细胞学 实验四
细胞生物学实验四 液泡系和线粒体的活体染色
细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色一、实验目的通过荧光活体染色观察液泡系和线粒体的形态结构及特点。
二、实验原理荧光活体染色法可以为我们提供高质量，高效率的细胞形态结构信息，其液泡系和线粒体都是细胞内非常重要的细胞器。
液泡系：是一种由膜包裹的小颗粒，由高度表达蛋白的外部囊泡和腺体细胞构成。
液泡系有多种类型，包括突触小泡、内分泌小体和溶酶体等，它们在细胞内部扮演着很重要的角色。
液泡系具有在荧光显微镜下能够显现的一些特定特征，如大小、形状、亮度和分布等。
活体染色可以提供很好的分辨率和细节，从而帮助我们更好地了解液泡系统的形态和功能。
线粒体：是一个直径约为1微米的双层膜结构，是细胞中的能量“发电厂”，在细胞内分解代谢物质，并生成ATP分子，以提供细胞各项生物学过程所需的能量。
可见线粒体可以帮助我们了解线粒体的数量、大小、形状和位置等特征，这有助于我们了解其功能和代谢状态。
三、实验材料激光共焦显微镜，激光荧光探针，放置在组织玻片上的细胞，PBS磷缓冲液，人工合成影响线粒体功能小分子等药物。
四、实验步骤1. 将细胞悬液滴在组织玻片上。
2. 添加荧光探针，荧光探针可以帮助我们区分液泡系和线粒体。
3. 给细胞注射小分子化合物，如人工合成影响线粒体功能小分子等，以研究药物对细胞器的影响。
4. 用激光共焦显微镜观察荧光探针和小分子化合物的荧光信号。
5. 分析显示出的细胞器信息，记录液泡和线粒体的数量、大小、形状和位置等特征。
五、实验注意事项1. 需要小心操作激光共焦显微镜，以避免损坏昂贵的设备或可能对人体存在危害的激光。
2. 荧光探针和小分子化合物需要在适当的浓度下添加，以避免对细胞的生长和存活产生不必要的影响。
3. 细胞的准确选择和应用荧光信号分析需要经验和技能支持，因此可能需要学习其他课程或培训活动，以便更好地完成任务。
六、实验结果正确的观察、检测和记录结果是实验的关键要求。
液泡系和线粒体的活体染色结果应包括液泡和线粒体的数量、亮度、位置和其它相关特征。
实验四染色体组型分析
实验中遇到的问题与解决方案
染色体标本制备困难
在制备染色体标本过程中，有时会出现细胞分裂不佳、染色体分散不均等问题，影响观察效果。解决 方案：可以尝试调整培养基成分、改变培养温度等手段优化细胞分裂条件，提高染色体标本制备的成 功率。
染色体识别困难
在观察染色体时，有时会出现染色体形态相似、不易区分的情况，影响组型分析的准确性。解决方案 ：可以通过增加拍照倍数、优化染色技术等手段提高染色体的可识别性，同时加强染色体特征的记忆 和识别训练。
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结果分析与应用
结果分析
通过对染色体组型分析结果进行综合分析，可以判断个体的遗传特征和潜在的健 康风险。
结果应用
根据分析结果，可以为个体提供针对性的健康建议和遗传咨询，预防和减少遗传 性疾病的发生。同时，染色体组型分析结果也可以用于辅助生殖、遗传性疾病的 筛查和诊断等领域。
05 实验总结与展望
实验总结
染色体组型分析的意义
染色体组型分析是遗传学研究中的重要手段，通过对染色体数 目和结构的观察，可以深入了解生物的遗传特征和变异情况。
实验操作流程
实验操作流程包括染色体标本制备、染色体数目和结构的观察 、染色体组型拍照和数据分析等步骤，通过这些步骤可以全面 了解染色体的特征。
实验结果与结论
通过染色体组型分析，可以得出生物的染色体数目、结构特征 和变异情况，为遗传学研究和生物分类提供重要的依据。
03 实验操作
样本准备
采集样本
从实验动物或人类细胞中采集样本，确保样本新鲜且无污染 。
细胞培养
将采集的样本进行细胞培养，以获得足够的细胞用于后续实 验。
染色体制备
细胞固定
细胞学实验指导
前言一、医学细胞生物学实验课的目的和要求医学细胞生物学实验课是医学细胞生物学教学的重要组成部分，它既与医学细胞生物学课堂讲授的理论部分密切联系，同时又有它独特的目的和要求：1. 实验是科学理论的实践与论证，通过实验，使学生从感性认识加深对课堂所获得的理性知识的认识和理解。
2. 通过光学显微镜的使用，临时标本的制作、细胞培养等技术操作，使学生掌握医学细胞生物学的基本实验方法和技能。
3. 通过实验，培养同学观察、比较、分析、综合等科学思维方法、独立工作能力和实事求是的科学态度。
4. 通过实验，使学生获得书写细胞生物实验报告、绘图、制表等方面的基本知识和技能训练。
二、医学细胞生物学实验报告的写作实验报告是科学研究的记录，同学们必须学会客观地、真实地记载实验过程和结果。
实验报告的形式一般可分以下三种：1. 文字报告：要求学员将观察所得和实验结果客观地用文字给以准确、详细的描述和记录。
文字力求简洁明了，条理清楚。
2. 绘图: 绘图是医学细胞生物学实验中常用的报告形式之一, 它既是根据所观察标本的真实记录和研究资料, 又可通过描绘学习更精细观察描述。
医学生物学实验绘图不同于一般艺术性绘图。
医学细胞生物学绘图的基本要求: ①绘图前应对标本加以仔细观察研究，并在正确的理解后方可动手绘制。
图中各种结构的大小应与实物成比例，力求准确，明暗之处以点疏密表示，切勿以铅笔涂施阴影；②绘图要求洁净明了，整齐有序，图的位置大小，要求分配适宜，线条力求匀整；③图绘好后，各部结构要用铅笔详细标注名称，标注的方法是：由所标注的部位引出直线，并将其名称注于线的末端，所引的线条应与报告纸上下沿平行，书写字应当横排，字迹要求端正。
3. 制表：将观察所得或实验结果，设计一表格，将有关结果逐项填入，表示其相应关系。
三、实验室规则1. 做好课前预习：实验课前，要认真阅读实验指导及与教材的有关内容，明确实验目的、要求和注意事项，了解实验内容、方法和步骤。
实验4 植物细胞骨架的观察
中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006植物细胞骨架的观察一、实验目的：1. 掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2. 对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。
二、实验原理：真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。
考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。
张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。
三、实验材料洋葱表皮细胞试剂：1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液2、M-缓冲液3、1%Triton X-100/M-缓冲液4、30%戊二醛-PBS溶液四、实验方法五、实验结果核骨架六、思考题：1．洋葱表皮细胞中，质膜下，核围，胞质中的细胞骨架分布有无不同？答：质膜下细胞骨架比较稀疏，细胞膜骨架膜骨架(membrane skeleton)是质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白构成的网架结构，普遍存在于各种细胞中，参与维持质膜的形状, 并协助质膜完成多种生理功能。
胞质中的细胞骨架比较均匀，主要有微管和纤丝组成，参与物质的运输，维持细胞的形态，参与细胞的运动，参与纺锤体的形成等作用。
细胞核中染色最深，是因为细胞核骨架的存在，细胞核骨架包括染色体骨架，细胞质基质和核纤层。
在图2中可以观察到细胞核中有好几处染色特别深（箭头所指处），为核仁的致密纤维成分。
2．为什么实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，有的呈串珠状？答：实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，呈纤维状的细胞骨架主要成分是张力纤维的成分，用于维系整个细胞。
呈念珠状的成分有：1.由于在处理条件下，细胞骨架不可避免的存在解聚，由于细胞骨架的解聚，呈现念珠状的细胞骨架。
细胞生物学实验四巨噬细胞吞噬观察
吞噬现象
试验材料、试剂及仪器用品
材料
1、6－8周龄健康雄性小鼠 2、5％鸡红细胞。 采血1ml，放入4ml阿氏液中，用PBS洗3
次，调节成5% V/V的混悬液。
试剂
1、 4％淀粉肉汤。
2、D’Hanks液。
3、阿氏（Alsver）血液保存液。
葡萄糖
2.05克
柠檬酸钠 0.89克
柠檬酸
实验四、小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬现象观察
实验目的
通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞 活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过 程及意义。
实验原理
细胞吞噬作用原是单细胞动物摄取营养的方式之一,也 具有原始的防御作用。随着动物进化，在高等动物中， 主要有两类细胞具有吞噬作用，一是巨噬细胞，二是 嗜中性粒细胞。他们的吞噬作用成为动物体非特异性 免疫的重要组成部分。
实验操作
1、巨噬细胞诱导。实验前1天，每只小鼠腹腔 注射1ml 4％淀粉肉汤。
2、体内吞噬。实验当天，先给每只小鼠腹腔注 射2ml 1%鸡红细胞生理盐水悬液，轻揉腹部， 使其在腹腔分布均匀。吞噬45min。
3、处死小鼠，吸取巨噬细胞。脱颈处死小鼠， 随即向腹腔注入1ml生理盐水，揉匀。然后剪开 腹部皮肤，暴露腹膜，用带针头的注射器插进 腹腔吸取腹腔液；来自0.05克氯化钠
0.42克
酚红
0.01克
蒸馏水加至100ml，过滤或高压蒸汽消毒。保存
于4C。
4、0.85％生理盐水。 5、0.01M，PH7.2的PBS。 6、甲醇。 7、吉姆萨染液。
仪器及用品
1、普通离心机 2、恒温箱 3、注射器 4、10ml玻璃离心管及1.5ml塑料离心管 5、载波片 6、自制湿盒
4、制片。（1）直接观察：滴1滴腹腔液，盖上 盖玻片直接观察；
实验四 RNA的细胞化学-Brachet反应
实验原理
细胞经甲基绿一派洛宁混合液般认为这是由于带有负电荷的核酸对 碱性染料派洛宁和甲基绿具有亲和力， 且这两种染料的作用有选择性，甲基绿 染高聚分子的DNA呈蓝绿色，派洛宁染 低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中 的DNA和RNA进行定位、定性、和定量 分析。
实验步骤
1.
撕取洋葱内表皮3块，分别进行下面操作：
2. 3.
4.
– 1小块， 平铺于载波片上。 – 1小块放于3mL5％三氯乙酸90℃水解15min， 用70％乙醇洗片刻，平铺于载波片上。 – 1块放于1mL 0.1%RNA酶中处理10～15min， 水洗，吸干，平铺于载波片上。(今天暂不作) 滴一滴Unna染液，染色30min。 蒸馏水洗2次，用吸水纸吸去多余的水分。 盖上盖波片，镜检。细胞质被染成浅红色，细胞核 染成蓝绿色，其中核仁被染成紫红色。
作业
绘图示细胞中DNA和RNA的分布。
参考：另外一种实验方法
3mL 3mL 3mL
3mL
2-4滴
2mL
丙酮是固定剂，也是脱水剂，蛋白质与 水结合形成水化是 浑浊的，丙酮与蛋 白质争水，减低蛋白质水化层的厚度， 使片子更清晰）。
多倍体诱导
C—有丝分裂
加倍染色体
三、实验准备
1、材料：大蒜根尖 2、仪器药品：显微镜、小镊子、刀片、载玻片、 盖玻片、水浴锅、卡诺氏固定液、解离液、龙 胆紫染液
四、实验步骤
１．取材：清水中培养直新根长出 ２．多倍体诱导: 移至0.2-0.4％浓度的秋水 仙素溶液中培养直至根尖1－2cm ３．固定: 卡诺氏固定液12-24小时→70%的酒 精中保存 ４．解离: 水洗→盐酸60℃ 8min解离→水洗 ５．染色、压片: 切取分生区→吸水→染色液 一滴，5分钟→压片 ６．镜检实验目的
1、通过实验掌握诱导植物多倍体的方法和技 术。 2、观察多倍体的特点及染色体加倍后的细胞 学表现。 3、利用染色体分析的方法对多倍体的细胞作 出准确判断。
二、实验原理
秋水仙素是诱导多倍体效果最好的药剂之一。在适宜 浓度的秋水仙素的作用下，它既可以有效地阻止纺锤 体的形成，又不至于对细胞发生较大的毒害。 作用机理：当细胞进行分裂时，一方面能使染色体的 着丝点延迟分裂，于是已复制的染色体两条单条分离， 而着丝点仍点连在一起，形成“X”形染色体图像（称 为C—有丝分裂，即秋水仙效应有丝分裂）；另一方 面是引起分裂中期的纺锤丝断裂，或抑制纺锤体的形 成，结果到分裂后期染色体不能移向两极，而重组成 一个双倍性细胞核。这时，细胞加大而不分裂，或者 分裂成一个无细胞核的子细胞和一个有双倍性细胞核 的子细胞。经过一个时期以后，这种染色体数目加倍 了的细胞再分裂增长时，就构成了双倍性的细胞和组 织。
五、作业
简要描述正常二倍体和多倍体植物的异同。 绘制二者中期细胞图片
细胞生物学实验_实验四 细胞膜的通透性和细胞连接观察
表一：观察红细胞对各种化学物质透入
管 号 10%红细胞悬液 溶液种类(mL)
0
2滴
蒸馏水
2 mL
1
2滴
0.12M/LNa2SO4 2 mL
2
2滴
0.17M/LNH4Cl 2 mL
3
2滴
0.12M/L草酸铵 2 mL
4
2滴
0.32M/L葡萄糖 2 mL
5
2滴
0.32M/L甘油 2 mL
6
2滴
0.32M/LC2H5OH 2 mL
实验四、 细胞膜的通透性和植物 细胞通讯形式
一、目的与要求
1、了解细胞膜的渗透性及各类物质进 入细胞的速度。
2、观察植物细胞间的胞间连丝，进一 步认识植物细胞间的通讯连接形式
二、材料、试剂与器材
1、 材料 ：洋葱鳞茎叶，新鲜动物血细胞 悬浮液 ，番茄，红椒
2、药品： 试剂:0.17 mol／L 氯化铵；0.12 mol／L硫
1）原理：细胞间彼此不是孤立的，相互之 间通过细胞胞间连丝互通物质与信息转递
2）步骤：学生自己设计
想一想：如何制作临时装片？
观察胞间连丝应取番茄和红椒哪
一部分？
3、观察软骨组织标本
软骨组织是由软骨基 质、纤维和软骨细胞 组成。
1、透明软骨
2、纤维软骨 3、弹性软骨
四 、学生自己动手实验 五、实验报告 其中要求画图：胞间连丝图
溶质的通透性不同,因此有的溶质分子可透入,有的
溶质分子则不能透入,能透入的溶质分子的速度也
不同。当溶质分子进入红细胞使细胞内溶质浓度增
加时,导致水的摄入。红细胞膨胀到一定程度时,细
南开大学细胞生物学实验-实验四细胞活体染色
• 压片时在盖玻片两端各放一根发丝，防止压破细 胞并保持细胞的有氧呼吸状态．
实验结果
先用低倍镜找到肝细胞，再换高倍 镜观察细胞质内染为蓝绿色。呈颗 粒状或线状的线粒体。注意其分布 特点。
兔肝实验结果
洋葱实验结果
实验要求
• 活体染色制片课堂评定成绩 • 使用油镜后用擦镜液将镜头仔细擦净 • 实验报告要求同前
实验四
细胞的活体染色
(必做，综合性实验，4学时）
前言
随着现代生命科学的发展, 人类拥有 了更多认识生命奥秘以及诠释生命活 动规律的技术手段和方法.
细胞活体染色作为经典技术不仅应用 于现代细胞生物学研究领域,而且在 临床医学领域, 广泛用于疾病的预防、 诊查和治疗.
实验目的
掌握活体染色方法 和原理，了解 光学显微镜下线粒体基本形态结 构及分布.
实验流程 切取洋葱鳞茎的幼嫩鳞片（3~4mm3）
撕开面向下
Janus green B 染色(30min)
平浮于载玻片上 滴加一滴Ringer液
制备标本片
镜检
注意事项
• 活体染色的显著特点是选取的染色剂的毒性小， 可保持细胞的活性。 染色剂浓度小，溶质：溶 剂为1：3000左右．
• 实验中取肝组织不要太大，在任氏液中充分洗去 肝组织内的血细胞， 浸入詹纳斯绿-B染液染色 时，要使部分肝组织暴露于空气中，保持组织块 的活性和正常呼吸，便于保持线粒体的氧化性．
实验材料及试剂
材料：兔肝脏和洋葱鳞茎 试剂：Ringer 氏液；
詹纳斯绿-B染液
兔子肝脏
实验流程 切取兔肝组织（2~5mm3） 用Ringer液迅速洗涤至白色 Janus green B 染色(30min)
细胞化学与组织化实验一~实验四
一 、实验目的
掌握细胞内碱性蛋白的鉴别方法并了解碱性 蛋白在细胞内的分布。
学会制作血涂片并掌握制作技巧。
细胞化学与组织化实验一~实验四
二、实验原理
由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目 不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电 荷多少不同。如在生理条件下，整个蛋白质所带负电 荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白 质。据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后用不 同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱 性蛋白质显示出来。
细胞化学与组织化实验一~实验四
A液（0.2mol/L乙酸液）：冰醋酸1.2ml加蒸馏水100ml 。 B液（0.2mol/L乙酸钠液）：NaAc.3H2O 2.72g加蒸馏 水至１00毫升。 取A液３０毫升＋B液70毫升＋蒸馏水300毫升。 6)6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,NaCl 0.5g,可溶性 淀粉６.0g，蒸馏水１00ml，煮沸灭菌，４℃保存，使 用时热水浴融化。
4．使用药品、试剂和各种药品注意节约，爱护器 材。洗涤和使用仪器时应仔细，防止损坏仪器。 严格遵守 仪操作规程，在未知正确操作程序时， 不要独自使用，须在老师的指导下进行。
细胞化学与组织化实验一~实验四
5．实验废弃物、毒害性实验材料应倾倒在指定地 点，统一处置。 6．实验时一律穿工作服，不允许穿拖鞋进实验室， 以免溅落的腐蚀性药品或掉下的玻璃器皿伤 及裸露的皮肤。 7．节约水、电、气，燃气灯应随用随关。最后离 开实验室时，要将室内检查一遍，关好水、电、 气，锁好门窗。 8．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准， 严禁携出室外。借物必须办登记手续。 9．实验结束，将实验记录交指导教师审阅并做好 室内清洁工作。
细胞化学与组织化实验一~实验四
1-细胞生物学实验
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。 2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略） 3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液 2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管） 接下去的操作见下面的流程图。 健那绿染色：各取10μlD4悬浮液和健那绿染液在载玻片 上混合，10分钟后加盖玻片，观察线粒体。 改良苯酚品红染色：取10μlD6涂片，滴10μl改良苯酚品 红染液，5分钟后加盖玻片，观察细胞核。
2.细胞核的分离提取
3.高速离心分离提取线粒体
操作步骤 装有上清液的高速离心管→ 17000rpm 离心 20 分 钟 → 弃 上 清 ， 留 取 沉 淀 物 → 加 入 0．25mol／L蔗糖－0.003 mol／L氯化钙液1ml， 用吸管吹打成悬液→17000rpm离心20分钟→将 上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入 0.1ml 0． 25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙 溶液混匀成悬液→取上清液和沉淀物悬液，分 别滴于载玻片上，各滴一滴 0.02 ％詹纳斯绿 B 染液盖上盖片染20分钟→油镜下观察，颗粒状 的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。
2 . 总长度为 1mm，分为 100 等份，每一个格的长度为 0.01mm(10μm)。
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且 左端对齐(0刻度重合)。
实验四 透射和扫描电镜的样品观察
实验四透射和扫描电镜的样品观察课程名称：细胞生物学实验实验日期：2014年10月27日班级：试验121（青岛）姓名学号：刘香凝sy0040一、实验原理用电子束成像的显微镜称为电子显微镜。
电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高的分辨力和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的强大工具。
根据成像原理的不同，电镜分为透射电子显微镜和扫描电子显微镜。
（一）、透射电子显微镜原理透射电镜主要用于观察生物样品内部精细的结构，用于透射电镜观察的样品往往需制备成超薄切片。
1、透射电镜的基本构造1）电子束照明系统：照明系统由电子枪和聚光镜两部分组成。
电子枪位于镜筒顶端，由阴极——控制极——阳极构成三级电子枪。
电子枪是电子束的发射装置，由高频电流加热钨丝激发电子，并用高压使电子加速。
聚光镜的作用是将电子枪发出的电子束会聚于样品平面，并调节试样平面处电子束孔径角、电流密度和照明光斑半径.2) 电镜成像系统由样品室、物镜、中间镜和投影镜组成。
通过聚光镜会聚的电子束穿过样品，经物镜放大形成一级放大像，再经中间镜和投影镜进行二级和三级放大。
最后在荧光屏上形成最终的放大像，通过调节中间镜和投影镜电流，放大倍数能从几百倍连续改变到十几万到几十万倍。
聚光镜、物镜、中间镜与投影镜等都是电磁透镜。
电磁透镜是精密加工的中空圆柱体，里面置线圈，通过线圈电流的大小，调节磁场强度使电子束发生偏转，汇聚或发散，最终结果正如光线透过玻璃透镜一样，可以聚焦成像。
3）真空系统由气泵组成，保持镜筒内高真空，由于电镜是利用高速的电子束为照明源，在电子束的通道上不能有任何游离的气体存在，否则将发生电子与残余气体原子的碰撞，引起电离，放电等反应，易烧坏灯丝获污染样品。
4) 记录观察系统包括荧光界和照明系统。
镜筒最下面部位是观察窗。
窗口由防护X射线的一定厚度的铅玻璃组成。
观察窗内下方是荧光屏，荧光屏上的荧光物质通常由硫化锌或硫化锌与硫化镐的粉末组成。
它们在电子束的照射下产生荧光，使电子像转化为肉眼可见的可见光图像。
2014细胞生物学实验课内容（细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察）
2014细胞生物学实验课内容（细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察）第一篇：2014 细胞生物学实验课内容(细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察)实验三细胞形态的观察【实验目的】1.认识光学显微镜下细胞的形态结构；2.掌握临时制片和显微绘图的方法。
【材料、器材和试剂】材料：人体口腔黏膜上皮细胞、洋葱鳞茎；器材：显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸；试剂：1%碘液。
【方法和步骤】1.口腔黏膜上皮细胞的制片与观察口腔黏膜细胞涂片标本的制备：吸取一滴碘液滴在一张洁净的载玻片中央，用一根事先灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，然后，将其放入载玻片上的染液中并来回搅动使细胞散开，染色1 min左右后小心加盖玻片（尽量避免产生气泡），用滤纸吸去盖玻片周围的液体。
观察：将自制的口腔黏膜上皮细胞标本装片置于显微镜下观察，先用低倍镜观察较分散的、轮廓清晰的黏膜上皮细胞。
由于该细胞体积较小、着色较淡，观察时应稍降低视野亮度以便于较快找到目标（在低倍镜下，用碘液染色的细胞呈黄色，成群或分散分布，形态大小多呈扁平椭圆形）。
选择轮廓清晰的细胞移至视野中央，转换至高倍镜下观察。
在高倍镜下，可见口腔黏膜上皮细胞外围有一层薄薄的细胞膜，扁圆形的细胞核呈深黄色，细胞质呈浅黄色或浅蓝色，核中央致密的结构为核仁。
2.洋葱鳞茎内表皮细胞的制片与观察表皮细胞装片标本的制备：取一干净载玻片，在其中央滴一滴碘液，将洋葱鳞茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用剪刀在内表皮划“田”字形小方格，每一小方格边长3-4mm，然后用镊子轻轻撕下一小方格的膜质表皮，置于载玻片的碘液滴中铺平，取一干净的盖玻片，将其一侧先接触标本旁的碘液，再缓缓地盖上盖玻片，尽量避免产生气泡，用滤纸吸去盖玻片周围的液体。
观察：将制备好的装片标本放到显微镜下，先用低倍镜观察，可见许多长柱状、排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中一个典型的细胞移至视野中央，再转换至高倍镜下仔细观察细胞壁、细胞核、细胞质和液泡等结构。
高中生物细胞实验课程设计与教学方案
高中生物细胞实验课程设计与教学方案导言：生物是高中阶段的一门重要学科，细胞是生物学研究的基础单位。
为了提高学生对细胞的理解和掌握，本课程设计了一系列生物细胞实验，旨在通过实践活动，使学生对细胞的结构、功能和特性有更深入的认识。
本教学方案将详细介绍实验的内容、安排和教学方法，以帮助教师有效地进行课程设计和教学安排。
实验一：细胞观察和测量实验目的：通过使用光学显微镜观察不同类型的细胞，学生将能够掌握细胞的形态和结构，并通过测量细胞的大小来加深对细胞的了解。
实验步骤：1. 准备细胞样品：将洋葱切片装在注射器中，滴入一些碘液，覆盖载玻片，并使用封口胶固定样品。
2. 使用显微镜：将载玻片放置在显微镜平台上，利用光学显微镜进行观察。
3. 细胞观察与测量：在显微镜下，观察细胞的形态、细胞壁、细胞核等结构，并使用目镜上的标尺对细胞大小进行测量。
实验结果：学生应观察到洋葱细胞的透明质壁、细胞核和细胞质等特征。
通过测量，学生应该能够确定细胞大小的范围。
实验二：细胞膜通透性实验实验目的：通过实验，学生将了解细胞膜对不同物质的通透性，并进一步了解细胞膜结构和功能。
实验步骤：1. 准备试验材料：将鸡蛋壳清洗干净，将醋倒入容器中，将鸡蛋放入容器中浸泡。
2. 观察实验过程：学生应每隔一段时间观察、记录蛋壳的变化情况，特别是蛋壳中的气泡产生情况。
3. 结果分析：学生应该观察到蛋壳表面出现气泡，这表明醋分解了蛋壳中的钙，进而说明鸡蛋的蛋壳对醋有通透性。
实验结果：通过这个实验，学生应该了解到细胞膜是半透性的，可以控制物质的进出。
实验三：细胞分裂观察实验目的：通过观察和记录细胞的分裂过程，学生将加深对细胞分裂的理解。
实验步骤：1. 准备细胞样品：从洋葱根尖中取一小段，放入显微镜载玻片上，滴入少量甘露醇，覆盖载玻片，并加一滴甘露醇增溶。
2. 使用显微镜观察：将载玻片放入显微镜平台上，使用高倍镜观察细胞，并记录不同阶段的细胞分裂情况。
实验结果：学生应观察到洋葱根尖细胞在显微镜下的分裂过程。
实验四 压碎法制片法
压片法（压碎法）
压片法：是把动、植物的器官或组织经过处 理后压在载玻片上，使细胞成一薄层，以便 进行观察。
压片法为细胞学、遗传学研究较为理想的方 法，主要用于染色体的形态观察、染色体计 数、细胞分裂观察等。
一、实验目的
学习压碎法制片方法；
观察染色体的数目和形态。
压片材料要少，避免细胞紧贴在一起，致使细胞和染 色体没有伸展的余地；
解离时间不可过长，以免染色体结构受损；解离后水
洗要彻底，否则不易着色；
用镊子敲打盖玻片时，用力要均匀； 放置出现气泡。
四、实验结果
根据制片结果观察洋葱根尖有丝分裂的各个 时期，并观察染色体数目是多少？
制片质量如何？（染色体是否分散，计数是 否顺利等？）
二、实验材料及用品
实验材料：洋葱根尖
实验用具：载、盖玻片；显微镜；镊子；恒温 水浴锅、酒精灯、试管、培养皿等。 实验药品：卡诺氏固定液、对二氯苯饱和水溶 液、70%AL、50%AL、1N盐酸、1%醋 酸洋红、45%醋酸、液氮、加拿大树胶。
三、实验步骤
选材（0.5-1cm根尖） 预处理（对二氯苯饱和水溶液，1-3h）
缺点：染色体较软，容易缠绕，不易分散；对小型染色体的材料 效果较差。 注意：酸解是本实验成败的关键之一。酸解温度应保持在60℃ （上下浮动不超过0.5℃），如果温度过低或时间过短，酸解不够， 染色会过浅；若温度过高或时间过长，会造成酸解过度，使DNA完 全解聚，造成染色浅或不均一的现象。
注意事项
预处理的目的？预处理试剂还有哪些？
固定（卡诺氏固定液，2-24h，低温）
保存（70%AL，4℃）
卡诺氏固定液（纯酒精：冰醋酸=3:1）穿透力强而快，固定原理：纯酒精固定细 胞质，冰醋酸固定染色质，并能防止组织由于酒精所引起的高度收缩与硬化
细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色
细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色【实验目的】1.通过制片掌握活体染色方法2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞处死兔子的方法3.了解线粒体及液泡系在光镜及电镜下的基本形态结构【理论基础】1.活体染色的基本概念和实际应用，常见的活体染色剂2.生物体内线粒体的基本形态与功能（特别是线粒体所含的酶类），重点联系理论课“线粒体”一章中结构与功能部分3.液泡系的组成及在光镜和电镜下的形态特点，可参照理论课“细胞的内膜系统”的内容【实验内容】（一）兔肝细胞线粒体的活体染色[操作技能要求]1.学会静脉空气栓塞处死兔子的方法2.熟悉线粒体活体染色方法及注意事项[讲解和明确的内容]1.詹纳斯绿B进行线粒体活体染色的原理2.用詹纳斯绿B进行染色时为何让组织块上表面露在染液外面3.为什么要取兔肝边缘较薄的肝组织4.空气栓塞处死兔子的要点：注意兔子的固定方法，耳缘静脉的选择，注射的方向，针头进入血管的标志，注射的空气量以及注射器的选择[观察要点]1.注意观察光镜下肝脏线粒体的形状与分布2.观察电镜照片上线粒体嵴的数目与分布方式（二）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察[操作技能要求]1.捣髓法处死蟾蜍的方法2.学会液泡系的活体染色方法[讲解和明确的内容]1.为什么要选取蟾蜍胸骨剑突软骨最薄部分的一小片2.中性红作为液泡系活体染色剂的特点：在生活状态下中性红染色可能与液泡中的蛋白有关[观察要点]注意观察软骨细胞液泡系的形态及与周围软骨细胞的区别[相关理论内容]1.光镜下观察到的液泡系包括哪些细胞内结构2.细胞内膜系统的组成（三）依据提纲讲解线粒体及溶酶体的理论内容。
《实验四观察植物细胞的有丝分裂》的教学设计新
《观察植物细胞的有丝分裂》教学设计灌南高级中学陈效花一、教学内容分析：《观察植物细胞的有丝分裂》是一个经典的高中生物学实验，考虑到装片的制作和观察的难度和效果，教材将此实验处理成验证性实验。
学生在理论课上已经学习了第五章第一节《细胞增殖》有关理论内容的基础上，对于细胞的分裂过程和细胞各个分裂时期的染色体形态已经有了系统的了解，学生能认识和辨别各个分裂时期的细胞，具备了此节实验课的基础知识。
本次实验旨在与课本内容相结合，通过实验加强学生对知识的感性认识，所以在此时安排此实验，达到复习、巩固相关实验操作技能，深化学生对于有丝分裂过程相关知识的学习和再认识。
二、学情分析：在学习了第一节《细胞增殖》第1课时有丝分裂理论内容后，学生对细胞增殖的细胞周期概念有了明确的认识，对于动物细胞有丝分裂的分裂间期、前期、中期、后期、末期各个时期中染色体数目、形态、位置及其对应模式图像有了大体的认识，但是有的同学还不能够准确无误地识别、描述各个时期的主要特征，还没有在脑海中建立起比较有丝分裂图像的表象。
虽然在《脂肪鉴定》、《植物细胞的质壁分离》等实验中，已经做过临时装片使用过显微镜，但是还是有部分学生不能够熟练操作。
本实验临时装片制作的每一步，都要做到恰到好处，实验才有可能成功。
但以往根据课本的实验方法步骤进行此实验，有的同学只能在低倍镜下观察到分生区细胞，有的同学往往发现显微镜下的视野呈紫色一片，看不清细胞或是细胞重叠在一起，根本看不清细胞结构，更谈不上看到处于分裂期的细胞了，对于缺少显微观察经验的学生来说，就意味着很少看到或根本看不到处于分裂期细胞的染色体变化规律，这是本实验的难点之一。
因此，实验材料的选择和培养，装片制作的各个环节将直接影响实验成功与否。
三、教学目标：1.知识目标：①学会观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期图像。
②掌握有丝分裂过程染色体的行为变化以及各个时期的主要特征。
③绘制植物细胞有丝分裂中期简图。
实验四RNA的细胞化学
2．滴一滴Unna试剂，染色30min。 3．蒸馏水洗两次，吸水纸吸去多余的水分 4．盖上盖玻片，镜检。
对照片： 撕取洋葱鳞茎内表皮，经5%三氯醋酸中90℃水
浴处理15min 。再经70%乙醇洗片刻，然后按步骤 2-4制片观察。
实验预期结果
实验准备
（一）器材 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸
（二）材料 洋葱鳞茎表皮
（三）试剂 1．Unna试剂：甲基绿—派洛宁（Methyl green-
Pyronin）染色液
配制注意事项： （1）Pyronin可加热助溶。 （2）Methyl green批号不同，染色效果差别很大。商品Methyl green常混有甲基紫， 影响染色效果，应先把药品放在分液漏斗中，加入足量的氯仿，用力振荡，然后静置， 直到洗脱甲基紫为止，最后干燥备用。
作业
• 1 简述实验的原理 • 2 绘图示实验结果
• 3 你还能设计新的对照实验吗？
细胞生物学：实验4 feulgen反应显示细胞中的DNA
实验四
Feulgen 反应显示细胞中 的DNA
细胞膜/壁 细胞质
核仁
标题
细胞核
染色方法（放大倍数）
作业：用铅笔绘制一个洋葱根尖细胞并注 明各主要部位的颜色。
绘图的要求见实验ห้องสมุดไป่ตู้告P16。
选取具有普遍性的细胞
线条平滑、点均一、细致
5）弃去schiff试剂，用 1ml 亚硫酸氢钾洗 3 次，每次浸泡 2-3 min；
6）弃去亚硫酸氢钾，用 2ml 左右的蒸馏水漂洗 2 遍；
7）吸取洋葱根尖置于玻片上，稍微吸取水分；滴加 1 滴 4.5％ 醋酸，然后 盖上盖玻片，轻压使根尖散开成单层云雾状；
8）观察：在低倍镜下找到分生区细胞，再高倍镜下观察细胞各部位的染色反 应。
实验目的
• 了解Feulgen反应的基本原理 • 熟悉Feulgen反应的染色方法 • 掌握生物学绘图方式
实验原理
DNA可在酸性条件下水解，嘌呤—脱氧核糖之间的糖苷键 断开，形成醛基(—CHO)，再用显示醛基的特异性试剂Schiff 试剂处理，形成光镜下所见的细胞核内紫红色反应产物。
Schiff试剂的主要成分是碱性品红，碱性品红结构中的醌基是一个发 色基团，经亚硫酸处理后，则醌基两端的双键打开，形成无色品红-硫 酸复合物。
紫红色
Meristem
洋葱根尖
实验步骤
1）取 0.6cm 长的洋葱根尖放到离心管中；
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山东大学医学院细胞生物学系
实验四 细胞增殖 染色体（质）
目的要求
1、熟悉细胞增殖的主要方式； 2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点； 3、熟悉人染色体的基本形态特征； 4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；
细胞增殖是生命的重要特征。它是指细 胞通过生长和分裂获得和母细胞相同遗 传特征的子细胞而使细胞数目增加的过 程
正常男性核型
（二）操作 1、制作有丝分裂压片 （洋葱根尖）
步骤
取材（取根尖，carnoy固定2h ） ↓
软化 1mol/L HCl 5min ↓
刀片切下尖端，苯酚品红染色 ↓
切碎，压片 ↓
观察
结果 前期
中期
后期、末期
末期
2、制作X染色质标本片 （人口腔 粘膜上皮细胞）
原理 一个个体无论其细胞中有几条X染色体，在
真核生物的增殖主要有三种方式 无丝分裂 有丝分裂 减数分裂
G1期
பைடு நூலகம்间期 S期
细胞周期
G2期
前期
有丝分裂期 中期
后期 末期
有丝分裂各期形态学特点
G1期，合成细胞生长所需的各种蛋白质、 糖类、脂质
S期，又称DNA合成期 G2期，由G1期的2n变为G2期的4n
有丝分裂期 M期
前期：核仁核膜崩解，染色质螺旋折叠形成 光镜下可见的早期染色体结构。
间期时均只有一条具有转录活性，其余的 X染色体均失活形成异固缩的X染色质。因 此，一个细胞中所含X染色质的数目等于X 染色体数目减1。
步骤
刮取口腔粘膜细胞 制片 ↓
95%乙醇固定10分钟 ↓
5mol/L HCl 水解10分钟 ↓
Giemsa染液染色8分钟 ↓
冲洗观察
结果
（三）实验报告 1、绘有丝分裂图（洋葱根尖） 2、绘X染色质图
中期：染色体排列到赤道板上，放垂体呈典 型纺锤样
后期：染色单体分离形成子代染色体，向两 极移动
末期：染色单体到达两极，去浓缩，核膜核 仁重建
1、动物细胞有丝分裂 （马蛔虫 受精卵切片）
动植物细胞有丝分裂的不同点
动物细胞有中心体，从中心体形成纺锤体 植物细胞从两极形成纺锤体
动物细胞最后通过缢裂形成两个细胞， 植物细胞是细胞板形成细胞壁，分隔成两个
细胞
有丝分裂前期
有丝分裂中期
有丝分裂后期
有丝分裂末期
2、植物细胞有丝分裂 （洋葱根尖纵切 片）
1根冠 2生长区 3延长区 4根毛区
有丝分裂中期\后期
有丝分裂前期、末期
3、收缩环 （肝癌细胞飞片）
4、无丝分裂 （草履虫装片）示教
5、减数分裂
6、人染色体的基本形态 （人血涂片）