人巨细胞病毒pp65抗原检测

I gM
症状 1
症状 2
抗原血症 1
抗原血症 2
移植后时间 首 次 pp65 抗 原 血 症 出 现 于 移 植 后 59 天 ， 2 天 后 出 现 喘 憋 、 低 氧 血 症 ，经 更 昔 洛 韦 治 疗 13 天 后 症 状 消 失 ， 抗 原 血 症 转 阴 ， 此 时 I gM才 开 始 出 现 弱 阳 性 ， 此 后 I gM持 续 阳 性 。移 植 后 6 个 月 ，再 次 出 现 喘 憋 、低 氧 血 症 ，查 pp65 抗 原 血 症 转 阳 , 经更昔洛韦治疗 7 天后症状消失、抗原血症转阴。
阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低，
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CMV感染的危险因素 CMV感染组DRI评分大多>20 合并细菌或感染 病程长、未正规治疗的狼疮
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三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和 再障病人中CMV感染中的应用
A 骨髓数量重建 B 配型完全符合者T细胞功能重建 C 配型不完全符合者T细胞功能重建
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PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2 － 骨髓移植后CMV感染的危险因素
CD34＋细胞分选
GVHD(FK506)
TBI
合并其他病原体感染
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PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3 －－治疗时间
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研究目的
了解HCMVpp65抗原检测在免疫功能低下者临床
HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。 了解HCMVpp65抗原检测在监测疾病活动性和指
导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。
应用HCMVpp65抗原检测分析免疫抑制病人CMV
感染的危险因素
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人巨细胞病毒pp65抗原检测
CMV PP65抗原血症检测
（一)分离白细胞及制片 (二) 固定和打孔 (三) 免疫荧光染色 (四)、读片和结果判断
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五、CMV 感染的分类和定义
活 动 性 CMV 感 染 的 定 义 为 血 中 出 现 PP65 阳 性 白 细 胞 ， 即 出 现 抗 原 血 症
发病/活动性感染 例数 1/1 5/5 5/6 2/2
由于病例数少，无法进行COX‘S比例危险性分析.
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PP65在监测自身免疫病病人CMV感染中的应用
发热的自身免疫病病人出现CMV感染发病率和死亡率均 很高，CMV感染可能是重要的致病原
较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效 控制，可能是病毒活动性复制的更主要的原因
用其指导治疗明显降低了死亡率
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在骨髓移植中，可在发病早期诊断，亚临床感染 的检出率偏低，应寻求更好的预测方法，或调整诊 断标准
不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株
治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发，应结 合更好的监控疗效的方法
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一PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的 应用1
骨髓移植后或激素冲击/化疗后发热患者 PP65抗原血症出现开始抗病毒治疗可明显降 低死亡率。
CMV感染与多种临床危险因素有关
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发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现CMV感染发病 率和死亡率均很高
幼稚细胞多，分化程度低，无抗病毒作用或病毒 作用很弱，可能是病毒活动性复制的更主要的原 因 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低 合并细菌或其他感染者CMV感染率高，感染可由 多种炎症因子触发
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结论
人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症检测可 作为免疫功能低下者活动性CMV感染或HCMV疾 病的预测指标
细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的 90％的症状性感染首次阳性抗原血症的PP65阳性 细胞数 <10个/1.5×10（1－7） 我们认为这组病人只要发现阳性细胞即应治疗
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首次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性
首次pp65抗原阳性细胞 计数 1 2－3 4－10 >10
接 受 T B I组 的 C M V 感 染 发 病 率 明 显 高 于 未 接 受 组 。
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G V H D 与 C M V 感 染 的 关 系
G V H D 无 G V H D 计
pp6 5抗 原 阳 性 1 3 3
1 6
pp6 5抗 原 阴 性 4
1 6
2 0
计
1 7
1 9
3 6 P < 0 .0 1
发 生 G V H D 组 的 C M V 感 染 发 病 率 明 显 高 于 未 发 生 组 。
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FK506
用药 未用药
pp65抗原阳性 6
10
16
pp65抗原阴性 0
20
20
合计
6
30
36 P<0.01
使用FK506组CM V感染率明显高于未使用组。
* 人巨细胞病毒（CMV）感染甚为普遍
* 人巨细胞病毒（CMV）感染是免疫功能低下者的常见机 会感染
* 器官移植后活动性HCMV感染率为20-70%，如发生CMV肺 炎，死亡率可达80-90%
* CMV还有抑制机体免疫功能的作用，CMV感染可增加真菌 和其他机会感染发生率，
* 还可能造成异基因移植物的损害。
* 目前对器官移植后CMV病的重点是预防，包括预防性抗 病毒或针对CMV亚临床感染(Preemptive)抗病毒治疗治疗
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* 早期检测活动性HCMV感染是pre-emptive治疗的 前提条件
* CMV常规病毒培养(CCC)往往需4周才能获阳性结果,对早期 诊断帮助不大 * CMV特异性抗体IgM，在严重免疫抑制患者可不出现或延迟 出现。 * 人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症较特异性抗体IgM阳性 早出现30天1。优点是可定量检测，5小时内可出结果。
患者例数
感染
18 16 14 12 10
8 6 4 2 0
细菌感染
无细菌感染
pp65阳性 pp65阴性
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T B I与 C M V 感 染 的 关 系
pp65抗 原 阳 性 pp65抗 原 阴 性
T B I 10
1
未 用 T B I 计 3 13 22 23
计
11
25 36 P < 0.01
感染
23
1
11
17
非感染 6 2
2
13
23
8
5
3
总计
16
24 40 P>0。05
入院后是否接受免疫抑制剂冲击治疗对发病率无显著影响。
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发病组pp65抗原阳性细胞数与无症状感染组阳性细胞数比较
<100
发病 3
无症状感染
8
11
>100
5
1
6
总计
8
9
17
P<0. 01
发病组 pp65 抗原阳性细胞数>100/1. 5x105PMNL，无症状感染组阳性细胞数 <100/1. 5 x 105PMNL。如下表
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讨论 一pp65抗原血症检测
直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功 能的响，在检测免疫抑制病人的CMV活动性感 染时尤其有用.
其检出率明显高于血清学方法 特点为快速（手工操作4-5小时）、敏感
性高（活动性感染80-90%，CMV病99-100%） 和较高的特异性（77-95%）、可以定量测试
8
13
发病 5 年以上的狼疮患者既往 CTX 的用量>10 克组的发病率低于 用量<10 克组。
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发病 5 年以上的狼疮患者既往 CTX 的用量>10 克组的发病率低于 用量<10 克组。
入院后是否接受激素和/ 或 CTX 冲击治疗对发病率的影响
冲击ห้องสมุดไป่ตู้
未冲击 总计
P
MP MP＋CTX CTX
CMV 病的定义为：抗原血症出现后 7 天之内出现下述症状者
白 细 胞 ≤ 3000/mm3； 血 小 板 《 75× 109/L； 单 核 细 胞 增 多 ， 异 淋 > 10%; 视网膜炎； CXR 示 间 质 性 肺 炎 和 低 氧 血 症 ， 无 其 他 原 因 解 释 者 ； 肝炎（肝功异常、肝脾肿大），无其他原因解释者； 移植物功能异常 大 脑 病 变 /神 经 系 统 异 常 /多 神 经 炎
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亚临床感 染 6%
无症状感 染 6%
CMV病 88%
CMV病 无症状感染 亚临床感染
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30 25 20 15 10
5 0
ALLO－P/B
AUTO-PBSCT
患者总数 活动性感染 CMV病
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次pp65抗 原 阳 性 细 胞 数 与C M V疾 病 危 险 性
7
4 ( 6 7 %)
2 0 1 2 ( 6 0 %)
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3周内感染 7. 7％ 2个月以上感染 38. 46％
3周－2月感染 54. 8%
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16
14
12
10
8
6
4
2
0
alloPBSCT
allo-BMT
BMT+PBSCT
AUTOPBSCT
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试验原理 用免疫荧光标记的单克隆抗体检测CMV的低基质磷蛋 白 pp65。
pp65的特点 * CMV病毒复制的早期蛋白，它出现于病毒感染的早 期，在细胞感染后3－4小时即开始出现 * 是CMV病毒含量最丰富的蛋白 * 其功能是将病毒的DNA锚定在受感染细胞的核膜上 * 在胞浆的高尔基体内合成,然后运回核内。
无 症 状 感 染 ： PP65 抗 原 血 症 阳 性 ， 无 上 述 临 床 表 现 。
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(三)患者一般资料见表
骨髓移植
性别
男
女
17
13
自身免疫病
2
38
血液系统肿瘤
23
7
年龄X＋SD 总数
34. 1±6. 99 36 45. 8±17. 1 40 36. 7±10. 2 30
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SLE患者中CMV感染者和CMV病者的年龄构成
感染/发病例数
<1年
1－5年
>5年
感染/发病
病程 感染/发病
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发病 5 年以上的狼疮病人既往 CTX 的用量与 CMV感染的关系如表
CTX用量
>10 克 <10 克
总计
感染
0
7
7
非感染
5
1
6
总计
5
4(9. 75%)
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治疗情况及死亡率
治 疗 人 数 死 亡 ( %)
骨 髓 移 植 14
2 ( 14. 2% )
自身免疫病 6
1 ( 1 6 . 6 %)
血液病
1
0 ( 0)
计
21
3 ( 1 3 . 6 %)
未 治 疗 人 数 死 亡 ( %)
2
2 ( 1 0 0 %)
1 1 6 ( 5 0 %)
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试验结果
病人总数
骨髓移植 36
自身免疫病 血液病
40
30
总计 106
PP65抗原阳性(%) 16 (44. 4%) 17 (42. 5%) 8(26. 6%) 41(38. 3%)
CMV病
15/16
11/17
7/8
33(80. 4%)
CMVI gM阳性
2/16
1/17
1/8
－－－早期诊断
* 骨髓移植后早期用IGM来诊断CMV感染将 贻误治疗
* pp65抗原检测可用于早期诊断，甚至预 测发病
* 如果能在骨髓重建的早期检测到对CMV的 细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准 确地预测CMV感染。
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病人的百分比 100％
A B
C
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 移植后天数
首 次pp65抗 原 阳 性 细 胞 C M VPP65抗 原 阳 性 细 胞
计 数
例 数
1
1/1
2－ 3
5/5
4－ 10
5/6
>10
2/2
由 于 病 例 数 少 ， 无 法 进 行C O X‘ S比 例 危 险 性 分 析 .
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系
一 例 行 Al l o -PBSCT 的 病 人 两 次 抗 原 血 症 与 症 状 和 I g M 的 时 间 关