规模化猪场大肠杆菌、沙门氏菌耐药性检测与分析

中国农业大学硕士学位论文结果与分析
结果与分析
１大肠杆菌、沙门氏菌分离鉴定
１．１生化鉴定
从冬季、春季和夏季的３２６份猪粪便中分离鉴定出大肠杆菌１３６株，沙门氏菌６２株（表１）。

其中冬季大肠杆菌１９株，沙门氏菌６株，分离率分别为２１１３％和８％。

春季大肠杆菌７５株。

沙门氏菌１６株．分离率分别为５６．８％和１２．１％。

夏季大肠杆菌４２株、沙门氏菌加株。

分离率分别为３５．３％和３３．６％。

表１冬、毒、夏三季大脯杆菌、涉门氏菌分离
ＴａｂｌｅｌＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＥ，ｃｏｌｌａｎｄＳａ／ｍｏｎｅＨａｉｎｗｉｎｔｅｒ，神ｇａｎｄⅫｍｍｃｒ
墨壁堕婴墨登熊墼盔堕堑堕墼盐圈垦堇塑
２００４．１２７５１９６
２００５．４１３２７５１６
２００５．７１１９４２４０
总计３２６１３６６２
１．２大肠杆菌、沙门氏菌血清型鉴定
囤１丈脑杆酶血清型分布
ＦｉｇｕｒｅｌＤｉｓｔｒｉｌｍｔｌｏａｏｆｓｅｍｔｙｐｅｓ吐最∞“ｉｓｏｌａｔｅｓ商ｎ９１４０·ａｎｔｌｓｅｒａ用１４种大肠杆菌Ｏ单价抗血清０８、０９、０９３、０１３１、０１４９、０１０１、０１３９、０１５７、０１８、０６４、０１０７、０２０、０１４１和０６０对１３６株大肠杆菌进行血请型鉴定。

结果（表２、表３和表４）表明定型大肠杆菌７６株，分属１２种血清型，占分离菌株的５５．９％。

其中０１４１、０１８、０１０７、０２０，９０１３１为优势血清型（图１），占定型株的７６．３％；１４株有自凝现象，占１０．３％；未定型分离株４６株，占３３．８％。

冬季鉴定出４种大肠杆菌血清型，优势血清型是０１４１，占该季定型株的６０％。

春季鉴定出９种血清型，ＤＡ０１８和０２０为优势血清型，占该季定型株的３８．９％和２２．２％；０８和０１５７Ｙ，ｊ该季独有的血清型。

图２大肠杆菌肠毒素基因琼脂糖凝胶电泳
Ｍ：ｌ舶ｂｐｍａｒｋｅｒ，肠毒索基因：Ｊ舻，训和ｓｔ２；Ｎ：阴性对照
Ｆｉｇｕｍ２Ａｇｅｒｅｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｎｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｃｎｔｃｒｏｔｏｘｉｎｇｅｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓ
Ｍ：１００ｂｐｍａｒｋｅｒ；ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｇｅｎｅｓ：细，ｓｔ／ａｎｄｓｔ２；Ｎ：ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｍｒｏｌ
３大肠杆菌、沙门氏菌耐药性分析
３．１大肠杆菌耐药性分析
采用微量肉汤稀释法分析不同季节１３６株大肠杆菌分离株的耐药性。

药敏试验结果（图３、图４－１、图４－２）表明大肠杆菌分离株最少的同时耐４种抗生素，最多的同时耐１８种抗生素，分别占大肠杆菌分离株的２．２％和０．７％，同时耐１０种以上（包括１０种）抗生素的大肠杆菌占５１．３％。

不同季节耐药谱组成不同。

冬季人肠杆菌１９株共有９种耐药谱，最少的同时耐７种抗生素，最多的可同时耐１６种抗生素，分别占冬季分离株的５．２％和１５．８％；同时耐１０种以上抗生素的分离株１４株，占７３．７％。

春季人肠杆菌７５株共有１５种耐药谱，最少的同时耐４种抗生素，最多同时耐１８种抗生素，均占春季分离株的１．３％；有２６株同时耐１０种以上抗生素，占３４．７％。

夏季大肠杆菌４２株，共有１４种耐药谱，最少同时耐４种药，最多同时耐１７种药，分别占２．４％和４．８％；３３株为１０耐以上菌株，占７８．６％。

图３大肠杆菌分离株对２０种抗生素的耐药谱
Ｒ表示耐药
３Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｉｎｌ３６Ｅ．ｃｏ／／ｉｓｏｌａｔｅｓ
Ｆｉｇｕｒｅ
Ｒ：Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
图４－１不同季节大肠杆菌分离株对２０种抗生素的耐药谱
Ｒ袭示耐药
ｓＰ．ａｓｏｍ
Ｆｉｇｍｅ４·ｌＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｉｎ１３６Ｅ．ｃｏｌｉｉｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅａｔ
Ｒ：Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
图４．２不同季节大肠杆菌分离株对２０种抗生素的耐药谱
Ｒ表示耐药
Ｆｉｇｕｒｅ４·２Ａｎｆｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｉｎｌ３６Ｅ．ｃｏｌｉｉｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｆ，ａｓｏｎｓ
Ｒ：ＲｅｓｉｓｔＩｕｆｌｇｅ
大肠杆菌分离株对土霉素、四环素、磺胺嘧啶、金霉素、强力霉素和阿莫西林耐药率依次为９９．Ｏ％，９９．Ｏ％，９８％，９２．４％，８９．４％和８７．９％（图６）。

所有大肠杆菌分离株都对头孢曲松敏感。

其他抗生素的耐药率在从４．４％Ｎ６４．７％左右（图６）。

冬季分离株对土霉素、四环素和磺胺嘧啶完全耐药，春季分离株对士霉素和四环素完全耐药（图５－１、图５．２）。

冬季分离株对安普霉素、环丙沙星、多粘菌素Ｅ、恩诺沙星、新霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、沙拉沙星和链霉素比春季和夏季分离株耐药率高。

田５－ｔ不同季节大肠杆菌分离株对２０种抗生素的耐药率
＾ＭＯ；阿莫西林ＡＰＲ：安瞢霉素ｃＥｎ头孢曲松ＣＨＬ金霉素ｃ口ｔ环丙沙星ＤⅡ：二氟抄星ＣＯＬＩ多牯菌素ＤＯＸ，强力霉紊ＥＮＲｔ
愚诺沙星ＦＬＯ，氟苯尼考
Ｆｉｇｕｒｅ５—１ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＥｃｏｌｉｉｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｃａｓｏＰ，ｓｔ０２０ｄｒａｇｓ
ＡＭＯ＇．Ａｒ加■ｏｉｌｔｈ，，Ａ］ＰＲ：＾一Ⅱ岫，ｃ卧：ｏ师抽ｍ～ｃｍ二ｆｆａｈ：ｘｔｅｔｍｃｙｄｉｎｃ，（邛：ｃｉ即Ⅱ嵋－ｍ，ＤＩＦ：Ｄｉ／ｌｏｎｃｉ－，ＣＯＬ：Ｃｏｌｉｓｌｉ“ＤＯｘ：
Ｄｏｘｙｃｙｅｆｉｎｅ．日蛆：Ｅｍｏｆｌｏｘａｃｉｎ．ＦＬＯ：ＦＩｏｒｆｅｎｉｃｏｌ
图５＿２不同季节大肠杆菌分离株对２０种抗生素的耐药率
０ＢＮｔ庆太霉素Ｋ＾Ｎｔ卡郅霉素ＮＥＯ：斯Ｉ翥ＮＯＲ：诺氟抄星ＯＦＬ：氧氟涉星ＯＸＹ：土霉素
ｓ＾鼬涉拉涉星ｓＴＲ一链霉素ＳＵＬｚ磺胺嘧嚏ｍ四环素
Ｆｉ邸＂５·２ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＥｃｏｉｌｉｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｃｓｓｏｎｓｔ０２０ｄｒｕｇｓ
ＧＥＮ：Ｃ－ｅｎｔａｍｙｃｉｎ，ｌ￡＾Ｎ：Ｋ“ｌａｍｙｃｉｎ，ＮＢＯ：Ｎｅｏｍｙｃｉｎ．ＮＯＲ：Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ。

０ＦＬ：Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ，Ｏ）ｆｔＯｘＷｅｔｒａｃｙｃｆｉｎｅ，ＳＡＲ：Ｓａｒａｆｌｏｘａｃｉｎ，弧：ＳｔｚｅｐｔｏｍｙｃｉＡ，ＳＯＬ：Ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ．唧：ｎｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ
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图６大肠杆菌分离株对２０种抗生素的耐药率
ＡＭＯ；阿真西林ＡＰＲ：安普霉素四：头孢曲梧ＣＨＬ，盘霉素ＣＩＰ；环丙沙星ＤＩＦ：二氟沙星ＣＯＬｚ多牯菌素ＤＯｘ：强力霉素ＥＮｍ恩诺沙星ＦＬＯ：氟雀佗考０ＥＮｔ庆人罐寨ＫＡＮ；卡那辫素ＮＥＯｉ新撵臻ＮＯＲ：嘴氟沙蚺ＯＦＬ·轼氟涉蛀ＯＸＹ：上霉素ＳＡＲ：沙批沙址ｓＴＲ：链蝣崇
ＳＵＬｔ磺胺嘧嚏１ｔ丌；四环素
Ｆｉｇｕｒｃ６ＡｎｔｉｍｉｃＴｏｂｊａｌ他ｓｉｓｔ粕∞ｏｆＥｃｏｌｉｉｓｏｌａｒｃｓｔｏ２０ｄｒｕｇｓ
ＡＭＯ：Ａｍｏｘｉｃｉｆｌｉ，．ＡＰＲ：Ａｐｒａｍｙｃｉｎ，（】三Ｆ：ｃｃｍｉａ柚ｎ‘ＣＨＬ：Ｃｌｆｌｏｔｌｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｔｅ，Ｃｍ：Ｃｉｐｍｆｌｏｘａｃｉｎ．ＤＩＦ：Ｄｉｆｌｏｘａｃ：ｉｎ，ＣＯＬ：Ｃｏｌｉｓｄｎ，ＤＯＸ：Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉ吐．
ＥＮＲ：Ｅｎｒｏｆｌｏｘｌｃｉｎ．ＦＬＯ；ｎｏｒｆｅｎｋｏｌＧＥＮ：Ｇｅｎｔａｍｙｃｌｎ，ＫＡＹ：Ｋａｎｍｙｃｉａ．ＮＥ０：Ｎｅｏｍｙｃｉｎ，ＮＯＲ：：Ｎｍｆｌｏｘａｅｌｎ．ＯＦＬ：Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ＯＸＹ：Ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｌｎｅ，ＳＡＲ：Ｓａｒａｆｌｏｘａｃｉｎ，ＳＴＲ：Ｓｌｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ＳＵＬ：Ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ，珊Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ
３．２沙门氏菌耐药性分析
６２株沙门氏菌药敏试验结果（图７、图８－１、图８－２）表明沙门氏菌分离株最少同时耐２种抗生素，最多同时耐１８种抗生素，分别１１ｉ沙ｒＪ氏苗分离株的１．６％和３＋２％，同时耐１０种以上（包括加种）抗生素的占６１．３％。

不同季节分离株的耐药谱组成不同。

冬季６株沙门氏菌有５种耐药谱．最少的同时耐８种抗生素，最多的可同时耐１６种抗生素，分别占冬季分离株的１．７％和３３．３％；同时耐１０种以上抗生素的分离株４株，占６６．７％。

春季沙门氏菌１６株共有９种耐药谱，最少的同时耐２种抗生素，最多同时耐１６种抗生素，分别占春季分离株的６．３％和１８．８％；有９株同时耐１０种以上抗生素，占５６．３％。

夏季沙门氏菌加株，共有ｕ种耐药谱，最少同时耐５种药，
最多同时耐１８种药，分别占２．５％和５％；２５株为１０耐以上菌株，占６２．５％。

图７沙门氏菌分离株对２０种抗生素的耐药谱
Ｒ表示耐药
Ｆｉｇｌｌ∞７Ａｎｔｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｉｎ６２Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｉｓｏｌａｔｅｓ
Ｒ：Ｒｅｓｉｓｔａｎｅｅ
图８—１不同季节沙门氏菌分离株对２０种抗生素的耐药谱
Ｒ表示耐药
８－１Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｉｎ６２ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｉｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｅａｓｏｎｓＦｉｇｕｒｅ
Ｒ：Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
中国农业大学硕士学位论文结果与分析
图８－２不同季节沙门氏菌分离株对２０种抗生素的耐药谱
Ｒ表示耐药
Ｆｉｇｕ＂８－２Ａｎｔｈｎｉｃｒｏｂｉａ］ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａＭｅｍｉｎ６２Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｉｓｏ］ａｔｃｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｅａｓｏｎｓ
Ｒ：Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
沙门氏菌分离株对土霉素、四环素和磺胺嘧啶的耐药率为９８．４％，对金霉素、强力霉素和阿莫西林依次为８８．７％，８２．３％和９１．９％。

所有沙门氏菌分离株都对头孢曲松敏感。

其他抗生索的耐药率从１ｌ＿３％到８０％左右（图９）。

冬季分离株对阿莫西林、金霉素、环丙沙星、强力霉素、恩诺沙星、土霉素、四环素和磺胺嘧啶完全耐药。

春季分离株阿莫西林完全耐药。

夏季分离株对强力霉素、土霉素、磺胺嘧啶和四环素完全耐药。

沙门氏菌冬季分离株对安普霉素、环丙沙星、多粘菌素Ｅ、恩诺沙星、庆大霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、沙拉沙星和链霉素的耐药率比春季和／或夏季的高（图１０．１、图１０－２）。

图９沙门氏蓠分离株对２０种抗生素的耐药率
ＡＭＯ：阿甍西林ＡＰＲ；安普霉翥ＣＥＦ：头孢曲｛ｊ｝ＣＩｆｌ．金毒素ｃ口：环丙涉星ＤＩＦ：二氟沙星ＣＯＬｔ多粘茼紊ＤＯＸＩ强力稚索ＥＮＲ：恩诺沙星ＦＬＯ·氟苯尼考ＧＥＮ；庆大霉素ＫＡＮ；ｐ那毒素眦０：新霉隶ＮＯＲ；诺氟涉星ＯＦＬ：氧氟沙星ＯＸＹ：土霉索ＳＡＲ：沙拉沙胜ＳＴＲ：链霉索
ＳＵＬ一黛歧嘧啶ＴＥＴｔ四环煮
Ｆｉｇｕｒｅ９Ａｎｔｉｍｉｃｆｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆ＆抽ｏｎｅＵａｉｓｏｌａ啪ｔ０２０ｄｒａｇｓ
ＡＭＯ：Ａｍｏｘｉｄｏｉｎ，ＡＰＲ：Ａｐｔａｍｙｄｎ，ＣＥＦ：＆ｈｄｍｘｏｎｅ．∞Ｃｈｌｏｒｔｃｔｒｔｃｙｃｌｉｎｅ．口：Ｃｉｐｍｆｌｏｘ“ｉｎ，ＤＩＦ：Ｏｉｆｌｏｘａｃｉｎ，ＣＯＬ：Ｃｏｌｉｓｔｉｎ，ＤＯＸ：Ｄａｘｙｃｙｃｌｉｎｅ，ＥＮＲ：Ｅａｍｆｌｏ．．ｕｔ血ＦＩ．ＯＩＦｌｏｒｆｅｎｉｃｅｌＯＥＮ：Ｇ曲ｔａｍｙｃｉｎ，ＫＡＮ：Ｋａｎａｍｙｃｉｎ，ＮＥ０：Ｎｅｏｍｙｃｉｎ，ＮＯＲ：Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｌｎ．ＯＦＬ：Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ＯＸＹ：Ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ．ＳＡＲ：Ｓａｎａｆｌｏｘａｃｉ玛ＳＴＲ：Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ＳＵｋＳｕｌｆａｄｌａｚｉｎｃ，ＴＥＬＴｃ［ｔａｃｙｃｌｉｎｅ
图１０－１不同季节沙ｎ氏菌分离株对２０种抗生素的耐药率
ＡＭＯ：阿莫西林ＡＰＲ：安普霉素ＣＥＦ：头孢曲梧ＣＨＬ：金霉素ｃＩＰ！环丙沙星ＤＩＦ：二二氟沙星
㈣１．：多粘菌素ＤＯＸ：强力霉素Ｅ帅：恩诺沙星ＦＬＯ：氟苯尼考
Ｆｉｇｕｒｅｌ０．１Ａｎｔｉｍｌｃ∞ｂｉａｌｌｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｊｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｉｅｒｅｎｔｓｅａｓｏｎｓｔ０２０ｄｒａｇｓ
Ｎｏｔｅ：ＡＭＯ：Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｌｎ，ＡＰＲ：舢ｎｍ咖ＣＥＦ：Ｃｃｆｔｒｉａｘｏｎｅ，∞Ｃｈｌｏｒｔｅｔｒａｃｙｃｆｉｎｅ，ｃ口：Ｃｉｐｍｆｌｏｘａｃｉａ，ＤＩＦ：Ｄｉｆｌｏｘａｃｉｎ．ＣＯＬＣｏ．ｔｉｎ．ＤＯＸ：Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ，ＥＮＲ：Ｅｎｒｏｆｌｏｘ∞ｉｎ，ＦＬＯ：Ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ
围１０－２不同季节沙门氏菌分离株对２０种抗生素的耐药率
ＧＥＮ：庆大霉粜ＩＯＮ｝卡那霉素ＮＥＯ：新霉素ＮＯＲ：诺氟沙星ＯＦＬｚ氧氟沙星ＯＸＹ：土霉素
ＳＡＲ：沙拉沙星ＳＴＲ：链霉素ｓｕＬ：磺胺嘧啶ＴＥＴ：四环素
Ｆｉｇｕｒｅｌ０．２Ａｎｔｉｍｉｃｔｏｂｉａｌｒｃｓｌｓｔａｎｃｅｏｆ＆拥ｏｎｅｌｌａｉｓｏｌａｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｅａｓｏｎｓｔｏ２０ｄｒｕｇｓ
Ｎ№：ＧＥＮ：Ｇｅｎｌｗｙｃｉｎ。

ＫＡＮ：ＫａｎｍｙｄⅡ。

ＮＥＯ：Ｎｍｙｃｉｎ，ＮＯＲ：Ｎｏｒｔｌｏｘ血，ＯＦＬ：Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ，０ｎＯｘｙｔｃｔｍｃ３，ｃｌｉｎｅ，ＳＡＲ：Ｓａｒａｆｌｏｘａｃｉｎ。

ＳＴＲ：ＳＳｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ＳＵｋＳｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ，骶Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ
中国农业大学硕士学位论文结果与分析
囤”大肠杆菌、沙门氏菌对６种瞳诺酮类药物的耐药谱
Ｒ：耐药
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓＦｉｇｕｒｅ１１ＡｎＲｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐａｔｔｅｒｎｏｆＥ．ｃｏｌｉａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｉｓｏｌａｔｅｓｔｏｓｉｘ
Ｒ：Ｒｅｓｉｓｔａａｃｅ
对于６种喹诺酮类抗生素，药敏试验结果（图１１）表明：火肠杆菌敏感株有３９株，ｒ与所有分离株的２８．７％；６０株２耐以上菌株。

占“．１％；同时耐６种喹诺酮类抗生素的大肠杆菌有４１株，占３０．１％。

敏感沙门氏菌株１３株，占分离株的２１．０％：２耐以上菌株３０株，占４８．４％；同时耐６种喹诺酮类抗生索的有１５株，占２４．２％。

围１２大肠杆菌、沙门氏菌对６种瞳诺酮类药物耐药率
ＣＩＰ：环丙沙星ＤＩＦ；二氟沙星ＥＮＲ：思诺沙星ＮＯＲ：诺氟沙星ＯＦＬ：氧氟沙星ｓＡＲ：涉拉沙星
Ｆｉｇｕｒｅｌ２ＡｎｆｉｍｉｅｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＥ．ｃｏｉｌｓａｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔ０６ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ
ＣＩＰ：Ｃｉｐｔｏｆｌｏｘａｃｉｎ，Ｄ巧：Ｄｉｆｌｏｘａｅｉｎ，ＥⅡ哝：Ｅｕｒｏｆｌｏｘａｃｌｎ。

ＮＯＲ：Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ，ＯＦＬ：Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ＳＡＲ：Ｓａｒａｆｌｏｘａｃｉｎ喹诺酮类抗生素耐药率结果（图１２）表明１３６株大肠杆菌的二氟沙星、沙拉沙星、环丙沙星、
诺氟沙星、恩诺沙星和氧氟沙星的耐药率分别为６７．６％。

４２．６％，３８．２％，３５．３％，３３．８％和３３．８％。

６２株沙门氏菌的二氟沙星、沙拉沙星、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和氧氟沙星的耐药率分别为７２．６％。

４５．２％，３７．１％，２４．２％，３７．１％和３０．６％。

３．３耐喹诺酮菌株ＧｙｒＡ基因ＱＲＤＲ和１型整合子检测与分析
应用ＰＣＲ法扩增了３６株不同喹诺酮类抗生素耐药水平的大肠杆菌和沙门氏菌的∥叫ＱＲＤＲ。

每个被检菌株都得到单一的目的片段（图１３和图１４），片段长１９１ｂｐ。

扩增序列用ＤＮＡＭＡＮ分析软什推导氨基酸序列（图１５和图１６）。

以大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２ＱＲＤＲ序列为参考序列。

图１３大肠杆菌ｊｙｒＡ口舳Ｒ琼脂糖凝胶电泳
ｚ分离株ＰＣＲ扩增产物，１７：阴性对照
１：１００ｂｐｍａｒｋｅｒ，２－１６
Ｆｉｇｕｒｅ１３Ａｇａｒｏｓ。

ｇｅｌｃｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆＱＲＤＲｏｆｇｙｒＡｆａｏｍＥ，ｃｏｌｉ
Ｌａｎｅｌ：１００ｂｐｍａｒｋｅｒ，ｌａｎｅ２－１６：ｐｍｄｅｃｔｓｏｆＥ，ｃｏｌｉｉｓｏｌａｔｅｓ，ｌⅫｃ１７：ｎｃｓ－ｔｉｖｅｅｃｍｒｏｌ
围１４沙门氏菌ｇｙｒＡ０ＲＤＲ琼脂糖凝腔电泳
１：１∞ｂｐｍｕｋｅＩ．１２：阴性对照，其余为分离株扩增产物
Ｆｉｇｕｒｅ１４Ａｇａｒｏ∞ｇｅｌｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｃｓｉｓｏｆＱＲＤＲｏｆ∥一ｆｒｏｍＳａ／ｍｏｎｅ／／ａ
Ｉ．∞ｅ１：１００ｂｐｍｚｒｋｅｒ，Ｉｎｅｌ２：ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒ０１．ｏｔｈｅｒｓ：ｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＳａ／ｍｏｎｅｌ／ａｉｓｏｌａｔｅｓ
氨基酸序列分析结果表明（图１５，表６），敏感大肠杆菌无氨基酸变异。

耐１种、２种和３种喹诺酮类药物的人肠杆菌第８３位发生氨基酸突变，突变方式是丝氨酸（ｓ）被亮氨酸（Ｌ）取代，８７位氨基酸未发生改变。

同时耐４种、５种和６种喹诺酮类抗生素的大肠杆菌同时发ｔｔ８３、８７位氨基酸突变，突变方式是Ｓｅｒ８３Ｌｅｕ，１株４耐菌株８７位由天冬氨酸（Ｄ）变为甘氨酸（Ｇ）外，其余菌株变为天冬酰胺（Ｎ）。

中国农业大学硕士学位论文结果与分析
ＡＢ
图”大肠杆菌、沙门氏蕾１型整合于产物琼脂糖凝胶电泳
＾：大脯杆菌Ｔ型整合子璩脯糖凝腔电泳；Ｂ：沙门氏菌１型整台予璩精糖凝腔电泳
‰１００ｂｐｍｒｋｅｒ．Ｎ：阻性对照ｉ１可：分离株１型整合子产栩
Ｆｉｂｒｅ１７Ａｇａｍ％铲ｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏ础ｏｆｄａ鹊１蛐ｃｇ∞ｎｓ矗ｏｍＥｃ０矗鲫ｄ舶蛔叫曲ｉ∞ｌ拙
Ａ：ｉｃｓｕｌｔｓｏｆＥ∞Ｈ：Ｂ：螂ｍｂ０ｆＳａ／ｍｏｎｅｌ如．
袭７大肠杆菌、沙门氏菌１型整合子检测
ｎｂｌｃ７Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｄａｓｓ１劬ｃ鲫ｎｉｌＩｃｏｌｉ∞ｄ血抽删ｊ口ｊｓｏｌａｔｅｓ
根据１型整合子两端保守序列，设计引物，应用ＰＣＲ法检测１３６株大肠杆菌和６２株沙门氏菌的１型接合子。

结果（表７）表明４２株大肠杆菌和３２株沙门氏菌含有１型整合子，分别占各自分离株的３０．９％和５１．６％。

ＰＣＲ产物琼脂糖凝胶电泳（图１７）显示大肠杆菌分离株中有２种１型整合子，片段长度分别为１．２妨和１．７ｋｂ。

沙门氏菌有３种１型整合子，片段长度分别为１ｋｂ、１．７ｋｂ和２曲。

１型整合子核苷酸序列测定和基因分析结果（表８）表明大肠杆菌１．２ｋｂ的１型整合子中包含一个∞ｄＡ２基因盒，１．７ｋｂ的１型整合子中包含ａｈＭ２、口口ｄｄ基因盒。

沙门氏菌１ｋｂ的１型整合子中有∞谢基因盒，１．７ｋｂ整合子中有ｄｈｐｌ２，２协的１型整合子中也包含一个口口谢基因盒。

所有整合子中都没有喹诺酮耐药基因ｑｎｒ。