HPLC法测定筋络通颗粒中橙皮苷的含量

HPLC法测定筋络通颗粒中橙皮苷的含量
李玥
【摘要】目的建立筋络通颗粒中橙皮苷的HPLC含量测定方法.方法采用Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.3%磷酸(22:78)作为流动相,流速为1.0 mL·min-1,紫外检测波长为283 nm,柱温为35℃.结果在0.065 5～2.096μg范围内,进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为
99.33%,RSD为0.84%(n=6).结论方法灵敏、简便,结果准确,重现性好,可用于筋络通颗粒的质量控制.
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2010(025)001
【总页数】2页(P6-7)
【关键词】HPLC法;筋络通颗粒;橙皮苷
【作者】李玥
【作者单位】天津市塘沽中医医院,天津300450
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
筋络通颗粒是由天津天一制药有限公司开发的一种适用于治疗严重的关节变形和强直性脊柱炎等病症的复方制剂，临床疗效显著，主要由蒺藜、沙苑子、陈皮、当归、续断、熟地黄等药物组成，具有补肾通督、养血柔筋、通络止痛的作用。

方中陈皮的主要成分橙皮苷具有较强的抗炎作用[1]，且在中药新药的制备和研发中, 橙皮苷
常常被选为指标成分而用于定性和定量研究。

因此，为了有效控制筋络通颗粒的内在质量，选取方中陈皮所含的橙皮苷作为质控指标，采用HPLC法测定其含量，
结果满意。

1.1 仪器 Waters2695液相色谱系统：四单元数码梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、Waters2487 DAD检测器、Empower工作站；METTLER TOLEDO AX205(瑞士)十万分之一天平；BP121S万分之一天平(瑞士沙脱利斯公司)。

1.2 试药筋络通颗粒(批号0811013，0811014，天津天一制药有限公司)；橙皮
苷对照品(批号110721-200512，中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯，水
为高纯水；其它试剂均为分析纯。

2.1 色谱条件色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，采用Agilent C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.3%磷酸(22∶78)，检测波长为283 nm，流速为1.0 mL·min-1，采用35 ℃柱温，理论板数按橙皮苷色谱峰计算不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成0.02 g·L-1的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取筋络通颗粒，研细，取约1 g，精密称定;置于100 mL
三角瓶中，加甲醇25 mL，称质量;加热回流处理20 min，取出放冷，称质量;补
甲醇至原量，摇匀，滤过(0.45 μm微孔滤膜)，续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性对照品溶液的制备原方去陈皮药材，按制剂工艺法进行制备，得缺陈皮
的阴性制剂。

取阴性制剂1 g，按2.3项下操作，制备阴性制剂对照品液。

2.5 专属性实验按2.1项下的色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果橙皮苷对照品和供试品色谱图中橙皮苷峰与其它组分峰基线分离，分离度大于1.5，保留时间约为9.3 min；
阴性对照色谱图中与橙皮苷对照品以及供试品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对橙皮苷的测定无干扰,见图1。

2.6 线性关系考察精密称取于40 ℃真空干燥至恒重的橙皮苷对照品5.24 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成橙皮苷标准储备液(209.6 mg·L-1)。

分别配成209.6，104.8，52.4，26.2，13.1和6.55 mg·L-1的系列对照品溶液，分别吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，以峰面积A为纵坐标，对照
品质量浓度C(mg·L-1)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=16 603C+9 628.4；r=0.999 9，橙皮苷在0.065 5～2.096 μg之间呈良好的线性关系。

2.7 精密度实验精密吸取同一份供试品溶液，连续进样6次，测定橙皮苷峰面积
积分值，RSD为0.13%(n=6)，表明精密度良好。

2.8 稳定性实验按2.3项下操作制备一份供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，
10和12 h测定橙皮苷峰面积，RSD为0.48%，结果显示供试品溶液在12 h内稳定。

2.9 重现性实验取同一批号供试品(批号0811013)6份，各约1 g，精密称定，分别按2.3项下操作，制备供试品溶液，测定含量，平均含量为1.191 mg·g-1，RSD为1.1%(n=6)，表明该方法的重现性较好。

2.10 加样回收率实验取已知含量的制剂(批号0811013，含量为1.191 mg·g-1)，进行加样回收率实验。

取筋络通颗粒，研细，约0.5 g，精密称定；置于25 mL
三角瓶中，加入质量浓度为209.6 mg·L-1的标准品溶液适量，加入甲醇约25 mL，称质量；加热回流20 min，取出放冷，称质量；补甲醇至原量，摇匀，滤过(0.45 μm微孔滤膜)，依法测定，计算橙皮苷回收率为99.33%，RSD为0.84%。

2.11 供试品含量测定分别按2.3项下操作，制备不同批号(0811013，0811014)
的供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定。

结果见表1。

3.1 色谱条件的选择根据2005年版《中国药典》收载的陈皮药材中橙皮苷的测定
条件[2]，本实验首先考察流动相为甲醇-0.3%磷酸(35∶65)的检测效果，结果在此条件下色谱峰较宽，峰形不理想，于是根据文献[3]调整流动相为乙腈-0.3%磷酸(22∶78)，此时橙皮苷色谱峰尖锐、对称。

但此条件下阴性样品中有干扰峰存在，尝试过改变流动相比例19∶81，20∶80，21∶79，23∶77均未能排除干扰，但尝试将柱温由25 ℃升至30 ℃时，干扰有所改善，当调节柱温至35 ℃时，阴性样品中干扰排除，从而确定色谱条件。

3.2 处理方法的选择本实验在处理方法选择时，参考文献[4-6]对加热回流和超声处理方法进行比较，结果显示加热回流法的提取效果比超声法好。

实验中还对回流溶剂甲醇的用量(25和50 mL)以及回流时间(10，20和30 min)的提取效果进行考察，结果表明25 mL甲醇，回流提取20 min效果最好。

【相关文献】
[1] 张冬松,高慧媛,吴立军．橙皮苷的药理活性研究进展[J]. 中国现代中药, 2006,8(7):25-26.
[2] 中国药典2005年版[S].一部．2005:132.
[3] 饶春恺,谭忠军,宋军．HPLC测定参苓健脾胃颗粒中橙皮苷的含量[J]. 中成
药,2006,28(10):1542-1543.
[4] 袁金斌,周志炎．HPLC测定陈皮提取物及制剂中橙皮苷的含量[J]. 中成药, 2006,28(3):455-456.
[5] 张立峰,赵国强,刘灿仿．HPLC法测定康儿灵颗粒中橙皮苷的含量[J]. 西北药学杂
志,2008,23(2):70-72.
[6] 尚远宏,刘圆,石圣洪,等．RP-HPLC测定参仁强体胶囊中橙皮苷的含量[J]. 华西药学杂志, 2007,22(1):72-73.。