VARIANT IIβ-地贫试剂

结果分析
HbA2，的报告范围在1—13%之间，而HbF的报 告范围在1% 到40%之间。该结果同目前经济可 行的方法有很好的一致性。在为了与已确立的范 围保持一致性，低于报告范围的HbA2 和HbF值 应被报为小于1.0%，超出范围的HbA2 和HbF值 应被分别报为大于13%和大于40%。 糖尿病标本会有典型的P2峰升高。另外可能还有 “未知X”的峰出现在HbF 和P2之间。如果此峰面 积大于HbF则它可能会被误认为HbF ，尤其在 HbF窗口中出现另外附加峰时更应注意。
将引物，空白（DI水），校准液和对照液放在VARIANT II的样本仓。 1.5ml样本管应使用1.5ml载管。载管上应有标记样本类型的条形码， 其条码类型有：引物，空白（DI水），校准液和对照液。 按如下要求在样本盘中加入试剂和病人样本。 1 引物 2 空白（去离子水） 3 空白（去离子水） 4 Hb A2/F校准液 5 正常对照1 6 正常对照2 7 to N* 病人血标本 N + 1 正常对照1 N + 2 正常对照2 N+3 终止管
样本测试
选择CDM中的Run/Worklist屏幕来启动机器。 按开始键启动工作菜单。详细信息参看手 册第4.0章节。 每次分析校准物结束后，都将自动计算出 A2和F的反应因子，该因子将用于计算所有 后面样本的A2和F面积的百分比值
结果分析
结果分析
在对结果进行解释和说明时应遵循如下原则： HbA2 的滞留时间是3.65 ± 0.10，HbA2 或HbF 的反应因子需在0.7—1.3之间的范围内。 HbA2 的正常范围一般通常占全部血红蛋白的 1.75%到3.25%，而ß-海洋性贫血的范围则在 4.0% 到 9.0%之间。 通常HbF的正常范围一般占全部血红蛋白的不到 1%，杂合子和纯合子状态的ß-海洋性贫血的病人 其HbF可分别达到1-5%和80-100%。 每例分析的全面积波动在1,000,000 到3,000,000 µv.秒之间。若超出此范围产生的结果则不应2一同被洗脱。 样本 中HbA2 大于10%时应检测是否有其它类型血红 蛋白干扰的可能。 血红蛋白Barts 和 H在开始整合前被洗脱。 分析结果的的总面积在1,000,000到 3,000,000µvolt•秒之间，超出此范围可能报告不 出结果。 糖尿病标本会有典型的P2峰升高。另外可能还有 “未知X”的峰出现在HbF 和P2之间。如果此峰面 积大于HbF,则它可能会被误认为HbF ，尤其在 HbF窗口中出现另外附加峰时更应注意。
期望值
在使用本程序双重测定时，使用了68名正 常的加州男女样本。血红蛋白A2 的正常值 是2.8%. 其 95%可信区间是2.3% 到3.3%。 在确定血红蛋白F时双重测定使用了46例加 州正常男女的样本，其均值是<1.0%，95% 可信区间是<1.0%。 每个实验室均应根据自己的情况和贫血类 型确定自己的范围
试剂准备
Hb A2/F 校准液 在每安瓶Hb A2/F校准液中加入10ml校准液 稀释液以对其进行配置。 轻摇以使之彻底溶解和混合。 配置好的Hb A2/F 校准液15-30 °C下静置 10分钟。在2-8 °C下储存可保存10天。若 药片发黄或瓶体破裂，请勿使用。 取1ml校准液于贴好标签的管中
样本收集
将至少5ul全血样本收集后应放置于空的含 EDTA作为抗凝剂的真空管中，并充分混合。 样本在2-8 °C可保存7天。 如果样本管形状或型号不规则或样本少于 500ul，则样本应进行预稀释。取1ml预稀 释液加入1.5ml样本管，随后加入5ul全血， 盖好盖子轻摇使之混合均匀，然后将管子 放入1.5ml样本载管
更换新的分析柱
所有的新柱（没使用过的）安装后都要进 行其加热器温度调节和双灌注，此后其使 用不需再调节，在每次运行前都应进行灌 注。 将分析槽放入其槽架，然后将槽架放入加 热仓后关闭锁定之。
更换新的分析柱
样品的排列 顺序 样本 全血引物 去离子水 A2/F校准液 终止管 管号 vial 1 and 2 vial 3 and 4 vial 5 and 6 vial 7
试剂准备
血红蛋白引物 在每次开始分析之前，使用引物校定分析 槽。 加入1ml去离子水配置引物。 轻摇使之溶解和充分混合。 在15-30°C 下放置10分钟。
质控物准备
在每组病人样本的开头和结尾都要运行测 定一套正常(HbF 1-2%, HbA2 1.8-3.2%)和 异常(HbF 5-10%, HbA2 4-6%)对照液。
更换新的分析柱
选择CDM中的Run/Worklist屏幕来启动机器。 按开始键启动工作菜单。 运行结束后，注意第二个校准液管（6号管） 的血红蛋白HbA2的滞留时间。最佳时间是 3.65分钟（参考试剂盒中分析柱说明书）。 若HbA2的滞留时间测量值的变化幅度超过 0.05分钟，建议进行温度调节
样本测试
期望值
色谱图例
校准品
色谱图例
正常值质控
色谱图例
高值质控
色谱图例
血红蛋白S峰， 镰形红细胞贫血病 (AS)
色谱图例
血红蛋白E 峰 (AE)
色谱图例
ß-地贫的峰值 特点
一些问题
本程序可以确定血红蛋白A2 和F的面积百分比，且可以定 性分离正常的和常见的异常血红蛋白。 其它少见的血红 蛋白可能在已知的血红蛋白洗脱时同时被洗脱。为了确定 特殊的血红蛋白，有时需对其链进行分析。 增高的HbA2 有可能在伴有缺铁贫血时被掩盖。 实验室在对ß-海洋性贫血和HbA2 确定时还应结合家族史 和其它实验室检查结果，包括血清铁，血铁结合力，红细 胞形态，红细胞压积，平均红细胞体积（MCV）等11, 12。 成分很少的HbS 和其它类型的血红蛋白在HbA2被洗脱后 也一起被洗脱下来，这可能会造成HbA2假性升高。
数据更新
在SETUP/Test屏幕上有升级按钮，可以从 光盘上升级所许的全部参数信息。该光盘 放在试剂盒内。 下载升级参数，需在SETUP/Test屏幕上按 升级按钮，将光盘放入光驱，随后选择合 适光驱后按OK。 升级后，检查SETUP/Sample 中的 Patient\Calibrator\QC的设定值是否与使用 的试剂一致
VARIANT IIβ-地贫试剂
操作规程
试剂盒组成
1号缓冲液 2瓶 每瓶1900ml磷酸钠缓冲液，内含<0.1%叠氮 化钠作为防腐剂，在15-30℃保存。 2号缓冲液。 1瓶 每瓶1800ml磷酸钠缓冲液，内含<0.1%叠氮化 钠作为防腐剂，在15-30℃保存。 冲洗液/细胞裂解剂 2瓶 每瓶1800ml去离子水，pH值为6.6内含<0.05% 叠氮化钠作为防腐剂，在15-30℃保存。 分析柱 2个 规格为4.6mm ID *30mm。每个可做250人份。 在15-30℃保存。
试剂盒组成
Hb A2/F校准液稀释液试剂 1盒 6安瓶嗜脂红细胞稀释液，含庆大霉素，妥布霉素和 EDTA作为防腐剂，配置后每管容积为10ml 稀释液瓶每瓶含100 mL去离子水，含<0.05%叠氮化钠 作为防腐剂，在2-8℃保存。 引物 3盒 每盒10安瓶嗜脂红细胞稀释液，含庆大霉素，妥布 霉素和EDTA作为防腐剂，配置后每管容积为1.0ml ，28℃保存。 样本管 100个 1.5 mL聚丙烯样本管 CD-R 含本程序的参数设置