透射免疫比浊终点法与速率法测定免疫球蛋白对比分析

/L、聚乙二醇 ４０g/L,试 剂 ２ 为 羊 抗 人 I
１００ mmo
l
gG
抗体适量、叠 氮 钠 ０．
９５g/L)及 定 标 校 准 品 (浓 度 为
６、
１２、
２０、
３０g/L),批 号 为 １９０９０４. 校 准 品 量 值 可 溯
源至IRMM ERM DA４７０ 参考物质.
１．
３ 方法
１．
３．
速率法,副波长无,加入试剂 R２ 混匀后立即测定初始
吸光度,连续 监 测 ２ mi
n 测 定 吸 光 度 变 化 率 ΔA/mi
n
计算出 浓 度. 其 余 参 数、反 应 过 程 和 校 准 方 法 同 终
检验医学与临床 ２０２１ 年第 １８ 卷增刊 Ⅰ Lab MedC
l
i
n,
２０２１,
Vo
l．
种方法测定结果比较 差 异 无 统 计 学 意 义 (
P ＞０．
０５),
有良好的相关性,见表 １.
结果(
x±s,
g/L)
方法
终点法
速率法
t
不同浓度 I
gG(
g/L)
６
１２
２０
３０
６．
１２±０．
１８ １１．
９６±０．
４８２２．
０４±３．
１７３２．
１３±６．
１２
０．
０８
＞０．
０５
P
＞０．
０５
２．
抗体相似的 球 蛋 白,能 与 相 应 抗 原 特 异 性 结 合,介 导
体 液 免 疫 作 用 [１]. 同 时,其 本 身 也 是 抗 原,具 有 免 疫
原性可刺激机体产 生 特 异 性 抗 体
. 目 前,临 床 上 常
[
２]
用透射免疫比浊测定I
I
I
gG、
gM、
gA,按测定方法其中
透射免疫 比 浊 又 可 分 为 终 点 法 和 速 率 法 [３]. 由 于 免
０４±３．
１７、
３２．
１３±６．
１２g/L,两
种方法测定结果比较差异无统计学意义(
P ＞０．
０５),有 良 好 的 相 关 性;速 率 法 平 均 回 收 率 为 ９７．
１％ ,回 归 方 程
Y ＝０．
９９X ＋０．
１２,相关系数为 ０．
９９６,符合试剂盒产品性能指标.结论 两种方法测 定 I
gG 有 较 好 的 相 关 性,
n,测 定 吸 光 度 A１;再 加 入
试 剂 R２７５ μL,孵 育 ５ mi
n,测 定 吸 光 度 A２;计 算
.
仪
器
根
据
测
定的抗原抗体复合的吸
ΔA＝A２－A１
光度变化 ΔA 由 标 准 曲 线 自 动 换 算 出 待 测 样 本 I
gG
的浓度.
１．
３．
２ 透 射 免 疫 比 浊 速 率 法 仪 器 主 要 参 数 设 置:
J]．中 华 医 学 杂 志,
２０１８,
９８(
２８):
２２３３
Ｇ
２２３７．
[
５] 闫寒冰,冯谦 ．缺 铁 性 贫 血 患 者 的 血 小 板、巨 核 细 胞 数 值
变化的研究分析[
J]．中国现代药物应用,
２０１７,
１１(
２):
５９
Ｇ
６０．
[
７] BERGMANN K,
BERGMANN O J．Anunusua
成,一般不出 现 肉 眼 可 见 的 反 应;第 二 阶 段 为 可 见 反
应阶段,小的 抗 原 抗 体 复 合 物 之 间 正、负 电 荷 吸 引 形
成较大复合物,反 应 时 间 长,易 受 电 解 质、温 度、酸 碱
度等影响.终点法在反应 第 二 阶 段 测 定 吸 光 度,受 抗
原抗体比例影响最大,只 有 在 定 量 抗 体 中 加 入 抗 原 量
５２７
Ｇ
５２８．
临床探讨
[
９] 黎海东,郑丹,李仲庭 ．
３３５ 例成人缺铁性贫血的血常规改
变及铁参数检测分析[
J]．中 国 实 用 乡 村 医 生 杂 志,
２０１４,
１３:
３１
Ｇ
３２．
[
]韩丁丁,
马聪,赵羚,等 ．缺铁性贫血患者 铁 代 谢 与 血 小 板
１０
参数的相 关 性 分 析 [
J]．中 国 实 验 血 液 学 杂 志,
亲和力强.R 型 抗 体 是 用 于 免 疫 比 浊 测 定 的 理 想 试
剂.R 型抗体 亲 和 力 较 强,与 抗 原 结 合 后 不 易 解 离,
在抗体过剩时易形成大而稳定的复合物,而且 R 型抗
体的等价带 较 宽,具 有 较 大 的 抗 原、抗 体 合 适 比 例 范
围.终点法检测受抗原抗 体 复 合 物 分 子 大 小、数 量 和
１８Supp
lⅠ
点法.
１．
４ 统 计 学 处 理 所 有 数 据 以 SPSS１９．
０软件作统
计学处理,计量资料以 x±s 表示,组件比较采用配对
t 检验,以P ＜０．
０５ 为差异有统计学意义.
结
果
２
４９
在加入促聚 剂 (如 聚 乙 二 醇 等)可 使 复 合 物 在 ３~１０
达到最佳比 例 时,形 成 的 抗 原 抗 体 复 合 物 量 最 大,反
应速度最快;在 抗 原 过 量 和 抗 体 过 量 时,发 生 钩 状 效
应,产生高、低 浓 度 时 测 定 结 果 偏 低 的 现 象. 速 率 法
是在抗原抗体特异性结合 阶 段 进 行,测 定 最 大 反 应 的
速度,主要受 抗 体 影 响,要 求 抗 体 特 异 性 强、效 价 高、
机体浓度最多的 I
g,在 机 体 抗 感 染 免 疫 中 发 挥 作 用,
临床上普遍 采 用 免 疫 比 浊 法,利 用 沉 淀 反 应 原 理,在
抗体过量以及增浊剂(促 聚 剂)作 用 下,抗 原 抗 体 在 特
殊缓冲液中快速形成抗原 抗 体 复 合 物,使 反 应 液 发 生
定结果差异无统计学意 义 (
样本基质影响较大,在低 浓 度 测 定 时 抗 原 抗 体 复 合 物
形成的数量 太 少,对 光 通 量 影 响 不 大,如 果 复 合 物 分
子太小则阻 挡 不 了 光 线 的 通 过,因 此 测 定 结 果 偏 低;
在高浓度测定时,受抗原 抗 体 复 合 物 解 离 和 聚 合 沉 淀
４３
＞０．
０５
３．
７１
＞０．
０５
２．
２ 透射免疫比浊速率法测定 I
gG 回收 试 验 混 合
血清样本,加入不同浓度I
gG 校准品,用速率法进行测
定,回收率分别为 ９３．
１％ 、
９８．
８％ 、
９９．
３％ ,平均回收率
９７．
１％ ,符合试剂盒产品性能指标设计要求.见表 ２.
表 ２ 透射免疫比浊速率法测定 I
率法分别测定 I
g G,进 行 结 果 对 比 分 析,探 讨 透 射 免
疫比浊速率法临床应用的可行性.
１ 材料与方法
１．
１ 标本来源 样本血清 来 源 于 本 院 门 诊 和 住 院 患
者,采集空腹 血 后 及 时 分 离 血 清,取 无 溶 血、脂 血、黄
疸血清混匀,并置—２０ ℃ 保存备用.
１ 透射免疫 比 浊 终 点 法 用 ４ 个 不 同 浓 度 I
gG
校准品进行 ４ 点定标,形 成 标 准 曲 线. 仪 器 主 要 参 数
设置:终 点 法,非 线 性 四 阶 多 项 式 标 准 曲 线,温 度
３７ ℃ ,主波长 ６００nm,副波长 ７００nm,样品量 ２μL＋
试剂 R１２２５μL,孵育 ５ mi
４８
检验医学与临床 ２０２１ 年第 １８ 卷增刊 Ⅰ Lab MedC
l
i
n,
２０２１,
Vo
l．
１８Supp
lⅠ
板型巨核细胞观察[
J]．云南医药,
２０１９,
４０(
２):
１３６
Ｇ
１３７．
[
]
４ 中华医学会血 液 学 分 会 ．铁 缺 乏 症 和 缺 铁 性 贫 血 诊 治 和
预防多学科专 家 共 识 [
１．
２ 仪器与试剂 贝克曼Ｇ库尔特(
Be
ckmanCou
l
t
e
r
AU５８００)自 动 生 化 分 析 仪 (美 国 贝 克 曼Ｇ库 尔 特 公
司).免疫比浊法试剂盒及 配 套 的 校 准 品 由 浙 江 伊 利
康生物技 术 有 限 公 司 提 供 的 I
gG 检 测 试 剂 盒 (终 点
法,试剂 １ 主要成 分 we 为 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 缓 冲 液
i
s
s
n．
１６７２
Ｇ
９４５５．
２０２１．
２５．
０１８
j．
透射免疫比浊终点法与速率法测定免疫球蛋白对比分析
高英鸿,严碧琼
浠水县人民医院检验科,湖北浠水 ４３８２００
摘 要:目的 探讨透射免疫比浊终点法改为速率法测定免疫球蛋白的可行性,为临床应用提供参考.方
法 分别用透射免疫比浊终点法和速率法测定 ４ 个不同浓度I
gG 校准品 ２０ 次进行结果比较相关性分析,对速
率法进行回收试验.结果 终点法和速率法测定 ６、
１２、
２０、
３０g/L 浓度的I
９６±０．
１４、
gG 校准品结果分别为 ５．
１２．
０４±０．
３７、
１９．
６１±２．
１２、
２８．
４３±５．
６１g/L 和６．
１２±０．
１８、
１１．
９６±０．
４８、
２２．
P ＞０．
０５),速 率 法 具 有 良
好的相关性.结果分析,免 疫 比 浊 法 是 利 用 抗 原 抗 体
结合的高 度 特 异 性,在 反 应 液 中 形 成 肉 眼 可 见 的 反
应.抗原抗体反应分为两 个 阶 段,第 一 阶 段 是 抗 原 抗
体特异性结 合 阶 段,反 应 迅 速,在 数 秒 至 几 分 钟 内 完
gG 回收试验
测定浓度(
g/L)
５．
８２
加入浓度(
g/L)
－
回收浓度(
g/L) 回收率(％ )
－
－
６．
０９
０．
２９
０．
２７
９３．
１
２０．
０１
１４．
２９
１４．
１９
９９．
３
１０．
０６
４．
２９
４．
２４
和高浓度测 定 结 果 偏 低,速 率 法 相 比 较 高;速 率 法 相
较终点法测定稳定性差,相 对 偏 差 较 大. 两 种 方 法 测
[
５]
mi
n 形成浊度 .终点 法 稳 定 性 好,但 形 成 稳 定 的 抗
原抗体复 合 物 时 间 长,易 发 生 沉 淀 或 解 离 使 浊 度 下
降,并且受样 本 溶 血、高 血 脂、高 胆 红 素 等 因 素 影 响.
速率法采用 连 续 监 测 方 式 测 定 抗 原 抗 体 特 异 性 结 合
２０１８,
２６
(
６):
１７３８
Ｇ
１７４１．
[
]秦,
李欣宜
１１
．蔗糖铁注射液治疗缺铁性贫 血 临 床 疗 效 观
/CD]．中西医 结 合 心 血 管 病 电 子 杂 志,
察[
J
２０２０,
８(
１１):
４４,
５７．
(收稿日期:
２０２１
Ｇ
０１
Ｇ
０２ 修回日期:
２０２１
Ｇ
０４
Ｇ
２２)
DOI:
１０．
３９６９/
速率法反应迅速、操作简便、灵敏度和精密度高,在低值和高值测定中可以得到较为准确的结果,可以参考临床
应用.
关键词:透射免疫比浊; 终点法; 速率法; 免疫球蛋白; 可行性
文献标志码:
A
文章编号:
１６７２
Ｇ
９４５５(
２０２１)
２５
Ｇ
００４８
Ｇ
０３
免疫球 蛋 白 (
I
g)是 具 有 抗 体 活 性 或 化 学 结 构 与
疫 比 浊 法 影 响 因 素 多,特 别 是 终 点 法 随 着 时 间 的 延
长,抗原抗体复合物聚合形 成 大 颗 粒 沉 淀 导 致 结 果 偏
低等,而速率法通过测定抗 原 抗 体 结 合 形 成 复 合 物 的
速度,可改善终点法 测 定 的 影 响 [４]. 根 据 免 疫 比 浊 原
理和测定方法,本文将透射 免 疫 比 浊 终 点 法 改 进 为 速
８
２．
３ 与校准品比较 用速 率 法 测 定 ４ 种 不 同 浓 度 的
I
９９X ＋０．
１２,相关系数为
gG 校准品,回归方程Y ＝０．
０．
９９６.可 见 速 率 法 测 定 结 果 与 校 准 品 浓 度 呈 高 度
相关.
３ 讨 论
I
gG 分子量 约 １５０kD,主 要 以 单 体 形 式 存 在,是
２．
１ 两种方法测 定 I
gG 分 别 用 透 射 免 疫 比 浊 终 点
法和速 率 法 测 定 ４ 个 不 同 浓 度 I
gG 校 准 品 ２０ 次,两
反应最大速度,测试时间短,而且不受样本因素影响.
表 １ 透射免疫比浊终点法和速率法测定 I
gG 校准品
盒新产品设计性能指标. 试 验 发 现,终 点 法 在 低 浓 度
lc
a
s
eo
f
ex
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r
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hr
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o
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i
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r
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f
i
c
i
ency[
J]．
BMJCa
s
eRepo
r
t
s,
２０２０,
１３(
１):
e
２３１８３３．
[
８] 田凤瑛 ．血小板计 数 在 儿 童 缺 铁 性 贫 血 中 的 意 义 [
J]．云
南医药,
２０１９,
４０(
６):
５．
９６±０．
１４ １２．
０４±０．
３７１９．
６１±２．
１２２８．
４３±５．
６１
０．
１６
本研究结果显示,终点 法 和 速 率 法 测 定 ４ 种 不 同
浓度的I
gG 校准品,测量精密度均 ＜４％ ,准 确 度 偏 差
均 ＜１０％ ;速率法 平 均 回 归 率 为 ９７．
１％ ,均 达 到 试 剂
９８．