丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化C57小鼠血脂水平的影响观察

2020年12月第10卷第23期
·基础医学·
丹参酮IIA对动脉粥样硬化C57小鼠血脂水平的影响观察
罗炬辉1 陈友权2 何德全2 龙信聪3
1.广州市白云区第二人民医院重症医学科，广东广州 510450；
2.广州医科大学附属第三医院
心内科，广东广州 510150；3.广州市白云区第二人民医院内科，广东广州 510450
[摘要] 目的 观察丹参酮IIA 对动脉粥样硬化C57小鼠血脂水平的影响。

方法 研究时间为2019年4 ~ 10月，选取C57小鼠10只为空白对照组；将MCMV，感染apoE-/-敲除，已出现动脉粥样硬化的小鼠20只，分为模型组与丹参酮组，每组10只。

对照组进行正常喂养；模型组腹腔注射生理盐水；丹参酮组给予丹参酮IIA。

观察三组大鼠巨噬细胞、T 细胞等炎症因子的含量、血脂水平。

结果 8周后，模型组的巨噬细胞、T 细胞、炎症细胞的含量均高于对照组与丹参酮组，差异有统计学意义（P ＜0.05）；对照组与丹参酮组的巨噬细胞、T 细胞及炎症细胞含量比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；模型组的LDL-C、TC、TG 高于对照组与丹参酮组，模型组的HDL-C 均低于对照组与丹参酮组，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；对照组与丹参酮组的LDL-C、TC、TG 含量比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。

结论 丹参酮IIA 可以减轻炎症反应，提高免疫能力，并改善动脉粥样硬化C57小鼠血脂水平。

[关键词]丹参酮IIA；动脉粥样硬化；C57小鼠；血脂水平
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2020）23-38-04
An observation of the effect of tanshinone IIA on the blood lipid
level of C57 mice with atherosclerosis
LUO Juhui 1
CHEN Youquan 2
HE Dequan 2
LONG Xincong
3
1. Intensive Care Unit, the Second People's Hospital of Baiyun District, Guangdong, Guangzhou 510450, China;
2. Department of Cardiology,the Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangdong, Guangzhou 510150, China;
3. Department of Internal Medicine, the Second People's Hospital of Baiyun District, Guangdong, Guangzhou 510450, China
[Abstract] Objective To observe the effect of tanshinone IIA on the blood lipid level of C57 mice with atherosclerosis. Methods From April 2019 to October 2019, a total of 10 C57 mice were selected as the blank control group. A total of 20 apoE-/- knockout mice infected with MCMV and having atherosclerosis were divided into the model group and the tanshinone group, with 10 mice in each group. The control group received normal feeding. The model group was injected normal saline intraperitoneally. The tanshinone group was given tanshinone IIA. The contents of inflammatory factors such as macrophages and T cells and the blood lipid level in the three groups of rats were observed. Results 8w later, the contents of macrophages, T cells and inflammatory cells in the model group were higher than those in the control group and the tanshinone group, with statistically significant differences (P ＜0.05). There was no statistically significant difference in the contents of macrophages, T cells and inflammatory cells between the control group and the tanshinone group (P ＞0.05). The LDL-C, TC and TG of the model group were higher than those of the control group and the tanshinone group, and the HDL-C of the model group was lower than that in both the control group and the tanshinone group, with statistically significant differences in all of these comparisons (P ＜0.05). There was no statistically significant difference in LDL-C, TC and TG contents between the control group and the tanshinone group (P ＞0.05). Conclusion Tanshinone IIA can reduce inflammatory reactions, improve immunity and ameliorate the blood lipid level inC57 mice with atherosclerosis.
[Key words] Tanshinone IIA; Atherosclerosis; C57 mice; Blood lipid level
[基金项目]医疗卫生健康事业发展专项资金（传承发展中医药事业）广东省中医药局中医药科研项目（20191211）。

动脉粥样硬化是动脉血管发生炎症后出现的一种疾病，近年来临床上较为常见，动脉粥样硬化
会发生血管内皮障碍、炎症因子激活后一系列炎症反应、血脂脂质混乱，形成血栓等[1]，是很多心脑血管疾病的基础疾病，如缺血性脑卒中、冠心病、心力衰竭等一系列疾病。

丹参酮IIA 是一种近年来较为
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热点的丹参酮型的二萜类化合物，是丹参中较为重要的脂溶成分[2]，主要提取于丹参，有研究显示丹参酮IIA，具有优越的生理活性，在抗炎及抑菌、清除自由基、抗氧化方面保护肝脏，并具有改善功能、抗癌、改善血液循环等功效，其对心脑血管的作用为目前临床研究热点[3-4]。

因此，本研究就丹参酮IIA 对动脉粥样硬化C57小鼠血脂水平影响进行探究，如下。

1 材料与方法1.1 实验动物
雄性C57大鼠30只，体重180～220g，无任何头部颈部淤血等外伤。

购于中国科学院上海斯莱克实验动物有限公司，动物许可证号：XYZW（粤）2017-2021。

大鼠分笼饲养、自由摄食饮水。

实验研究时间为2019年4～10月，实验均经我院医学伦理委员会审核通过，本实验过程严格按照国际疼痛研究协会（IASP）关于进行动物疼痛实验的纲要实施完成[5]。

采用随机数字表法将大鼠分3组，每组10只。

1.2 药品、试剂及仪器
丹参酮IIA（上海上药第一生化，批号：1903104），
ELISA 试剂盒（美国BOSTER 公司，货号：EK0411、A00101、EK0527），逆转录试剂盒购自（Promega 公司，货号：A5001），TB GreenTMPremix ExTaq Ⅱ试剂盒购自（TakaRa 公司，货号：RR820AA），PVDF 膜（Millipore 公司，货号：IPVH00010），免疫组化试剂盒（北京中衫金桥，货号：SPN-9001）。

1.3 实验分组
对照组：正常喂养，不进行动脉粥样硬化造模、不给予丹参酮IIA；模型组：进行动脉粥样硬化造模但不给予丹参酮IIA；丹参酮组：进行动脉粥样硬化造模并给予丹参酮IIA。

于造模后第7天，对照组正常喂养8周；模型组：腹腔注射生理盐水，15mg/kg，1次/d，共8周；丹参酮组给予丹参酮IIA，腹腔注射 15mg/kg，1次/d，共8周。

所有小鼠喂养8周后处死取材。

1.4 大鼠动脉粥样硬化模型的制作[6]
对敲除apoE-/-（载脂蛋白E 基因）的20只小鼠注射低剂量（2×10PFU）d 的感染MCMV（低剂量巨细胞病毒），在慢性潜伏感染阶段，MCMV 感染可以明显加重Apoe（载脂蛋白E）基因缺陷小鼠主动脉粥样硬化病变，并使重度动脉粥样硬化病变提前出现。

随机分为模型组与丹参酮组，各10只。

造模第7天随机抽取模型组与丹参酮组大鼠，于眼眦取血后检测血脂水平以判断造模成功。

1.5 测定指标 
比较8周后，三组炎症因子水平包含巨噬细胞
包含白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-ɑ）、CD3，成熟T 淋巴细胞表面标志（T 细胞）含量、血脂水平包含高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）、血清总胆固醇（TC）。

1.6 统计学方法
研究数据采用 SPSS22.0统计学软件进行分析，多组间及同组不同时间点的计量资料用（x ±s ）表示，采用方差分析，两两比较采用SNK-q 进行检验，计数资料采用χ2检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 三组患者炎症因子水平比较
与对照组比较，丹参酮组、模型组的炎症因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6 水平均明显升高，差异有统计学意义（P ＜0.05），见表1。

表1 三组患者炎症因子水平比较（x ± s ，pg/mL）
组别IL-6IL-1βTNF-ɑ丹参酮组45.46±8.18*19.27±2.35*23.74±6.73*模型组185.74±54.56* 33.21±12.20* 39.63±15.72*对照组23.45±15.2313.65±2.65 7.26±1.54F 35.4909.42613.331P
＜0.001
＜0.05
＜0.05
注：与对照组比较，*
P ＜0.001
2.2 三组患者巨噬细胞、T 细胞细胞含量比较
入组第1天三组的巨噬细胞、T 细胞比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；造模8周后，与对照组比较，丹参酮组、模型组的巨噬细胞百分比均减少，差异有统计学意义（P ＜0.05）；造模8周后，与对照组比较，丹参酮组、模型组的CD3细胞百分比均减少，差异有统计学意义（P ＜0.05），见表2。

2.3 三组患者血脂水平比较
入组第1天三组的HDL-C、LDL-C、TG、TC 上的差异无统计学意义（P ＞0.05）；造模1周后，与对照组比较，丹参酮组、模型组的HDL-C 水平降低，LDL-C、TG、TC 升高，差异有统计学意义（P ＜0.05）；造模8周后，对照组与丹参酮组的HDL-C 水平较模型组均高于模型组，LDL-C、TG、TC 水平均低于模型组，差异有统计学意义（P ＜0.05），见表3。

3 讨论
建立动脉粥样硬化的动物模型中，大鼠具有可同时检测多种指标、价格低廉、血量丰富、免疫系统完善等优点，C57小鼠在引发诱导性肥胖、2型糖尿
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表2 三组患者巨噬细胞、T细胞细胞含量比较（x ± s ，%）
组别
巨噬细胞
T细胞（CD3）含量第1天
1周后
8周后F P 第1天1周后8周后F P 丹参酮组B 2.43±0.48* 1.45±0.12# 2.34±0.45@19.680＜0.01 68.36±2.51* 85.45±1.54# 72.44±0.32#272.378＜0.01模型组A 2.39±0.95* 1.44±0.13# 1.31±0.09#11.244＜0.01 68.41±2.43* 85.33±1.48# 85.21±1.34#287.406＜0.01对照组 2.37±0.85 2.41±0.52 2.45±0.480.039
＞0.05
68.45±2.2569.33±2.7769.45±2.160.514
＞0.05
F 0.01530.86826.9000.003210.819320.244P
＞0.05
＜0.01
＜0.01
＞0.05
＜0.01
＜0.01
注：与对照组比较，*P ＞0.05，#P ＜0.001，@
P ＞0.05
表3 三组患者血脂水平比较 （x ± s ）
组别HDL-C（mmol/L）
LDL-C（mmol/L）第1天1周后8周后F P 第1天1周后8周后F P 丹参酮组B 1.85±1.37* 0.98±0.25# 1.83±0.87@ 2.744＞0.05 2.54±0.55* 3.55±0.52& 2.28±0.24@21.416＜0.05模型组A 1.84±1.35* 0.96±0.21# 1.35±0.65@ 2.548＞0.05 2 .54±0.48* 3.41±0.55& 3.29±0.49@8.627＜0.01对照组 1.85±1.44 1.83±1.21 1.85±0.940.000
＞0.05
2.54±0.53 2.55±0.52 2.45±0.380.131
＞0.05
F 0.000 4.711 1.1650.00010.43119.844P ＞0.05
＜0.05
＞0.05
＞0.05
＜0.01
＜0.01
组别TG（mmol/L）
TC（mmol/L）
第1天1周后8周后F P 第1天1周后
8周后F P 丹参酮组 1.41±0.48* 2.75±0.51& 1.42±0.31@30.384＜0.05 4.38±0.64* 6.87±0.95& 4.31±0.68@35.950＜0.05模型组 1.41±0.46* 2.79±0.53& 2.67±0.41&26.540＜0.05 4.40±0.56* 7.15±1.12& 6.79±1.21&22.104＜0.05对照组 1.40±0.49 1.42±0.51 1.38±0.560.015
＞0.05
4.41±0.62 4.45±0.57 4.39±0.620.026
＞0.05
F 0.00222.76527.9350.00626.64425.784P
＞0.05
＜0.01
＜0.01
＞0.05
＜0.01
＜0.01
注：与对照组比较，*P ＞0.05，#P ＜0.05，@P ＞0.05，&P ＜0.01
病及粥样动脉硬化等有明显优势，因此本研究就用C57大鼠建立动脉粥样硬化模型[7-8]，研究丹参酮IIA 对动脉粥样硬化血脂水平的影响观察。

有研究显示，当血脂含量过高时，血脂依附于血管后会在血管壁形成脂质条纹，沉积过多后造成血管堵塞或血管狭窄[9]。

一般情况下LDL 会进入系膜区后，由系膜细胞或吞噬细胞通过其表面受体进行清除，但如果沉积程度超过LDL 的清除能力，就会造成脂蛋白沉积发生，加重动脉粥样硬化的病变程度[10]。

本研究显示，造模后的小鼠出现炎症因子水平升高、巨噬细胞、CD3细胞百分比均减少等情况，给予丹参酮IIA 8周后的小鼠炎症因子水平较注射生理盐水的小鼠，炎症因子水平恢复至与对照组持平的水平，原因可能为动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，炎症因子、黏附分子等表达增加，驱使炎症细胞向动脉内膜迁移，加速动脉粥样硬化的发生及发展，并且炎症细胞和血管内皮细胞的黏附是炎症反应发生关键步骤之一[11-12]。

增多的黏附分子募集更多炎症细胞向动脉内膜迁移后加速血管内皮的损伤，被认为是动脉粥样硬化形成的始动环节[13-14]。

而研究结果显示丹参酮 IIA 能减少血管中炎症因子的表达，从而减少炎症细胞及黏附分子的表达及迁移，以降低动脉粥样硬化进行与发展。

本研究结果还显示，使用丹参酮IIA 的小鼠的HDL-C 高于注射生理盐水的小鼠，LDL-C、TC、TG 水平低于注射生理盐水的小鼠，原因为LDL 为人体内胆固醇运输的主要载体，血管中的TC 和LDL 升高，人体内皮细胞受到刺激后，产生大量的自由基后LDL 就会被氧化产生脂蛋白（Ox-LDL），Ox-LDL 的不断增加则会使血管内皮受到损伤，使炎症反应就一步加重，丹参酮IIA 在被吸收后减少血管中Ox-LDL 的生成，因此LDL-C、TC、TG 水平均呈下降，对血管内皮起到一定的保护作用，加之对炎症细胞等细胞因子的调节，对粥样动脉硬化的炎症反应起到一定抑制作用[15]。

因此随着炎症因子被抑制，体细胞产生的淋巴因子也降低趋势，随之巨噬细胞恢复正常水平。

综上所述，丹参酮IIA 可以保护动脉内皮功能，降低动脉粥样硬化小鼠的炎症反应，恢复免疫系统的同时改善血脂水平。

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·预防医学与公共卫生·
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（收稿日期：2020-02-26）
（上接第40页）
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（收稿日期：2020-02-26）。