产漆酶培养基条件的优化_赵玉萍

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白腐真菌固体发酵玉米秸秆产漆酶条件的优化[J

验室保藏。
）３主要发酵材料和试剂 ①发酵材料。献皮粉，取熬皮过４目玉米秸秆粉，Ｄ筛；烘干后的玉米秸秆用粉碎机粉碎，０目 ②试剂。过４筛。葡萄糖，愈创木酚，冰醋酸，醋酸钠，ｇｏ，ＨＰ峪ＭｓＫＺ等。４Ｏ
１．方法２
１材料与方法
，１材料，
存待用叹
组别
叼认ｅ，二， ‘ ．飞￣４７气｝７７７７
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万方数据
第５期
武忠伟等：白腐真菌固体发酵玉米枯秆产漆酶条件的优化
ｐＨ过高或过低发酵产漆酶活性都很低，这是因为固体发酵接种时，其发酵早期产生大量的有机酸，使秸秆的ｐＨ值从７左右迅速下降至４左右（．０．０表）为后期发酵创造了２，适宜的酸碱环境。０．７０．６日０．５只０．４胆谧０．３帐０．２０．１
万方数据
７６３
湖
北
农业科源自学２加７年浸湿，ｈＺ后以手握有水渍，但无水滴滴出为宜，然后加人基料于２ＯＬ５ｍ三角瓶中，每个样品设３次重复；接种量５恒温培养箱中２℃ ％，６培养，每隔
最佳的产酶培养基（：％）玉米秸秆粉７，２，９熬皮０
Ｍ娇氏０，ＨＰ４．０．ＫＺ０６４Ｏ

培养条件对白腐菌分泌漆酶的影响

ＺＨＡＮＧｉｐｎＧＡＯｉＬ — ｉｇ，Ｈｕ
（ｃｏｌｆｏｅｔｎａｄｃｐｒｈｔｔｒ，ｎｕＡｒｕｔａＵｉｒｔ，ｅｉ３０６ＳｈｏｏＦｒｓｙａｄＬｎｓａｅＡｃｉｃｅＡｈｉｇｉｌｒｌｎｖｓｙＨｆ０３）ｒｅｕｃｕｅｉｅ２
５．５，４．６，４２，３８，６０ａｄ７０，ｒｓｅｔｖｌ．．．ｎ．ｅｐｃｉｅｙ．
Ｋｅｒｓ：ｉ —ｏｕｇ；ａｂｎｓｕｃｎｔｏｅｏｒｅ；ａｃｓｃｉｉｙｗｏｄｗｈｔｒｔｆｎｕｓｃｒｏｏｒｅ；ｉｒｇｎｓｕｃｌｃａｅａｔｔｅｖｙ
ｔｒｆｈｔ．ｏｆｎｕｓｄｎ，ａｄｃｒｏｏｒｅ，ｎｔｇｎｓｕｃｓａｄｐａｕｆｈｔ－ｏｎｕｅｅｏｔｕｅｏｉｒｔｕｇｓｗｅｗａｏｅｎａｂｎｓｕｃｓｉｏｅｏｒｅｎＨｖｌｅｏｉｒｔｕｇｓｗｒｐｉｒｗｅｆ —
（０ｙｏｕ）子囊菌（ｓｍｃｔ）脉孢菌Ｐｌｒｓ、ｐＡｏｙｅｅ、ｓ（ｅｒｓｏａ、柄孢壳菌（ｏｏｐｒ）和曲霉菌Ｎｕｏｒ）ｐＰｄｓｏａ（ｓｅｉＭ）等－。白腐菌是一种担子真菌Ａｐｒｌｓｇｌ１］３
作者简介：张利萍（９０一）女，教。Ｅｍｉｚａｇｐｎ＠ａａ．ｄ．ｎ１８，助－ａ：ｈｎｌｉｇｈｕｅｕｃｌｉ
３６卷２期
张利萍等
培养条件对白腐菌分泌漆酶的影响

毛云芝菌(Coriolus hirsutus)产漆酶培养条件优化

毛云芝菌（Ｃｏｒｉｏｌｕｓｈｉｒｓｕｔｕｓ）产漆酶培养条件优化摘要：优化了以桑叶和麸皮为主要原料由毛云芝菌（Coriolus hirsutus）生产漆酶的培养条件，即培养料起始pH、装料量、封口情况、接种量、发酵时间对漆酶活性的影响，并观察了该菌在优化后培养条件下的代谢动力学情况。

结果表明，自然pH，装量为10 g/250 mL三角瓶、封口纱布4层，接种量为5 mL种子液/瓶，培养时间为10 d，酶活达到1.37×10 4U，优化后结果比初始设计提高了18％。

关键词：Coriolus hirsutus；漆酶；培养条件文献标识码：S646.2; Q554A微生物酶工业化生产应用的主要限制是成本高，培养基和培养工艺的优化是酶的工业化生产中降低成本的有效措施。

若培养基中所用的营养物质占总生产成本很高的比例，那么降低培养基质的成本能够增加生产过程的生产力［1］。

固体培养通常定义为微生物在没有或接近没有自由水的固体物质上生长［2］，研究表明，与液体深层发酵相比，固体发酵具有产量高、设施简单、能量消耗低、废水排除量少、目标产物容易回收等特点［3］。

漆酶是一种多酚氧化酶，用分子氧作为电子受体，催化许多酚类和芳胺化合物氧化；在存在合适的氧化还原介质时，漆酶也能够氧化非酚类物质［4］。

可见这种酶有广泛的底物专一性和显著的非特异性［5］。

近年研究表明，漆酶还可用于生物传感器的制造，如免疫探测器、药物研究等［6］，所以漆酶从十九世纪末至今受到了极大的关注［7］。

选择合适的培养基质，研究其适合的培养基和培养条件是提高漆酶产量的关键。

目前国外固体发酵产漆酶的研究较国内多样化且技术完善，国外有采用椰子果肉［8］、栗子壳［1］、酿造加工副产物［9］、香蕉收获时的残留废物［10］等作为固体发酵基质，这样既有利于解决环境问题，又可以使农产品加工废物得到充分的利用。

笔者在实验室已经筛选出的漆酶产量高的培养基培养毛云芝菌（Coriolus hirsutus）的基础上，优化了固体发酵C. hirsutus 产漆酶的培养条件，即不同的培养料起始pH、装料量、封口情况、接种量、发酵时间等对菌种产漆酶的影响，并分析了该菌在优化后的培养条件下的代谢曲线。

优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究

第卷第期年月林产化学与工业优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究收稿日期：基金项目：长江学者和创新团队发展计划资助项目（）张玉，洪枫＊（东华大学生物科学与技术研究所，上海）摘要：对香菇发酵产漆酶条件进行了优化并研究了部分漆酶性质。

结果发现静置培养优于振荡培养；值＞时香菇菌体基本无法生长，香菇最适生长及产酶值为；低温有利于香菇漆酶生长，但最适产酶温度是；浓度为时有利于香菇漆酶的合成，其中是香菇产漆酶的最佳铜离子浓度，当铜离子终浓度超过时，严重抑制香菇菌丝的生长；除了，二甲基苯胺之外，阿魏酸、愈创木酚、没食子酸、黎芦醇等诱导剂促进香菇合成漆酶的作用不明显，反而会抑制菌丝生长；的加入不利于漆酶合成。

香菇漆酶在条件下保温后仍残余了的活力；以，连氮双（乙基苯并噻唑磺酸）（）为底物的最佳反应温度是，最适反应值为（柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液体系）。

关键词：香菇；漆酶中图分类号：；；文献标识码：文章编号：（），（，，，）：（）＞，，，，，，，，：，，（，，）（，），，（）（），：；漆酶（，，）是目前国内外研究得较为热门的一种胞外多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶中的一小族，已发现其存在于昆虫、植物、真菌和细菌中，其中以真菌尤其是白腐菌中［］分布最为广泛。

真菌漆酶一般含有个铜离子，它们位于酶的活性部位，在氧化反应中能够协同传递电子并将氧分子还原成水。

它的氧化还原电位比昆虫和植物漆酶高，可以氧化酚类、芳胺类、羧酸类、甾体激素与生物色素、金属有机化合物和一些非酚类底物，从而在环境、食品、生物、造纸、纺织印染［］等诸多现代工业领域里都能得以广泛应用。

香菇（）又名香覃，属担子菌纲，伞菌第期张玉，等：优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究目，蘑菇科，皮裥属，学名香皮裥菌。

火红密孔菌产漆酶培养基的优化

火红密孔菌产漆酶培养基的优化杨咏洁;吕蕾;王旻乾;权伍荣【期刊名称】《延边大学农学学报》【年(卷),期】2015(037)003【摘要】采用液体摇瓶培养方法,探讨了碳源、氮源及pH值等不同培养条件对火红密孔菌分泌产漆酶能力的影响.同时,采用正交试验设计方法,对主要的影响因素进行了优化.结果表明:葡萄糖为最佳碳源、酒石酸铵为最佳氮源、初始pH值为8.0时,均有利于漆酶的分泌.正交试验表明:葡萄糖20 g/L、酒石酸铵10 g/L、初始pH 值8.0,以邻联甲苯胺作底物,经7d培养,漆酶的酶活力最高,可达238 U/mL.【总页数】5页(P231-235)【作者】杨咏洁;吕蕾;王旻乾;权伍荣【作者单位】延边大学农学院食品科学系,吉林延吉133002;延边大学农学院食品科学系,吉林延吉133002;延边大学农学院食品科学系,吉林延吉133002;延边大学农学院食品科学系,吉林延吉133002【正文语种】中文【中图分类】TQ925【相关文献】1.血红密孔菌Pycnoporus sanguineus SYBC-L12固态发酵小麦秸秆产漆酶及其对小麦秸秆的降解作用 [J], 范晶晶;马德丽;席艳茹;蔡宇杰;孙啸;管政兵;廖祥儒2.血红密孔菌Pycnoporus sanguineus SYBC-L12固态发酵水稻秸秆产漆酶及其对染料的脱色作用 [J], 孙啸;蔡宇杰;廖祥儒;张峰;刘家扬;袁小曼;马德丽;席艳茹3.响应面法优化褐腐真菌竹生薄孔菌产纤维素酶的液体培养基 [J], 马鸿飞;崔宝凯;员瑗;陈圆圆;戴玉成;司静4.白腐真菌落叶松锈迷孔菌产漆酶液体培养基的优化及其对染料的脱色作用 [J], 吴怡; 马鸿飞; 曹永佳; 司静; 崔宝凯5.真菌产生的锰过氧化物酶和漆酶研究Ⅱ．一株产锰过氧化物酶的担子菌──血红密孔菌K－2352 [J], 周金燕;张发群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究

产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究产漆酶细菌筛选鉴定及固体发酵条件研究一、绪论漆酶是一种广泛存在于自然界中的酶，具有重要的工业应用价值。

在油漆等化工行业中，漆酶可以加速有机溶剂和有机物的降解，具有分解污染物、提高涂料质量等重要作用。

对于产漆酶细菌的筛选鉴定及固体发酵条件的研究具有重要的意义。

二、产漆酶菌株的筛选为了筛选出产漆酶的菌株，我们采用了固体培养的方法。

从土壤、水体等环境样品中采集菌株，然后将其进行分离纯化。

在培养基中，我们添加了有机溶剂作为唤醒剂，以刺激菌株产生漆酶。

接着，通过平板筛选法，筛选出产漆酶活性高的菌株。

用甲基橙为指示剂进行酶活性测试，并通过测定橙色环的直径来评价菌株的漆酶活性。

三、产漆酶菌株的鉴定对于筛选出的产漆酶菌株，我们进行了鉴定工作。

采用形态学观察的方法，观察菌株的形态特征，如菌落形状、色泽、边缘和胞外酶的生成情况等。

接着，通过生理生化试验，检测菌株对不同营养物质的利用情况，并对其产生的酶活性进行测定。

通过16S rRNA基因序列分析，确定菌株的种属。

四、产漆酶细菌的固体发酵条件研究为了提高漆酶的产量，我们进行了固体发酵条件的研究。

我们优化了基础培养基的配方，确定了最适合菌株生长的基础培养基组成。

接着，通过单因素实验和正交实验，优化了培养条件，包括发酵温度、pH值、初始菌量、发酵时间等。

通过对发酵产物的酶活性进行测定，确定了最佳的固体发酵条件。

五、结论通过筛选鉴定和固体发酵条件的研究，我们成功地获得了一株高产漆酶的细菌菌株，并确定了最佳的固体发酵条件。

这为产漆酶的工业化生产提供了重要的理论基础和技术支持，具有重要的应用价值。

我们的研究结果对于深入了解漆酶的产生机制、酶的结构和功能，以及漆酶的应用研究也具有重要的参考意义。

高活性漆酶产生菌的发酵条件优化

ｄｕａｏｙｔｙｃｌｌｅ１／，ｙａｔｅｔｃ１ＬｉｍｃｒｘｍｅｅｕｏｇＬｅｓｘｒｔｂｈｌｓ５ａ５，Ｋ２ＯｇＬ，ａ１００ＬＭｇ０Ｈ４／ＣＣ２．５Ｐ１，ｓ４
０２／ａｄＯｌｏａｙｓａｅｔ１０ｒｍｎ０℃ ．Ｗｉｈｄｉｏｆ．５ｇＬ，ｎｉａｒｔｒｈｋｒａ５／ａｄ３ｔｔｅａｄｔｎｏｍｍｏ／５ｘｌｉｅａｈｉ２ｌＬ２，一ｙｉｎｓｄ
ｔｅｒｖｓｎｔ２ｈａｄ２ｍｍｏ／ＬＣｕｈｅｕｌａｔａｎ７１ “ ａ６ｈ．ｔｅｅｙｃｉｉｙｕｄｒｏｔａｕｔｒｏｄｔｎｔ９ｈｎｚｍｅａｔｖｔｎｅｐｉｌｃｌｅｃｎｉｏｓｍｕｉｗａ１．ｓ３３９２Ｕ／ｍＬａｔｒ７ｄｇｏｈ．ｆｒｗｔｅ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｏｕｅｓｃｌｒ：ｌｃａｅ：ｃｔｖｔｏｏｄｔｏＣｏｉｌｓＶｒｉｏｏａｃｓｕｌａｉｎｃｎｉｉｎｉ
漆酶
是一种含Ｃ的多酚氧化酶（－ｉｈ— ｕｐｄｐｅ
霞等采用正交试验设计方法优化漆酶培养条件，
工业、纸工业等领域具有良好的应用潜力。．造
Ｍｒ２１ａ００．
高活性漆酶产生茵的发酵条件优化
马瑛，贾红华，周华，萍韦
（南京工业大学生物与制药工程学院，江苏南京２００）１ பைடு நூலகம் ９

白腐真菌发酵罐液态发酵产漆酶条件的优化

关键词：白腐真菌；发酵罐；漆酶中图分类号：Ｑ９３９．９６文献标志码：Ａ文章编号：１００３ — ４３１５（２０１５）０２ — ００２１ — ０５
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎＰ
（１．甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃兰州７３００７０，２．江苏农牧科技职业学院，江苏泰州２２５３００）
摘要：通过在发酵罐中液体发酵产漆酶，在发酵罐中筛选黄孢原毛平革菌液体发酵产漆酶的最佳条件．试验选取已优化的白腐真菌液态发酵培养基进行培养，在发酵罐中进行单因素和多因素正交试验，对其在发酵罐中发酵产酶条件进行优化．选取的白腐真菌黄孢子原毛平革菌的最佳发酵生产条件为：温度２８℃ 、转速３００ｒ／ａｉｒｎ、通气量５Ｌ／ａｉｒｎ（通气比１．０ｖｖｍ）、ｐＨ值５、接种量为１５％．在此条件下最高产酶水平可达１４．８６Ｕ／ｍＬ．
ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍｐｒｏｄｕｃｅｄＬａｃｃａｓｅ
ＱＩＡＯＬｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧＬｉ，ＳＨＩＺｈａｏ — ｇｕｏ，ＬＩＬｅｉ
７ — ０ｃ口
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ，

漆酶生产工艺的研究与改进

漆酶生产工艺的研究与改进一、引言漆酶是一种分子量较小的酶，具有广泛的应用前景。

其中最具代表性的用途就是在工业生产中作为生物催化剂，提高产物的纯度和收率，降低生产成本。

一直以来，漆酶的生产工艺一直是生物技术研究领域的热点之一，众多科学家和研究机构致力于发掘更高效的漆酶生产工艺。

二、漆酶的生产工艺目前，漆酶生产工艺主要采用微生物发酵法。

常见的产生漆酶的微生物包括铜绿假单胞菌和黄杆菌。

不同的菌株对生产条件的需求不同，需要通过不断优化来提高生产效率。

1. 菌株的选择漆酶的生产效率和菌株的选择有很大的关系。

铜绿假单胞菌和黄杆菌是目前最常被用于漆酶生产的微生物，在这些菌株中，铜绿假单胞菌的产量更高。

此外，国内外还有一些新的细菌被挖掘出来，值得进一步研究其漆酶生产的潜力。

2. 发酵条件的控制生产漆酶的过程中，发酵条件的控制至关重要。

pH值、温度、发酵时间等条件都需要严格控制。

此外，发酵过程中的氧气供应也需要控制在适宜范围内。

目前，通常采用气体补给技术和在线监测技术来保证氧气供应的平衡。

3. 收割和提取技术收割和提取技术也是影响漆酶生产效率的重要因素之一。

通常采用离心法或超滤法来收集菌体，然后使用水解酶或超声波等技术来提取漆酶。

这些方法不仅能提高漆酶的产量，还能改善漆酶的纯度和活性。

三、漆酶生产工艺的改进在不断改进的过程中，科学家们提出了很多新的漆酶生产工艺。

常见的改进方法包括：1. 基因工程改造利用基因工程技术，可以通过改造菌株的代谢途径和调节酶基因的表达来提高漆酶的产量。

研究表明，通过基因工程改造，可以将漆酶的产量提高一到两倍。

2. 大规模化生产技术目前，漆酶的生产工艺已经转移到了大规模化生产阶段。

通过使用发酵罐、气体补给器、离心机和超滤器等设备，可以在短时间内生产出大量的漆酶。

此外，使用自动化控制技术也能够提高漆酶生产效率。

3. 生化反应工程生化反应工程是现代生物技术的重要组成部分。

通过研究发酵条件、酶的稳定性和保护因子等因素，可以实现漆酶的高效生产。

黄多孔菌产漆酶最佳培养条件的优化

Ｍａｄｌ营养盐浓缩液１０ｍＬＭａｄｌ微量元素浓ｎｅｓ０，ｎｅｓ缩液１ｍ，ｕＯ５２，ｏＬ檬酸缓冲ＬＣＳ・Ｈ０４ｍｇ１ｍｌ柠／
液５（Ｈ＝５０）０ｍＬｐ．。
０１ｍ，５℃ 保温５ｍｉ，用７２．Ｌ２ｎ利２Ｅ型紫外可见分光光度计测５５ａ９ｍ处的光密度（Ｄ值）酶活力以Ｏ，
第３３卷
第２期
纺织学报
Ｊｕｎ１ｏｅｔｅＲｅｅｒｈｏｒａｆＴｘｉｓａｃｌ
Ｖ０．３．Ｎｏ２１３．
２２年２月０１
Ｆｂ．。２０１ｅ２
文章编号：２３９２（０２０ —０３００５ —７１２１）２０６ —５
养基进行了优化，优化后酶活提高达２５倍，漆酶．为
的工业化生产提供了基础。
１实验部分
１１材料－
实验菌株：多孔菌（ｏｙｏｕｌａｓ（ｕ．黄ＰｌｒｓｅｇｎＢｌ）ｐｅ１Ｆ．，源于中国林业科学研究院森林生态环境与ｒ）来
一一
＿＿＿ｉ
一
１
一
样品与底物反应５ｍｎｉ后光密度的改变值表示，以每分钟光密度增加００１为１个酶活力单．０位（ｍＬ。Ｕ／）
一
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液体发酵培养基：铃薯２０ｇＬ葡萄糖马０／，

竹黄菌液态发酵产漆酶培养条件的优化

Ｌｔｄ。Ｈｕｉｎ２３０ａａ２０１。Ｃｈｎ）ｉａ
．
ＡｂｔａｔＡｗａｃｓｐｏｄｉｓｒｉｓｒｃ：ｎｅｌｃａｅｒｕｃｎｇｔａｎ，Ｓｈｉａａｂｍｂｉｏａ，ｗａｓｌｔｄｆｏｔｅａｕａｒｉａｕｓｃｌｓｉｏａｅｒｍｈｎｔｒＩ
文章编号：６３１８（０１０ — ７３０１７ — ６９２１）５０７ — ６
竹黄菌液态发酵产漆酶培养条件的优化
胡艳，蔡宇杰 ¨ 廖祥儒，马文寅，李枝玲。张大兵。可溶性淀粉、适的氮源为０８ｇｄ的酵母膏，及最适铜离／Ｌ最．／Ｌ以
子浓度为２４ｍｍｏ／在自然Ｐ．，液量为５．ｌＬ，Ｈ５０装０ｍＬ，０℃ 、０／ｎ摇瓶振荡培养６３２０ｒｍｉ４ｈ下，
ａｄｌｔｄａｏｌｗｓｆｏｕｌｓａｃ，ｅｓｅｔａｔ．％，ｎｏｐｒｏ．ｎｉｅｓｆｌｓｏ：ｌｂｅｔｒｈ２ｓｙａｔｘｒｃ８０ａｄｃｐｅｎ２４ｍｍｏ／ｐｉｌＬ。Ｈ
５０，ｌｕｄｖｌｍｅ５／５．ｉｉｏｕ０２０ｍＬ，３ ℃ ，２０ｒｍｉ．Ｗｉｈｐｉｍｏｄｔｏｓｈｃｉｉｖｏｑ００／ｎｔｔｅｏｔｍｕｃｎｉｉｎ，ｔｅａｔｖｔｆｈｌｃａｅｗａｃｉｖｄａ２０Ｌａｔｒ６，ｗａｉｈｒ１ｉｓｔａｈｔｏｈｏｔｏ．ａｃｓｓａｈｅｅｔ１０００Ｕ／ｆｅ４ｈｓｈｇｅ７ｔｍｅｈｎｔａｆｔｅｃｎｒ１

亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化

亮菌产漆酶的液体和固体发酵条件优化作者：叶选怡等来源：《湖北农业科学》2013年第06期摘要：为了探讨液体和固体发酵条件对亮菌（Armillariella tabescens）产漆酶的影响，采用正交试验对亮菌液体和固体发酵产漆酶培养基和培养条件进行筛选。

供试亮菌在液体培养时产漆酶甚微，在培养基和培养条件优化后最高酶活为7.92 U/mL；固体发酵时在以葡萄糖浓度0.6%、稻草麦麸质量比3∶7、温度27 ℃、含水量65%、接种量11 mL/100 g培养时漆酶酶活可达3 496.7 U/g。

固体发酵的酶活显著高于液体发酵，固体发酵更适宜亮菌产漆酶。

关键词：亮菌（Armillariella tabescens）；漆酶；液体发酵；固体发酵中图分类号：TQ925 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）06-1410-05漆酶（Laccase，EC1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，与抗坏血酸氧化酶、血浆铜蓝蛋白和胞外胆红素氧化酶同属于铜蓝氧化酶（Blue multicupper oxidase）家族[1，2]。

1883年，日本学者吉田（Yoshida）[3]首次从日本漆树（Rhus verniciflua）树汁中发现了一种可以使树漆迅速氧化、硬化的酶；1894年，这种酶被分离纯化，并被命名为漆酶[4]。

多年来的研究证明，漆酶在自然界中分布于多种植物、真菌、少数昆虫和细菌中，尤其在白腐真菌系统中分布更为广泛，现已成为研究的热点。

漆酶具有的独特功能使其具有巨大的生物利用潜能，如纸浆的去木质化、染料脱色、废水脱毒、食品加工和制药等[5]。

亮菌（Armillariella tabescens）又名假蜜环菌，因由柳树发光朽木分离出菌种，菌丝体在暗处有荧光，故称亮菌[6]。

亮菌中含有亮菌甲素、乙素、丙素、氨基酸、多糖等多种化学成分。

民间用亮菌治疗胆囊炎和传染性肝炎有显著效果，现代药理研究表明亮菌具有醒酒[7]、保肝[8]、防辐射[9]、增强免疫[10]和抗肿瘤[11]等多种功效。

产漆酶真菌的筛选及发酵产酶条件的优化

产漆酶真菌的筛选及发酵产酶条件的优化作者：王雪刘太林杨焜梅王志成湛莹薛兆淞李永佳来源：《安徽农学通报》2019年第23期摘要：从4种白腐真菌（金针菇Flammulina velutipes、秀珍菇Pleurotus geesteranus、鸡腿菇Coprinus comatus、黑木耳Auriculariaheimuer）中通过愈创木酚与漆酶形成显色圈时间、大小、颜色深浅的方式筛选出产漆酶能力最强的菌株为金针菇。

研究了碳源、氮源、各种理化因素等培养条件对漆酶分泌的影响，并通过正交实验设计优化产酶条件。

单因素结果表明：pH 为5时，漆酶分泌最高，酶活分别为235U/mL;培养温度28°C时，漆酶分泌最高，酶活分别为269U/mL;培养时间7d，漆酶分泌最高，酶活分别为311U/mL;蔗糖作碳源、豆粕作氮源，且碳氮总量不变时，碳氮比为10∶1时漆酶分泌最高，酶活为309U/mL。

正交试验表明：蔗糖10g/L，豆粕1g/L，在250mL的三角瓶中，pH为6，温度28°C时，金针菇在第5天达产酶高峰，峰值酶活为330U/mL。

关键词：漆酶;筛选;金针菇;培养条件中图分类号; TQ92 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）23-0031-04Screening of Laccase-producing Fungi and Optimization of Fermentation Conditions for FermentationWang Xue et al.（Food Engineering College，Tianshi College，Tianjin 301700，China）Abstract：From four species of white rot fungi，Flammulina velutipes，Pleurotus geesteranus，Coprinus comatus，Auriculariaiaheimuer，the strains with the highest laccase production capacity were selected as Flammulina velutipes by comparing the formation cycle time，size and color of guaiacol and laccase.The effects of culture conditions such as carbon source，nitrogen source and various physical and chemical factors on laccase secretion were studied，and the conditions for enzyme production were optimized by orthogonal experimental design. The single factor results showed that the laccase secretion was the highest at pH 5 and the enzyme activity was 235 U/mL. The laccase secretionwas the highest at 28°C，and the enzyme activity was 269 U/mL. The laccase secretion was reached at 7 days. The peak activity was 311 U/mL;sucrose was used as carbon source and soybean meal was used as nitrogen source. When the total carbon and nitrogen specific gravity was unchanged，the laccase secretion was the highest at 10：1，and the enzyme activity was 309 U/mL. Orthogonal test showed that：sucrose 10g/L，soybean meal 1g/L，in a250mL volumetric flask，pH is 6，the temperature of 28 °C，Flammulina velutipes reached the peak of enzyme production on the 5th，the peak enzyme activity was 330U/mL.Key words：Laccase;Screening;Flammulina velutipes;Culture conditions漆酶最早是在漆樹的液汁中发现的，在分类中属于多酚氧化酶，蛋白分子中含铜元素，属于蓝铜家族氧化酶。

2株白腐真菌产漆酶条件的优化

生产。本试验分别采用单因素试验和正交试验对产漆酶条件进行优化，旨在确定最佳的产漆酶培养条件。
１材料与方法
１．１试验材料
２．１．１碳源对漆酶分泌的影响在液体培养基中分别以２０ｇ／Ｌ葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉、麸皮作为碳源，其
过氧化物酶、锰过氧化物酶，在后期又发现了漆酶，这３种酶
ＭｎＳＯ４＋３．０ｓ／ＬＫＨ２ＰＯ＋２０ｇ／Ｌ琼脂）；液体培养基（综合马铃薯固体培养基中去除琼脂）。
１．２试验方法
１．２．１扩大培养
合后于２８℃反应１０ｍｉｎ，用ＴＵ一１８１０型紫外可见分光光度
计测定６００ａｍ下的吸光度。酶活力用吸光度的增值（ △ Ｄ鲫）表示， △ Ｄ锄＝ｌＯ．１规定为１个相对酶活力单位。
２结果与分析２．１碳源、氮源对漆酶分泌的影响
酵１０ｄ左右时，粗酶液的酶活力达到１２．７Ｕ／ｇ。
关键词：白腐真菌；漆酶；培养条件；酶活力
中图分类号：ＴＳ２０１．３文献标志码：Ａ文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０７—０３２２— ０３
酶。很多研究表明，漆酶产生于白腐菌的次生代谢阶段，是木质素降解过程中的关键酶，当营养物条件（如碳、氮源）受到限制时，漆酶进行合成并分泌到细胞外。由于白

一株产壳聚糖酶菌株的培养条件优化

一株产壳聚糖酶菌株的培养条件优化赵玉巧;徐娜;杜云建【摘要】[目的] 优化产壳聚糖酶菌株的培养条件.[方法] 对一株从海洋中筛选的假单胞菌XK-3菌株产壳聚糖酶条件进行优化.[结果]培养基最佳组成:葡萄糖30.0g/L,牛肉膏为15.0 g/L,(NH4)2SO4 15.0 g/L,K2HPO4 2.0 g/L,KH2PO4 2.0g/L,NaCl 5.0 g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L.摇瓶培养最佳条件:培养初始pH 6.0,培养温度28 ℃,装液量20%.Mg2+、Ca2+ 、Mn2+对壳聚糖酶活力有一定的促进作用,Fe3+、Cu2+和Zn2+对壳聚糖酶活力有一定的抑制作用.摇瓶培养条件优化后得到的壳聚糖酶活力为3 430 U/L,优化前壳聚糖酶活力为1 072 U/L,优化后是优化前的3.2倍.摇瓶培养得到菌体的最适生长时间为24 h,发酵于64 h后结束.[结论] 优化后的培养条件提高了壳聚糖酶产量,使该菌株的工业应用成为可能.%[Objective] To optimize culture conditions of the strain that produced chitosanase.[Method]The culture conditions of Rhodotorula sp.strain were optimized for the production of trehalose.[Result]The optimum medium consisted of 30.0 g/L sucrose, 15.0 g/L beef extract, 15.0 g/L(NH4)2SO4,2.0 g/L K2HPO4,2.0 g/L KH2PO4 ,5.0 g/L NaCl ,0.5 g/L MgSO4·7H2O.The optimum culture conditions were determined as follows: initial pH 6, temperature 28 ℃,fluid volume 20%.Mg2+, Ca2+ and Mn2+ had a certain promoting effect on the activity of enzyme, Fe3+, Cu2+ and Zn2+ had a certain inhibitory effect on the activity of the enzyme.The yield of the chitosan enzyme was 3 430 U/L through optimized shaking flask culture conditions, the yield of chitosan enzyme was 1 072 U/L before optimization, the optimized result was 3.2 times of that of the former.Theoptimum growth time was 24 h, and the fermentation time was 64h.[Conclusion] The culture conditions that were optimized improve the chitosan enzyme production, and make the industrial application of the strains possible.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2017(045)008【总页数】3页(P7-9)【关键词】壳聚糖酶;假单胞菌;培养基;优化【作者】赵玉巧;徐娜;杜云建【作者单位】淮海工学院,江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏运云港 222005;淮海工学院,江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏运云港 222005;淮海工学院,江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏运云港 222005【正文语种】中文【中图分类】S18壳聚糖是由D-氨基葡萄糖通过β-1,4-氨基糖苷键连接而成[1]，其基本不溶于水，影响了其应用范围。

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素在技术上和成本上具有较大的挑战。当前水解木质纤维
２］。酸素主要有３条途径：酸解法、酶解法和微生物降解法［
酶解法和生物水解法因其解法因对环境污染大而较少应用，
３］。据报处理过程温和、能耗低、设备要求低而备受关注［４－７］，道［降解木质素的微生物有白腐真菌、褐腐真菌和软腐
真菌，其中白腐真菌以其酶活高、酶系完全成为研究的热点。）、木质素的降解主要依赖３种酶，即漆酶（锰过氧化物酶Ｌａｃ（，和木质素过氧化物酶（其中漆酶是一种结合多ＭｎＰ）ＬｉＰ）个铜离子的多酚氧化酶，能催化各种芳烃类化合物（特别是
１材料与方法
１．１材料与仪器菌种：白腐真菌，本实验室保藏。，超净工作台：上海和呈仪器制造有限公司；ＢＣＭ－１０００，恒温摇床：上海福玛实验设备有限公司。ＱＹＣ２１１－１．２培养基及配制方法（）斜面培养基：１ＰＤＡ培养基。）种子培养基：，，（葡萄糖２硫酸铵３．２０ｇ５ｇＭＳＯｇ４· ，，７Ｈ２Ｏ０．５ｇＫＨ２ＰＯ０ｇ，ＮａＯ２ｇＭｎＳＯ４１．２ＨＰ４０．４，，吐温－加蒸馏水至０．０３５ｇＣｕＳＯ５Ｈ２Ｏ０．００７ｇ８０３ｍＬ，４· １０００ｍＬ。（）初始发酵产酶培养基：，，麸皮１葡萄糖１硫酸３０ｇ０ｇ，，，铵０．１ｇＭＳＯＨ２Ｏ０．５ｇＫＨ２ＰＯ１．０ｇＮａＯｇ４ ·７４２ＨＰ４，，，吐温－０．２ｇＭｎＳＯ０３５ｇＣｕＳＯＨ２Ｏ０．００７ｇ８０４０．４ ·５
１］，形成了纤维素的天然屏障［因此利用木质纤维维素外侧，
— —农业部分（；基金项目：江苏省科技支撑计划— 编号：ＢＥ２０１０３５７）；江苏省高校产业化推进项目（编号：江苏省ＪＨＢ２０１１５８）－大学生科技创新计划项目，作者简介：赵玉萍（女，淮阴工学院副教授，江南大学在读博１９７７－）：士。Ｅ－ｍａｉｌｚｈａｏｕｉｎ４＠１２６．ｃｏｍｙｐｇ收稿日期：２０１２－０７－２５
８］。由白腐真菌产生的漆酶因其来源广泛、催酚类）的氧化［
但因酶Байду номын сангаас活不高，一直化活性强而具有广泛应用前景和价值，
９］。以来是研究的热点［
本试验利用实验室保藏白腐真菌，采用响面法优化产漆酶培养基提高酶活，为漆酶的进一步研究及工业化生产提供一定的依据。
ＺＨＡＯＹｕｉｎＸｉａｏ－ｗａｎ－ｐｇＣＨＥＮｇ
（）淮阴工学院生命科学与化学工程学院，江苏淮安２２３００３ ’ （ＳｃｈｏｏｌｏＬｉｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｉｎｅｅｒｉｎｕａｉｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏＴｅｃｈｎｏｌｏＪｉａｎｓｕ，Ｈｕａｉａｎ２２３００３，Ｃｈｉｎａ）ｆｆｇｇ，Ｈｙｆｇｙ，ｇ摘要：对白腐真菌发酵产漆酶的培养基组成进行优化试验。在单因素试验结果的基础上，进行三因素三水平的响应面分析，通过对试验数据回归分析，获得了二次多元回归方程，预测麸皮、酒石酸铵和吐温－并预测漆酶最高酶８０的优化值，活。结果表明：当麸皮、酒石酸铵和吐温－８０的优化值分别为／／漆酶最高酶活可达１１．０４，０．１０ｇＬ和３．２４ｍＬＬ时，／，／与预３４．２５ＵｍＬ验证实验漆酶实际酶活为３６．６７ＵｍＬ，测值十分接近，优化后酶活与比优化前提高了６２．９８％。关键词：白腐真菌；漆酶；酶活；培养基
从麸皮、葡萄糖、酒石酸铵、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、硫酸锰、硫酸铜、吐温－进行单因素试８０这９种因素，验，初步筛选出对菌株产酶影响较大的３种因素，然后通过根据软件所提Ｄｅｓｉｎｘｅｒｔ软件进行三因素三水平的试验，－Ｅｇｐ供的各种条件进行试验。在原有发酵产酶培养基基础上，在其它因素不变的情况下，仅对麸皮添加量进行单因素试验，其添加量分别为５．０，／测定酶活。依据相同的方法作其７．５，１０．０，１２．５，１５．０ｇＬ，分别改变葡萄糖、酒石酸铵、磷酸二氢钾、磷它单因素试验，酸氢二钠、硫酸镁、硫酸锰、硫酸铜和吐温－结果８０的添加量，见图３～５。
第２８卷第６期２０１２年１１月
／１０．３９６９．ｉｓｓｎ．１００３－５７８８．２０１２．０６．０５７ｊ
Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．６Ｎｏｖ．２０１２
产漆酶培养基条件的优化
Ｏｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒｌａｃｃａｓｅｒｏｄｕｃｔｉｏｎｐｐｂｒｅｓｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｙｐｇｙ赵玉萍陈晓旺
：ＡｂｓｔｒａｃｔＣｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒｌａｃｃａｓｅｆｒｏｍｗｈｉｔｅｒｏｔｆｕｎｉｒｏｄｕｃｔｉｏｎｇｐ，ｗａｓｏｔｉｍｉｚｅｄ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｔｏｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｉｎｌｅｆａｃｔｏｒｔｅｓｔｓｔｈｒｅｅｐｇｇａｎｄｔｈｒｅｅｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅａｎａｌｚｅｄｂｒｅｓｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｆａｃｔｏｒｓ－ｙｙｐ，ａｎｄｔｈｅｓｅｃｏｎｄｏｒｄｅｒｅｕａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｒｅｒｅ－ｑｙ－ｇｙｇｓｓｉｏｎａｎａｌｓｉｓｏｆｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｄａｔａ．Ｔｈｅｏｔｉｍａｌａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｒｅｄｉｃｔｅｄｙｐｐｐ，ａ／ｂｒａｎｍｍｏｎｉｕｍｔａｒｔｒａｔｅａｎｄｔｗｅｅｎ８０ｗａｓ１１．０４ｇＬ，ｗｈｅａｔ－／／，０．１ｇＬａｎｄ３．２４ｍＬＬｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌａｎｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｒｅｄｉｃｔｅｄｐｙｐ／ｌａｃｃａｓｅｃｏｕｌｄｒｅａｃｈｔｏ３４．２５ＵｍＬ．Ｔｈｅｌａｃｃａｓｅａｃｔｉｖｉｔｏｆｖｅｒｉｆｉｃａ－ｙ／ｔｉｏｎｅｘｅｒｉｍｅｎｔｗａｓ３６．６７ＵｍＬ，ｗｈｉｃｈｗａｓｖｅｒｃｌｏｓｅｔｏｔｈｅｒｅ－ｐｙｐｄｉｃｔｅｄｖａｌｕｅ．Ｔｈｅｌａｃｃａｓｅａｃｔｉｖｉｔｕｎｄｅｒｔｈｅｏｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎ－ｙｐｃｒｅａｓｅｄｂ６２．９８％ｃｏｍａｒｅｄｔｏｔｈｅｏｒｉｉｎａｌｅｎｚｍｅｍｅｒｏｄｕｃｔｉｏｎ－ｙｐｇｙｐｄｉｕｍ．：；；；Ｋｅｗｏｒｄｓｗｈｉｔｅｒｏｔｆｕｎｉｌａｃｃａｓｅｅｎｚｍｅａｃｔｉｖｉｔｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｇｙｙｙ
２结果与讨论
２．１初始酶活根据上述培养条件，采用起始产酶培养基发酵产酶，测其酶活变化曲线见图１。定漆酶酶活，
［０］。加蒸馏水至１３ｍＬ，０００ｍＬ１
农作物秸秆、稻壳和森林废弃物在内的木质纤维素类物质是世界上最广泛的可再生资源，是最具前景的生物转化生产原料。天然的纤维素物质除了本身更加致密的晶体结构外，一般还含有半纤维素和木质素等，这些物质“ 包裹” 在纤