五日生化需氧量(BOD5)测定中接种液的几种获取方法

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表% 水样号 $ % + ! ’ 2 5 4
空白实验 ()*’ 值 培养时间 1 天 培养前溶解氧 -. ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’# %! 2# ’% 2# ’% 2# &% 2# &% 2# &% 2# &% 2# &% / 0 $ 培养后溶解氧 -. !# 2& 2# +2 2# +2 ’# 52 ’# 52 ’# 52 ’# 52 ’# 52 / 0 $ ()*’ 测定值 -. &# 2! &# $2 &# $2 &# %2 &# %2 &# %2 &# %2 &# %2 / 0$
分析的实例说明用这此方法配制的接种稀释水进行标准样品的考核空白实验值的测定和控制样品及工业和生活废水的分析均获得了满意的分析结果空白实验值的测定笔者在分析的工作中用花园土浸出液和城市生活污水为接种液做空白实验水样号培养时间1水样号培养时间1标准样品的分析笔者曾参加过玉溪十五规划抚仙湖入湖河流实际样品考核在考核过程中笔者分别采用上述几种法对接种稀释水进行了配制并用其对样品进行了接种稀释现将结果选列于表用花园土浸出液和城市生活污水为接种液考核样品分析结果水样号水样稀释培养前滴定空白液培养前水样稀释培养后绝对偏差相对偏差为接种稀释水在培养液中所占比例为标准样品在培养液中所占比例其中相对误差中的负号已省略控制样品的分析为检验这些方法配制的接种稀释水的质量用葡萄糖3的控制样随成批样品一同分析分别称取在8干燥的葡萄糖谷氨酸各
!# %" 标准样品的分析
笔者曾参加过玉溪 “十五规划” 抚仙湖入湖河流 ()*’ 实际样品考核， 在考核过程中， 笔者分别采用上 述几种 法对接种稀释水进行了配制， 并用其对样品进行了接种稀释， 现将结果选列于表 + 中# 从表中可 见， 所有考核样品的分析结果均在样品保证值的范围内， 相对误差均较小 #
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周元清" 申时座" 史云东" 张晔伟： 五日生化需氧量 （ ()*’ ） 测定中接种液的几种获取 方法
! " 分析的实例说明
用这此方法配制的接种稀释水进行标准样品的考核、 空白实验值的测定和控制样品及工业和生活废 水的分析，均获得了满意的分析结果 #
! # $ " 空白实验值的测定
笔者在 %&&’ 年 $ 月至 $% 月从事玉溪抚仙湖入湖河流 ()*’ 分析的工作中， 用花园土浸出液和城市生 活污水为接种液做空白实验 ()*’ 值， 分别选列于表 $ 和表 % 中 # 从表中可见，所有空白实验 ()*’ 值也均 在方法规定的 &# + , $# & -. / 0 $ 的范围内#
玉溪师范学院学报 （第 /’ 卷） /))0 年第 ’ 期% ;<=>8?@ <A B=C7 DE?:FE>G H<@@E5E I<@* /’ J<* ’ K?>* /))0
! 化学研究 !
五日生化需氧量 （
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）测 定 中
接种液的几种获取方法
周 元 清 % 申 时 座% 史 云 东 % 张 晔 伟
水样号 ’ ( " 2 * + / 0 . ’’’ ’( ’" ’2 ’* ’+ ’/ ’0
! ! 注： &’ 为接种稀释水在培养液中所占比例， &( 为标准样品在培养液中所占比例， 其中相对误差中的负号已省略,
2, "! 控制样品的分析
为检验这些方法配制 的接种稀释水 的质量， 用 葡萄糖、 3 4 谷氨酸配 制成的 )%$* 值为 ’0- 5 ("67 3 4 ’ 的控制样随成批样品一同分析 , 分别称取在 ’-"8 干燥 ’ 9 的葡萄糖、 谷氨酸各 （ ’*- : ’ ） 67 溶于
（ 玉溪师范学院 化学与环境科学系， 云南 玉 溪 &$’()) ）
［关键词］ !"#$ 测定； 接种液；接种稀释水 ［摘% 要］ 在对抚仙湖入湖河流 !"#$ 进行分析的过程中，对几种接种液的来源、 配比、 预处理及 接种稀释水的配制方法进行了研究，并通过一系列的实验数据说明了这些配制方法的可行性* ［作者简介］ 周元清， 博士研究生， 讲师， 主要从事生物化学和环境生态的教学与研究工作 * ［中图分类号］+,’&［文献标识码］-［文章编号］()), . ,$)& （ /))0） )’ . ))&( . )0
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! " # $ 城市生活污水或含生活污水的河水或湖水
生活污水不宜用刚排出的生活污水， 最好采用污水井盖下靠井壁位置的水 " 因为此处污水停留时间 长， 有利于微生物繁殖生长" 采集后在室温下放置 #% & ， 取上清液供用 "
! " ’ $ 淘米水
取 () * 大米， 加入水 !)) +, 左右， 振荡混匀后， 在 #)- 下放置培养 ! .， 取其上清液 " 用淘米水在室温 下好氧发酵， 大约放置 ( / 0 . 闻到臭味即可使用， 倒出上清液作为接种液， 123( 大约为 %)) +* 4 ,， 使用时 稀释至 !)) +* 4 , 左右较好 " 用淘米水作接种液一般可使用 ’ 周， 当淘米水 56 为 ( 时停止使用"
监测站进行水质监测时经常需要测定的项目， 因此， 提高该方法测定的准确性和可靠性显得尤为重要 * 对于不含或少含微生物的工业废水， 包括酸性废水、 碱性废水、 高温废水或经氯化处理的废水、 测定用 于分析质量控制的标准样品等， 在测定 !"#$ 时， 需进行接种， 以引入能分解水中有机物的微生物 * !"#$ 的测定过程长达 $ 3， 当发现测定失败时， 由于样品的时效性问题， 很多测定难以重新进行， 以致很多分析 人员无法报出正确的分析数据* 获得含有足够微生物的接种稀释水， 是 !"#$ 分析能否顺利进行的关键问 题之一* 给稀释水接种的接种液的获得有很多种方法， 下面介绍的是笔者在 /))$ 年 ( 月至 (/ 月从事玉溪 抚仙湖入湖河流 !"#$ 分析工作过程中所总结出的几种简便、 易行的接种液的获取方法 *
’ $ 接种稀释水的配制
加入接种液的稀释水叫接种稀释水， 其作用是在水样中引入可以氧化分解有机物的生物种群， 以便降 解水中的有机物质 " 接种稀释水的配制过程是： 将培养好的接种液从培养箱中取出， 量取上清液作为接种 液， !, 稀释水中接种液的加入量为 #) / #( +," 按照 ;10%77—70 中的水质 五日生化需氧量 （ 123( ） 的测 定稀释与接种法规定： 接种稀释水在 #)- 下的 123( 值应控制在!’ / !!) +* 4 ,之间或溶解氧瓶中的菌群 在 ! ))) / !) ))) 个 4 +, 之间" 一般接种稀释水的配制是在 ! , 稀释水中加入： （ <） 生活污水 ! / !) +, 或受生活用水污染的河水 （湖水） !) / !)) +,； （ =） 表层土壤浸出液!) / ’) +,； （ >） 淘米水 ! / # +,"
! " % $ 金鱼水加淘米水
进行废水分析前 #% & ， 取家养金鱼鱼缸内的养金鱼水 ( 份， 第二道淘米水 ! 份， 两者混合均匀， 带回实 验室进$ 肉汤接种液
在城市管道污水中， 加入少量肉汤培养基， 于 ’0- 培养箱中培养 !7 / #% & 便可 " 其制备过程是， 称取 肉汤培养基 #!0 * 于三角烧瓶中， 加入蒸馏水 !)) +,， 轻轻摇匀， 隔石棉网微火煮沸至完全溶解， 置压力锅 中灭菌 #) +89， 于冰箱中保存， 如出现浑浊或絮状物不可再用" 于试管中加入上述肉汤培养液 !) +,， 再加 入城市管道污水 ! +,， 塞上棉塞， 置 ’0- 培养箱中培养 !7 / #% &， 取出后充分振摇， 用少许脱脂棉过滤， 滤 液用蒸馏水稀释 !) 倍即可"
生化需氧量是指在规定条件下， 微生物分解存在于水中的某些可氧化物质， 特别是有机物所进行的生 物化学过程中消耗溶解氧的量* 此生物氧化全过程进行的时间很长， 如在 /)1 培养时， 完成此过程需 ()) 多天* 目前国内外普遍规定 /)1 2 (1 培养 $ 3 ， 分别测定样品培养前后的溶解氧， 二者之差即为 !"#$ 值， 以氧的 45 6 . ( 表示 * 测定生化需氧量 （ !"#$ ） 的经验性常规方法是稀释接种法 * 由于 !"#$ 是各级环境
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表" # 水样稀释培
用花园土 浸出液和城市生活污水为接种液考核样品分析结果 # 空白液 培养前 $% +, ’. +, -+, -+, -+, -+, -+, -+, (+, (+, *( +, *( +, *( +, 2( +, 2( +, 2( +, ’+, ’+, *( 水样稀释 培养后 $% ", +(/ -, /+/ (, /*. (, .00 ", 2+’ -, ./+ ", *.’ (, ’+2 ", -". ", /(( 2, (.",.+-, ---, ---, --", .+’ 2, *+*, (( # 空白液培 养后 $% *, 0’ ", 2", 2", 2", 2", 22, .. ",0", 02, /0 2, /0 2, /0 -, --, --, -*, "*, "+, "+ -, .0* -, ./( -, .-0 -, ."+ -, .’-, ./" -, .*/ -,.2. -, .’0 -, .". -, ."2 -, .22 -, .’0 -, .’0 -, .’0 -, .’+ -, .-* -, .-’ -, -’* -, -(0 -, -.( -, -+2 -, -.-, -(/ -, -2" -, -*’ -, -0( -, -+’ -, -++ -, -*+ -, -0( -, -0( -, -0( -, -02 -, -.* -, -.. &’ 养 前滴定 $% +, +**, 2+" *, -". 0, --*, 02" *, /2’ *, *’0 +, ’’. *, /.+ +,’+0 +, 2"2 +, ((+ +, "20 +, ’(* +, ’.( *, *(+ *, .’+, 2&( 稀 释水 样 )%$* ’-’, (++*, 0-’ ’, .(( ’-, 2"" ’, *(/ *2, 0-+ ’", "’+ (’, 22/ +, -’" ., 2"2 2, *0/ +, 0./ ", -0( ’, *02 (, ’2" /, */* *, -./ /, (* 绝对 偏差 -, +/" -, ---, ---, 0-2 -, ---, "0+ -, 2+* -, ’.0 -, **0 -, ---, ---, ---, ---, ’"-, ---, ’’0 -, ---, ’’ 相对 偏差 -, +’1 -, --1 -,--1 2, (*1 -, --1 -, +01 ", -21 -, +21 *, ..1 -, --1 -, --1 -, --1 -, --1 0, //1 -, --1 ’, -(1 -, --1 ’, -1
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表$ 水样号 $ % + ! ’ 2 5 4
空白实验 ()*’ 值 培养时间 1 天 培养前溶解氧 -. ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ 2# $3 2# $& 2# $& 2# $& 2# $& 2# !! 2# !! ’# %! / 0 $ 培养后溶解氧 -. ’# 4$ ’# +& ’# +& ’# +& ’# +& 2# &% 2# &% !# 2& / 0 $ ()*’ 测定值 -. &# +4 &# 4& &# 4& &# 4& &# 4& &# !% &# !% &# 2! / 0$
( % 接种液的来源、 配比和制备
(* (% 花园土浸出液
取 ()) 5 左右的花园等处植物生长土壤， 加入 ( 6 水， 混合并静置 () 478 后取上层清液供用 * 采集花 园土时要考虑季节和温度* 春秋季阳光充足温和， 适合细菌及微生物繁殖， 可从浅层 / 9 ’ :4 处采集； 夏季 则因温度过高、 太阳光直射的缘故而要在离地表 $ 9 & :4 处采集， 否则细菌及微生物太少； 冬季温度又太 低， 采集的土样要经增菌 能使用 *
! " : $ 土壤浸出液
称 # * 土壤， 加 % +, 无菌水振荡 ! +89； 静置； 取浸出液即可 "
# $ 接种液的预处理
#" !$ 充$ 氧
将混合均匀的接种液倒入相应容量的大烧杯中， 充入适量纯氧或空气， 使接种液中含有接近饱和的溶 解氧 "
# " # $ 培$ 养
在盛接种液的烧杯口盖一块清洁、 湿润的纱布， 置于设定温度为 ’( / ’0- 的生化培养箱中 " 接种液在 培养箱中放置 #% & 后即可用于稀释水的接种 "
水， 移入 ’ --- 63 容量瓶内并稀释至标线， 混合均匀 , 分析样品的同时， 将 (- 63 葡萄糖 4 谷氨酸标准溶 液用同一种接种稀释水稀释至 ’ --- 63， 按测定 )%$* 的步骤操作, 部分控制样品的分析结果列于表 2,
! ! ! !
表2 培养前溶 解氧 ; 67, 3 葡萄糖 4 谷氨酸 葡萄糖 4 谷氨酸 葡萄糖 4 谷氨酸 /, 0( 0, -/ 0, -’