药品的微生物限度检查

10ml
24～48h
紫红胆盐葡 萄糖平板
10-1
无菌落
18～24h
有菌落
报告未检出
10g/10ml/ 100cm2供试品
3.耐胆盐革兰阴性菌定量检查操作示意图
以TSB为稀释液制供试液
一定量 肠道增菌肉汤
20～25℃, 2h预增菌
1ml
24～48h
紫红胆盐 葡萄糖平板
报告结果
10-1
18～24h
（六）梭菌的检查
梭菌 增菌 培养 基
供试液的制备
书写检 验记录
哥伦比亚琼脂培养基分离
1.梭菌检查程序
无菌落生长
过氧化氢 酶试验
配培养基和稀释液
最终结果判断
有 菌 落
确证 试验
10g/10ml/ 100cm2供试品
2.供试品梭菌检查操作示意图
各10ml
分别接种
一份80℃保温10min后迅速冷却
10-2
10-31ml10-110-210-3
各管加1ml
查可能菌数表
9ml 稀 释 液
有/无菌落
（二）大肠埃希菌检查
大肠埃希菌作为检验供试品是否受粪便污染的指示菌。
2015年版《中国药典》规定经口及呼吸道服给药的制剂，每1g、1ml或10cm2不得检出大肠埃希菌。
TSB 增菌 培养
30℃～35℃
3～5d
1.平皿法
（1）基本程序：
数据 处理
结果观察与计数
书写检 验记录
平板 接种
需氧菌 的培养
供试液 的制备
配培养基和稀释液
倒置 培养 3～5d
30～35℃
TSA
不少于 0.1ml
10-1
10-1
10-2
10-2
10-3
10-3
阴性 对照
阴性 对照
(2)平皿法-涂布法：需氧菌总数检查操作示意图
肠道增 菌肉汤
供试液的制备
书写检 验记录
1.耐胆盐革兰阴性菌检查程序
配培养基和稀释液
无菌落
紫红胆盐葡萄糖琼脂平板
查耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数表
定性
定量
10g/10ml/ 100cm2供试品
做定量检查
2.耐胆盐革兰阴性菌定性检查操作示意图
以TSB制备100ml供试液
肠道增菌液
20～25℃,2h 预增菌
厌氧,48h
报 告 检 出
适宜体积的梭菌增菌培养液
无菌落
厌氧,48～72h
哥伦比亚琼脂平板
10-1
100ml 供试液
G+杆菌 有/无芽孢
无气泡, 阴性
报告 未检出
有菌落
革兰染色、镜检
过氧化氢酶试验
又称白色假丝酵母，卵圆形真菌，革兰染色阳性，有芽生孢子，能形成厚膜孢子和假菌丝。 感染后可引起呼吸系统、消化系统和泌尿生殖 系统的疾病。
2015年版《中国药典》规定局部给药的外用制剂，每1g、1ml或10cm2 不得检出铜绿假单胞菌。
（四）铜绿假单胞菌检查
TSB 增菌 培养
供试液的制备
书写检 验记录
溴化十六 烷基三甲 铵平板分 离
无菌落
配培养基和稀释液
最终结果判断
氧化酶试验等确证试验
1.铜绿假单胞菌检查程序
有菌落
10g/10ml/ 100cm2供试品
1.抽样方法：随机性、有代表性、可疑 2.检验数量 应从2个以上最小包装单位中抽取,大蜜丸不得少于4丸,膜剂不得少于4片。 3.检验量
（五）检查项目及培养条件
检查项目
培养基
培养温度
培养时间
需氧菌总数
胰酪大豆胨 琼脂培养基(TSA)
30℃～35℃
3～5d
霉菌和酵母菌总数
沙氏葡萄糖 琼脂培养基(SDA)
100ml 供试液
18～24h
溴化十六烷基三 甲铵琼脂培养基
报告未检出
有菌落
无菌落
阳性
确证试验
18～72h
2.供试品铜绿假单胞菌检查操作示意图
氧化酶试验
阴性
10-1
阴性
阳性
报告检出
阳性:30s粉色变紫红; 阴性:不变色或仅粉色
适宜体积TSB增菌液
RV肉汤增菌培养
TSB中预培养
书写检 验记录
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂划线分离
无菌落或无特征菌落
配培养基和稀释液
有特征 菌落
三糖铁琼脂培养基穿刺接种
最终结果判断
确证 试验
1.沙门菌检查程序
10g/10ml 供试品
适宜体积 TSB预培养
10mlRV肉汤 增菌培养
报告未检出
无菌或无疑似菌落
有疑似 菌落
检查 方法
倾注法 涂布法
霉菌和酵母菌总数(TYMC)检查培养条件
培养基
培养温度
培养时间
沙氏葡萄糖 琼脂培养基(SDA)
20℃～25℃
5～7d
含抗生素的胰酪大豆胨琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
三、控制菌检查法
（一）耐胆盐革兰阴性菌 （二）大肠埃希菌 （三）铜绿假单胞菌 （四）沙门菌 （五）金黄色葡萄球菌 （六）梭菌 （七）白色念珠菌
三糖铁 斜面
无疑似现象
有疑似现象
18～24h
确证 试验
2.供试品沙门菌检查操作示意图
18～24h
0.1ml
18～24h
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂
18～48h
阴性
阳性
报告检出
革兰阴性无芽胞杆菌，能产生蓝绿色的水溶性色素，俗称绿脓杆菌，是常见的化脓性感染菌，可引起局部感染和败血症。
无菌落或无特征菌落
确证 试验
9.1 普通衍射光学元件及其特性 9.2 谐衍射光学元件及其特性
9.1.1 衍射光学元件的发展历程 衍射光学元件(DiffractiveOpticalElement,DOE)是基于光波的衍射理论设计的,类 似于全息图和衍射光栅,表面带有阶梯状的小沟槽或线等衍射结构的光学元件,通过整个 光学表面能产生波前相位变换。 200年前发明的衍射光栅是最早的衍射光学元件,在光学仪器中应用广泛,随后近一 个世纪开始了波带片的研究工作。1820年,菲涅尔提出菲涅尔透镜,并在1822年研制成 功。1836年,泰伯发现了基于菲涅尔衍射中的泰伯效应。这是设计和制作光学阵列发生器 或照明器的重要方法之一。1971年,达曼提出并设计了光电技术、图像处理技术使用的光 学分束器———达曼光栅(DammannGrating)。20世纪80年代中期,美国麻省理工学院林肯 实验室率先提出了“二元光学”的概念。二元光学元件(BinaryOpticalElement,BOE)如图 9.1所示,它是基于光波的衍射理论,在传统光学元件表面刻蚀产生两个或多个台阶深度的 浮雕结构,形成纯相位、同轴再现、具有极高衍射效率的一类衍射光学元件。1988年,斯涅 森(Swanson)和维尔德卡姆(Veldkamp)等利用衍射光学元件的色散特性校正单透镜的轴上 色差和球差,研制了多阶相位透镜。从此,开始进行衍射光学元件在光学成像领域的研究。
9～10ml TSB各3管
10-1
10-1
10-1
10-2
10-2
10-2
10-3
10-3
10-3
稀
稀
稀
9ml
稀 释 液
10g/10ml/ 100cm2供试品
10-1
1ml
1ml
100ml供试液
10-2
10-3
每管加1ml
30～35℃
培养3～5d，结果观察，查最可能检索表
先加
混合
各1ml
稀 释 液
10g/10ml/ 100cm2供试品
9ml
10-1
1ml
1ml
100ml供试液
10-3
10-2
10g/10ml/ 100cm2供试品
取相当于1g、1ml 或10cm2供试液用滤膜过滤、冲洗
取下滤膜,菌面朝上贴胰酪大豆胨琼脂平板上培养
结果观察 与计数
微生物限度检测法是检测非规定灭菌制剂（即允许有菌的制剂）及其原、辅料受微生物污染程度的方法。
药品的微生物限度检查
微生物 限度检查项目
需氧菌总数检查 霉菌和酵母菌检查 控制菌检查
（一）检查标准 《中国药典》（2015年版）四部 微生物总数检查参照通则1105；控制菌检查法参照通则1106。
1.平皿法：适用于含菌量高 的供试品 2.薄膜过滤法：适用于有抑菌活性 或菌量不太高的供试品 3.最可能数法(MPN)：适用于含菌量太 低、不能用前两法检查的供试品
检查 方法
倾注法 涂布法
需氧菌总数(TAMC)检查培养条件
培养基
培养温度
培养时间
胰酪大豆胨 琼脂培养基(TSA)
数据 处理
书写检验 记录
2.薄膜过滤法
10-1
100ml供试液
（1）基本程序：
（1）基本程序：
数据 处理
结果观察,查MPN检索表
书写检 验记录
连续3个稀释级接种TSB管,3管/稀释级
需氧菌 培养
供试液 的制备
配培养基和稀释液
3.MPN法(最可能数法)
(2)MPN法操作示意图
20℃～25℃
5～7d
控制菌
不同控制菌 采用的培养 基不同
30℃～35℃
不同控制 菌培养时 间不同
1.水溶性供试品：10g(ml)+稀释液→1:10供试液
（一）供试液制备方法
稀释液和冲洗液
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 pH7.2磷酸盐缓冲液 胰酪大豆胨液体培养基等
10g或10ml
适量稀释液
一、药品微生物限度检查总则
（二）检查环境 洁净度不低于D级背景下的局部B级环境
（三）微生物限度检查的药品种类 口服制剂及大部分外用制剂
1.口服制剂 液体制剂、半固体制剂、部分口服固体制剂。 2.外用制剂 除眼用制剂及注明无菌药品外，其余所有外用制剂。 3.原辅料 含菌的药用原辅料。
（四）检验数量和检验量
2015年版《中国药典》规定阴道、尿道给药的制剂每1g、1ml或10cm2不得检出白色念珠菌。
（七）白色念珠菌检查
沙氏葡萄糖肉汤增菌培养
供试液的制备
书写检 验记录
沙氏葡萄糖琼脂培养基分离
1.白色念珠菌检查程序
念珠菌显色 培养基平板
配培养基和稀释液
有疑似 菌落
最终结果判断
供试液的制备
书写检 验记录
1.大肠埃希菌检查程序
配培养基和稀释液
无菌落
MacC 琼脂 平板
确证试验
最终结果判断
MacC 肉汤
有 菌 落
10g/10ml/ 100cm2供试品
确证试验
2.供试品大肠埃希菌检查操作示意图
100ml 供试液
适宜体积 TSB增菌液
10ml
营养琼脂纯培养
100ml MacC肉汤
未特别说明,控制菌培 养温度为30～35℃
阳性对照：
供试品检查：
阴性对照：
无菌生长
检出阳性菌
未检出：符合规定 检出：不符合规定
（一）耐胆盐革兰阴性菌检查
耐胆盐革兰阴性菌指在胆汁酸中可以存活并繁殖的革兰阴性菌。
2015年版《中国药典》规定呼吸道吸入给药制剂、含药材原粉的口服中药制剂、中药提取物、中药饮片等需检查耐胆盐革兰阴性菌，其数量不得超过限度标准。
先加
后加
涂布
稀 释 液
10g/10ml/ 100cm2供试品
9ml
10-1
1ml
1ml
100ml供试液
10-3
10-2
倒置 培养 3～5d
30～35℃
TSA
10-1
10-1
10-2
10-2
10-3
10-3
阴性 对照
阴性 对照
(2)平皿法-倾注法：需氧菌总数检查操作示意图
后加
书写检 验记录
甘露醇 氯化钠 琼脂平 板
1.金黄色葡萄球菌检查程序
无菌落或无特征菌落
确证试验
配培养基和稀释液
有特征 菌落
纯培养
最终结果判断
10g/10ml/ 100cm2供试品
适宜体积TSB增菌液
10ml
18～24h
甘露醇氯化钠琼脂
报告未检出
有疑似 菌落
无菌或无疑似菌落
点计菌落数，菌落数乘于稀释倍数即为1g、1ml或10cm2供试品中的微生物总数。按菌落报告规则报告结果。
4.结果观察及计算
（三）霉菌和酵母菌总数检查
检查单位重量、体积或面积（g 、ml 或10cm2）的非规定灭菌制剂药品中所污染活的霉菌和酵母菌数量（也包括细菌菌落）。
1.平皿法：适用于含菌量较多 的供试品 2.薄膜过滤法：适用于有抑菌活性或 菌数不太多的供试品
10ml
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属中致病性 最强的一种化脓性病原菌，也是人类食 物中毒症中常见的病原菌之一 ，可引起 局部感染和败血症 。
2015年版《中国药典》规定局部给药的外用制剂，每1g、1ml或10cm2不得检出金黄色葡萄球菌。
（五）金黄色葡萄球菌检查
TSB增菌培养
供试品液制备
纯培养
确证试验
18～72h
2.供试品金黄色葡萄球菌检查操作示意图
10-1
100ml 供试液
阴性
阳性
报告检出
革兰阳性杆菌，芽胞多大于菌体，成梭形， 多为专性厌氧菌。有些种能产生外毒素使 人和动物致病。
2015年版《中国药典》规定阴道、尿道 给药的中药制剂每1g、1ml或10cm2不得 检出梭菌。
100ml 1:10供试液
二、微生物总数检查
2.油脂性供试品 10g(ml)+乳化剂→+稀释液→ 1:10供试液
10g或10ml
100ml 1:10供试液
十四烷酸异丙酯 或聚山梨酯80等
≤40℃乳化
加稀释液
（二）需氧菌总数检查
检查单位重量、体积或面积（g 、ml 或10cm2）的非规定灭菌制剂药品中所污染活的需氧菌数量（包括细菌和真菌）。
18～24h
1ml
42～44℃ 24～48h
MacC平板
报告未检出
10-1
无菌落
18～72h
有菌落
阴性
阳性
报告检出
18～24h
沙门菌属是通过消化道传播、肠杆菌科的重要肠道致病菌。
（三）沙门菌检查
2015年版《中国药典》规定含脏器提取物或 药材原粉的口服制剂、研粉口服、直接口服及泡 服的中药饮片每10g或10ml不得检出沙门菌。