生化分析仪参数设置

（八）底物耗尽限额设置。

有些仪器有自动选择线性功能，能自动 选择反应曲线上连续监测期内仍呈线性 的吸光度数据计算结果，使酶活性测定 的线性范围得以扩大，可以减少稀释及 重测次数。
（九）试剂吸光度上限、下限 和试剂空白速率设置。


每种试剂都有一定的空白吸光度范围， 试剂空白吸光度的改变往往提示着试剂 的变质，此时应更换合格试剂。 试剂吸光度上限为正向反应用，试剂吸 光度下限为负向反应用。
（三）：样品量与试剂量设置

3.1稀释水量。 添加样品稀释水是为了洗出粘附在采样 针内壁上的微量血清，减少加样误差， 添加试剂稀释水是为了避免试剂间的交 叉污染。所以两种稀释水应尽量减少， 以免被过量稀释。
（三）：样品量与试剂量设置

3.2最小样品量。 即分析仪进样针能在规定的误差范围内 吸取的最小样品量，随着技术的不断改 进，仪器的最小样品量逐渐减小，在样 品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的 情况下往往需采用分析仪的最小样品量 作为减量参数，从而使仪器的检测范围 上限得以扩大。
（一）：检测方法。

1.3比浊法。 自动生化分析仪一般只能做透射免疫比 浊分析，当光线通过一定体积的含免疫 复合物的溶液时，由于溶液中存在的抗 原-抗体复合物粒子对光线的反射和吸收， 引起透射光的减少，测定的光通量和抗 原抗体复合物的量成反比。
（一）：检测方法。

比浊法常用于终点法测定,目前主要用于 血清特种蛋白的检测，如载脂蛋白、免 疫球蛋白等。
（一）：检测方法。

1.1终点法 1.1终点法又称为平衡法，是根据反应达 到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其 对光吸收强度的大小对物质进行定量分 析的一类方法，有一点终点法和两点终 点法两类。
（一）：检测方法。

一点终点法的特点是使用一种或两种试 剂，当待测物与试剂反应达到终点时， 测定混合溶液的吸光度来计算待测物的 浓度。该法常用的有总蛋白双缩脲法、 白蛋白溴甲酚绿法等。


自动生化分析仪通过温度控制系统保持 温度恒定，保证反应的正常进行。 恒温控制器可以对25℃、30℃、37℃三 种温度进行恒温，根据需要可以任意选 择。全自动生化分析仪的温度控制器一 般只能控制37℃一种温度,少数也可以控 制30℃和37℃两种温度。
（三）：样品量与试剂量设置

样品量与试剂量的确定一般按照试剂说 明书上的比例，并结合仪器的特性进行 设置，亦可按比例缩减或重新设计，但 要考虑到检测灵敏度、线性范围等。样 品与试剂量的设置过程中主要应注意以 下几个方面：
一：实验项目基本信息设置。

5：试剂的设置。根据实验项目在1、2检 测单元的分配情况，为实验项目分配具 体的试剂放置位置。例如：将ALT设置在 1单元1号试剂位。如果采用试剂条码扫 描，可不设置试剂位置。另外，为每个 实验项目设置试剂下限报警值。例如： 将ALT试剂下限报警设置为20，当ALT试 剂可检测标本数低于20时，将提醒工作 人员添加试剂。
（六）分析时间设置

一般监测时间10分钟左右，间隔10-30秒 读数一次。有的仪器在整个测定反应周 期全程读数，有的只读取指定时间(点)的 吸光度。
（六）分析时间设置

6.4 加试剂点。 采用双试剂时，加R2点决定R1与样品的 反应时间，也决定R2与R1及样品的反应 时间。一般仪器各5分钟左右。
（五）反应方向设置。

反应方向有正向反应和负向反应两种， 反应过程中吸光度增加为正向反应，吸 光度下降为负向反应。
（六）分析时间设置

分析时间包括孵育时间、延迟时间、监 测时间等，选择不同的分析方法应选择 相应的分析时间。
（六）分析时间设置


6.1孵育时间。 在一点终点法是样品与试剂混匀开始至 反应终点为止的时间，在两点终点法是 第一个吸光度选择点开始至第二个吸光 度选择点为止的时间。 终点法不宜采用标明反应时间接近和大 于仪器最大反应时间的试剂盒。
（一）：检测方法。

两点终点法也称固定时间法, 肌酐苦味酸 法是一个两点法的例子。当测定波长同 干扰物质的吸收光谱有重叠时，通过选 用两点终点法可消除样品空白引起的干 扰。其分析过程是在样品与试剂混合后 经过一段延滞期读取一个点A1，一定时 间后再读取点A2，然后比较标准和测定 的△A(△A=A2-A1)值，求得待测物的浓 度。
（三）：样品量与试剂量设置

样品体积分数 过高，血清内源干扰会使 反应特异性下降，但样品体积分数 过低 会使反应中产生的信号太小，特别是对 低活性标本，仪器分析中信噪比(噪音/信 号)增大，会导致结果重复性下降。
（四）反应波长设置。


当测定体系中只有一种组分或混合溶液中待测 组分的吸收峰与其他共存物质的吸收波长无重 叠时，可选用单波长。 如果待测物质有几个吸收峰，可选用吸光度最 大的一个波长，或者选择吸收峰较宽而钝，而 不是处于尖峰或陡肩，在吸收峰处吸光度随波 长变化较小的某个波长，常见干扰物在该波长 下的光吸收也应最小。
（六）分析时间设置

6.3监测时间。 酶促反应延滞期后，在过量底物的存在 下，反应速率加快并达到稳定的阶段， 即酶促反应以恒定的速率进行，这段时 间称为线性反应期或零级反应期，自动 生化分析仪的监测时间即为此期。
（六）分析时间设置

连续监测法在零级反应期至少应监测 90～120秒或至少4点(3个△A)，少于3个 △A不能称为连续监测法，因为不能计算 线性度，监测时间过长则容易发生底物 耗尽，可测范围变窄。
（七）线性度设置。

线性度是非线性比率的界线，常用%表 示。一般设置为15%。线性度%大，说 明△A之间已不成线性。
（七）线性度设置。

各种生化分析仪线性核查所依据数学模 型不同，在奥林巴斯生化分析仪中是将 读数间隔内若干个吸光度读数分为前后 二个半段，以最小二乘法找到吸光度-时 间回归线，然后求出前半段时间的吸光 度和后半段时间的吸光度变化，再取二 者均值，依据内置数学公式和所设定的 线性度判断线性。
（三）：样品量与试剂量设置

3.3总反应容量。 在不同的分析仪有一个不同的规定范围， 在设置的时候样品量和试剂量之和不能 超过这一范围，也不应小于比色杯的最 小比色体积。
（三）：样品量与试剂量设置

总反应容量受仪器的光路系统所影响， 直射式光路由于光束较宽，难以减少所 测试反应液体积。集束式光路则是通过 一个透镜使光束变窄，可检测低至180μl 的反应液混合体，点光源技术的光束更 小，照射到样品杯时仅为一个点，可使 反应液的量降至120μl。
（一）：检测方法。

1.2连续监测法 连续监测法又称动态分析法、速率法等， 基本原理是在酶促反应的最适条件下， 在反应速度恒定期(零级反应期)内连续观 察和记录一定反应时间内底物或产物量 的变化，以单位时间酶反应初速度计算 出酶活力的大小和代谢物的浓度。
（一）：检测方法。

具体方法有两点速率法和多点速率法。 两点速率法是通过观察在零级反应期内 两个时间点的吸光度，用两个点的吸光 度的差值(△A)除以时间(分),计算出每分 钟的吸光度变化值。
（一）：检测方法。

多点速率法是在零级反应期内每隔一定 时间(2～30s)进行一次监测，连续监测 多次，求出单位时间内的反应速度，该 法的优点就是大大提高了分析速度和准 确性，主要适用于酶活性及其代谢产物 的测定。
（一）：检测方法。

在连续监测法过程中，即使不加样品， 试剂中的底物自动降解也会得到一个结 果。因此应设置试剂空白速率，不同批 号试剂的试剂空白速率不一样，其值为 以水作为样品测得的项目结果，样品测 定结果应扣除试剂空白速率的数值。
生化分析仪参数设置
一：实验项目基本信息设置。

1：根据检验科生化室开展的实验项目， 首先在仪器上设置实验项目名称。根据 医院的实际情况，设置不同的实验组合。 例如，我们将尿素、肌酐、血糖、尿酸、 胱抑素C、钙设置为肾功一，将钾、钠、 氯、二氧化碳设置为肾功二。
一：实验项的计 算项目设置计算公式。例如：尿素/肌酐， 球蛋白，白蛋白/球蛋白，AST/ALT，间 接胆红素等。
一：实验项目基本信息设置。

3：实验项目在1、2检测单元的分配。将 所有的实验项目在1、2检测单元均匀分 配，能很好的发挥仪器性能，提高检测 速度。
一：实验项目基本信息设置。

4：实验项目在内、外圈比色杯分配。奥 林帕斯5400检测单元存在两套比色杯， 分别为内、外圈比色杯，将实验项目在 内、外圈比色杯分配，能进一步提高检 测速度，避免实验项目间的交叉污染。 例如，将ALT项目设置在1单元内圈， GGT项目设置在2单元外圈，所有的ALT 都在1单元内圈比色，所有的GGT都在2 单元外圈比色。



一般认为酶活性测定的试剂空白速率 (△A/min)应≤0. 001~0.003。 测定方法设置了试剂空白的项目，都要 先行作试剂空白测定，在样品测定计算 中自动扣除。 连续监测法的试剂应每天常规测定此参 数。
（四）反应波长设置。

当被检溶液混浊或存在较多的干扰物质 时，测定过程中会出现光散射和非特异 性光吸收，从而影响测定结果的准确性。 此时可用双波长甚至多波长测定，以提 高测定结果的准确性，而在实际应用中 选择辅助波长主要用于消除脂血、溶血、 黄疸的干扰。
（四）反应波长设置。

辅助波长的设置原则是根据测定波长选 择辅助波长，要求干扰物质在测定波长 同辅助波长有相同的吸光度。
（三）：样品量与试剂量设置

3.4试剂量/样品量比值。 不要为节省试剂而过分地减少试剂用量， 因为在终点比色法中，缩小试剂量/样品 量比值会降低线性范围，测定高浓度样 本时会因试剂量不足而使结果偏低。
（三）：样品量与试剂量设置

3.5 样品体积分数。 样品体积分数(SVF)是样品体积与反应液 总体积之比值，它涉及到反应系统中所 用的样品体积、样品稀释液体积、试剂 体积、试剂稀释液体积的选择和配比， 关系到反应液中样品稀释倍数。