高效液相色谱仪使用注意事项
高效液相色谱仪的使用注意事项
高效液相色谱仪的使用注意事项
1.使用前须确定操作者是否具有色谱仪操作资格，如未具有资格，应在专业人士的指导下使用。
2.首次使用前，应检查仪器性能是否正常，适当调整参数，以达到最佳操作状态。
3.使用过程中，应注意仪器的安全，避免过热、过压及调节参数超出正常范围，避免仪器受损。
4.样品质控，应定期使用标准品或有关物质进行质控，确保测试精度。
5.操作时应熟练掌握仪器操作流程，以防误操作。
6.应及时更换仪器液体及耗材，以确保实验准确。
7.使用后，应将仪器关闭，安全放置，勿放在水源附近或潮湿环境中。
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高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总
高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new?method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9．填写登记本，由负责人签字。
10．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
13．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
高效液相色谱法注意事项
高效液相色谱法注意事项1.虽然泵能耐压6000PSI的压力，但不要使泵处于4000PSI以上的压力为宜。
2.安装及拆卸色谱柱时应注意柱的连接方向，千万不能接反。
否则可能导致柱效降低，甚至损坏色谱柱。
3.严禁开空泵。
在无流动相通过时不要扳动进样阀的操作杆，使用时要注意尽可能少扳动，以免磨损内部的密封垫圈。
4.为了延长检测器灯源的使用寿命，在色谱泵稳定后再打开检测器电源开关，分析结束后立即关闭检测器。
5.应使用高纯度、高质量的溶剂和试剂。
6.避免pH值超限，pH值应控制在2.2～7.5之间。
pH值偏低或偏高都会腐蚀液相系统的不锈钢材料；破坏色谱柱填料的结构，使填料失活。
7.色谱柱温不能超过规定要求，柱温过高会加速色谱柱填料老化，破坏其结构。
8.使用所有溶剂必须是互溶的。
这对于缓冲流动相来说是非常重要的，盐类的析出会很快损坏要维护的部件。
9.流动相首选甲醇-水系统，如经试用不适合时，再选用其他溶剂。
为保护仪器，应尽可能少用含有缓冲液的流动相。
如果流动相中含有缓冲剂，每日使用后应用不含缓冲剂的流动相或新鲜纯化水将仪器管路、泵、进样阀、色谱柱及检测池等充分冲洗干净。
10.如果液相系统使用未过滤的洗脱液、注入未过滤的样品、系统中滞留缓冲洗脱液都能堵塞系统或划伤泵柱塞。
所以流动相、样品使用前必须用0.45μm微孔滤膜过滤；流动相并先经脱气处理后使用。
停泵后决不允许缓冲洗脱液滞留在系统中，须用经过滤后的新鲜纯化水进行清洗，并保证将缓冲剂冲洗干净。
11.如果泵闭置在2天以上，应将甲醇注满液相系统，以避免水溶剂系统中可能存在微生物的繁殖。
12.色谱柱保存时应使填充剂处在润湿状态，两端密塞。
反相柱（如十八烷基硅烷键合硅胶柱）可在甲醇中保存；正相柱（如硅胶柱）可在正己烷中保存等。
13.决不能使用盐酸溶液。
一般来说，任何浓度的卤化物都会腐蚀未经钝化的不锈钢材料。
14.尽量避免使用在电化学过程中引起腐蚀的金属离子。
应避免的典型金属离子有锰、铬、锌、铜、镍、钼、铁。
高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题
高效液相色谱仪使用中应注意的问题：
1. 柱温控制：高效液相色谱仪通常需要在一定的温度下进行分析，因此使用过程中需要确保柱温控制系统稳定，并按照要求设置适当的柱温。
2. 流速控制：在使用高效液相色谱仪时，需要准确控制流速以保证分离效果。
不同的分析条件有不同的最佳流速范围，因此在实验前要进行流速校正并按需调节。
3. 样品准备：样品准备是影响分析结果的重要环节，需要确保样品充分溶解，可以使用适当的溶剂和溶解条件。
同时，在样品准备过程中要注意避免造成杂质的污染。
4. 使用试管的问题：注意试管的洁净问题，如果使用不洁净的试管会影响试验结果的准确性；注意塑料试管的溶解问题，有些有机溶剂可能会对管壁有溶解现象；注意被测样品在试管壁上的吸附问题，有些药物可能会吸附在玻璃试管的管壁上。
HPLC使用注意事项
HPLC使用注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于分析化学和生物化学领域的分离技术。
在使用HPLC时，以下是一些需要注意的事项：1.选择合适的柱：根据样品性质和分离要求选择适当的柱。
不同的柱材料和填料对样品的分离效果有不同的影响。
2.样品准备：样品的准备对于HPLC分析至关重要。
样品应该是纯净的，不含杂质。
如果有需要，可以通过萃取、浓缩或衍生化等方法对样品进行前处理。
3.流动相的选择：选择合适的流动相对于分离效果也是至关重要的。
流动相可以是各种溶剂或它们的混合物。
对于高效液相色谱来说，通常使用的是有机溶剂如甲醇、乙腈等。
还需要注意一些流动相的pH值，应根据样品的性质来选择。
4.流速和梯度条件：选择适当的流速和梯度条件以满足分离的需求。
流速过高可能会导致柱压升高和分离效果下降。
而流速过低则会降低分离效率。
5.注射量：注射量应根据样品和柱的容量来确定。
一般来说，注射量不宜过大，以免超出柱的容量范围。
6.检测器的选择：根据分析目的选择适当的检测器。
常用的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
不同的检测器对不同的化合物有不同的灵敏度和选择性。
7.标定和校准：在进行HPLC分析之前，应该进行标定和校准以确保分析结果的准确性和可靠性。
标准品的选择和制备应严格按照相关的规范进行。
8.维护和保养：定期进行仪器和柱的维护和保养以保证仪器的正常运行。
比如清洗柱、更换柱和检测器的流体以及检查泄漏和杂质等。
9.数据分析和解释：在获得分析数据后，进行相应的数据分析和解释。
对峰进行积分、计算峰面积和峰高度等指标，并与标准品进行比较分析。
10.安全措施：在进行HPLC分析时，应遵守相关的安全操作规程，避免接触有毒和易燃物质。
总之，正确使用HPLC技术需要注意上述方面的事项，以保证分析结果的准确性和可靠性。
通过合理的实验设计和操作，可以获得满意的分离效果和分析结果。
高效液相色谱仪使用注意事项及工作原理
高效液相色谱仪使用注意事项及工作原理高效液相色谱仪使用注意事项液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
由于泵只能输送液体，而不能输送空气。
2、色谱柱变干的问题：另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
3、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意以下问题：假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会特别便利。
PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK碰到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。
二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。
高效液相色谱仪使用注意事
高效液相色谱仪使用注意事项
（1）流动相放置时间超过三天的不要继续使用，应重新配制，需要调PH的千万不能遗忘！！！
（2）配制好的流动相应过滤，并超声15分钟！
（3）换流动相时候，应停泵，换好流动相后，先将流速调为0.8，运行10分钟后将流速重新调回标准要求的
流速。
（4）实验过程中，注意观察压力的变化，并注意流动相是否充足，否则应该及时补充。
（5）实验前和实验后都应清洗进样阀，定量环，并将基线走平，用滤纸把进样口擦干！
（6）进样的时候，应该将进样针完全插入进样口，若进样针还有部分留在外面，说明没有进到位，样品不
会完全打进去！！！
（7）实验完成后，应尽快关闭检测器，因为紫外灯的寿命只有2000小时，而且更换紫外灯的费用比较高！（8）冲柱子的冲柱水和甲醇都应该过滤和超声，且在换冲柱水和甲醇的时候都要调流速。
参照第（3）条！（9）经常注意观察桌面上和地上的废液缸，及时倒掉废液！。
高效液相色谱仪使用注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项
1、循环水可用5%甲醇。
2、纯化水的电导率为18。
3、过滤溶液时混合溶剂用油膜；也可先用水膜过滤水溶液，再用油膜过滤有机溶剂。
4、开机后先用纯甲醇冲洗柱子20～30min →纯化水冲洗20～30min →流动相（盐溶液）
关机前冲洗柱子顺序相反。
5、柱子安装方向：柱子上箭头指示的方向（液体流动方向）安装；低压到高压的顺序。
注意
安装接头连接紧密。
进样量一般为3次，每次进样20µl。
6、检测器：AU 吸收值不变表示柱子中无杂质存在。
λ表示波长
E SAMP 样品池能量（大于200）
EREF 参比池能量不变
ADJ 参数不变
泵：PSI 压力不变表示无气泡
7、排气泡：可用大注射器抽5ml液体。
8、新柱子的柱压在1000左右。
10、进样器的针管与针头分开放，清洗时先用纯甲醇再用纯化水。
11、连续注入样品三次且保留时间和峰面积重合（误差5%）表明系统稳定可以检测。
12、标准品和样品做两组平行试验。
13、每周开机一次，每月用甲醇冲洗柱子至少一次（20～30min）。
高效液相色谱仪操作注意事项
高效液相色谱仪操作注意事项流动相：1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
样品：1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。
操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server （一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开O n line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
HPLC仪器使用注意事项
HPLC仪器使用注意事项HPLC（高效液相色谱）是目前广泛应用于分析化学的一种重要技术手段。
然而，在使用HPLC仪器时，需要注意以下几个方面的问题，以确保分析结果的准确性和仪器的良好运行。
1.仪器的日常维护：定期检查和保养HPLC仪器是确保其正常运行和延长使用寿命的重要措施。
这包括清洁仪器表面、更换耗材和消耗品、检查泵的压力以及检查和校准检测器等。
仪器的维护工作应按照仪器提供商的要求进行，并根据实际情况进行适当调整。
2.使用适当的溶剂：HPLC仪器几乎都使用有机溶剂，在选择时需要注意它们的纯度和质量。
使用优质的有机溶剂可以确保分析结果的准确性，并减少对仪器和柱的损害。
此外，应注意将溶剂储存在干燥、清洁、不受阳光直射的地方，以避免溶剂的蒸发和污染。
3.样品的准备和处理：HPLC仪器仅能处理液体样品，因此固体样品需要先进行溶解和过滤。
此外，样品的稳定性也需要考虑。
一些样品可能会在接触空气、光照或高温条件下发生分解，导致分析结果的不准确。
因此，在准备样品时，应尽量避免这些条件，并在分析之前进行适当的保存和封存。
4.柱的选择与维护：柱是HPLC分析的关键部分，其选择需要根据具体样品的性质和分离需求进行。
在选择柱时，应注意柱的尺寸、填料类型和粒径以及柱温设置等因素。
同时，为了保证柱的稳定性和使用寿命，需要定期进行逆洗和再填充等维护工作，以及对柱进行正确的保存和保养。
5.检测器的调整与校准：HPLC仪器使用的检测器包括紫外/可见检测器、荧光检测器和质谱检测器等，这些检测器需要经过适当的调整和校准才能保证分析结果的准确性。
在使用检测器前，需要根据仪器的说明书进行检测器的初始化操作，并根据标准物质进行灵敏度、线性度和准确性等校准工作。
6.数据的处理与解释：HPLC分析产生的数据需要进行适当的处理和解释，才能得出正确的结论。
在数据分析过程中，应考虑样品的稀释、补偿和基线的修正等因素，并结合仪器的性能和分析方法的要求进行结果的计算和解释。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过2.0ml/min，压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过3天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液。
10、所用水均为注射用水或纯化水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
高效液相色谱仪维护1、保持仪器室和仪器的干净整洁，同时打开排风扇保持室内良好的通风。
2、每次开机仪器均应通过自检，否则根据说明书的要求进行处理，在任何时候出现异常情况或若遇操作人员处理不了的情况时，需及时报请相关领导批准后进行处理或请专业维修人员进行处理。
高效液相注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用流速一般为1.0ml/min，最高不超过3.0ml/min（制备），压力一般不超过25MPa，最高不超过30MPa。
2、使用温度一般不高于50℃，最高不高于60℃（特殊要求的除外）。
3、试剂瓶上应注明试剂名称，配制人员以及配制日期，同时写好仪器使用记录。
4、开机后，先用色谱乙腈或甲醇（使用前要超声，脱气）冲洗约30分钟，流动相中若含磷酸盐缓冲液，用5%乙腈或8％甲醇溶液（配制后超声，脱气）冲洗约30分钟再换流动相；若不含磷酸盐缓冲液，可直接换流动相；若不含有机溶剂,用注射用水冲洗约30分钟再换流动相。
更换时注意停泵！5、分析完毕，用5%乙腈或8％甲醇溶液冲洗约30分钟再换乙腈或甲醇冲洗约30分钟。
6、流动相使用前用有机滤膜过滤，超声波脱气约2分钟，使用时间一般不超过2天，且每次使用前都要重新抽滤。
7、注射用水、5%乙腈或8％甲醇溶液使用前用0.45微米有机滤膜过滤（若过滤速度太慢可用少量乙腈冲洗滤膜），超声波脱气约2分钟，当天配制，当天使用。
8、冲洗用乙腈和甲醇用0.45微米有机滤膜过滤，以后每3天用0.45微米有机滤膜过滤1次。
9、使用微孔滤膜时应注意水系和有机系，水系滤膜不能用于抽滤含有有机溶剂的溶液，过滤装置目前实验室只有一套，请大家一定倍加珍惜，过滤时，实验人员必须守在旁边。
10、所用水均为超纯水或市售哇哈哈用水（限当天使用），乙腈、甲醇均为色谱纯。
11、样品进样前，必须用色谱级溶剂溶解，再经有机滤头过滤，方可进样。
12、使用过程中，注意压力变化，若压力过低或者过高，及时查明原因。
注：以上注意事项以C18柱为例，若为其它特殊色谱柱，要根据要求相应调整。
13、戴安液相分析和制备时需更换定量环及检测池，请根据需要更换，若有疑问，请咨询负责人。
特殊柱子的使用：1、阳离子柱：不能接触有机溶剂，一般保存在水中，使用时注意管路中的有机溶剂。
2、硅胶柱：反相：使用时同C18柱；正相：注意溶剂的混溶，正己烷、正庚烷与甲醇、水、乙腈不互溶，可用异丙醇过渡。
高效液相色谱注意事项
高效液相色谱注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于各个领域的分析技术，下面是使用HPLC时需要注意的几点事项。
1. 样品准备：在进行HPLC分析前，需要仔细准备样品。
首先，确保样品是稳定的，不会在分析过程中产生降解或变化，并且准备足够的样品量以避免实验中的误差。
其次，要将样品充分溶解或悬浮于适当的溶剂中，以获得准确和可重复的分析结果。
2. 准备工作：在运行HPLC之前，需要对仪器进行一些准备工作。
首先，根据所需的分析方法，选择合适的柱和流动相，并对其进行装配。
然后，检查仪器的运行状态，如泵的压力和流量、检测器的灵敏度等，确保其正常工作。
最后，对仪器进行校准和标定，以确保分析结果的准确性和可靠性。
3. 流动相控制：在HPLC分析过程中，流动相的选择和控制非常重要。
合理选择流动相的组成和比例，以获得最佳的分离效果。
在分析过程中，要保持流动相的稳定性，避免气泡和颗粒物进入流动相中，以免影响分析结果。
4. 样品注射：样品注射是HPLC分析中关键的一步。
正确地注射样品可以避免样品在进样过程中的损失和变化，并确保准确和可重复的分析结果。
在进行样品注射时，要注意控制注射量和注射速度，以避免过量或不足的样品进入柱中。
5. 分离条件控制：为了获得最佳的分离效果，需要合理控制分离条件。
首先，选择合适的柱和流动相，以达到对于待分析物相容性和选择性的要求。
然后，根据分析方法的要求，调整流速、温度和梯度程度等参数，以优化分离效果。
6. 数据分析：在HPLC分析过程中，要准确记录和分析数据。
首先，记录样品处理、仪器参数和分析条件等操作步骤和参数。
然后，进行数据处理和结果分析，如计算峰面积、定量分析和结果比对等。
最后，对分析结果进行统计学分析，评估分析方法的准确性和可靠性。
总之，使用HPLC进行分析时，需要严格控制实验条件和仪器性能，并进行合理的样品准备和处理。
遵守上述几点注意事项，可以提高HPLC分析的效率和结果的准确性和可靠性。
高效液相色谱仪使用注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项1、使用者上机前首先须经过管理老师的同意，须认真履行仪器使用登记制度，出现问题应及时向老师报告。
2、须自备分析柱和流动相溶剂。
3、流动相：须使用色谱纯级溶剂，样品溶液和流动相需用0.45µm 滤膜过滤。
若是使用V ARIAN色谱仪，流动相须首先赶气40～60分钟。
4、进样：一定要使用平头微量进样针进样。
对一般样品而言，进样体积需大于定量环的2.5倍～4 倍则更加保险。
5、请正确开关机，顺序如下：打开计算机（Agilent 1100还须先运行Bootp Server程序）→打开HPLC 各模块电源→待各模块自检完成后，打开化学工作站→打开Purge阀，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止→关上Purge阀→进行数据分析方法编辑和数据采集方法编辑→用流动相冲洗和平衡系统和分析柱（更换溶剂后应以较长时间平衡系统）→关机时，先关闭化学工作站，再关HPLC 各模块电源和计算机。
6、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相。
7、请在每次分析时检查并记录压力是否在正常范围；每次使用完毕后请清洗系统：先以适当比例水和ACN 或MeOH混合溶液清洗20～30分钟，再以100％ACN 或MeOH 清洗10～20分钟，最后应将有机溶剂保留在系统中。
当流动相中使用了无机盐、酸等缓冲盐物质，在分析结束后，应先用纯水“purge”脱气机管路冲洗5分钟，再用95％水和5％ACN 或MeOH清洗色谱柱30～40分钟后，再以100％ACN 或MeOH 清洗10～20分钟，最后应将有机溶剂保留在系统中。
冲洗过程中关闭D灯、W灯。
8、为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。
通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
使用高效液相色谱仪的注意事项
使用高效液相色谱仪的注意事项
使用高效液相色谱仪的注意事项包括：
1.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
2.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
3.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子
一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
5.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
6.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→
单向阀检查并清洗，清洗方法：①以异丙醇作溶剂冲洗；②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。
7.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免
产生气泡。
8.试管的洁净问题：高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，
如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。
例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。
总之，高效液相色谱仪使用时需要注意以上问题，以保证仪器的正常运转和实验结果的准确性。
高效液相色谱仪使用时的注意事项
高效液相色谱仪使用时的注意事项1. 色谱柱中的流动相会排干吗？不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
因为泵只能输送液体，而不能输送空气。
相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂(如经氦气脱气的甲醇)冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要(以1mL/min的流速)冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
. 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头需要注意什么问题？如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。
PEEK管路容易连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi(但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi)。
使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。
但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。
高效液相色谱仪在使用过程中需要注意的事项
高效液相色谱仪在使用过程中需要注意的事项液相色谱是实验室使用频率非常高的仪器设备，在使用过程中会有许多小技巧，小的注意事项，今天就按照LC组成部分：流动相溶剂瓶→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→废液，此顺序来一一说明如何做保养？一、流动相溶剂瓶的保养溶剂瓶是流动相的起点，通常是盛放水相溶液或是有机相溶液。
1、水相溶液，对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。
对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新。
就单纯的水来说，放置一天之后，在色谱图中会出现很多的杂峰，影响有关物质的检测。
因此，建议水相，特别是纯水，每天进行更换。
2、有机相溶液，对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。
但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。
为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。
3、清洗过滤，溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英和不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，因此必须进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。
二、高压泵的保养泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。
状态正常的高压泵是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。
1、泵压力波动，很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动又是常见的一类问题。
通常我们可以通过重新清洗流路和再次脱气流动相加以解决。
2、过滤白头保养，在泵的维护里还有一项常做的工作就是更换清洗阀上的过滤白头，通常判断的标准是纯水以5mL/min流速清洗的时候，如果压力超过1MPa则考虑更换。
三、进样器的保养进样器分手动和自动两大类，虽然两者工作模式不同，但使用的要点是基本一致的。
1、防止交叉污染，自动进样器常见的问题是交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内外表面，并随下一次进样进入色谱系统。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
一、高效液相色谱仪的使用注意事项
1、使用人在使用前一定要确认当前系统是处于哪种色谱状态；
2、要对流动相系统、进样器等进行排气操作，避免有气泡干扰；正式进样前，要将流动相、色谱柱、检测器等设置好，并进行预平衡，待仪器处于稳定的初始条件下，再开始进样检测；
3、待检测的样品根据仪器的要求一定要保证澄清透明，可选择高速离心或者过滤膜等方式进行净化；
4、进样的顺序建议按照试剂空白、标准系列溶液、试剂空白、样品空白、质控样品、待测样品、试剂空白的顺序进行，以便确认仪器中是否存在干扰待测成分的物质、质控效果等，若待测样品较多，建议在待测样品中间插入质控样品，以确保检测质量；
5、采用梯度洗脱条件检测时，一个样品检测完成之后，一定要确保柱压等条件恢复到初始状态再进行下一个样品的检测；
6、所有检测工作完成后，要对液相系统进行溶剂替换，反相系统建议用甲醇或乙腈保存，包括进样器和液相管路部分，如果使用缓冲盐作为流动相，要用大比例水相将盐冲出，再用纯有机相替换。
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９． 清洗色谱柱或长时间不采集数据之时，应将“灯”关闭，以延长“灯”之寿命，切忌频繁开关“灯”。
１０．自动进样小瓶之进样隔垫，不需每次更换，至少应使用５次以上，但也不能长时间不更换，避免碎屑堵塞针头。
３． 当流动相中使用了无机盐、酸等物质，在分析结束后，应先用纯水“purge”脱气机管路５分钟，再用其冲洗色谱柱３０分钟。
４． 使用水冲洗系统之后，一定要用有机溶剂“purge ”脱气机管路５分钟，排净水，避免长菌。
５． 流动相溶剂瓶中，不能让水长期保存于其中，使用之后一定要换以有机溶剂保存，避免长菌。
６． 液相室溶剂蒸腾不可避免，为了健康，请不要长时间停留其间，更不能在室内喝水、吃东西。
７． 拆装色谱柱时一定要注意顺序：
安装：先装柱进口端，再安柱出口端；
拆卸：先拆柱出口端，再拆柱进口端
注意：装柱时应先用手拧紧不锈钢螺丝，再拧松，再拧紧，最后用扳
子拧紧。（约１／４圈）
１１．请按自己配制供试品时所用溶剂来确定“WASH”小瓶中所用的溶剂类型，并注意更换。
１２．请尽量不要用手接触插入溶剂瓶中的管线，以防止手上的油污污染流动相。
１３．一般情况下，仪器室不能开窗，避免灰尘。
１４．使用工具后，请物归原位，以方便下次使用。
１５．请及时保存自己建立的方法，并在关机前将方法（method 和 sequence）均改为“default”，以确保再次开机时不被他人误操作改掉。
高效液相色谱仪使用注意事项
tomyang 发表于: 2007-5-09 09:52 来源: 万客化工在线
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高效液相色谱仪使用注意事项
１． 理论上，流动相或冲洗色谱柱之溶剂应在每日使用前过滤。
２． 更换流动相或者每日（停机过夜）重新开泵冲柱前，均应先“purge”３分钟，以使管路中之气体排净。
关机时，先关闭工作站，其他并无顺序，需注意一点：NT 系统为手动关机，按下关机指令后，待显示屏上出现“It is now safe to turn off your computer”之时，则轻按机箱上的电源按钮，即可关机。而win 2000无需如此，可自动指令关机。
１６．请在每次分析时仔细纪录柱压力，柱效等参数，以便进行纵向对比，了解仪器和色谱柱状况。
１７．请正确开关机，顺序如下（Agilent 1100）:
先开计算机、脱气机、泵、自动进样器、柱温箱—此五项无顺序，但应等自动进样器自检完成后再进行下一步操作。
等显示屏“boop”出现后，而且确定液相其他部件均正常时，则可打开检测器电源，