HPLC法测定VB12注射液中VB12的含量

HPLC 法测定 VB12 注射液中VB12 的含量
一、实验目的
1.学习 HPLC分析条件的建立。

2.练习 HPLC仪器的使用。

3.掌握 HPLC分析系统适应性的考察方法及要求。

4.掌握HPLC法测定样品含量的方法。

二、实验原理
高效液相色谱法的定量方法常采用外标法，外标法又分标准曲线法、一点法和两点法。

当标准曲线法为过原点的直线时，则可用一点法进行含量测定，其误差主要来源于进样量不准确。

在药物分析中，为了减少实验条件波动对分析结果的影响，常采用随行外标一点法，即每次测定都同时进对照品和样品溶液。

在同一台仪器同样的分析条件下，进同样体积的对照品溶液和样品溶液分析，则有
A 样C
样
A标C标
查资料可知VB12紫外最大吸收波长
在
量测定。

三、仪器与试剂
361nm左右 , 可在该波长处利用外标法
对
VB12进行含
（1）高效液相色谱仪（紫外检测器）;25 μ L 微量注射器。

（2）C18反相健合相色谱柱（ 150× 4.6mm,5μ m).
（3）溶剂过滤器（ 0.45 μ m）及脱气装置。

（4） 0.2mg/mLVB12 的甲醇溶液。

（5）甲醇（色谱）；重蒸馏水（新制）
（6）样品： VB12注射液（ 100μ g/mL）
四、实验步骤
1、流动相的配置
量取甲醇和重蒸馏水（体积80： 20）置量筒中混合后，用0.45 μ m滤膜过滤脱气。

2、色谱条件
固定相： C18反相健合相色谱柱（150× 4.6mm,5μ m)
流动相： VB12为甲醇与水（体积80：20）
检测波长： 361nm
柱温： 30o C
3、含量测定
（1)对照品溶液的配制
精密称取VB12工作对照品适量2mg，置 10mL量杯中，加甲醇溶解并稀释至刻度线，摇匀。

（2）样品溶液的配制
精密量取样品注射液0.1mL，置 250mL容量瓶中，加水稀释至刻度线，摇匀。

精密量取1mL 置 10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度线，摇匀后备用。

（3）精密吸取对照品和样品溶液10μ L, 分别注入高效液相色谱仪进行分析，根据对照品和
样品溶液色谱图的峰面积用标准品对照法计算其注射剂中VB12的含量。

五、数据记录及处理
（1) 色谱条件如下
色谱柱：柱温：流动相：
流速：检测器：检测波长：
(2)记录组分名、保留时间、峰宽等参数，分别计算对照品和样品的理论塔板数、理论踏板
高度、拖尾因子及两者的分离度。

t R W n H T R s
对照品
样品
（3）峰面积记录
溶液
峰面积 A C样/(mg/mL)
对照品
样品。