【换液】贴壁细胞培养之更换培养液

【换液】贴壁细胞培养之更换培养液
更换培养液
1、仔细检查所培养的细胞，观测是否有污染或发生细胞变性，一经发现，立即丢弃。

2、检查培养液的颜色如从红色变为黄色时，或细胞密度较大时估计培养液中的营养物质将耗竭，更换细胞培养液。

一般一周至少更换二次培养液，不过大部分人是2到3天更换一次，这还要看自己所养细胞状态。

我自己养的A549状态特别好的时候，几乎每天传代，更别说换液了。

3、在超净工作台内吸去或者倒出培养器皿中的旧培养液，(若采取倒的办法，要从细胞贴壁面的反面倒出）用PBS清洗（冲洗）一两次。

另每次倒出后都要将瓶口过一下酒精灯火焰。

4、用吸管加入预热至36.5摄氏度到37摄氏度的新鲜完全培养液。

（我图方便一般是直接倒）完全培养液一般由1*合成培养液+10%胎牛或小牛血清+100IU/ml青霉素和100mg/ml链霉素组成。

5、加入培养液的体积和培养器皿表面积之比应在0.2到0.5ml/cm2之间。

若培养液层太深则影响氧气的弥散，若高浓度氧气需要细胞培养液层应较浅（2mm)。

低浓度氧气需求的细胞系培养液层可较深（5mm）。

（我自己的操作：一般小培养瓶加5-7ml，大培养瓶加10-15ml)
6、把培养细胞放回细胞培养箱中培养。

（自己实际操作：在放入培养箱前显微镜下观察一下细胞状态以及细胞是否干净，用酒精棉球擦擦瓶外壁。

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