标准操作规程（SOP）——神经氨酸酶活性ELISA检测方法
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一、目的
本实验是利用ABI 公司的NA-star 试剂盒，检测流感病毒的神经氨酸酶活性的方法。
二、范围
适用于中国国家流感中心所有技术人员进行神经氨酸酶活性ELISA 检测。
三、程序
（一）生物安全要求
季节性流感病毒及经完全灭活的高致病禽流感病毒和H2N2流感病毒操 作可以在BSL-2实验室里进行，操作人员采取BSL-2级防护。
禽流感H5、H7亚型高致病性禽流感病毒及H2N2亚型流感病毒的操作需要在BSL-3级实验室中进行，操作人员采取BSL-3级防护。
（二）材料
1．ABI 公司NA-star 试剂盒 （Cat NO.4374422或4374348或4374349）
2．检测毒株
3．移液器
单通道可调 20μL ～200μL
4．PE 公司2103 Multilablel Reader
（三）实验步骤
本试验擦作步骤序依据ABI 公司NA-star 试剂盒诊断试剂盒说明书制定。
1．取96孔板，1~10列每孔加入25μL NA-star 缓冲液，用于稀释神经氨酸
酶，11、12列加入NA-star 缓冲液。
2．1~11孔加入25μL 的待检测病毒液，12孔加入25μL NA-star 缓冲液作为标准操作规程（SOP ）——性ELISA
空白对照。
3．摇动96孔板，使其完全混匀，放置37℃孵育20min。
4．将试剂盒内的神经氨酸酶底物用缓冲液稀释1:1000稀释备用。
5．每孔加入NA－star中的神经氨酸酶底物10μL，充分混匀，放置37℃孵育10min。
6．每孔加入神经氨酸酶促进剂60μL，立即用PE 公司2103 Multilabel Reader 检测化学发光信号。
由于化学发光信号在5min内将减弱，读取数据时每孔不要超过1s。
7．每个数据减去空白对照，绘制标准曲线。
或者利用GrapHPad软件分析数据。