物Ex-RAD凝胶增渗效果最好的促透剂是氮酮,而且5%氮酮效果最佳.
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2016(035)010
【总页数】5页(P1050-1054)
【关键词】Ex-RAD凝胶;辐射保护剂;氮酮;薄荷醇;冰片;麝香酮;促透剂
【作者】党学良;赵军;李晰;苏静妹;王庆伟
【作者单位】第四军医大学唐都医院药剂科,西安710032;第四军医大学唐都医院药剂科,西安710032;第四军医大学唐都医院药剂科,西安710032;商洛学院生物制药工程系,商洛726000;第四军医大学唐都医院药剂科,西安710032
【正文语种】中文
【中图分类】R979.6;R969.1
放射性皮肤损伤是临床放射治疗(放疗)过程中最常见的不良反应。

临床主要表现为:皮肤滤泡样黯色红斑,触痛性或鲜色红斑,片状湿性脱皮,皮肤皱褶以外部位的融合的湿性脱皮,凹陷性水肿,甚至发生溃疡,出血坏死[1-2]。

这不仅会影响放疗
计划的顺利实施,还严重降低患者的生活质量,给患者带来极大痛苦。

目前没有统一推荐的预防放射性皮肤损伤的措施,而且临床多以烧伤进行预防和治疗。

因此,基于放射性皮肤损伤机制研发新的防治药物,对于改善患者生活质量非常重要。

Ex-RAD是一种新型高效、低毒抗辐射药物,化学名为:(E)-4-羧基苯乙烯基-4-氯苯甲基砜钠盐,具有优良的抗辐射活性,可以防治致死剂量的电离辐射,并在抗辐射有效剂量下未观察到不良反应[3-4]。

目前笔者未见有关Ex-RAD凝胶剂相关研
究的报道,若将其制备成凝胶剂,可方便用于临床放疗患者,局部发挥放射性皮肤损伤防治作用,不影响肿瘤部位的放疗。

具有良好的经济和社会效益。

选择Ex-RAD凝胶剂作为考察防治药物,采用改良Franz扩散池法,考察不同促透剂氮酮、薄荷醇、冰片、麝香酮对Ex-RAD凝胶剂的体外经皮渗透的影响,为研究其局部
发挥放射性皮肤损伤防治作用奠定基础。

1.1 实验动物雄性SD大鼠,SPF级,体质量180~220 g,第四军医大学验动物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(军)2012-0007,实验动物使用许可
证号:SYXK(军)2012-0023,大鼠给予标准饲料,自由饮水。

1.2 试剂Ex-RAD凝胶(由第四军医大学药学院化学教研室提供,纯度:99.9%,批号:20141120);卡波姆940(武汉银河化工有限股份公司,批号:20111010);氮酮(天门科捷制药有限公司,批号:110404);薄荷醇(北京化工科技股份有限公司,批号:20130829);冰片(福建青松股份有限公司,批号:140708);麝香酮
(广东致信中药饮片有限公司,批号:20120125);0.9%氯化钠注射液(辰欣药业股份有限公司,批号:1501272165,作透皮接收液);乙腈、甲醇为色谱纯;水为
超纯水,其余试剂均为分析纯。

1.3 仪器Agilent 1260液相色谱系统(美国Agilent有限公司;包含Agilent 1260泵、Agilent1260 DAD检测器、Agilent 1260色谱工作站);YB-P6智能透皮实验仪(天津药典实验设备有限公司);CP225D电子天平(赛多利斯科学仪器有
限公司,感量:0.01 mg);PHS-3C型精密酸度计(上海大普仪器有限公司);
KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司); Milli-Q Advantage A10超纯水系统(美国Millipore有限公司)。

2.1 Ex-RAD分析方法的建立
2.1.1 色谱条件色谱柱: Inertsil ODS-3(150 mm×4.6 mm,5 μm );C18保护柱( 10 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸(50:50);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:280 nm,进样量:20 μL,柱温:30 ℃。

2.1.2 对照品溶液的制备取Ex-RAD标准品适量,精密称定,加甲醇使其溶解,制备成含Ex-RAD 11.0 μg·mL-1的溶液,作为对照品储备液,吸取上述储备液
10 mL置25 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得4.40 μg·mL-1的对照
品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取凝胶剂约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密
加入甲醇50 mL,密塞,称定质量,超声处理30 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,用孔径0.45 μm的微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2.1.4 色谱系统专属性依照上述色谱条件,分别取适当浓度的Ex-RAD对照品
溶液、透皮接收液分别进样,记录色谱图,考察方法色谱系统的适用性。

在该条件下,Ex-RAD色谱峰基线分离完全且保留时间为5.211 min,接收液中的氮酮其他成分及皮肤组织中的成分不干扰Ex-RAD的测定,见图1。

2.1.5 标准曲线的绘制精密量取Ex-RAD对照品储备液,用甲醇分别稀释成
0.44,1.32,2.20,3.08,4.40 μg·mL-1Ex-RAD对照品溶液。

在上述色谱条件
下进样分析,记录Ex-RAD色谱峰面积。

以Ex-RAD色谱峰面积(Y)对Ex-RAD标准品浓度(X)进行回归,回归方程为:Y =92.759X+7.086( r=0.999 2,n=5 ),
Ex-RAD在0.44~4.40 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.1.6 精密度实验取同一供试品溶液进样6次,每次进样20 μL,按“2.1”项色谱条件测定,Ex-RAD峰面积RSD为1.56%,表明该方法的精密度良好。

2.1.7 稳定性实验取适量的Ex-RAD供试品溶液在室温下放置后,分别在0,2,4,6,8,12 h进样分析,测定Ex-RAD,峰面积的RSD为1.74 %,表明供试品溶液在室温下12 h内稳定性良好。

2.1.8 加样回收率实验取透皮接收液9份,分别加入一定量的Ex-RAD对照品
溶液,制成低、中、高浓度的系列溶液,按“2.1.3”项方法处理,进样测定,计
算回收率,低、中、高浓度的回收率分别为98.6%,101.2%,99.7%。

2.2 透皮吸收实验
2.2.1 体外大鼠皮肤的制备实验前剪去健康SD大鼠腹部毛,正常饲养1 d后
将SD大鼠处死,用手术剪剪取其腹部剑突以下去毛皮肤。

除去皮下脂肪组织和黏膜,用0.9%氯化钠溶液冲洗,直至皮肤洗液无白色浑浊为止,即获得实验用新鲜全皮,用滤纸吸干皮肤表面的0.9%氯化钠溶液,解剖镜下选取适当大小未损伤的皮肤备用[5-7]。

2.2.2 不同促透剂对Ex-RAD的透皮吸收实验
2.2.2.1 样品的制备称取卡波姆适量分散于少量乙醇中,加纯化水适量,密封
放置过夜使其充分溶胀,作为凝胶剂基质。

按处方量精密称取Ex-RAD适量,溶
于少量50 %乙醇后,加入到上述基质中混合均匀,得到含药基质。

按实验要求分别加入不同促透剂,制备成含氮酮、薄荷醇、冰片、麝香酮分别为1%,3%,5%
的凝胶。

2.2.2.2 透皮实验将大鼠皮肤自然固定在Franz 扩散池上(扩散池接收池容积为17 mL,有效渗透面积为1.67 cm2),保持皮肤角质层朝上,并将精密称取的样品均匀涂抹在鼠皮上,接收池里注入0.9%氯化钠溶液,排净空气,使真皮一侧与接收液之间无气泡。

体系固定好,系统温度设定为(37.0±0.2)℃,转速为300 r·min-1。

待温度恒定后,打开搅拌器,恒速搅拌并开始计时,分别于开始后1,2,4,6,8,12 h从取样管抽取接受液1.0 mL,每次取样后均补加相同体积的新鲜
接收液,并排除接收室中的气泡[8-9]。

将收集的接收液样品过滤后进行HPLC测
定分析,分别测定Ex-RAD样品的含量,依据标准曲线分别计算样品中Ex-RAD
的浓度。

并按下式计算各自的单位面积累计透过量(Qn) 。

Cn为第n个取样点药物浓度(μgmL-1);V为接收液体积(17 mL);Ci为第i个取
样点药物浓度(μgmL-1);Vi为取样体积;A为渗透面积。

2.3 不同浓度促透剂的促透结果
2.3.1 氮酮的促透结果以Ex-RAD为检测指标,考察不同浓度的氮酮体外透皮
性能。

3种不同浓度氮酮皮肤渗透动力学均符合Higuchi方程,r值均>0.90,即
累积渗透量Qn与时间t呈良好线性关系。

结果见图2和表1。

2.3.2 薄荷醇的促透结果以Ex-RAD为检测指标,考察不同浓度的薄荷醇体外
透皮性能。

3种不同浓度薄荷醇皮肤渗透动力学均符合Higuchi方程,r值
均>0.91,即累积渗透量Qn与时间t呈良好线性关系。

结果见图3和表2。

2.3.3 冰片的促透结果以Ex-RAD为检测指标,考察不同浓度的冰片体外透皮
性能。

3种不同浓度冰片皮肤渗透动力学均符合Higuchi方程,r值均>0.93,即
累积渗透量Qn与时间t呈良好线性关系。

结果见图4和表3。

2.3.4 麝香酮的促透结果以Ex-RAD为检测指标,考察不同浓度的麝香酮体外
透皮性能。

3种不同浓度麝香酮皮肤渗透动力学均符合Higuchi方程,其r值
均>0.89,即累积渗透量Qn与时间t呈良好线性关系。

结果见图5和表4。

添加促透剂是改善其经皮渗透的重要方法,目前,常用的促透剂有数十种。

笔者在预实验的结果的基础上,考察氮酮、薄荷醇、冰片、麝香酮对Ex-RAD凝胶剂的
体外经皮渗透的影响。

实验结果表明,氮酮对Ex-RAD具有较好的促透作用,在
实验浓度范围内,随氮酮浓度的增大,促透效应越强;麝香酮对Ex-RAD的促透
作用较弱,随浓度的增加,促透作用基本无变化;薄荷醇在浓度为1%和3%时显示出促透作用,但是浓度增加到5%时,反而抑制Ex-RAD的皮肤渗透;与薄荷醇化学结构相似的冰片,1%时对Ex-RAD有一定的促透作用,随浓度增大,也表现出抑制渗透作用。

放射性皮肤损伤是肿瘤放射治疗中最常见的并发症,若不采取任何保护措施,放射性皮肤损伤的发生率可达90%。

本研究通过对不同透皮促透剂筛选,为Ex-RAD
更好预防放射性皮肤损伤提供实验依据。

【相关文献】
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