RP－HPLC法测定痛宁胶囊中葛根素含量

RP－HPLC法测定痛宁胶囊中葛根素含量
张玲昂;王俊杰;张松亮;刘弘
【期刊名称】《实用医药杂志》
【年(卷),期】2015(000)004
【总页数】2页(P355-356)
【关键词】痛宁胶囊;葛根素;反相高效液相色谱法
【作者】张玲昂;王俊杰;张松亮;刘弘
【作者单位】467000 河南平顶山，解放军152医院药械科;467000 河南平顶山，解放军152医院药械科;467000 河南平顶山，解放军152医院药械科;467000 河南平顶山，解放军152医院药械科
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
痛宁胶囊由延胡索、徐长卿、白芷、川芎、葛根、防风、郁金、香附八味中药组成［批准文号：济制字（2011）B11007］，具有理气活血，祛风止痛之功效。

临床用于气滞血瘀所致的头痛、腰痛、胃痛、风湿性关节炎等，疗效确切。

痛宁胶囊提取工艺设计了两个步骤，延胡索醇提，其余七味药材水提。

其中醇提部分四氢帕马丁含量已做研究，而水提部分未做研究，为了更好地反映制剂的整体质量，采用RP－HPLC法对葛根中葛根素含量进行测定。

现报告如下。

1 仪器与试药
岛津LC－20AT高效液相色谱仪；SPD－M20A二极管阵列检测器；岛津LC－色谱工作站。

葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110752－200804）；痛宁胶囊批号为131127、131204、131210；甲醇为色谱醇；水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为 Agilent TC－C18柱（250mm×4.6mm，5 μm），流动
相为甲醇－水（24∶76），检测波长为 250 nm；流速为 1.0 ml／min，柱温为
30 ℃，进样量10 μl。

2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品11.82 mg至100 ml容量瓶中，加甲醇适量溶解，定容，摇匀，作为对照品储备液，精密量取5 ml至10 ml容量瓶中，用甲醇溶液定容，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取供试品适量，研细，精密称取0.8 g，置具塞锥形瓶中，精密量取甲醇溶液 50 ml，称重，超声提取 0.5 h（功率为 200 W、频率为 40 kHz），取出放冷，称重，补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4 ml至20 ml容量瓶中，定容，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照溶液制备按痛宁胶囊的处方及制备工艺制备不含葛根的样品，按上述方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学考查
2.3.1 专属性试验取上述制备的对照品，供试品，阴性对照溶液各10 μl，按色谱
条件测定，葛根素峰和其他组分峰达到良好分离，阴性无干扰，出峰时间较快，见图1。

图1 葛根素的高效液相色谱图
2.3.2 线性关系考察精密吸取葛根素储备液 1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 ml至 20
ml容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。

分别吸取10 μl进行HPLC分析，测定葛根素的峰面积。

并以峰面积（A）对进样量（m）进行线性回归。

回归方程
A＝3781445m＋12038，r＝0.9998；结果表明葛根素进样量在0.0591～0.9456 μg 范围内线性良好。

2.3.3 精密度试验精密吸取葛根素对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，重复进样
5次，测定峰面积积分值的RSD为0.89%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验取室温放置的供试品溶液，分别于0、3、6、12、24 h 注入色
谱仪，测定葛根素峰面积，RSD 为0.83%，说明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 重复性试验精密量取同一批号的痛宁胶囊6份，制备成供试品溶液，进样，测得葛根素含量，RSD为0.83%，表明本方法重复性良好。

2.3.6 加样回收试验精密称取葛根素对照品 19.02 mg至25 ml容量瓶中，加30%的乙醇溶液适量溶解，定容，摇匀，作为对照品储备液。

精密称取已知含量的样品9份（14.72 mg／g），0.1 g／份，置具塞锥形瓶中，分别精密量取上述对照品
储备液 1.6、2.0、2.4 ml，加入锥形瓶中，照供试品溶液的制备方法制备溶液，
测定葛根素含量，计算回收率。

结果见表1。

2.4 样品含量测定分别精密称取3个批次样品，依次为131127、131204、131210，制备成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μl注
入液相色谱仪中，测定峰面积，按外标法计算含量，葛根素含量依次为 14.72、14.40、14.86 mg／g，表明制剂含量稳定。

3 讨论
3.1 目标成分选择结合药物提取工艺，延胡索醇提，其余药材水提，最初的研究
为选择延胡索中四氢帕马丁作为单指标成分来定含量，但从提取过程看，其不能很好地反映制剂的水提工艺质量，葛根具有痛经活络功效，用于项背强痛、眩晕头痛、胸痹心痛等［1］，所以选择其指标成分做进一步的研究。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）编号样品含量（μg）RSD（%）1 1478 1217 2676 99.35 2 1493 1217 2745 101.31 3 1465 1217 2641 98.48 4 1460 1522 2965 99.42 5 1468 1522 2994 100.15 99.82 0.99 6 1463 1522 2994 100.40 7 1494 1826 3301 99.43 8 1475 1826 3337 101.09 9 1485 1826 3269 98.72加入量（μg）测得量（μg）回收率（%）平均回收率（%）
3.2 检测波长考察经过紫外扫描，葛根素在250 nm处有峰值，和多处参考资料相符，因此选择此波长段为检测波长［2－7］。

3.3 提取方法考察依据葛根素理化性质及所选提取溶剂为水并参考其他资料［2，3］，采用超声提取，选择甲醇在 20、30、40、50 min时取样考察，发现在30 min后，提取量已无变化，且色谱图杂峰较少，背景干净，故选择了甲醇超声0.5 h。

3.4 流动相考察参照葛根素的常用流动相检测系统，对乙腈－水－磷酸［2］、甲醇－乙腈－水［3］、乙腈－水［4］、甲醇－水［5－7］系统进行考察，通过对保留时间，分离度，拖尾因子等综合分析，并结合实验操作的简繁，最终选择甲醇－水（24∶76）为流动相。

本试验方法准确率高，重复性好，可作为痛宁胶囊中葛根素的含量测定方法；同时笔者也是想表述一个观点，即对同一制剂，应该在每一步工艺过程中确立一种指标成分为这步含量测定的基准，以此制定质量标准。

这样可以使产品整体质量更加清晰，便于产品质量监控和市场监督，其可行性需更多的研究、论证和认可。

【参考文献】
【相关文献】
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