高效液相色谱法测定富含油脂辣椒制品中的辣椒素类物质
超高效液相色谱法快速测定辣椒素类物质
超 高 效 液 相 色 谱 仪 ： Ｃ ＵＴ Ｕｒ ｅｆ ｍ Ａ Ｑ ＩＹ ｔ Ｐｒ ｒ — ａ ｏ
Ａ ％ ／ ５ ． ＯＯ
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Ｃ ｒｅ ｕｖ 初 始
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代 高档 仪器 分析 法 的灵 敏 度 和 准 确度 都 较 高 ， 仪 但 器 价格 昂 贵 。 目前普 及 的液 相色 谱 因其性 价 比优越 和方 法 可靠 常被 用 于 此 项 工作 ， 分 析 速度 还有 待 但
进一 ห้องสมุดไป่ตู้ 提高 。
四氢 呋喃 一甲醇 （ 积 比 １ １ 溶 液 １ ， 旋 ， 体 ：） ０ｍＬ 涡 震 荡 １ｍｎ 再超 声 提取 ３ ｉ。取 出冷 却 至 室 温 ， ｉ， ０ｍｎ 移
甲醇 ： 色谱 纯 ， 国 Ｔ ｄ 公 司 ； 美 ｅａ
酸 性 氧化 铝 ：４～１０ Ｉ １０～２ ０ 目） 上 海 ７ ５ ｍ（ ０ ｘ ０ ，
晶纯试 剂有 限公 司 ；
绘 制标 准 曲线 （ 取跟 样 品浓 度相 近 的标 准溶 液进 或 行 单点 校 正 ） 以保 留时 间 和该 点 处 的光 谱 图定 性 ， ，
为 ０ ０ ｑ／ Ｌ， 量 限 为 ０ ２ ｇ ｍＬ 该 法 满 足 辣 素 等 级 评 价 相 关 标 准 的 要 求 。 ．５ｎ ｍ 定 Ｉ ｇ ．５ｍ ／ 。 关键 词 超 高效 液 相 色谙 辣椒及辣 椒制品 辣椒素 同系物 辣 味 水 平
对辣 椒 或其 提取 物 中辣椒 素类 物 质 的定量 分析
摘要
建 立 了超 高 效 液 相 色谱 法 快速 测 定 辣 椒 制 品 中辣 椒 素 、 氢 辣 椒 素 、 二 降二 氢 辣 椒 素 的 方 法 。样 品 以 四 氢
高效液相色谱法测定雀辣中辣椒素及类似物的含量
分析检测高效液相色谱法测定雀辣中辣椒素及类似物的含量白铭松，何佳艳，熊彩云，袁 潘，李成功，潘文丽*（祥云县综合检验检测院，云南大理 671000）摘 要：目的：优化探索适合雀辣中辣椒素和二氢辣椒素的含量测定方法，并对雀辣中的辣椒素及二氢辣椒素进行测定，为雀辣资源的开发利用开展基础研究。
方法：通过对不同的提取方法进行优化，得到较优的方法并测定不同地区雀辣中辣椒素及二氢辣椒素的含量。
结果：辣椒素在0.019 2～0.191 8 mg·mL-1线性良好，相关系数大于0.999 9，二氢辣椒素在0.015 7～0.157 5 mg·mL-1线性良好，相关系数为0.999 8；方法回收率为91.06%～101.22%，RSD为0.8%～2.1%。
雀辣中辣椒素含量为（3.190±0.025）～（5.308±0.022）mg·g-1，二氢辣椒素含量为（0.868±0.021）～（1.082±0.018）mg·g-1，普洱雀辣中辣椒素及二氢辣椒素含量高于西双版纳雀辣。
结论：本文建立的方法快速、稳定、准确、节省溶剂，适合雀辣中辣椒素和二氢辣椒素含量的测定。
关键词：雀辣；辣椒素；二氢辣椒素；高效液相色谱Determination of Capsaicin and Its Analogues in QueLa by High Performance Liquid ChromatographyBAI Mingsong, HE Jiayan, XIONG Caiyun, YUAN Pan, LI Chenggong, PAN Wenli*(Xiangyun Inspection and Testing Institute for Comprehensive Control, Dali 671000, China) Abstract: Objective: To optimize and explore a suitable method for determining the content of capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa, and to determine the capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa to provide basic research for the development and utilization of QueLa resources. Method: By optimizing different extraction methods, a better method was obtained and the content of capsaicin and dihydrocapsaicin in different regions of QueLa was determined. Result: The linearity of capsaicin is good within 0.019 2～0.191 8 mg·mL-1, with a correlation coefficient greater than 0.999 9. The linearity of dihydrocapsaicin is good within 0.015 7～0.157 5 mg·mL-1, and the correlation coefficient was 0.999 8; the recovery rate of the method is 91.06%～101.22%, and the RSD is 0.8%～2.1%. The content of capsaicin in QueLa is (3.190±0.025)～(5.308±0.022) mg·g-1, and the content of dihydrocapsaicin is (0.868±0.021)～(1.082±0.018) mg·g-1. The content of capsaicin and dihydrocapsaicin in Pu’er QueLa is higher than that in Xishuangbanna QueLa. Conclusion: The established method is rapid, stable, accurate, and solvent efficient. It is suitable for the determination of capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa.Keywords: QueLa; capsaicin; dihydrocapsaicin; high performance liquid chromatography雀辣资源主要分布于云南普洱地区、西双版纳地区和德宏地区。
高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质
高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质孙胜枚【摘要】该研究采用了高效液相色谱法对辣椒制品中的辣椒素类物质进行检测,并对其提取条件和检测方法进行了研究.以乙醇∶水=70∶30 (V∶V)作为提取液,采用直接萃取法提取样品中的辣椒素和二氢辣椒素,以0.3％磷酸二氢钾溶液-乙腈(62∶38,V∶ V)为流动相,检测波长230 nm,Macherey-Nagel Nucleosil120-5 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离.结果表明,辣椒素和二氢辣椒素在20～100 μg/mL质量浓度范围线性关系良好(R12=0.999 8,R22=0.999 9),检出限为0.001 g/kg,加标回收率分别为93％～104％和86％～103％,相对标准偏差RSD ＜5％.该方法操作简单、快速,具有良好的准确性和精密度,可有效排除香辛料物质的杂峰干扰,适合各类辣椒制品中辣椒素类物质的检测.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【总页数】4页(P148-151)【关键词】高效液相色谱;辣椒素类物质;测定【作者】孙胜枚【作者单位】广东省江门市李锦记(新会)食品有限公司,广东江门529100【正文语种】中文【中图分类】TS262.5日常所食用的辣椒制品中的辣味主要来源于辣椒当中的辣椒素类物质。
辣椒素类物质主要包含有以下5种：辣椒素（capsaicin，CAP）、二氢辣椒素（dihydrocapsaicin，DCAP）、高辣椒素（homocapsaicin）、高二氢辣椒素（homodihydrocapsaicin）、降二氢辣椒素（nordihydrocapsaicin）［1-2］。
其中辣椒类制品辣感的主要来源是辣椒素和二氢辣椒素，占辣椒素类物质总含量90%以上［3］，因此这两种辣椒素类物质也是辣味水平研究的主要对象［4-5］。
目前对于辣椒素类物质含量的检测主要方法有：比色法、薄层色谱法、紫外分光光度法和高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法［6-9］。
高效液相色谱法检测饲料添加剂样品中的辣椒素类似物
离、定性与定量，效果较好，根据辣椒素类物质的结 通道 2998 紫外检测器，美国 Waters 公司；Waters C8
构特点和光吸收特性，一般采用反相化学键合相，紫 色谱柱：粒度 5 μm，长度 150 ㎜，内径 3.9 ㎜，美
对辣椒素类似物检测方法有多种，包括化学分析 剂有限公司；乙腈：色谱纯。Fisher 公司；试验用
方法和仪器分析方法，前者有凯氏定氮法[5]，后者有 水；辣椒素标准品：含量 99%；二氢辣椒素标准品 ：
紫外可见光光度法[6]、三维荧光光谱法[7]、高效液相 含量 99%；降二氢辣椒素标准品：含量 99%。
Abstract: In this experiment, the low toxic and economic ethanol was used as the extraction so‐ lution, and the capsaicin analogues in the samples were extracted by reflux condensantion. Using high performance liquid chromatography(HPLC) method for the determination of capsaicin analogues, C8 chromatographic column, particle size 5 microns, 150 ㎜ in length, inner diameter 3.9 ㎜, ace‐ tonitrile-water(volume ratio 40: 60) as mobile phase, flow rate was 1.00 mL / min, at 280 nm. HPLC is simple and convenient, easy to operate, reproducible and high precision, and can guide the de‐ tection study of capsaicin analogues in feed additives.
高效液相色谱法测定豆瓣中辣椒素类物质含量
辣椒素类物 质 的 分 析 方 法 主 要 有 感 官 分 析 法［４］、分 光光度法［５］、高 效 液 相 色 谱 法［６，７］、液－质 联 用 法［８，９］、气 相 色谱法［１０］、酶 联 免 疫 法［１１］、电 子 鼻 法［１２］等 方 法。 高 效 液 相色谱法具有高灵敏度、高分离度、高准确度及省时等优 点，在辣椒素类物质的分析中广泛使用。
本实验采用高效液相色谱法测定豆瓣中辣椒素 和 二 氢 辣 椒 素 的 含 量 ，通 过 对 高 效 液 相 色 谱 分 析 条 件 的 优 化 ，确 定 辣 椒 素 和 二 氢 辣 椒 素 的 检 测 方 法 。 并 对 豆 瓣 中 的 辣 椒 素 类 物 质 进 行 了 分 析 ，采 用 国 际 通用的斯 科 维 尔 指 数 和 辣 度 来 表 示 豆 瓣 的 辣 味 程 度 。 以 期 为 豆 瓣 的 辣 味 分 级 、产 品 的 生 产 和 消 费 者 的选择提供参考。
高效液相色谱法测定食品中的辣椒素、二氢辣椒素
３８ ０８Ｖ ．９ ｏ０ ７ ２０， １ ， ．７ ｏ２ Ｎ
食 品 斛 字
※分析检测
高效液相色谱 法测 定食 品中的
辣椒素 、二氢辣椒素
王 旭 １ 王富华 １ ， ，钟 红 舰 ： 肖荣 英 ｓ 靳 松 ， ，
（． １ 农业部蔬菜水 果质量监督检验测试 中心 ，广东 广 州 ４ ０ ０ ；３ 华中农业大学资源与环境学院，湖 北 武汉 ５ ０２ ． ５ ０ ４ ：２ 农业部农产品质量监督检验测试 中心 ，河南 郑州 １６０ ． １０ ８ ） ０ ０ １ ４ ０ ７ ：４ 农业部蔬菜品质监督检验 测试 中心 ，北京 ３０ ０ ．
中图分类号：Ｔ ２４９ Ｓ６ ．
文献标识码 ：Ａ
文章编 号：１０ —６ ０２０ ）７０ ７ —４ ０ ２６ ３ （０ ８０ —３ ８０
辣椒 碱 ，香 草 酰 胺 类 生 物 碱 ， 是 茄 科 植 物 辣 椒 果 实 中 的主 要 呈 辣 物 质 ， 可 增 进 食 欲 、 改 善 消 化 功 能 ， 具有抗菌、抗肿瘤和镇痛 作用，长期 以来作为优质 的 调味 品深 受 人们 欢 迎 ，也 可 作 为镇痛 药 物在 临床 医 学上 使 用 【 Ｉ 辣 椒 中 的 辣 椒 碱 主 要 有 ５ 种 ： 辣 椒 素 １。
性 高 的优 势 。
本 研究 通过 对 食 品中 的辣 椒素 、 二氢 辣椒 素 的提取
方 法 和 色 谱 条件 的选 择 和 优 化 ， 确 定食 品 中的 辣椒 素 、 二 氢 辣椒 素 的 高效 液相 色 谱荧 光 检测 方法 ，并 对 该方 法
高 二氢 辣椒素 （０ ｄｈ ｄ０ａ ｓｉｉ） ｈ ｍ０ ｉｙ ｒｃｐａ ｎ，其 中前 两者 占辣 ｃ 椒 碱 总 量 的 ９ ％ 以上 ，也 提供 了 ９ ％ 以上 的辣 感和 热 ０ ０ 感 ，其含 量 的 高低 直接 影 响到 辣 椒及 其 制 品 的辣度 。辣 椒 素 、 二氢 辣椒 素 分子 结 构 见 图 １２。 ［ １ 辣椒 碱 的测定 方法 主要 有 比色 法 、 高效 液相 色谱 法
辣椒中辣椒素的高效液相色谱法测定
辣椒中辣椒素的高效液相色谱法测定2008年第6期现代科学仪器ModernScientificInstruments辣椒中辣椒素的高效液相色谱法测定李如华韩振泰(中国林科院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林生态环境重点实验室北京100091)摘要辣椒素的化学组成主要为辣椒碱和二氢辣椒碱.辣椒碱具有镇痛,消炎,促进食欲,改善消化,抗菌,杀虫及对神经递质的选择性等药理作用.辣椒碱可以治愈和缓和一些难治愈慢性神经疼痛,可为这些疾病的治疗提供一条新的途径,是一个很有发展潜力的药物本文采用高效液相色谱法,通过对流动相,检测波长等分离条件的优化,建立了辣椒素的分析方法.经实验证实,本方法操作简单,重复性好,准确度高,可以对辣椒素的工业化生产提供帮助J.方法回收率90%～92%,相对偏差:2.5%,相关系数:r=0.9956.关键词辣椒素;二氢辣椒碱;高效液相色谱中图分类号Q946.88 DeterminationofCapsaicinoidsinHotPepperbyRP—HPLCLiRuhua,HanZhentai (ResearchInstituteofForestryEnvironmentandProtection,CAF;KeyLaboratoryofForestr yEcologyandEnvironment,StateForestryAdministration,Beijing,100091,China) AbstractThechemicalcompositionofCapsaicinoidsiscapsaicinanddihydrocapsaicin.Cap saicinhastheeffectsofAnalgesia,antiphlogosis,increasingtheappetite,improvingthedigestion,antibact erial,disinfectionsandSOon.CapsaicinoidsCallcureandmitigatesomechronicneuralache,provideanewwayf orthesediseasetreatments.Capsaicinoidsisthemedicinewithhighdevelopmentpotentials.Inthispaper,byt heHPLCmethod andwiththeoptimizationofmobilephaseanddetectionwavelength,theanalysismethodofC apsaicinoidswases—tablished.Experimentsprovedthatthemethodhasthecharacteristicsofsimpleoperation,go odreproducibility, highaccuracyandcanprovidehelptotheindustrialproductionofCapsaicinoids-4j.TheReco veryrate.relativedeviationandcorrelationcoefficientofthemethodare90%～92%.2.5%and0.9956respectively.KeywordsCapsaicinoids;Dihydrocapsaicin;HPLC辣椒是一种药食同源的蔬菜,含有生物碱,色素,维生素,有机酸,矿物质等成分j.辣椒所独具的特性是辣味,其成分为辣椒素类物质.辣椒素是辣椒果实中结构为N一香草基酞胺类的生物碱.辣椒素的化学组成主要为辣椒碱(Capsaicin,C),二氢辣椒碱(Dihydrocapsaicin,DC),二者约占整个辣椒素的90%,其它为二者的同系物.辣椒素类提取物通常是混合物J,晶体颜色为白色(或微黄,微红),没有固定的熔点,通常熔点范围为57℃一66℃,沸点范围为210~C一220℃,易溶于低级醇和丙酮,氯仿,石油醚等有机溶剂,由于其酚羟基表现出弱酸性,因而能溶于强碱J.辣椒素属于酰胺类化合物,因而可发生水解生成香草基胺和癸烯酸.辣椒素的结构通式:收稿日期:2008—07—29作者简介:李如华,男,大学本科.1实验部分1.1仪器与试剂液相分析仪:Waters244高效液相色谱仪,Wa—ters486紫外检测器,M510泵,浙大色谱工作站.甲醇为优级并经0.5m滤膜过滤.水为重蒸水并经0. 451xm滤膜过滤.辣椒碱标样:天然,Sigma公司. 1.2色谱条件色谱柱:250am×4.6mmODS柱;流动相:75%的甲醇/水溶液;流速:1mL/min;检测器:220nm.1.3标准样品配制准确称取50mg辣椒碱标样,用甲醇定容至1O mL,备用.1.4辣椒碱样品配制准确称取60—200mg辣椒碱样品,用甲醇定容至10mL.68?现代科学仪器ModemScientificInstruments2008年12月2实验结果与讨论2.1流动相的选择和优化实验前我们对辣椒碱的HPLC法进行了调研,目前所采用的流动相主要有以下几种体系.张继敏等人采用稀磷酸(pH3.1～3.5)溶液/乙腈(50:50)为流动相,这与美国药典USP2003磷酸水溶液(1:1000, v/V)/乙腈(600:400)相似;赵仁邦等人采用甲醇作流动相.用甲醇作流动相,价格低廉,且避免了使用酸性溶液.为此,我们选择以甲醇作流动相进行实验.实验发现,用纯甲醇作流动相,辣椒碱和二氢辣椒碱的色谱峰未完全分开.于是,我们分别配制85%,75%,70%的甲醇溶液作流动相.实验结果显示,随着流动相中水的含量增加,辣椒碱和二氢辣椒碱的t逐渐增加,当流动相为85%的甲醇/水溶液时,辣椒碱和二氢辣椒碱基本分开;当流动相为75%的甲醇/水溶液时,辣椒碱和二氢辣椒碱可实现基线分离;但当水的含量增加至40%时,即60%的流动相对辣椒碱样品溶解性降低.因此,我们认为,流动相以70—75%的甲醇溶液较为合适.此时样品各组分能实现基线分离(如图1).图1辣椒碱标样图谱图2辣椒提取物样品图谱2.2检测波长的影响我们用标准样品,在图1的条件下,测定了不同检测波长下的辣椒素和二氢辣椒素的峰面积,其结果见表1. 表1不同检测波长下的辣椒素和二氢辣椒素的峰面积蝗面积l波长选择波长(m)图3检测波长对峰面积的影响根据表1,我们绘出了保留时间t为17.3min的辣椒碱组分的检测波长对峰面积的影响趋势,如图3所示.由图3看出,当波长在220nm时,辣椒碱的峰面积最大,此时灵敏度最高.2.3定量分析2.3.1重复性实验在上述优化条件下,即流动相为75%的甲醇/水溶液,检测波长为220am,连续钡定七次标样,测定结果见表2.经计算,平均测定相对偏差为2.5%.表2计算相对误差2.3.2标准曲线通过测量不同浓度的标样,得出辣椒碱,二氢辣椒碱的峰面积与浓度的关系,(见表3),即可绘出标准曲线,如图4,图5所示.结果表明,辣椒碱在0,25 —5mg/mL浓度范围内,浓度与峰面积具有良好的线性关系.蝗面积浓度/mL)图4辣椒碱标准曲线直线回归方程:Y=2.0927+2.801X,蝗面积维度/mL)图5二氢辣椒碱标准曲线直线回归方程:Y=0.6805+2.2141X.2.3.3样品测定表4样品中的辣椒碱含量测定表5样品中的二氢辣椒碱含量测定3结论本文建立了辣椒素的高效液相色谱分析方法.其优化条件是:色谱柱250cm×4.6mmODS柱;流动相75%的甲醇/水溶液;流速1mL/min;UV220nm.平均相对偏差为2.5%,辣椒碱在0.25—5mg/mL浓度范围内,浓度与峰面积具有良好的线性关系.经实验证实,本方法操作简单,重复性好,准确度高,满足分析要求.参考文献[1]彭书练,单扬,丁芳林.辣椒碱的制取,纯化及应用研究.辣椒杂志, 2005,3:40～41[2]张甫生,庞杰,徐秋兰,陈梅芳.辣椒红色素的研究进展.辣椒杂志, 2003,2:37[3]江和源,段文华,尉蕊仙.分子蒸馏技术及其应用.西部粮油科技, 2003.6:41—43[4]杨村,于宏奇,冯武文.分子蒸馏技术.北京:化工工业出版社, 2003,1:1—55,110—111[5]张志栋.辣椒碱的研究进展.天津药学,1997,9:25—26[6]伍明,任仲皎,王杰.天然辣椒红色素的提取新工艺.精细化工, 1994.11:30—33[7]阳勇.重庆大学学报.2004,12[8]张世文.吉首大学学报.2002,2。
辣椒中辣椒素的含量测定
辣椒中辣椒素的含量测定
万安凤
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2007(021)005
【摘要】目的建立辣椒素的含量测定方法.方法高效液相色谱条件:Gemini
C18(4.6 mm×25 mm,5 μg)色谱柱,乙腈-水(48:52)为流动相,检测波长为281 nm.结果辣椒素的平均回收率为102.24%,RSD=1.68%.结论该方法快速简捷、准确可靠,可用辣椒中辣椒素的含量测定.
【总页数】3页(P36-38)
【作者】万安凤
【作者单位】广州星群股份有限公司,广东,广州,510288
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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1.辣椒新品种‘艳椒425’中辣椒素及二氢辣椒素含量测定 [J], 张宗美;柴勇;孟霞
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3.中药材干辣椒中辣椒素和二氢辣椒素含量测定方法研究 [J], 韦继雯;闫倩玲;周云波;王红
4.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱快速筛查和定量检测食用油脂中的天然辣椒素、合成辣椒素和二氢辣椒素 [J], 刘诗瑶;吴文林;肖全伟;梁恒兴;苟兴华
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高效液相色谱法_紫外检测器测定辣椒制品中辣椒素的含量
目前文献上报道的测定辣椒素的方法有：紫外分光 光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、超临界ＣＯ２萃取 法［５］。
谱柱Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８ （ ５μｍ，２５０×４．６ｍｍ）；ＵＶ检测 器；超声波清洗器（ＳＢ－５２００） 宁波新芝科器研究所； ０． ４５μｍ 有机溶剂过滤膜；索氏抽提装置；常压蒸馏装 置；粉碎机。
甲醇（ＨＰＬＣ级） ； 四氢呋喃（Ａ．Ｒ） ； 水（ＨＰＬＣ级）。 辣椒素标样（纯度９５％） 美国Ｓｉｇｍａ公司；二氢辣椒素 标样（纯度９０％） 美国Ｓｉｇｍａ公司；辣椒制品 长沙市市售。 １．２ 色谱条件 流动相为Ｖ（甲醇）：Ｖ（水）＝８０：２０，流速０．８ｍｌ／ｍｉｎ，色谱 柱为Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８ （５μｍ，２５０×４．６ｍｍ），柱温３０．０ ℃，ＵＶ检测器的波长为２８０ｎｍ，进样量１０μｌ。 １．３ 溶液制备
含量（ｍｇ／ｇ） 含量（ｍｇ／ｇ）
剂，结果是甲醇＋四氢呋喃（５０＋５０）混合溶液作提取溶剂提 取效果最好。见图１。
３．５
辣椒素
３
二氢辣椒素
２．５
２
１．５
１
０．５
０
１
２
３
４
５
溶剂
注：１—甲醇；２—丙酮；３—四氢呋喃；４—甲醇＋四氢呋喃（５０＋５０）混合溶 液；５—甲醇＋丙酮（５０＋５０）混合溶液。
Fig.1
2709食品科学分析检验194椒素化学稳定性很高能溶于甲醇乙醇丙酮乙酸乙酯等有机溶剂中辣椒素纯品为白色结晶物石油醚正己烷中结晶辣椒素的药用价值很高常用于皮肤科临床具有消炎镇痛治疗严重牛皮癣和皮肤瘙痒糖尿病性神经痛以及治疗冻疮冻伤等作另外在食品工业中作为添加剂也已经得到广泛应capsaicinh2cohodihydrocapsaicinh2coho评价辣椒品质除评价辣椒果实中的营养成分实色泽以及外形以外很重要的是其辛辣程度在其辣味物质中辣椒素是最主要的一种成分因而辣椒素的测定已经成为辣椒品质鉴定品种资源普查优良辣椒品种的培育辣椒及制品辣度分级以及辣椒素的食品添药效研究和外贸出口等必须进行的项目之一尤其是辣椒及辣椒制品辣度分级的问题国际辣椒市场采用的是美国的shu辣度单位销到国外的辣椒必须提供辣椒的辣度由于我国无法提供辣椒及辣椒制品的辣度致使我国辣椒产品的出口受到阻碍椒的选种育种及加工环节由于没有辣度标准导致育种指标不明确目前文献上报道的测定辣椒素的方法有紫外分光光度法薄层色谱法高效液相色谱法超临界co2萃取分光光度法或薄层色谱法测定辣椒素一般用乙酸丙酮或乙醇在60左右多次浸泡提取过氧化铝柱或吸附树脂来分离色素和辣椒素回收溶剂后残留物用乙酸乙酯溶解加显色剂显色最后比色测定该法操作复杂又很费时间而且氧化铝柱对辣椒素有吸附准确度和灵敏度都不高使得结果偏低高效液相色谱法简称hplc法测定辣椒素常用的流动相是乙腈和水体系甲醇和水体系此种方法具有高灵敏度高分离度高准确度及省时等优点但是由于高效液相色谱法所需要的仪器相当昂贵目前国内应用此法的相对较少我国在这方面的研究还刚刚起步国外已经开始将超临界co2萃取技术和高效液相色谱法结合起来进行高效分离和定量测定辣椒素但是准确度和定量分析方面还有待进一步研究本研究是采用超声波提取法提取辣椒素采用高效液相色谱法测定辣椒素含量旨在寻找一种样品预处理过程简单辣椒素得率高测定方法精确的研究方法为以后进一步研究辣椒素的提取测定提供可靠的依材料与方法11仪器和试剂高效液相色谱仪agilent1100美国安捷伦公司谱柱agilentzorbaxsbc185m25046mmuv检测超声波清洗器sb5200宁波新芝科器研究所045m有机溶剂过滤膜索氏抽提装置常压蒸馏装粉碎机甲醇hplc级四氢呋喃ar水hplc级辣椒素标样纯度95美国sigma公司二氢辣椒素标样纯度90美国sigma公司辣椒制品长沙市市售
高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质
２０１ ６ Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．３
· １ ４８· Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．２８９
Ｃ ｈｉｎａ Ｂｒｅｗ ｉｎｇ
Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ
高效液相色谱法测定辣椒 制品中的辣椒素类物质
孙胜枚
（广东省江 门市李锦记 （新会）食 品有限公 司，广 东 江门 ５２９１００）
摘 要 ：该 研究采 用 厂高效液 相色谱法 对 辣椒制 品中 的辣 椒素类 物质 进行检 测 ，并对 其提 取条件 和检测 方法进 行 了研究 。 以乙醇：水＝
ＳＵＮ Ｓｈｅｎｇｍ ｅｉ
（ＬｅｅＫｕｍ Ｋｅｅ（Ｘｉｎ Ｈｕｉ）ＦｏｏｄＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊｉａｎｇｍｅｎ ５２９１００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｃａｐｓａｉｃｉｎｏｉｄｓ ｉｎ ｃａｐｓｉｃｕｍ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗ ａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔ ｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍ ｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ．Ｕｓｉｎｇ
ｅｔｈｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ：ｗａｔｅｒ＝７０：３０（Ｖ：Ｖ）ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｃａｐｓａｉｃｉｎ ａｎｄ ｄｉｈｙｄｒｏ ｃａｐｓａｉｃｉｎ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｄｉｒｅｃｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔ— ｅｄ ｂｙ Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ１２０－５ Ｃｌ８（４．６ ｍｍｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ），ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ０．３％ ｍｏｎｏｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（６２：３８，Ｖ＝ ａｓ
超高效液相色谱法快速测定辣椒素类物质
超高效液相色谱法快速测定辣椒素类物质赵春华;侯倩慧;余季金【摘要】建立了超高效液相色谱法快速测定辣椒制品中辣椒素、二氢辣椒素、降二氢辣椒素的方法.样品以四氢呋喃-甲醇(体积比1:1)提取,采用反相高效液相色谱分离.色谱柱为BEH C18,流动相乙腈-水进行梯度洗脱;二极管阵列检测器(DAD),检测波长为280 nm.各成分在1.0 -100.0 mL/L范围内线性良好.辣椒素、二氢辣椒素测定结果的相对标准偏差分别为0.8%,1.2%(n=5),回收率分别为93.0%-100.0%,92.9% -97.4%.方法检出限为0.05 mg/mL,定量限为0.25 mg/mL.该法满足辣素等级评价相关标准的要求.%A rapid method was developed for determination of capsaicin, dihydroeapsaicin and nordihydroeapsaicin in capsa-icinoids by ultra performance liquid chromatography. The sample was extracted with tetrahydrofuran - methanol ( volume ratio was 1:1). The components were separated on a BEH C18 column by gradient elution with acetonitrile - water as the mobile phase, and detected with DAD at 280 nm. The linear range was 1.0 - 100.0 mL/L. The RSD were 0.8 % , 1.2% (n = 5) , and the recoveries were 93.0% -100.0% and 92.9% -97.4% for capsaicin and dihydroeapsaicin, respectively. LOD was0.05 mg/mL, and LOQ was 0.25 mg/mL. The method meets the requirements of pungency level evaluation on the industrial criterion.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P38-40)【关键词】超高效液相色谱;辣椒及辣椒制品;辣椒素同系物;辣味水平【作者】赵春华;侯倩慧;余季金【作者单位】青岛华测检测技术有限公司,青岛,266101;青岛普仁仪器有限公司,青岛,266046;青岛大学,青岛,266071【正文语种】中文对辣椒或其提取物中辣椒素类物质的定量分析可采用铝蓝比色法、辣椒素分光光度法、高效液相色谱法、气-质联用法、液-质联用法等多种方法。
超高效液相色谱法-串联质谱法测定百色辣椒酱中合成辣椒素的含量
超高效液相色谱法-串联质谱法测定百色辣椒酱中合成辣椒素的含量作者：班振邓瑜来源：《食品安全导刊》2023年第10期摘要：目的：建立超高效液相色譜-串联质谱法快速检测百色辣椒酱中合成辣椒素的方法。
方法：样品经J2 PrepLinc全自动样品前处理平台净化浓缩后，采用超高效液相色谱法串联质谱法进行分析，以电喷雾化离子源多反应监测模式进行外标定量分析。
结果：合成辣椒素在1.0～500.0 ng·mL-1呈良好线性关系，相关系数为0.999 4，检出限为0.08 mg·kg-1，定量限为0.40 mg·kg-1，加标回收率在73.8%～97.5%，相对标准偏差为2.1%～3.5%（n=6）。
结论：该方法操作可靠、测定结果准确，适用于实验室大批量检验辣椒酱中合成辣椒素。
关键词：超高效液相色谱-串联质谱法；辣椒酱；合成辣椒素Determination of Synthetic Capsaicin in Baise Chili Sauce by Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass SpectrometryBAN Zhen， DENG Yu*（Baise Institutes for Food and Drug Control， Baise 533000， China）Abstract： Objective： A new method for the determination of synthetic capsaicin in Baise chili sauce by using UPLC-ESI-MS/MS was developed. Method： The samples were cleaned up by J2 PrepLinc platform and then determined by UPLC-ESI-MS/MS with multiple reaction monitoring. Result： The synthetic capsaicin showed a good linear relationship between 1.0 and 500.0 ng·mL-1，with a correlation coefficient of 0.999 4. The quantitation limit was 0.08 mg·kg-1， and the quantification limit is 0.40 mg · kg-1. The recoveries were in the range of 73.8%～97.5%， and the relative standard deviations of which were 2.1%～3.5%（n=6）. Conclusion： This method is reliable in operation and accurate in determination results， which can meet the requirement of analysis in a large number of samples.Keywords： ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry; chili sauce; synthetic capsaicin辣椒中呈辣味的物质统称为辣椒素或辣素，又名辣椒碱[1]。
食品中辣椒素类物质含量测定操作规程
辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质的测定及辣度表示方法操作规程1 目的对公司产品的辣椒素类物质含量测定制定标准操作规程，检验室操作人员按本规程操作，保证公司辣椒素类物质含量检测结果准确。
2 范围第一法液相色谱法适用于辣椒油树脂、辣椒及其为原料生产食品中的辣椒素、二氢辣椒素含量的测定第二法适用于辣椒和辣椒精油中辣椒素类物质总量的测定；第一法液相色谱法3 依据GB/T 21266-2007《辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法》、NY/T 1381-2007 《辣椒素的测定高效液相色谱法》、GB 28314-2012《食品安全国家标准食品添加剂辣椒油树脂》附录A.3。
4 实验原理试样经甲醇溶液提取，过微孔滤膜，进样，用反相色谱分离，紫外可见光检测器检测，外标法定量。
5 仪器和设备5.1 高效液相色谱仪：带紫外可见光检测器。
5.2 天平：感量±0.0001g、±0.01g。
5.3 超声波提取器。
5.4 组织捣碎机、电动粉碎机。
5.5恒温水浴锅。
5.6 滤膜：0.45µm有机滤膜6 实验步骤6.1 样品制备6.1.1半固态、固态样品取一独立包装样品，将样品混合均匀，静置，取上清液。
6.1.1液态样品取一独立包装样品，将样品振摇1min，使其混合均匀。
6.2 操作步骤称取一定质量的试样(精确至0.001g)于具塞锥形瓶中，加入甲醇20mL，在55℃水浴条件下，用超声波提取30min，然后放入冰水浴中冷却20min，收集滤液。
将滤渣连同滤纸重新用20mL甲醇超声提取30min后重复上述步骤，收集滤液。
再加入甲醇10mL重复一次。
将三次收集的滤液合并至50mL容量瓶，用甲醇定容。
经0.45µm有机相滤膜过滤后进行色谱分析。
（1）火锅底料类称取3g左右，定容于50mL容量瓶；（2）辣椒段、粉等（二荆条、新一代等）称取1g样品，定容于50mL容量瓶。
（3）辣椒油树脂、水辣粉等称取0.5g，定容于100mL容量瓶。
利用液相- 质谱法检测食用油中辣椒素的分析与探讨
THEORY | 理论研究Jul. 2018 China Food Safety »·65·配比结束时，要着重对其是否有效进行检验，来保证培养基可以真正投入到使用环节。
较常见的检验培养基是否有效的方法为定性检验，利用专用的用具（如无菌接种环）取用一些即将被检验的培养基中的较少部分待用，为了防止一整个培养基中出现植株污染的情况，需要在其中画一条线。
然后在特定的温度条件和标准时间内对待用的部分按要求培养。
然后对其生长状况进行仔细的察看和完整记录，0表示植株没有生长，1表示较弱生长，2表示长势良好，可以通过这些表示来判断植株是否正常生长，从而证实食品微生物检验中培养基是否有效。
严格把控食品微生物检验中培养基的存储过程。
种类不同的培养基其存储也不尽相同。
应严格按照供应商提供的储存条件、有效期和使用方法进行培养基和试剂的保存和使用。
喜阴的培养基应该存储在没有阳光直射和干爽的地方。
假如出现培养基因为存储中受潮而呈现块结状的情形时，就应该放弃取用。
在培养基经高压杀灭细菌后，应尽快使其降温至可以使用的程度。
培养基在灭菌锅里经过杀灭细菌后应及时取出，以防其中的有效成分流失。
储存的培养基在有效保质期内最好完全用尽，避免造成不必要的浪费。
在食品微生物检验中对培养基质量采取有效的质控对整个检验过程来说是必要的基础，严格把控每一批培养基的质量，可以达到有效控制培养基质量的目的，所以探析食品微生物检验中关于培养基的质量控制的有效举措，可以推动对培养基质量控制起到切实的作用。
□孙艳潇 甘肃省酒泉市敦煌市食品药品检验检测中心利用液相-质谱法检测食用油中辣椒素的分析与探讨针对各种油脂的检测实验，辣椒素以其使用范围广、热稳定性良好、脂溶性较好等特点成为人民食用油分辨研究检测中的重点。
本文主要是以食用油为研究对象，进行食用油中辣椒素的检测与分析。
辣椒是我国人民饮食中最喜欢添加的调味料，特别是火锅用油等。
总局关于发布《食用油脂中辣椒素的测定》食品补充检验方法的公告(2018年第26号)
附件食用油脂中辣椒素的测定BJS 2018011范围本方法规定了食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于食用油脂中辣椒素（天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素）含量的测定。
2原理试样经二氯甲烷溶解，氢氧化钠水溶液提取酸化后，过固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。
3试剂和材料除另行规定外，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.3 甲酸（CH2O2）：质谱级。
3.1.4 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。
3.1.5 氢氧化钠（NaOH）：分析纯。
3.1.6 浓硫酸（H2SO4）：98%，分析纯。
3.2 溶液配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸（3.1.3）1 mL用水定容至1000 mL，用滤膜（0.22 µm，水相）过滤后备用。
3.2.2 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（3.1.3）1 mL用乙腈（3.1.1）定容至1000 mL,用滤膜（0.22 µm，有机相）过滤后备用。
3.2.3 2%氢氧化钠溶液：称取20 g 氢氧化钠（3.1.5）溶于1000 mL水中，摇匀备用。
3.2.4 稀硫酸（1+15）溶液：取10 mL浓硫酸（3.1.6）缓缓倒入150 mL水中，搅拌均匀备用。
3.3 标准品天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、—1 —相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制3.4.1 标准储备液：分别称取天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品（3.3）0.1 g（精确至0.000 1 g），用甲醇（3.1.2）溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为1 mg/mL。
贮存于4 ℃冰箱中，有效期3个月。
3.4.2 混合标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液（3.4.1）适量于容量瓶中，用甲醇（3.1.2）将其稀释成含量分别为0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL 和100 ng/mL的标准系列混合工作液。
高效液相色谱法测定火锅底料中辣椒素类物质
高效液相色谱法测定火锅底料中辣椒素类物质
尼海峰;但晓容;李栋钢
【期刊名称】《中国调味品》
【年(卷),期】2014(000)011
【摘要】为了测定火锅底料中的辣味物质(辣椒素及二氢辣椒素),建立了高效液相色谱快速检测方法：色谱柱为C18 InertSustain (4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相为甲醇和水(V/V,65∶35),流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL,检测波长280 nm。
辣椒素类物质的提取采用超声波辅助提取。
结果表明：火锅底料中的辣椒素类物质含量在0.256~0.816 g/kg 之间,斯科维尔系数在3948~12583 SHU。
【总页数】5页(P115-119)
【作者】尼海峰;但晓容;李栋钢
【作者单位】四川天味食品集团股份有限公司，成都 610200;四川天味食品集团股份有限公司，成都 610200;四川天味食品集团股份有限公司，成都 610200【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3
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1.高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质 [J], 孙胜枚
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3.高效液相色谱法测定豆瓣中辣椒素类物质含量 [J], 贾洪锋;彭德川;梁爱华;何江红;陈祖明;贺稚非
4.高效液相色谱法测定高含水量辣椒制品中的辣椒素类物质 [J], 王穗萍;夏延斌;彭进;熊科;郑瑶瑶;杨峰
5.冻干浓缩对高效液相色谱法测定杭椒类辣椒中辣椒素类物质的影响 [J], 吕晓菡; 杨静; 陈建瑛; 傅鸿妃; 祝彪; 聂智星
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冻干浓缩对高效液相色谱法测定杭椒类辣椒中辣椒素类物质的影响
冻干浓缩对高效液相色谱法测定杭椒类辣椒中辣椒素类物质的影响Abstract[Objective] The research aimed to study the application of freezedrying and concentration techniques in the detection of capsaicinoids in peppers，especially in lowspicy pepper fruits.[Method] Fruits of four capsicum strains with different spicy degrees were used to explore the effects of pretreatment method （dry methods and concentrate）in capsaicinods determination by HPLC.[Result]The freeze drying technology could not only remove the water in fresh chili，but also retain its active substance to the maximum extent.The loss of capsaicin and two capsaicin in the fruit of drying technology was reduced.At the same time，the problem that fresh pepper could not be stored for a long time was solved in mass determination and analysis.During the extraction process，concentration extraction method was used to solve the problem that the sample size was too small and the capsaicin content was too low to obtain accurate data.In addition，the variation of capsaicin in capsicum fruits with low capsaicin content was studied by using this method.The results showed that the capsaicin content in the early stage was positively related to the maturity of the fruit，but the capsaicin content in the fruit decreased after 48 days of flowering.[Conclusion] This study provides a reference for the oxidation and transformation process of capsaicin.Key wordsFreeze dying;Concentrate;High performance liquid chromatography （HPLC）;Capsaicinoids;Pepper辣椒作為一种重要的蔬菜，在全世界60 多个国家和地区均有种植，是一种世界性的蔬菜[1-2]。
高效液相色谱法检测饲料添加剂样品中的辣椒素类似物
高效液相色谱法检测饲料添加剂样品中的辣椒素类似物陈玉艳;于家丰
【期刊名称】《现代畜牧兽医》
【年(卷),期】2018(0)10
【摘要】本试验利用低毒、经济的乙醇作为提取液,回流冷凝提取样品中的辣椒素类似物.用高效液相色谱法测定辣椒素、二氢辣椒素和降二氢辣椒素,采用C8色谱柱,粒度5μm,长度150 mm,内径3.9 mm,乙腈-水(体积比40:60)作为流动相,流速1.00 mL/min,在280 nm处进行检测.方法简洁方便,操作简易,可重复性与精密度强,对饲料添加剂辣椒素类似物的检测研究具有很好地指导作用.
【总页数】5页(P12-16)
【作者】陈玉艳;于家丰
【作者单位】辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳 110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳 110016
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
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1.高效液相色谱法测定食品中的辣椒素、二氢辣椒素 [J], 王旭;王富华;钟红舰;肖荣英;靳松
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辣椒及其制品中辣椒素含量检测及辣度分级
辣椒及其制品中辣椒素含量检测及辣度分级作者：张敏靳泽荣伏华李云龙杨延康来源：《食品安全导刊》2021年第06期摘要：本研究利用不同辣椒及辣椒制品类型对辣椒素含量检测方法进行相应优化，并结合感官评价对其进行分级。
结果表明，经优化后的各基质前处理方法操作简便高效，具有较低的检出限及良好的线性相关系数，检测数据与感官评价相结合，将辣椒素含量0.875g/kg、SHU>13500、辣度≥90度，定义为爆辣。
关键词：辣椒素含量高效液相色谱法感官评价辣度分级辣椒（Capsicum annuum L.）为木兰纲、茄科，属一年或多年生草本植物，也是一种重要的蔬菜和调味品[1]。
辣椒营养丰富，其中的维生素C含量在蔬菜中位居首位[2]。
自明朝末年引入中国后，辣椒便以其特殊的辛香麻辣味道而深受人们喜爱，也成为世界上种植最广泛的烹饪原料之一[1]。
据国际粮农组织（FAO）统计，仅2011年，全球辣椒产量共计约3330万吨，比过去10年的产量增加约40%[3]。
辣椒中体现辣味的物质统称为辣椒素，其含量的高低已成为评价辣椒品种及品质的重要指标[4-6]。
目前，辣椒食品中有关辣度检测的方法主要是高效液相色谱法及紫外分光光度法[7]，本文对辣椒及其制品的高效液相色谱检测方法进行优化，并结合感官评价按照“不辣、微辣、中辣、高辣、特辣、爆辣”这6个等级对辣味程度进行划分，以期对辣椒及其制品的辣味分级提供参考。
1 材料与方法1.1 试剂甲醇、四氢呋喃，诺尔施;辣椒素标准品，纯度≥99.5%;二氢辣椒素标准品，纯度≥99.5%。
1.2 仪器设备高效液相色谱仪：1260 Infinity II，配紫外检测器，安捷伦科技（中国）有限公司;旋转蒸发仪：RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂;冷冻离心机：TGL-20M，长沙湘仪离心机仪器有限公司;超声波清洗仪：SB25-12DTDN，宁波新芝生物科技股份有限公司。
1.3 试验方法1.3.1 整颗辣椒、辣椒节、辣椒粉取200g样品用料理机粉碎，过30目筛后，称取3g置于50mL离心管中，量取25mL甲醇与四氢呋喃的混合溶液（体积比1∶1）置于样品中，涡旋混匀2min，超声提取30min，6000r/min离心5min，将上清液转移至250mL平底烧瓶中;再次量取25mL甲醇与四氢呋喃的混合溶液置于残渣中，涡旋混匀2min，超声5min，6000r/min离心5min，将上清液转移至同一250mL平底烧瓶中，重复此提取步骤一次。
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辣椒素类物质是辣椒果实中的辣味成分和生 物活性成分 , 由 19 种[1] 以上的辣椒素同系物组 成 , 同系物结构类似 , 均是由香草基胺和 C8 - C11 支链脂肪酸组成 , 具体种类和含量与辣椒品种和 成熟度有关 , 主要成分为 : 辣椒素 (C) 、二氢辣椒 素 (DC) 、去甲二氢辣椒素 (NDC) 、高辣椒素 ( HC) 、 高二氢辣椒素 ( HDC) ; 其中辣椒素 、二氢辣椒素 、 去甲二氢辣椒素之和约占同系物总量的 98 %。斯 氏指数 (Scoville Heat Units) 是辣椒辣味感官评价指 标 , C、DC、NDC、HC、HDC 的斯氏指数及占总同 系物总量的质量分数分别是[2 ,3] : 16100000 (69 %) 、 16100000 ( 22 %) 、9300000 ( 7 %) 、8600000 ( 1 %) 、 8600000 (1 %) 。辣椒素和辣椒油树脂作为天然的食 品添加剂正得到日益广泛的应用 。不同厂家生产 的不同辣椒制品辣椒素量不一样 , 甚至同一厂家 生产的同种产品的不同批号辣椒素量都可能不一 致 。应将辣椒素量或辣味水平作为质量指标在产
第 26 卷第 12 期 2007 年 12 月
Chinese
分析试验室 Journal of Analysis
La2007 - 12
高效液相色谱法测定 富含油脂辣椒制品中的辣椒素类物质
王穗萍1 ,2 , 夏延斌 Ξ1 , 彭 进2 , 郑瑶瑶1 , 熊 科1 , 杨 峰1 , 陆微微1
(1 湖南农业大学食品科技学院 , 长沙 410000 ; 2. 常德市疾病预防控制中心 , 常德 415000)
摘 要 : 建立了高效液相色谱法测定高油脂辣椒制品中 3 种主要辣味成分的方 法 。样品以 70 %乙醇提取 , 采用反相高效液相色谱分离 , 紫外检测器 ; 根据色 谱峰的保留时间定性 , 以外标峰面积法定量辣椒素 (C) 、二氢辣椒素 (DC) 、去 甲二氢辣椒素 (NDC) , 结果以斯氏指数 (SHU) 计 。NDC 的色谱行为与 C 极其类 似 , NDC 可采用 C 的标准曲线定量 。采用色谱柱 , ZORBAX SB - C18 ; 流动相 , V (甲醇) ∶V (水) = 70∶30 ; UV 检测波长 , 230 nm ; 辣椒素和二氢辣椒素 RSD 分 别为 1 % , 115 % ( n = 5) ; 回收率分别为 9715 %、9415 %。辣椒素和二氢辣椒素 在 01001～011 mgΠmL 范围内线性良好 ; LOD 011 mgΠL , LOQ 015 mgΠL 。供试品溶 液稳定 , 12 h 内测定 RSD 为 1 %。方法满足辣味水平评价要求 。 关键词 : 高效液相色谱 ; 富含油脂 ; 辣椒制品 ; 辣椒素同系物 ; 辣味水平
ZORBAX SB2C18 色谱柱 (5μm , 4. 6 mm i . d. × 250 mm , Agilent) ; 流 动 相 , V ( 甲 醇) ∶V ( 水) = 70∶30 ; 流速 : 0. 8 mLΠmin ; UV 检测器 , 230 nm ; 柱 温 , 30 ℃; 进样量 , 20μL 。 1. 5 定量测定
文献[17] 一般采用 280 nm 的检测波长 。由上述 试验知 , 确定的流动相能分出达基线分离的 NDC , 而该条件下达不到灵敏度要求 , 同时辣椒制品含 水量相当高 , 一般在 60 %以上 , 甚至高达 85 % , 因而辣椒素含量相对要低很多 , 因此 , 需要寻求 更灵敏的检测波长 。对辣椒素和二氢辣椒素的标 准溶液进行紫外全波长扫描 。C 和 DC 的紫外全波 长扫描图完全一致 。在 230 nm 和 280 nm 出现两个 吸收峰 。230 nm 比 280 nm 的吸收值高很多且峰形 平缓 , 作为检测波长将更灵敏 、更稳定 。取样品制 备液分别在 280 、230 nm 检测波长下观察出峰效 果 。试验表明 , 230 nm 波长下 C、DC、NDC 的峰 高 、峰面积显著增加 。 2. 3 流动相 pH 的影响
取系列标准溶液进 10μL 以浓度 - 峰面积绘 制标准曲线 (或取跟样品浓度相近的标准溶液进行 单点校正) 。进样品制备液 20μL , 以保留时间定 性 , 峰面积定量 。去甲二氢辣椒素与辣椒素共用 同一条标准曲线 。
— 40 —
辣椒 素 同 系 物 总 量 ( 以 SHU 计) = mVρNDC ×
以辣 妹 子 猛 辣 型 辣 椒 酱 为 研 究 对 象 , 取 样 5100 g 加入 50 mL 不同浓度乙醇提取剂 , 乙醇采用 体积分数为 ① 70 %、② 75 %、③ 100 %。试验发 现 : 随着乙醇体积分数的增加 , 目标物峰高降低 、 峰宽增加 , 70 %乙醇的提取效果最好 , 该浓度为折 算样品中的水分后的乙醇体积分数 。 2. 5 油脂对醇水提取体系的影响考察 2. 5. 1 考 察 试 验 一 取 样 2100 g 加 入 30 mL V (70 %乙醇) ∶V (石油醚) = 1∶2 , 按 1. 3 样品制备 方法 , 分别将醚层 、醇水层进色谱分析 , 以 70 %乙 醇为对照 。试验表明辣椒素类物质在石油醚 (油 脂) 中溶解极少 , 大部分分配于醇水层 。 2. 5. 2 考察试验二 取样 2. 00 g 分别加入 50 mL 配制好的混合提取剂 : V (乙腈) ∶V (70 %乙醇) =
有关文献[18 ,19] 采用酸改善分离效果 , 本试验 采用优化出的色谱条件 (70 %甲醇 , 0. 8 mLΠmin , 230 nm , 30 ℃) 分别考察体积分数 1 %乙酸 , 0. 1 % H3 PO4 对分离效果的改善情况 。试验发现采用酸 对分离效果改善不明显 。故流动相中不需要加入 酸。 2. 4 不同浓度乙醇提取效果的比较
图 1 、图 2 分别为 0. 05 mgΠmL 标准色谱图和
样品色谱图 。
图 1 标准色谱图 Fig. 1 Chromatogram of the standard
图 2 样品色谱图 Fig. 2 Chromatogram of the sample
2 结果与讨论 2. 1 流动相的确定及去甲二氢辣椒素色谱峰的确
准确称取均匀 (研磨或组织捣碎机捣碎) 样品 2. 00 g , 用 V (乙醇) ∶V (水) = 70∶30溶液转移至 100 mL 容量瓶 , 50 ℃水浴 2 h (期间 015 h 振摇一次) 。 取出冷却至室温 , 用 V (乙醇) ∶V (水) = 70∶30 溶液 定容 , 混匀 , 过滤 , 过 0. 45μm 滤膜备用 。制备好 的样品溶液用封口膜密封后置冰箱中冷藏 。使用 时放置至室温 。乙醇提取浓度的确定 : 以样品含 水量折算后 , 乙醇体积分数为 70 %。 1. 4 色谱条件
辣椒素 (纯度 95 % , Sigma 公司) : 天然提取于 辣椒 , 2～8 ℃储存 ; 二氢辣椒素 (90 % , Sigma 公 司 , 美国) : 2～8 ℃储存 ; 甲醇 (色谱纯 , Tedia 公 司 , 美国) , 其他试剂为分析纯 。
辣妹子猛辣型辣椒酱 (20051016) , 湖南辣妹子 食品有限公司 ; 油中王食用调和油 (20050911) , 湖 南油中王油脂实业有限公司 。 1. 2 标准溶液配制
分析试验室 Journal of Analysis
Laboratory
Vol. 26. No. 12 2007 - 12
1 实验部分 1. 1 仪器与试剂
Aglient 1100 高效液相色谱仪 , 配四元泵 、紫 外 检 测 器 ( Degrass G1379A ; Quarpump G1311A ; Column G1316A ; VWD G1314A) ; 色谱柱 : ZORBAX SB - C18 (5 μm , 4. 6 mm i . d. ×250 mm) , Agilent ; 超纯水机 ( Hi2tech Instruments Co. ) ; UV22450 岛津 紫外分光光度计 。
9300 +
V m
(ρC
+ ρDC )
×16100
ρNDC - 去甲二氢辣椒素浓度 , mgΠmL ; ρC - 辣
椒素质量浓度 , mgΠmL ; ρDC - 二氢辣椒素质量浓
度 , mgΠmL ; V - 定容体积 , mL ; m - 取样量 , g ;
9300 , 16100 - SHU 换算系数 。
准确称取辣椒素和二氢辣椒素标准品 010500 g (折算为纯品) , 用甲醇溶解准确定容至 50 mL , 配制成 1 mgΠmL 的标准贮备液 。用甲醇逐渐稀释 分别得到 0 , 01001 , 01005 , 0101 , 0105 , 011 , 012 mgΠmL 的系列标准溶液 。各浓度标准溶液用封口 膜密封后置冰箱中冷藏 。使用时放置至室温 。 1. 3 样品制备
品商标上明确标示 , 以指导生产企业生产和消费 者购买 。含油辣椒酱是我国食传统辣椒制品之一 , 对该类产品的辣味水平进行评价和实行标准化具 有重大的现实意义 。
辣椒干 、辣椒提取物及纯化辣椒素晶体中辣 椒素类物质的定量分析方法主要有感官分析法[4] 、 凯氏定氮法[5] 、钼酸钠 —亚硝酸钠比色法[6 ,7] 、钼 蓝比色法[8] 、FAO 紫外双比色法[9] 、辣椒素分光光 度法[10] 、高效液相色谱法[3 , 11 , 12] 、气 —质联用[13] 、 液 —质联用[14 ,15] 、薄层扫描法[16] 。感官法受人为 因素影响较大 。比色法和凯氏定氮法抗干扰能力 有待改善 , 且只能测定辣椒素同系物总量 。辣椒 食品制品与辣椒和辣椒油脂相比 , 在基质的复杂 程度 、目标物含量水平上对分析方法有着更高的 要求 。本方法前处理条件温和 、稳定易控制 , 3 种 主要辣味成分 15 分钟内出峰良好 , 实现对富含油 脂辣椒制品的辣味水平的准确评价 。