龙牙百合在组织培养过程中的酶谱分析(doc 18页)(正式版)
兰州百合蔗糖代谢关键酶基因的克隆及原核表达
兰州百合蔗糖代谢关键酶基因的克隆及原核表达淀粉含量是决定百合种球质量的最关键因素。
蔗糖作为百合鳞茎中可溶性碳水化合物的主要形态,可在蔗糖合成酶(Sucrose Synthase,SuSy)和可溶性酸性转化酶(Soluble Acid Invertase,SAI)调控下参与淀粉合成。
为探究百合SuSy和SAI的基因功能及其在蔗糖-淀粉代谢途径中的调节机理,本研究首先克隆得到兰州百合(Lilium davidiivar.unicolor)两个SuSy基因SuSy1和SuSy2的全长cDNA序列,并对其序列进行了生物信息学分析,将其过表达载体和RNAi载体通过农杆菌介导转化兰州百合。
而后构建了兰州百合SuSy及SAI基因的原核表达载体,并在适宜条件诱导融合蛋白表达,为进一步研究百合SuSy和SAI基因功能奠定了基础。
主要研究结果如下:1.SuSy1和SuSy2基因cDNA全长克隆及生物信息学分析以兰州百合扦插鳞片的总RNA为模板,采用RT-PCR及RACE法成功克隆获得SuSy 基因SuSy1和SuSy2全长cDNA序列,其长度分别为2,877 bp和2,865 bp.序列分析结果显示,基因SuSy1和SuSy2的同源性为85.73%,与同科植物同源性为65%-88%,分别编码807和810个氨基酸,其蛋白等电点均为6.10.结构域分析表明,SuSy1和SuSy2均编码含有188个氨基酸的保守结构域,其中包含一个糖基转移酶结构域,与糖基转化酶家族GT1有很高的相似性。
2.SuSy基因转化兰州百合研究利用农杆菌介导转化法,将带有兰州百合SuSy1和SuSy2基因的过表达载体和RNAi载体导入兰州百合。
为优化遗传转化过程,进行了兰州百合小鳞片对潮霉素(Hyg)和头孢霉素(Cef)浓度敏感试验,并对影响转化的各因素进行筛选。
获得最适条件为:20 mg L-1 Hyg为抗性芽筛选的适宜浓度;300 mg L-1 Cef为最适抑菌浓度;预培养2 d,农杆菌菌液培养至OD600为0.6,侵染鳞片20 min,重悬液和共培养基中加入终浓度为100 μM的乙酿丁香酮(AS),共培养3 d.最终获得了 3株带有基因SuSy2片段的RNAi载体的转基因抗性苗,目前正处于筛选阶段。
百合组培实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除百合组培实验报告篇一：植物组织培养实验报告实验一植物组织培养实验报告一实验目的让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。
二实验原理植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA）和6–苄基氨基腺嘌呤（6–bA）的比例，决定了根和芽的分化。
三实验器材（一）试剂乙醇、IAA或2，4–D、hgcl2（或次氯酸钠）、6-苄基氨基腺嘌呤（6-bA）ms培养基（二）仪器设备培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等三实验步骤1.配制培养基（1）愈伤组织诱导培养基：ms培养基（蔗糖含量为10g/L，2,4–D含量为2mg/L，琼脂10g/L）。
（2）试验培养基：在ms培养基中按表33–1加入IAA和6–bA。
吲哚乙酸先用少量0.1mol/Lnaoh溶解，6-苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1mol/Lhcl溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。
2.培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至ph5.8，趁热分装于100mL三角烧瓶中，每瓶约20mL。
待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121℃（1kg/cm2）下灭菌20min。
取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。
接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。
龙牙百合的组织培养研究现状和进展
［］ 益 锋 ， ３李 肖君泽 ， 建 平 ， ． 百 合快 速 繁 殖与 脱 毒研 究 进展 【】 邓 等 龙牙 Ｊ 安徽 农 ． 业科 学，０７３（ ） ８４４ ０，８２ ２０ ， １ ： ０ －８５４９ ． ５ ６４ 【】 淼生 ， 小 敏 ， 莲 梅． ４吴 梁 陈 龙牙 百 合 组 培芽 诱 导 和试 管 苗生 根 试 验初 报 … ．
１ 选好外植体。龙牙百合的许多器官 、组织都可作外植体 ，如鳞 ） 片、顶芽、茎段 、叶片 、根尖、花梗 、花瓣 、花托 、花丝 、花药、胚 、 子房都可作用 为组培外植体 。卢其能采用顶芽、鳞片 、茎段和叶片比较 研究 ，以鳞 片切块组培的分化率最高 ， 发现秋冬季的鳞片分化成小鳞 并 茎 的能力最强。选择鳞片表皮３ ４ ＿ 层的鳞片为外植体诱导的小鳞茎不仅 快而且诱导率较高 ；鳞片表皮１ ２ 由于受损伤在接种后极易传染 ，不 —层 易成功；内层越深鳞片越幼嫩 ，诱导率越低 ，甚至不产生小鳞茎 ；鳞片 的中部诱导率较两头高。 ２ ）外植体 的消毒 处理 。通 常用 的灭菌剂 是酒精 、升汞 和漂 白粉 等。一般程序是先将外植体视洁净状况用流线形 自 来水冲洗１ｍ ｎ ４ ５ｉ 至２ ｈ
短期内获得保持原有品种优 良性状的大量种苗 ，而且通过茎尖脱毒后可
获得大量无毒种苗 ， 从而大大提高其产量和品质 ， 防止 品种退化的一 是 种重要手段 。如能推行组织培养工 厂化育苗 ， 不仅 能使一些优 良株系得 到迅速推广，而且能大量节约留种成本，产生显著 的经济效益 。
２ 龙 牙百 合组 织培养 研究
淼
应用科 学
９ ９
龙牙百合 的组织培 养研 究现状 和进展
百合组织培养实验报告
百合组织培养实验报告百合组织培养实验报告一、实验原理植物细胞全能性理论是植物组织培养的核心理论。
立体细胞具有生命的特征属性，在全能性的基础上，提供合适的营养和环境条件，立体细胞经历脱分化（dedifferentiation）和再分化（redifferentiation）过程，可形成再生植物。
二、实验用品实验材料：百合种球实验仪器：高压消毒锅、超净工作台、镊子、剪刀、手术刀柄、手术刀片、酒精灯、定时器、人工气候箱、分析天平、酸度计、电炉、蒸馏水机、培养皿、烧杯、量筒、移液管、吸球、药匙、玻璃棒、锥形瓶、称量纸、滤纸、枪、枪头、试剂瓶、打火机、塑料膜、绳子实验试剂：琼脂、蔗糖、75%，95%乙醇、α-萘乙酸（NAA）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1%升汞、盐酸、大量元素（磷酸二氢钾、硝酸钾、硝酸铵、七水硫酸镁、二水合氯化钙）、微量元素（四水合硫酸猛、七水合硫酸锌、五水合硫酸铜、二水合钼酸钠、碘化钾、六水合氯化钴、硼酸）、铁盐（乙二胺四乙酸二钠、七水合硫酸亚铁）、有机物（甘氨酸、盐酸吡哆辛、盐酸硫胺素、烟酸、肌醇）三、实验操作步骤1、用分析天平去8.8g琼脂，30g蔗糖，放入烧杯中，加蒸馏水至900ml，把烧杯放在电炉上煮琼脂，并用玻璃棒搅拌，时间为50-60分钟。
2、将煮好的琼脂加蒸馏水至900ml，按顺序用移液管加50ml大量元素，5ml微量元素，10ml铁盐，10ml有机物，再用枪加1ml6-BA，0.5mlNAA，并用玻璃棒搅拌。
调ph至5.6-6.0之间。
3、将配好的培养基倒入锥形瓶中（50-60ml），用绳子将塑料膜绑好。
准备蒸馏水，并将培养皿、手术刀柄、镊子用报纸包好，同培养基一起放入高压灭菌锅灭菌，温度为121℃，时间为23min。
4、灭完菌后将培养基放至室内，冷却。
准备好洗净的百合种球，75%的酒精，0.1%升汞（注：升汞有剧毒，注意操作），定时器，手术刀片，烧杯等，准备进行无菌操作。
龙牙百合珠芽组织培养研究
龙牙百合珠芽组织培养研究付娜;白志川;刘世尧;贾志刚;张华【摘要】[目的]为百合快速繁殖提供参考.[方法]以龙牙百合珠芽为外植体进行组织培养,分别研究外植体消毒条件(75%酒精浸泡20 或30 s后用0.1%HgCl2处理8、10、12 min)、珠芽处理方式(整个珠芽、单瓣珠芽、中心几个叶原基、单瓣珠芽上部、单瓣珠芽基部)、激素种类和浓度(100、200、300 mg/L GA、IBA、NAA)对不定芽诱导效果的影响.[结果]75%酒精浸泡20 s后用0.1%HgCl2处理12 min 消毒效果最好,外植体污染率较低,成活率较高;以整个珠芽为外植体时,成活率最高,但诱导的不定芽数量较少,单瓣珠芽基部诱导的不定芽数量最多;300 mg/L IBA浸泡珠芽10 h最有利于不定芽诱导,GA对不定芽诱导无明显作用.[结论]该研究确定了龙牙百合珠芽组织培养的最佳条件.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)034【总页数】2页(P19258-19259)【关键词】龙牙百合;珠芽;组织培养【作者】付娜;白志川;刘世尧;贾志刚;张华【作者单位】西南大学园艺园林学院,重庆,400715;西南大学园艺园林学院,重庆,400715;西南大学园艺园林学院,重庆,400715;西南大学园艺园林学院,重庆,400715;西南大学园艺园林学院,重庆,400715【正文语种】中文【中图分类】S68百合(Lilium spp.)为百合科百合属多年生草本植物,全世界共有百合属植物 94种,其中原产于我国的达 47种,18个变种。
百合具地下鳞茎,属球根花卉,花朵较大且花型优美,色彩鲜艳,具有极高的观赏价值。
近年来,百合切花已成为继月季、香石竹、菊花、唐菖蒲、非洲菊之后的一支新秀,市场前景广阔[1-2]。
百合主要靠鳞茎进行埋片繁殖,但繁殖系数较低,而且容易积累病毒。
近年来,组织培养已成为百合扩繁的一种有效手段。
龙牙百合的组织培养研究现状和进展
龙牙百合的组织培养研究现状和进展摘要从龙牙百合组织培养的过程和不同激素种类、浓度及其组合等因素的影响以及组培脱毒技术、组培苗移栽研究,综述龙牙百合组织培养的意义和研究现状与进展,关键词龙牙百合;组织培养;快速繁殖;研究龙牙百合(Lilium brownii F.E.Brown var. viridulum Baker)系野百合变种,在湖南邵阳至少有1800多年的种植历史。
因其鳞片肥大,形似龙牙而得名,是百合中最名贵的一种,其营养、药用、经济价值非常高。
1 龙牙百合的传统繁殖与快速繁殖的优劣势比较1)传统繁殖方式的缺陷。
龙牙百合在生产上主要是利用小鳞茎、珠芽、鳞片扦插进行无性繁殖,其缺陷主要有:繁殖率很低;种性退化;后代容易积累病毒,严重影响其产量和品质;传统留种方式占有耕地且降低产量,大大增加了种植成本;种子繁殖其后代会出现分离,不能保持原有母株的优良特性,且幼龄期长。
2)快速繁殖的优势。
龙牙百合利用组织培养进行快速繁殖,可在短期内获得保持原有品种优良性状的大量种苗,而且通过茎尖脱毒后可获得大量无毒种苗,从而大大提高其产量和品质,是防止品种退化的一种重要手段。
如能推行组织培养工厂化育苗,不仅能使一些优良株系得到迅速推广,而且能大量节约留种成本,产生显著的经济效益。
2 龙牙百合组织培养研究1)选好外植体。
龙牙百合的许多器官、组织都可作外植体,如鳞片、顶芽、茎段、叶片、根尖、花梗、花瓣、花托、花丝、花药、胚、子房都可作用为组培外植体。
卢其能采用顶芽、鳞片、茎段和叶片比较研究,以鳞片切块组培的分化率最高,并发现秋冬季的鳞片分化成小鳞茎的能力最强。
选择鳞片表皮3-4层的鳞片为外植体诱导的小鳞茎不仅快而且诱导率较高;鳞片表皮1-2层由于受损伤在接种后极易传染,不易成功;内层越深鳞片越幼嫩,诱导率越低,甚至不产生小鳞茎;鳞片的中部诱导率较两头高。
2)外植体的消毒处理。
通常用的灭菌剂是酒精、升汞和漂白粉等。
一般程序是先将外植体视洁净状况用流线形自来水冲洗15min至24h不等;再进行预灭菌,用70﹪或75﹪酒精浸泡15-30s;然后用0.1﹪升汞灭菌10min左右,顶芽和叶片用10%漂白粉溶液消毒10min即可。
龙芽百合组培快速繁殖及高产栽培技术综述
21611 叶枯病 又称灰霉病[15] ,是百合植株上最 普遍的病害之一 。严重时造成茎叶枯死 、花蕾腐烂 , 影响鳞茎产量 。症状是叶上出现黄褐色和红褐色椭 圆形病斑 。防治方法 : (1) 将患病植株叶片集中烧 毁 ; (2) 实行 3 a 以上轮作 ; (3) 加强田间管理 ,合理 增施磷钾肥 ,增强抗病力 ,注意清沟排水及田间通风 透光 ; (4) 用 50 %多菌灵 500 倍液 、或 75 %百菌清 500 倍液 、或 70 %甲基托布津 500 倍液 、或 50 %速克 灵 800 倍液 、或 50 %扑海因可湿性粉剂 1 500 倍液 喷洒 ,每 10 d 喷洒一次 ,连续喷 3～5 次 。 21612 立枯病 又称根茎基腐病 ,5～6 月发生 。主 要危害植株茎基部 ,影响植株生长 ,导致死亡 。症状 为植株茎基部渐变暗褐色 ,下部叶片先枯萎 ,随后整 株迅速黄枯死亡 ,鳞茎变褐 。该病菌是弱寄生的土 壤习居菌 ,能长期在土壤中腐生 。因土壤淹水 、粘 重 、施用未腐熟的有机肥料以及线虫和地下害虫等 均可引起该病菌侵染 。防治方法 : (1) 用药剂处理种 球 ; (2) 撒石灰粉消毒 ,并对周围及全园植株用 1 000 倍甲基托布津可湿性粉剂或 50 %多菌灵可湿性粉 剂稀释液喷雾或淋蔸 ,或用 75 %百菌灵可湿性粉剂 600 倍液喷雾 。 21613 软腐病 鳞茎发生灰褐色不规则水浸状斑 时 ,可喷 47 %加瑞农可湿性粉剂 800 倍液 ,或 72 % 农用硫酸链霉素可溶性粉剂 4 000 倍液进行防治 。 21614 病毒病 张于光[16] 认为 ,致病菌分真菌性 病毒和生理性病毒 。而沈淑琳[17]认为 ,主要病毒有 四种 :百合无症病毒 、黄瓜花叶病毒 、郁金香碎锦病 毒 、百合丛簇病毒 。百合受害较普遍 ,是较难防治的 一种病害 。大致症状为叶片变黄 ,或发生黄色斑点 (条斑) ,植株萎缩 ,花蕾萎黄不开 。该病主要是预 防 : (1) 防治蚜虫是防治病毒蔓延的有效途径 ; (2) 防 止接触性传染 ; (3) 拔除受害严重的植株并烧毁之 。
龙牙百合
龙牙百合的组织培养及研究龙牙百合(Lilium brownii F. E.Brown var. viridulum Baker) ,又名百合、博多百合、白花百合,为野百合的变种,属百合科百合属植物,产于江西、湖南、湖北、安徽、浙江、河南和陕西等地,是我国较早的栽培种之一。
龙牙百合的鳞片含有丰富的淀粉,风味独特,主要供食用;亦可药用,有润肺、止咳、清热、安神和利尿等功效;此外,还可用于观赏,大而洁白的花朵含有芳香油,可提取香料。
正因为它不仅是极富营养价值的名贵佳肴,而且有良好的药用价值,所以具有广阔的市场开发前景。
如：永州市零陵区。
种植龙牙百合平均产量1. 8万hm2 ,产值约60万元/hm2 ,成本约18万元/hm2 (其中用种成本10. 5万元/hm2 )【1】农民收益好，积极性特别高。
然而传统的繁殖方法主要采用常规的分球、分珠芽鳞片扦插，鳞片包埋等，采用这些方法繁殖，繁殖量较小，不能满足生产的需求，特别是经多代分殖以后，常造成种性退化，甚至病毒积累，影响百合的产量和质量。
利用组织培养技术，能够迅速去除病毒和更新品种，加快了百合的快速繁殖，缩短了百合的生育周期。
同时百合栽培中有着休眠期的束缚，也可通过低温或生长激素来打破休眠期。
下面本文从龙牙百合的快速繁殖与脱毒、休眠期的打破两个方面介绍龙牙百合组织培养研究的概况。
1、龙牙百合的快速繁殖与脱毒1.1外植体的选择龙牙百合许多器官都可作为外植体，如鳞片、顶芽、茎段、叶片、花药等，其中以鳞片做外植体较多，但是不同部位的鳞片的分化有差异。
根据罗丽萍等【2】试验统计得出,来自鳞片上、中、下部的分化率分别为7 %、15 %和95 %。
杭玲等【3】试验表明选择百合鳞片表皮3～ 4 层的鳞片为外质体诱导的小鳞茎不仅快而且诱导率也较高; 鳞茎表皮1～ 2层由于受损伤, 接种后极易污染, 不易成功; 内层越深鳞片越幼嫩, 诱导率越低, 甚至不产生小鳞茎。
杨柏云等【4】也表明剥取的茎尖大小与茎尖的成活率呈正相关系,茎尖越大,成活率越高。
开题报告 龙牙百合研究
提高肉制品的安全性，同时有助于改进肉制品的色泽和质构，提高商品性 能[10]。 2.2 发展趋势：在继续加强竹副产品传统利用的基础上，用植物化学、生 物化学、医药化学、植物分类学及植物生态学等多学科相结合的研究方法 和技术手段，重点进行竹子中生物活性成分（主要指药用成分）分布规律 和它们的功能，竹子提取物质化学特性及利用的研究；进行竹子水解、热 解产物的形成及利用的研究;采用生物化工和食品化工新技术， 应用发酵动 力学和酶动力学， 研究竹子天然物质和生物活性物质的新的分离技术。 主 要有：竹副产品加工利用的产业化技术；研究从竹材、竹叶、竹箨、竹根 等竹副产品中提取有保健和医药价值物质（如黄酮） 、竹汁、竹茹、竹沥及 其它活性物质的技术；用来制作凉性补养剂、催化剂、抗氧化剂、抗肿瘤 剂、杀菌剂、除臭剂等产品；研究竹笋、竹材加工废料的利用技术；研究 开发加工竹子饲料的技术。从这些方面看，龙竹竹叶黄酮研究的前景是很 广阔的！ 3、主要参考文献 [1]卢益中．淡竹叶天然保健饮料的研制[J]．食品工业科技，1998(4)：48 —49 [2]江苏新医学院．中药大辞典：下册[M]．上海：上海科学技术出版社． 1977：2253—2254 [3]史作清，施荣富，范云鸽．树脂吸附法在中草药有效成分提取中应用 [J]．中草药，2001，32(7)：660． [4]刘翠，王义久．竹叶资源研究进展及开发利用[J]．林业建设，1999， (6):10-14 [5]孙艳梅，徐雅琴，杨林．天然物质类黄酮的抗氧化活性的研究[J]．中 国油脂，2003，28(3)：54-57 [6]庄向平， 虞杏英， 杨更生． 总黄酮含量是测定[J]． 中草药， 1992， 23(3)： 122-124 [7]张英，丁霄霖．竹叶有效成分和抗活性氧自由基效能的研究[J]．竹子 研究汇编 [8]张英， 丁霄霖， 王树英． 竹叶特种氨基酸的存在及其生物学意义[J]． 无 锡轻工大学学报，1997，16(1)：29-32 [9]张英，唐莉莉．毛金竹叶提取物抗衰老作用的实验研究[J]．竹子研究 汇刊，1997，16(4)：62-67 [10] 胡春水，佘祥威．竹的药膳史及竹食品开发 [J] ．竹子研究汇刊， 1999．18(1)：26-31 4、该研究的简要内容，重点解决的问题，预期结果或成果 4.1 简要内容： （1）竹叶的预处理 （2）芦丁标准曲线制作 （3）优化提 取因素 （4）抗氧化研究
龙牙百合在组织培养过程中的酶谱分析
龙牙百合在组织培养过程中的酶谱分析-----------------------作者：-----------------------日期：本科生毕业设计(论文) 中文题目龙牙百合在组织培养过程中的酶谱分析外文题目 The zymography for Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker in the process of the tissue culture学号 0507040099姓名彭静学院生命科学学院专业生物科学指导教师完成时间2009-4-30江西师范大学教务处制目录摘要 (1)Abstract (2)1 文献综述 (3)1.1龙牙百合的生物学特征及价值 (3)1.1.1龙牙百合的生物学特征 (3)1.1.2龙牙百合的价值 (3)1.2龙牙百合在组织培养过程中过氧化物酶活性变化的研究现状 (3)1.3国内外同工酶研究现状及应用 (4)1.4 研究的目的和意义 (4)2 实验材料、主要仪器与试剂 (5)2.1实验材料 (5)2.2实验主要仪器 (5)2.3 实验试剂 (5)3 实验方法 (5)3.1技术路线 (5)3.2培养基及培养条件 (5)3.3确定上样量 (6)3.4电泳 (6)4试验结果及分析 (8)4.1组织培养过程中龙牙百合生长与分化情况 (8)4.2过氧化物酶同工酶与龙牙百合生长分化的关系 (9)5讨论 (10)6对下一步工作的建议 (10)参考文献 (11)附图 (12)致谢 (15)摘要在组织培养过程中，为研究龙牙百合生长分化与过氧化物酶同工酶的关系，对龙牙百合进行组织培养并采用聚丙烯酰胺不连续体系盘状电泳(垂直管电泳)分离不同阶段过氧化物同工酶。
结果：在龙牙百合生长分化过程及不同组织过氧化物酶同工酶酶谱有很大差异，过氧化物酶同工酶酶谱可作为判别龙牙百合生长分化进程的依据。
关键词：龙牙百合,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,过氧化物酶同工酶The zymography for Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker in theprocess of the tissue culturePENG JingAbstractIn the process of the tissue culture, a study on the relationship between the growth and differentiation and Peroxidase isozyme of Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker was carried out . Tissue Culture for Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker was taken , To separate Peroxidase isozyme under different stages , the discontinuous system of discoid spolyacrylamide gel electrophoresis (vertical tube gel electrophoresis) was used. And the result showed that there was a great difference of map of peroxidase isoenzyme in the process of the growth and differentiation and among different tissues. The map may be as a basis for determination of the course of differentiation.Key words：Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker, polyacrylamide gel electrophoresis, Peroxidase isozyme1 文献综述1.1龙牙百合的生物学特征及价值1.1.1龙牙百合的生物学特征龙牙百合(Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker)为百合科百合属中能形成鳞茎的栽培品种, 多年生宿根草本植物。
不同品种百合炮制品总皂苷含量比较
村乡科技XIANGCUN KEJI84XIANGCUN KEJI 2021年8月（中）不同品种百合炮制品总皂苷含量比较李辰钰李佳琪颜瑞辰李晨光（吉林农业科技学院中药学院，吉林吉林132101）［摘要］为研究不同品种百合炮制品总皂苷含量的差异，分别选取百合净制品、蜜制品、蒸制品，采用香草醛-高氯酸法进行样品处理，采用分光光度法测定总皂苷含量。
结果表明，超声辅助法提取兰州百合的总皂苷含量为1.10mg/g ，明显高于浸提法；卷丹中总皂苷含量明显高于其他3种百合，且百合蜜制品总皂苷含量最高，平均值为2.40mg/g ，其次是净制品，平均值为2.33mg/g ，蒸制品总皂苷含量最低，平均值为1.90mg/g 。
该试验为百合药材的选择和炮制加工提供了理论依据，同时验证了古法蜜制对于提高百合总皂苷含量有显著效果。
［关键词］百合；炮制品；总皂苷［中图分类号］R284［文献标识码］A［文章编号］1674-7909（2021）23-84-3百合作为一种药食两用植物，应用历史超过2000年，其主要来源为百合科植物卷丹（Lilium lancifolium Thumb.）、百合（Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker ）或细叶百合（Lilium pumilum DC.）的干燥肉质鳞叶［1］。
卷丹是百合科百合属多年生草本球根植物，其因火红的花色反卷的花瓣而享有卷丹的美名，被称为“百合之冠”。
细叶百合为百合科百合属多年生草本植物，花色美丽娇艳具有观赏价值，是抗旱性优良的育种品种。
百合中含有薯蓣皂苷、多糖类、生物碱等多种生物活性成分，具有宁心安神，促进血液循环，美容养颜等功效［2］。
百合皂苷类型多为甾体皂苷［3］，具有抗抑郁，镇静催眠，抑制人前列腺癌细胞增殖和侵袭、抗炎抑菌等作用［4］。
百合炮制方法有炙制、熬制、蜜制、炒制和蒸制。
百合主要分布于湖南、四川、河南、江苏和浙江等省，野生资源较少。
龙牙百合的研究进展
龙牙百合的研究进展赵健;赵志国;唐凤鸾;夏科;仇硕【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2017(045)007【摘要】龙牙百合(Lilium brownii var.viridulum Baker)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生草本植物,是野百合(Lilium brownii)的变种,为我国三大食用百合之一,具有重要的食用、药用和观赏价值.从资源分布与栽培、药食用价值、繁殖技术、病虫害发生与防控等方面对龙牙百合的研究进展进行综述,同时,对龙牙百合抗病育种、病虫害生物防治及深加工等方面的研究进行了展望.【总页数】4页(P78-81)【作者】赵健;赵志国;唐凤鸾;夏科;仇硕【作者单位】广西壮族自治区·中国科学院广西植物研究所,广西桂林 541006;广西壮族自治区·中国科学院广西植物研究所,广西桂林 541006;广西壮族自治区·中国科学院广西植物研究所,广西桂林 541006;广西壮族自治区·中国科学院广西植物研究所,广西桂林 541006;广西壮族自治区·中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006【正文语种】中文【中图分类】S682.1+9【相关文献】1.龙牙百合快速繁殖与脱毒研究进展 [J], 李益锋;肖君泽;邓建平;姜放军2.龙牙百合和兰州百合远缘杂交胚拯救及杂种苗快繁体系的建立 [J], 李润根;黄琴;融花珍;卢其能;高柱3.基于短引物扩增应用的龙牙百合主要病毒鉴定 [J], 周楚人;汪启明;彭国平;郝晓峰;刘一涵;陈咸吉;肖扬波;曾露芝;向蒙;刘甫智;李桂阳4.隆回县龙牙百合栽培用药现状及建议 [J], 孙卫文5.三倍体观赏百合与二倍体食用龙牙百合的杂交分析 [J], 崔罗敏;万麟;周树军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙牙百合增殖培养及鳞茎生长发育研究
龙牙百合增殖培养及鳞茎生长发育研究仇硕;唐凤鸾;夏科;李秀娟;赵志国;蒋庆鸿;赵健【摘要】以龙牙百合为材料,筛选适宜的增殖培养基,并研究根块茎膨大将军和芸苔素内酯(BR)对其鳞茎膨大发育的影响.结果表明:龙牙百合丛生芽在培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L中的增殖系数明显高于其他配方,达到7.3,地上部长势表现良好.以1/2MS+IBA 0.27 mg/L+NAA 0.3 mg/L+IAA 0.3mg/L+6％蔗糖为基本培养基,龙牙百合丛生芽在加入1.0 ml/L BR的处理中生长最好,全株重量和鳞茎重量均最高,达到1.65 g/株和1.33g/个,高于对照和其他处理.2.0 g/L根块茎膨大将军和1.0 mL/L BR喷施龙牙百合幼苗后,鳞茎鲜重分别为14.65g/个和14.91 g/个,是对照的108.8％和110.7％,氨基酸含量分别是对照的108.0％和108.5％,蛋白质含量分别是对照的114.4％和1 13.0％.龙牙百合最适宜的增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L,2.0 g/L根块茎膨大将军和1.0 mL/L BR喷施能提高鳞茎产量及氨基酸和蛋白质含量.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2017(044)004【总页数】7页(P61-66,封2)【关键词】百合;增殖;鳞茎发育;芸苔素内酯【作者】仇硕;唐凤鸾;夏科;李秀娟;赵志国;蒋庆鸿;赵健【作者单位】中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006;中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006;中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006;中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006;中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006;中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006;中国科学院广西植物研究所,广西桂林541006【正文语种】中文【中图分类】S644.1龙牙百合（Lilium browniivar. viridulum）是百合科百合属（Lilium）多年生鳞茎类植物，产于北至河北、山西，南至湖南、江西等地［1］，主产于湖南邵阳、隆回和江西万载、泰和等地，近年来广西永福、资源等地也有大量栽培。
龙牙百合两种病害致病菌的分离、鉴定及抑制效应研究
龙牙百合两种病害致病菌的分离、鉴定及抑制效应研究组织分离法对广西永福地区种植的龙牙百合两种病害的病原菌进行了分离，并对分离菌株进行培养、纯化、回接和重新分离，最后利用形态学和分子生物学技术对致病菌株进行了鉴定;同时观察了三种植物生长调节物质对两种致病菌的抑制效果。
结果表明：两种病害（A和B）症状表明是叶枯病和青霉病，分别从感病叶片中分离得到4株和3株病原菌，病原菌室外回接发现只有菌株A-4和B-2分别致病，致病率均达到100%。
形态学鉴定，A-4为葡萄孢属病原菌，菌落白色绒絮状，圆型;菌丝匍匐向外、向上生长、气生，无色，有隔膜，有分枝，具有分生孢子和顶生孢子。
B-2为青霉属病原菌，菌落圆形或不规则形，外围形成一圈白色绒毛状，中间蓝绿色;菌丝细，匍匐生长，具横隔，分生孢子梗扫帚状，孢子呈球形。
两类菌株分别获得全长522 bp和551 bp的序列，把ITS序列与Genbank中已登陆的序列进行相似性分析，并结合田间致病症状，认为龙牙百合叶枯病致病菌可能是椭圆葡萄孢，而青霉病致病菌是扩展青霉。
三种植物生长调节物质对两种致病菌的抑制效果表明，0.1～1.0 mmol·L-1 的SA不能完全抑制两种病原菌的生长，而0.5～1.0 mmol·L-1BRs和Me-JA均能完全抑制病原菌A-4和B-2的生长。
关键词：百合，叶枯病，病原分离和鉴定，植物生长调节物质，抑制效应中图分类号：Q945.8，S436.8文献标识码：A文章编号：1000-3142（2018）01-0109-10Isolation，identification and inhibiting effects of pathogens that caused two kinds of diseases in Lilium brownii var. viridulumQIU Shuo，XIA Ke，LI Xiujuan，ZHOU Hao，TANG Fengluan，ZHAO Zhiguo，ZHAO Jian*（Guangxi Institute of Botany，Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，Guangxi，China ）Abstract：The pathogens that caused two kinds of diseases in Lilium brownii var. viridulum were isolated using usual tissue isolation. Strains were cultivated，purified，reinoculated and reisolated. Morphological and molecular biological techniques were used to identify the strains. And three plant growth regulators were used to study the inhibiting effects on two pathogens. The results showed that two kinds of diseases were leaf blight （A）and penicilliosis （B）by the symptoms，and four strains and three strains were isolated from infected leaves，respectively. But only A-4 and B-2 caused two kinds of diseases，respectively. The incidences of A-4 and B-2 disease reinoculated in the field were all 100 %. A-4 is a kind of fungi belonging to the genus Botrytis，and its colonial morphology is a circular form，with colorless mycelium，prostrate on the medium，aerial，diaphragms and branches. There are conidium and acrospore. B-2 is a kind of fungi belonging to the genus Penicillium，and its colonial morphology is a circular form or irregular，with white mycelium outside the circle and turquoise in the central，the mycelium prostrate on the medium and diaphragms. There were broom conidium and spherical spores. At last，the sequence of internal transcribed spacer （ITS）region of A-4 and B-2 were analyzed，the length was 522 bp and 551 bp，respectively. The sequence were compared with other species in the Genbank，respectively. The symptom in the field indicates that the pathogen of Lilium brownii var. viridulum leaf blight（A）and penicilliosis are Botrytis elliptica and Penicillium expansum. The inhibiting effects of three plant growth regulators on two pathogens indicated that two pathogens could not be fully inhibited by 0.1-1.0 mmol·L-1 SA，but could be fully inhibited by 0.5-1.0 mmol·L-1BRs or Me-JA.感谢您的阅读！。
龙牙百合脱毒种球培育及休眠生理的研究的开题报告
龙牙百合脱毒种球培育及休眠生理的研究的开题报告（以下是一篇假想开题报告，如有雷同纯属巧合）一、研究背景龙牙百合是一种优质的药食两用植物，具有极高的经济和营养价值。
然而，龙牙百合种球中含有大量有毒素质，可能会对人体健康造成不良影响。
因此，如何有效地去除种球中的毒素成为了人们研究的焦点。
二、研究内容本研究旨在探究龙牙百合种球的脱毒种球培育及休眠生理。
具体包括以下几个方面：1. 建立龙牙百合脱毒种球的培育技术：通过优化培养基的配方、菌株选择、培养条件等方面，建立高效、可靠的龙牙百合种球脱毒技术，实现对龙牙百合种球毒素的有效去除。
2. 探究龙牙百合种球的休眠生理：通过对不同时期龙牙百合种球的生理生化指标进行检测，研究其休眠特点及影响因素，并确定龙牙百合种球的最佳保存条件，为龙牙百合种球的长期保存提供理论依据。
3. 分析龙牙百合脱毒种球的营养成分：通过营养成分测定，对脱毒龙牙百合种球与未脱毒种球的营养成分进行对比分析，为进一步推广龙牙百合种球的种植与食用提供科学依据。
三、研究方法1. 龙牙百合种球的收集：收集龙牙百合生长期的种球，用于后续研究和实验。
2. 建立龙牙百合脱毒种球的培育技术：通过调整不同培养基的配比、选用具有去毒能力的菌种、调整不同的温度、光照条件等措施，建立龙牙百合脱毒种球的培育技术。
3. 探究龙牙百合种球的休眠生理：通过对龙牙百合种球不同时期的生理生化指标、激素水平、微量元素含量、氧化还原状态等进行检测和分析，探究其休眠特点以及影响因素，进一步确定种球的最佳保存条件。
4. 分析龙牙百合脱毒种球的营养成分：采用标准化检测方法，对脱毒和未脱毒的龙牙百合种球的营养成分进行对比分析，探究种球去毒前后对其营养成分的影响。
四、预期目标和意义通过本研究，预期能够建立一套高效、可靠的龙牙百合脱毒种球培育技术，探究龙牙百合种球的休眠生理以及分析种球营养成分，从而为龙牙百合种植与加工提供科学依据，促进其产业化发展，同时也为龙牙百合种球的长期保存和果农增收提供理论支持，对于推动我国药食兼备植物的发展，提高人民健康水平具有重要意义。
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本科生毕业设计(论文) 中文题目龙牙百合在组织培养过程中的酶谱分析外文题目The zymography for Lilumbrownii F.E Browh Varvirdum baker in the process of the tissue culture 学号 0507040099 姓名彭静学院生命科学学院专业生物科学指导教师完成时间2009-4-30江西师范大学教务处制目录摘要 (1)Abstract (1)1 文献综述 (2)1.1龙牙百合的生物学特征及价值 (2)1.1.1龙牙百合的生物学特征 (2)1.1.2龙牙百合的价值 (2)1.2龙牙百合在组织培养过程中过氧化物酶活性变化的研究现状 (2)1.3国内外同工酶研究现状及应用 (3)1.4 研究的目的和意义 (4)2 实验材料、主要仪器与试剂 (3)2.1实验材料 (4)2.2实验主要仪器 (4)2.3 实验试剂 (4)3 实验方法 (4)3.1技术路线 (4)3.2培养基及培养条件 (4)3.3确定上样量 (5)3.4电泳 (5)4试验结果及分析 (8)4.1组织培养过程中龙牙百合生长与分化情况 (8)4.2过氧化物酶同工酶与龙牙百合生长分化的关系 (8)5讨论 (8)6对下一步工作的建议 (9)参考文献 (9)附图 (10)致谢 (12)摘要在组织培养过程中，为研究龙牙百合生长分化与过氧化物酶同工酶的关系，对龙牙百合进行组织培养并采用聚丙烯酰胺不连续体系盘状电泳(垂直管电泳)分离不同阶段过氧化物同工酶。
结果：在龙牙百合生长分化过程及不同组织过氧化物酶同工酶酶谱有很大差异，过氧化物酶同工酶酶谱可作为判别龙牙百合生长分化进程的依据。
关键词：龙牙百合,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,过氧化物酶同工酶The zymography for Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker in theprocess of the tissue culturePENG JingAbstractIn the process of the tissue culture, a study on the relationship between the growth and differentiation and Peroxidase isozyme of Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker was carried out . Tissue Culture for Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker was taken , To separate Peroxidase isozyme under different stages , the discontinuous system of discoid spolyacrylamide gel electrophoresis (vertical tube gel electrophoresis) was used. And the result showed that there was a great difference of map of peroxidase isoenzyme in the process of the growth and differentiation and among different tissues. The map may be as a basis for determination of the course of differentiation.Key words：Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker, polyacrylamide gel electrophoresis, Peroxidase isozyme1 文献综述1.1龙牙百合的生物学特征及价值1.1.1龙牙百合的生物学特征龙牙百合(Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker)为百合科百合属中能形成鳞茎的栽培品种, 多年生宿根草本植物。
鳞茎近球形, 横茎2—4.5cm，鳞片披针形, 白色, 无节, 味淡不苦。
根系由肉质根和纤维状根组成, 肉质根又叫“ 下盘根” , 着生于鳞茎下部；纤维状根又叫“上盘根” , 着生在鳞茎上部。
叶散生, 倒披针形。
花乳白色有香气, 一般称白花百合。
龙牙百合喜凉爽, 耐荫蔽, 喜湿润, 怕水涝, 10℃以上可以萌发生苗, 生长适温为16—24℃, 土层深厚、PH值5.7—6.3。
排水良好的砂质壤土最适宜生长[1]。
龙牙百合以其干品瓣形肥大微弯，色泽洁白至宝黄，形似龙牙而著称。
1.1.2龙牙百合的价值龙牙百合是一类药食同源、有较高经济价值的特产蔬菜和药用植物。
龙牙百合以鳞茎入药,为常用中药,也可供提取淀粉或食用。
龙牙百合含多种氨基酸、蛋白质、淀粉、磷脂、百合苷A、B等抗癌性植物碱及维生素B1、B2等营养物质,具有润肺止咳、宁心安神、清热解毒等作用,性微寒、味甘,是目前市场走俏的药用保健食品[2]。
具有养阴润肺止咳，清心安神功用；主治阴虚燥咳，劳嗽咯血、肺瘘、虚热、烦噪惊悸、失眠、多梦等；有镇咳、平喘、祛痰、抗疲劳、镇静、催眠、提高免疫力，升高外周白细胞等药理作用。
龙牙百合是最名贵的一种百合，它内含丰富的生物碱，蛋白质，矿质元素等，是食品中的珍品，由开其价格昂贵，被奉为贵族食品。
近几年,我国百合产量增加较快,经济效益显著[3]。
1.2龙牙百合在组织培养过程中过氧化物酶活性变化的研究现状在龙牙百合的组织培养过程中，植物过氧化物酶以其广泛存在和特殊的生物学意义而引起日益深入的研究[4]。
龙牙百合组培过程中对过氧化物酶活性变化的研究和其他百合属植物一样，一般都是通过测定植物发育不同时期内的过氧化物酶活性变化规律,来研究植物的组织分化状况[5]。
过氧化物酶与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系[6]。
在植物的代谢过程中它可以除去过多的H2O2，从而维持正常生理过程，避免了H2O2的毒害[7]。
因此，研究过氧化物酶活性变化是非常必要。
有许多公司、研究中心在过氧化物酶活性方面作了大量工作，并取得了较好的成就［８］。
1.3国内外同工酶研究现状及应用同工酶的研究得到了很大发展，同工酶在植物体内调节一定的代谢过程，因此，常被用于细胞分化、器官发生及个体发育过程中基因表达的研究，从同工酶的器官组织特异性也反映了基因表达的时空特异性。
过氧化物同工酶在各种动物体内广泛存在[9]，而且在某些动物的不同器官组织内酶谱存在一定的差异。
研究分化进程及其与过氧化物酶同工酶的关系，可以进一步深入探索龙牙百合生长分化的基因表达差异，为龙牙百合生长分化调控提供理论指导。
酶谱的变化已作为鉴定物种、研究分类与进化、遗传与变异的重要指标[10]。
而且由于同工酶是基因的产物，能直接反映基因的异同，易于观察研究，目前已作为一种分化遗传分化标志广泛地应用于发育生物学、群体依次学、医学、分类学等各个领域。
利用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定同工酶，方法简便，灵敏度高，重现性强，测定结果便于观察、记录和保存[11] [12]。
但至今尚未见到有关龙牙百合生长分化状况与过氧化物同工酶关系的研究。
1.4 研究的目的和意义1.4.1研究目的在组织培养过程中，过氧化物酶同工酶不断发生变化[13]。
通过比较不同阶段过氧化物同工酶谱的差异，来研究龙牙百合生长分化与过氧化物酶同工酶的关系。
1.4.2研究意义作为基因表达的产物，测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具，在植物的生长分化研究中有重要的意义。
在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化，测定这种酶的同工酶[14]，可以反映某一时期植物体内代谢的变化，研究分化进程及其与过氧化物酶同工酶的关系，可以进一步深入探索龙牙百合生长分化的基因表达差异，为龙牙百合生长分化调控提供理论指导[15] [16]。
2 实验材料、主要仪器与试剂2.1实验材料涂艺声教授细胞实验室培养的龙牙百合(Lilumbrownii F.E Browh Var virdum baker)无菌苗。
每隔10天对龙牙百合的茎段取一次样。
2.2实验主要仪器垂直板电泳槽及附件（玻璃板、硅胶条、梳子、导线等）、稳压稳流直流电泳仪、高速冷冻离心机、电子分析天平2.3 实验试剂见附表4 聚丙烯胺凝胶电泳贮液配制方法，但染色使用醋酸联苯胺染色。
醋酸联苯胺染色：0.1g联苯胺+5ml无水乙醇+10ml 1.5mol/L乙酸钠+10mol 1.5mol/L乙酸+75ml的双蒸水。
溶解并过滤待用。
胶片用双蒸水冲洗3次后，在染液中加入0.14ml 30% H2O2。
待酶带完全出现后（约20min），用自来水冲洗2-3次，再隔一天换一次水，总共换2-3次。
3 实验方法3.1技术路线本实验拟采取如下技术路线：无菌苗→外植体→接种→培养→不连续非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物酶同工酶→酶谱分析(定期观察龙牙百合的培养情况,看其生长势态，同时测定过氧化物和硝酸还原酶活性,做纪录)3.2培养基及培养条件本试验采用的基本培养基是MS培养基，其配方查阅有关的资料，另外附加6一BA、NAA植物激素。
蔗糖分别为每升培养基30g，琼脂每升培养基5.8 g，pH 为5.8 ，在容量为200ml的三角瓶中装入50ml，并以高压蒸汽灭菌锅在118℃下灭菌25分钟，培养温度为(25+2)℃,光照度为1500lx,光照12 h/d。
表1 2种培养基成分Table 3 culture medium ingredient 培养基编号培养基成分1号1/2MS基本培养基+BA 1.5 mg/ml + NAA 0.05 mg/ml +20g/l 蔗糖2号1/2MS基本培养基+ BA1.5 mg/ml + NAA 0.05 mg/ml +30 g/l 蔗糖3.3确定上样量设置一系列量（ul）（5、7.5、10、12.5、15、17.5、20），点样在一块电泳板上，然后进行电泳，发现点样量为12.5ul和15ul的图谱最清晰，所以上样量确定为12.5~15ul.3.4电泳[17]参照参考文献[13]中聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶。
用10倍pH8.3的Tris——甘氨酸缓冲液，分离胶采用过硫酸铵——TEMED催化系统，pH8.9，凝胶总浓度T7.1%，浓缩胶采用核黄素——TEMED催化系统，pH6.7、T3.1%，电极缓冲液为pH8.3Tris——甘氨酸系统。
加样量15ul，电泳在4度条件下进行，开始稳压为100v，指示剂溴酚蓝进入分离胶后恒压200v，电泳时间约一个半小时。