1.细菌学检验基本技术(1)

用途 沙门氏和志贺氏菌属分离 志贺氏菌分离鉴别 大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别 肠道致病菌分离 绿脓杆菌分离鉴别 志贺氏、沙门氏菌分离 肠道菌分离鉴别 霍乱弧菌分离 真菌、酵母菌分离
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（5）鉴别培养基
➢ 利用各种细菌分解糖类和蛋白质等的能力及其代谢产物 的不同，在此类培养基中加入了某些特定的作用底物， 用于检查各种细菌的生化反应，以鉴别和鉴定细菌。
可降低氧化还原电势，吸收环境中的氧气，从而造 成缺氧状态。 （7）特殊培养基 ➢ 如培养L型细菌及支原体的软琼脂培养基、孢子培 养基等。
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小结
细菌学检验的样品有哪些类型？ 细菌检验样品的采集及运送原则 不同类型培养基的灭菌要求有何不同？ 培养基的分类
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不耐高温的血清、尿素等：滤过除菌
外观：完整性、水分浸入、色泽异常、培养基外溢、干裂等弃去。 无菌试验：放入36±1℃过夜，有菌生长弃去。 功能检查：标准菌株培养24～48h，无菌或生长不好。重复接种 结果仍同前，弃去。
冷藏，不宜过久。
防止干涸、变质和污染。
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所用器材及过程
培养基、玻璃器皿 天平、药匙
矫正pH
先调pH，沸水加热5-10min，冷却 后过滤；滤纸、绒布等过滤
过滤澄清
液体：不超过容器2/3；斜面： 1/５管；半固体培养基： 1/3管 ；高层斜面：1/4～1/3管 ；平板：13~15ml
分装 灭菌 检定 保存
耐高压：121℃，15min 含糖：115 ℃，15min 鸡蛋、牛奶等：间歇灭菌3天3次
名
称
蛋白胨水培养基
乳糖胆盐发酵培养基
0.5%乳糖发酵培养基
半固体培养基
三糖铁琼脂培养基（TST）
用
途
靛基质和霍乱红试验
大肠杆菌发酵乳糖试验
肠道菌生化试验（复发酵）
动力试验和菌种保存
肠杆菌糖发酵及硫化氢反应
氰化钾基础培养基 脱羧酶试验对照培养基
沙门氏菌分离 细菌脱羧酶试验
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（6）厌氧培养基 ➢ 培养基氧化还原电势低，有利于厌氧菌的生长。 ➢ 如庖肉培养基肉渣中含有谷胱甘肽及不饱和脂肪酸，
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（4）选择性培养基 ➢ 多为固体培养基，加有抑制物质，抑制其它
非目的菌的生长或使其生长不佳。
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常用的选择培养基
名称 SS琼脂培养基 HE琼脂培养基 伊红美蓝琼脂培养基 麦康凯琼脂培养基（MacC） 甘露醇高盐琼脂培养基） XLD琼脂培养基 中国蓝琼脂培养基 碱性琼脂培养基 高盐蔡氏琼脂培养基
➢ 血液琼脂培养基、血清肉汤培养基、巧克力血琼脂培养基。
（3）增菌培养基
➢ 在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质， 以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物。
➢ 多为液体培养基，一般具有选择性抑制作用的抑制剂。
➢ 有助于目的菌的增殖
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常用増菌培养基
胆盐乳糖培养基（BL）
大肠杆菌增菌
半固体培养基
观察微生物的动力，分类鉴定、保存菌 种以及噬菌体效价滴定等。
有鞭 毛， 混浊 生长
无鞭 毛， 沿穿 刺线 生长
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2. 按成分分类
合成培养基 ➢ 由化学物质和成分已知的各种物质所组成，可以是
无机盐类，或无机盐类加有机物质。 ➢ 各批次性质稳定，用于细菌代谢、分类、菌种选育、
遗传分析等情况使用。 天然培养基 ➢ 化学成分不完全清楚，各批物质的成分很难一致，
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1. 以量筒装取适当量蒸 馏水于玻璃容器中
2. 于玻璃容器上标示培 养基名称
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1. 放上秤药纸
並归零
2. 以秤药匙舀 出适当量药 品 (请看培 养基配方上 说明)
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倾倒培养基时小心 不要沾到玻璃壁上
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1. 清理配药桌面与天平 2. 清洗秤药匙，擦干放回 3. 药品放回药品柜
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（三）培养基的种类
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三、样本送运原则
（1）选择适当的温度和时间
➢ 送检时间长或温度高，菌相将发生改变，影响结果的准确 性；
➢ 应遵循尽快送检的原则； ➢ 常规细菌学检查，不超过2h，最好1h内，保存在4℃中不
超过24h。 ➢ 含有脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等的样品，
低温自溶，应在25℃常温送检或用便携式培养箱送检
1. 按物理性状分类
液体培养基 半固体培养基（琼脂含量0.5~1%） 固体培养基（琼脂含量2~2.5%）
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液体培养基 主要用于增菌培养、生化试验等
沉
混表淀ຫໍສະໝຸດ 浊面生生
生
长
长
长
液体培养基中生长
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固体培养基 制备平板、斜面、高层及高层斜面，用于细 菌分离培养、鉴定和保存、増菌等。
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亚硒酸盐增菌培养基
沙门氏菌增菌
亚硒酸盐半胱氨酸增菌培养基
食品中沙门氏菌增菌
四硫磺酸钠亮绿基础培养基
沙门氏菌增菌
GN肉汤培养基
志贺氏菌增菌
碱性蛋白胨水培养基
霍乱弧菌增菌
7.5%氯化钠肉汤培养基
金黄色葡萄球菌增菌
缓冲蛋白胨水培养基
沙门氏菌增菌
血液增菌培养基
血液中细菌增菌
SCDLP液体基础培养基
化妆品中细菌增菌
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二、采样的一般原则 （1）无菌原则 ➢ 采样用具要无菌且在有效期内； ➢ 采样操作程序要无菌； ➢ 如果采样部位需要经过皮肤和粘膜时，做好外表面的消毒，防止污染。 ➢ 密封送检 （2）选择正确的采样时间 ➢ 分离病原菌时，应早期采样； ➢ 最好是病人发病早期、急性期或症状典型时； ➢ 用药前采样，或停药24h采样，或下一次用药前采样 ➢ 用于血清学诊断时，急性期及恢复期采集双份血清。
第二章 细菌学检验基本技术
邵丽军
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主要内容
第一节 样本的采集与送检原则 第二节 细菌的分离培养方法 第三节 细菌的形态结构检查法 第四节 细菌的生化反应检查法 第五节 细菌的血清学检验 第六节 细菌毒素的检测 第七节 细菌数量的测定 第八节 细菌L型检验 第九节 微生物菌种的保藏及保管
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第一节 样本的采集与送检原则
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（2）选择正确的气体环境
➢ 针对厌氧菌样本，注意隔绝空气氧； ➢ 如使用专门的厌氧采样瓶或试管，或人为的排出空气，或
直接接种于厌氧培养基或放在厌氧袋、厌氧盒中
（3）保持密闭状态
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便携式恒温培养箱
便携式冷藏保温箱
厌氧培养袋
厌氧瓶
厌氧罐
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第二节 细菌的分离培养方法
细菌的分离培养 提供细菌生长所需的各种条件（营养、温度、湿度、酸 碱度和气体），从样本中获得该种细菌活的纯化物的过 程。
如蛋白胨、牛肉膏、血液、鸡蛋。 ➢ 成本较低，在细菌学研究中常用。
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3. 按用途分类
（1）基础培养基
➢ 含有大部分细菌生长繁殖所需的最基本的营养成分。
➢ 普通肉汤、营养琼脂、蛋白胨水等
（2）营养培养基
➢ 在基础培养基上加入葡萄糖、血液、血清等营养成分，以满 足对营养要求较高和需要特殊生长因子的细菌生长繁殖。
一、细菌学检验样本的类型 ① 正常人体样本，如排泄物、血液、血清等 ② 食品、水产品、化妆品、药品、消毒及卫生用品、医疗用
品及环境（水、土壤、空气，各种物品）等卫生样本，包 括常规卫生评价、公共卫生事件、环境监测、委托送检等 标本 ③ 临床各种感染材料（试剂、样品、耗材、医疗废弃物等） ④ 动物尸检或感染材料。
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（3）选择正确的采样部位 ➢ 根据感染特点、病程发展及目的菌可能存在的部位，选择合适的解剖
部位采样。 （4）采集足够量样本 ➢ 采样量不能太少，过少样品会导致假阴性结果； ➢ 卫生样本要具有代表性，否则会影响评价的准确性。 （5）多样性采集 ➢ 感染进程复杂的，应多部位或多时间段采样，以防漏检。 （6）做好采样记录 ➢ 记录样本类别、采样时间、地点、采样量及采样人等信息。
肉浸膏、糖类、血液、鸡蛋、动物血清、酵母粉、生长因子、无 机盐类）。 2. 水分：常用蒸馏水。 3. 凝固物质：琼脂、明胶 4. 抑制剂和指示剂：如胆盐、抗生素、酸碱指示剂、氧化还原指 示剂等。
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（二）培养基制备的一般程序
称量、溶解
调配
氢氧化钠、盐酸（0.1mol/L、1mol/L） 高出所需pH0.1-0.2个单位
主要内容包括 培养基制备、细菌接种方法、细菌培养方法、细菌的生 长现象
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一、培养基的制备
培养基 是指经人工配制，将供细菌生长繁殖需要的各种营 养物质按比例配制而成的基质，可用于细菌的分离 纯化、传代、鉴定、菌种保存等。
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（一）培养基的主要成分及其作用P26 1. 营养物质：碳源、氮源及其它营养物质（蛋白胨、肉浸液、牛