免疫图谱
自身免疫性疾病概述
SLE好发于生育年龄女性，多见于15~45岁年龄段， 好发于生育年龄女性，多见于 岁年龄段， 好发于生育年龄女性 岁年龄段 女∶男比例为 7 ~ 9∶1。 ∶ 。 SLE的流行病学在美国多地区的调查报告，其患病率 的流行病学在美国多地区的调查报告， 的流行病学在美国多地区的调查报告 为14.6~122/10万人，我国大系列的一次性调查在上海 万人， 万人 纺织女工中进行，其患病率为70/10万人，妇女中则高 万人， 纺织女工中进行，其患病率为 万人 万人。 达115/10万人。 万人 SLE临床表现复杂多样。多数呈隐匿起病，开始仅累 临床表现复杂多样。 临床表现复杂多样 多数呈隐匿起病， 个系统， 及1~2个系统，表现轻度的关节炎、皮疹、隐匿性肾 个系统 表现轻度的关节炎、皮疹、 血小板减少性紫癜等， 炎、血小板减少性紫癜等，部分患者长期稳定在亚临 床状态或轻型狼疮， 床状态或轻型狼疮，部分患者可由轻型突然变为重症 狼疮，更多的则由轻型逐渐出现多系统损害；也有一 狼疮，更多的则由轻型逐渐出现多系统损害； 些患者发病时就累及多个系统，甚至表现为狼疮危象。 些患者发病时就累及多个系统，甚至表现为狼疮危象。 SLE的自然病程多表现为病情的加重与缓解交替。 的自然病程多表现为病情的加重与缓解交替。 的自然病程多表现为病情的加重与缓解交替
免疫抑制剂（肾上腺皮质激素、 免疫抑制剂（肾上腺皮质激素、环 磷酰胺）治疗有一定疗效， 磷酰胺）治疗有一定疗效，但副作 用与不良反应严重， 用与不良反应严重，停药后常易复 发。
自身免疫病患者中， 自身免疫病患者中 ， 有相当一部分病人 的血液或其它体液中可检测到一种或多 种高效价的自身抗体， 种高效价的自身抗体 ， 能为自身免疫病 的诊断提供非常有价值的依据。 的诊断提供非常有价值的依据。
11.4生物制品分析方法 -免疫法
生物制品分析的常用方法生物制品分析中常用的方法包括理化分析法、电泳法、酶法、免疫法、生物检定法等。
理化分析法在前面章节已有介绍，本节主要介绍电泳法、酶法和免疫法。
三、免疫分析法动物的免疫反应分为细胞免疫和体液免疫两种。
体液免疫指在外界抗原物质的刺激下产生专一性抗体的反应。
抗原和抗体的沉淀反应可以在体外发生，目前常被用于抗原物质的鉴定。
免疫扩散和免疫电泳法因其高度的反应专一性而成为近代生物制品不可缺少的分析技术。
常用的方法包括：免疫斑点法、免疫印迹法、免疫双扩散法和免疫电泳法。
免疫分析法（immunoassay，IA）是基于抗原和抗体特征性反应的一种技术。
由于免疫分析试剂在免疫反应中所体现出的独特的选择性和极低的检测限，使这种分析手段在临床、生物制药和环境化学等领域得到广泛应用。
各种标记技术（放射性标记、荧光标记、化学发光、酶标记等）的发展，使免疫分析的选择性更加突出。
结合免疫分析法与其他分析方法的放射免疫测定法和酶联免疫测定法因具有独特的优势，随着商品化试剂盒的普及，近年来在定量分析中的应用也越来越广泛。
（一）免疫鉴定法1. 免疫斑点法本法系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体性能特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。
检查方法是取硝酸纤维素膜，用EBM缓冲液浸泡15 min，将供试品、阴性对照品（可用等量的人白蛋白）及阳性对照品点在膜上，上样量应大于10ng。
室温干燥60min。
取硝酸纤维素膜，浸入封闭液（10%小牛血清的TTBS缓冲液，或其他适宜的缓冲液）封闭60 min。
弃去液体。
加入缓冲液10ml，摇动加入适量的供试品抗体（参照抗体使用说明书的稀释度稀释），室温过夜。
硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8 min。
弃去液体，更换TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的生物素标记的第二抗体，室温放置40 min。
硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8 min。
免疫学研究的现状及未来发展趋势
免疫学研究的现状及未来发展趋势免疫学是研究生物体免疫系统和免疫反应的学科，它对于防治疾病、促进人类健康和医学进步具有重要意义。
随着生物技术、分子生物学和计算学科的发展，免疫学研究正以更深入的水平在不断推进，未来也将面临更多的挑战和机遇。
现状：新技术与新方法的不断发展免疫学研究已经有近一个世纪的历史，但近年来，新技术和新方法的发展给免疫学带来了一些重大的变化和突破。
其中，单细胞分析技术、突变免疫图谱、CRISPR基因编辑技术、人工智能等是当前免疫学研究的重要方法和工具。
单细胞分析技术是一种可以分析单个免疫细胞特征和功能的技术，它为免疫学研究提供了全新的视角和手段。
通过单细胞测序、单细胞多参数流式细胞术等技术，科学家们可以探究免疫系统的复杂性和多样性，也可以鉴定单个免疫细胞的抗原特异性，甚至为细胞治疗提供更好的基础。
突变免疫图谱（MIP，mutation-derived immune profile）的出现则为免疫学的临床应用带来了新的前景。
MIP使用表观遗传学和基因组学技术对体液性和固定性肿瘤的突变负荷进行分析，在这个过程中，识别出的肿瘤抗原也成为了个性化癌症免疫治疗研究的主要目标。
CRISPR基因编辑技术则为免疫系统的研究提供了一种新的文化方法。
CRISPR系统可以在免疫系统分子水平上对特定基因进行编辑，因此，科学家们能够更好地理解各种因素如何影响人体的免疫反应，从而为人体的免疫系统进行精准干预。
未来：与生物技术、分子生物学和计算学科的交叉应用随着生物技术、分子生物学和计算学科的不断发展，免疫学也将会得到更加深入的研究和应用。
其中涉及持续的深度学习和大数据分析，这也是实现免疫学精准医学的关键技术之一。
生物技术方面，人们正在构建更先进的人工代谢系统、合成生物和氧化还原生物反应器，这些工具的提供有助于充分利用生物活性物质进行疾病治疗，以及开发更好更智能的疫苗和诊断方法。
与此同时，新一代测序技术和基因组学还可以用于人体免疫反应的深入分析和理解。
免疫球蛋白和抗体
学习目标
（2课时）
• 掌握：抗体和免疫球蛋白的概念； 免疫球蛋白的结构和功能；各类免 疫球蛋白的特性和功能。 • 熟悉：免疫球蛋白的水解片段；多 克隆抗体和单克隆抗体的概念。
• 了解：免疫球蛋白的异质性及抗体 的制备方法。
抗体的发现和研究历史：
1889年：绿脓杆菌
感染
动物血清
绿脓杆菌 1890年(Behring): 白喉类毒素
VL
V区的高变区（CDR）
CH1
CL
铰链区
CH2 CH3
CDR2(H)
CDR3(L)
CDR1(L)
抗原决定基
CDR2(L)
CDR1(H)
CDR3(H)
互补决定区和抗原决定基
恒定区（constant region, C区）
C端重链3/4，和轻 链1/2 组成(CH\CL) 氨基酸组成、序列稳定 某些抗体的C区具有补 体结合位点，具有多 种重要生物学活性
IgV区的功能：
与相应抗原特异性结合
Ig C区的功能：
激活补体 与细胞表面Fc受体结合 通过胎盘和黏膜
一、特异性结合抗原
由IgV区来实现 CDR 识别和结合特 异性抗原
形成Ag-Ab复合物, 使抗原不能发 挥原有的生物学效应
Toxin receptors
结果
Bacterial toxins
Host cell
中 和 作 用 通 过 胎 盘
结 合 受 体
超 用 敏 反 作 应 ADCC
体 外 反 应
课堂讨论
问题1：病毒感染是影响人类健康的重大疾病， 通过本节课的学习，Ab在抗病毒感染的过程作用 有哪些作用？ 问题2：除了传统意义上的作用，你能否想象一 下，Ab是否有新的抗病毒感染的机制？ 问题3：Ab抗病毒感染新机制对病毒感染控制有 什么提示？
颞部局部解剖图谱
颞部炎症
颞部炎症是指颞骨和颞部软组织的炎症性疾病。 颞部炎症的症状包括疼痛、肿胀、发热和局部压痛等。
颞部炎症的常见原因包括感染、免疫系统疾病和外伤等 。
颞部炎症的治疗方法包括药物治疗、物理治疗和手术治 疗等，具体取决于炎症的原因和严重程度。
颞部肿瘤和囊肿
颞部肿瘤和囊肿是颞部的占位 性病变，可导致压迫症状和其
对抗病原体。
颞部淋巴管的分布和走行
颞部淋巴管是淋巴系统的一部分，主要负责收集颞部组织中的淋巴液， 并将其输送到淋巴结进行过滤和处理。
颞部淋巴管在皮下组织中呈网状分布，与血管伴行，沿途收集淋巴液。
颞部淋巴管最终汇入颈部的淋巴结，通过颈静脉将处理过的淋巴液回流 至血液循环系统。
颞部淋巴回流的特点和作用
颧骨位于面部两侧，与鼻骨、 上颌骨和下颌骨等其他面部骨 骼相连，形成面部的中下部分 。
下颌骨和颧骨的生长和发育对 于面部形态和功能具有重要作 用。
颞部骨骼的生长和发育
颞部骨骼的生长和发育是一个复 杂的过程，受到多种因素的影响 ，如遗传、营养、环境和激素等
。
在婴幼儿期和青春期，颞部骨骼 的生长速度较快，而在成年期则
支配面部表情肌肉，如眼睑闭合、嘴角上翘等。
耳颞神经
供应颞部皮肤感觉。
三叉神经下颌支
支配咀嚼肌和下颌运动。
颞部血管和神经的分布和走行
• 颞部动脉、静脉和神经在颞部区域有特定的分布和走行，通过 了解它们的分布和走行，可以更好地理解颞部手术的操作要点 和风险，以及诊断和治疗相关疾病的方法。
05
CATALOGUE
关。
顶骨和枕骨
顶骨位于颅骨顶部，呈扁平状，与额 骨、枕骨和颞骨等其他颅骨相连。
顶骨和枕骨的生长和发育对于头部和 颈部的姿势以及大脑的发育具有重要 影响。
仙剑奇侠传四图文攻略
前言:《仙剑问答》“仙剑历史”、“仙剑故事”、“仙剑世界”答案：仙剑历史—1312312321；仙剑故事—1331223213；仙剑世界—3212321322。
§序章：游戏一开始，画面切入青恋峰云天河的家【查看《青恋峰、石沉溪洞》地图】，云天河正在用一只小猪祭奠他的父亲。
突然一声嚎叫，云天河出屋查看，发现一只山猪进入“石沉溪洞”，这还了得，进屋拿剑（在床上），准备进洞杀猪。
如果在游戏一开始回答了《仙剑问答》并全部正确，这时会得到“元祖星空×3、含光琉璃×5、龙胆草×5、烟月神镜×5、鼠儿果×10、影月神石×3”。
出屋后，按地图提示，拿完所有物品，将得到的鞋和腰带装备上进洞。
进洞后发现了一位红衣少女，可能是猪妖变的，用剑射她，没想到被她逃掉，继续追，追到存盘点时，可存盘练练级，顺便赚点止血草，到6级左右可进入墓室的那个山洞。
进去后，红衣少女会再次出现，再射她，没射准......此时，天河感觉到了强烈的杀气，这时boss出现敌人：魁召（水）、两只符灵（风），物理免疫；此战必败，只要（用防御）支撑几个回合后，会出现剧情，可学习仙术。
此时天河6级，有10个仙灵点，学“雷咒”和“土咒”，韩菱纱学“雷咒”，然后进入第二次战斗。
两只符灵风属性，天河和菱纱用“雷咒”一人杀一个，再和魁召打几个回合就自动结束战斗了。
仙术学习：初期，每个队员要掌握各个系的第一招（5个系需要25点仙灵），在初期学全一个系是没有意义的！进入墓室前，先把道具拿完，墓室破坏后又有新的道具出现。
在墓室可得到剧情道具“古玉”，出墓室后可继续练级，当天河7级后，菱纱也到5级了，天河学会特技——飞羽箭，菱纱学会特技——搜囊探宝。
此时可出洞回家。
回到家中后会发生剧情，得到“香炉、牌位”后到树屋拿些疗伤的药，然后前往“紫云架”。
【妖怪】——朱蛤（水），1级，掉落尸块朱蛤涎，偷窃得止血草；【妖怪】——翼手（风），2级，掉落尸块赤脊骨，偷窃得止血草。
疫增殖性疾病及其免疫检测
4、血清相对粘度↑，＞4；
5、本周蛋白尿（10～30%患者可有，常为 κ）。
三、重链病
是由于浆细胞发生突变和异常增 生，致使血清和尿中出现大量游离的 无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致 的疾病。
根据重链的不同可进一步进行免 疫分型，以γ、α、μ型为多见。
四、轻链病
第一节 免疫增生性疾病的概念及分类
一、概念
免疫增殖病（immunoproliferative diseases， IPD）主要是指免疫器官、免疫组织或免疫细胞（淋 巴细胞、单核-巨噬细胞）异常增生（良性或恶性） 所引起的疾病，多属于血液病范围。
这类疾病的表现有免疫功能异常及免疫球蛋白质 和量的变化。
3、轻链分子量小，扩散快，应每隔10分钟观 察一次结果。
三、免疫固定电泳
是血清区带电泳加免疫沉淀反应的一 项定性实验。是一种分类鉴定方法。
血清行区带电泳后，分别在电泳条上 加入不同类型的单克隆抗体，相应的抗原 将与抗体在某一区带形成抗原抗体复合物， 经漂洗和染色可清晰地显示出抗原抗体反 应带。（图4）
第三节 单克隆免疫球蛋白增殖病
该病突出的特点是患者血清中存在异常 增多的单克隆蛋白（M蛋白），其在类别、亚 类、H链、L链抗原结构等方面完全相同，但 多无免疫活性，又称副蛋白。
本周蛋白（Bence-Jones protein）——为过量合成的κ或λ型轻链， 游离存在于血清中，可从患者尿中排出。
一、多发性骨髓瘤
⑴ 免疫球蛋白多克隆增殖：指血清中两个 克隆以上的浆细胞同时增生，体内多种Ig 异常增高和/或尿中出现游离轻链或重链的 病理现象。多为良性反应性增殖或继发某 一疾病。
⑵ 免疫球蛋白的单克隆增殖：是由
人类疾病动物模型
4. IL2rg小鼠，1995年(Cao et al., 1995; DiSanto,
Muller, Guy-Grand, Fischer,& Rajewsky, 1995)
1995年，数个独立的实验室报告了IL-2Rγchain基因位点的突变会导致小鼠淋巴系统发育不 良。IL-2Rγ-chain是细胞因子IL-2，4，7，9，15 和21受体的至关重要的组成部分，而其突变将导 致这些细胞因子的信号传导受阻，使得NK细胞发 育严重受阻，且T细胞和B细胞的功能也受到极大 的破坏。在后面数年中进一步得到了IL2rg-/-小鼠 ，在此小鼠中人类造血干细胞和PBMCs的移植变 得容易了很多。
部分重要免疫缺陷动物及其发展方向
2. NRG与Fah-/-小鼠杂交获得的FRG小鼠成为了 人源化肝脏研究领域最重要的模型，利用这个模 型，使得我们研究得以研究肝脏纤维化疾病，肝 脏代谢性疾病，药物代谢途径，肝脏肿瘤疾病， 人类寄生虫（疟疾）和感染性疾病。目前已经成 功构建出FRG大小鼠，已经开始应用于肝脏相关 疾5年(Shultz et al., 1995)
偶然的机会Shultz发现将scid突变小鼠和Nonobesediabetic（NOD）小鼠杂交后出生的NODscid小鼠能够支持更多人类PBMCs或者造血干细 胞移植的生长，后续研究发现该杂交品系抑制了 NK细胞的活性，并且还伴随有固有免疫系统的缺 陷。该品系成为近20年应用最广的重症免疫缺陷 型小鼠，并且和众多不同品系杂交产生了更多的 亚型小鼠。
按免疫缺陷程度分为：
T淋巴细胞缺陷：如裸鼠
B淋巴细胞缺陷：如XID 小鼠
NK细胞缺陷：如Beige 小鼠
联合免疫缺陷动物：如T 、B淋巴细胞缺陷的小鼠 （SCID、Nod-scid小鼠 ）
免疫球蛋白(共62张PPT)
属IgG
IgM的特性和功能
为五聚体，分子量最大，称为巨球蛋白； 个体发育中最先出现的Ig，胚胎晚期即能产生，脐带血
IgM增高提示胎内感染（如风疹病毒、巨细胞病毒感染 等）；
免疫球蛋白H链和L链基因结构示意图
L1 VH1 L2 VH2 Ln VHn D1D2 Dn
JH1—6
C C C3 C1 C C1 C C2 C4 C C2
免疫球蛋白重链胚系基因
L1 Vk1 L2 Vk2 Ln Vkn
Jk1—5
Ck
L1 V1 L2 V2
Ln Vn J 1 C1 J 2 C2 J n Cn
同的抗原特异性。
抗独特型抗体（anti-idiotype antibody，AId）：
是指独特型可刺激异种、同种异体以及自体产 生相应抗体。
根据AId反应特点分为：Ab2、 Ab2、 Ab2 和Ab2四种。
独特型及抗独特型网络（ Id- AId）
Id表位具有自身免疫原性，体内存在能识别自
身Id的淋巴细胞，可产生抗独特型抗体，进行 免疫调节。
IgG通过胎盘；
定抗体与抗原结合的特异性； 凝聚的IgA或IgG4 激活补体经典途径
血清IgM升高说明有近期感染；
初乳中的sIgA可对婴幼儿发挥自然被动免疫作用
体内结合相应抗原分子
发挥免疫效应（生理与病理）；
* 高变区（hypervariable region, HVR）：在VL 同种异型决定簇存在Ig的恒定区。
MAb的优点是：高效价，可大量生产 IgE介导的肥大细胞激活
血清IgM升高说明有近期感染；
临床常用免疫学检查
临床意义
➢ CD3 + CD4+减低
➢ 恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、艾滋病、免疫抑制剂使用
➢ CD3+CD8+减低
➢ 自身免疫性疾病、变态反应性疾病
➢ Th/ Ts 比值
➢ 增高：自免、病毒感染、变态反应 ➢ 减低：艾滋病（小于0.5），恶性肿瘤进行期和复发时
全血细胞流式FSC-SSC图
四、数据的显示和分析
二维点图Dot Plot
➢便于数据统计
➢不同的细胞群 可以用不同的颜 色标记
➢主要表达方式
五、流式细胞的应用
一、淋巴细胞及其亚群的分析 二、淋巴细胞功能分析 三、白血病免疫分型 四、肿瘤耐药基因分析 五、在AIDS病检测中的分析 六、自身免疫性疾病相关HLA 抗原分析
参考值
▪ 流式： CD3+ CD3+CD4+ (Th) CD3+CD8+ (Ts) Th/ Ts
61％-85％ 28-58％ 19-48％
0.9-2.0
临床意义
➢ CD3+减低 自身免疫性疾病，如SLE,类风湿性关节 炎。
SLE
全身性红斑狼疮其名可回溯于十九世纪，发现患者面部赤红 的病症像狼咬过的伤痕，而拉丁文中狼为LUPUS狼疮，以后有 位皮肤科医师观察到患者鼻梁和两颊有明显的红斑，其英文为 ERYTHEMATOSUS红斑，
免疫球蛋白A检测
▪ 两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。
血清型IgA以单体形式存在
分泌型IgA（S IgA）由J链连接 的二聚体和分泌片组成。
参考值
▪ 血清IgA 0.7～3.5 g/L， IgA占10％-15％。 ▪ SIgA 唾液0.3 g/L，泪液30~80 g/L，初乳
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
免疫印迹法基本步骤
免疫印迹法基本步骤
一、蛋白质样品制备
1. 组织或细胞样品：将组织或细胞放入含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的细胞裂解液中，通过超声破碎或匀浆器破碎细胞，释放出胞内蛋白质。
2. 细菌样品：将细菌培养物离心收集菌体，用超声波破碎菌体，释放出蛋白质。
3. 血清样品：直接使用。
二、凝胶电泳
1. 将制备好的蛋白质样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，分离出不同大小的蛋白质。
2. 在电泳过程中，蛋白质带电荷量不同，大小也不同，因此会形成不同的条带。
三、转膜
1. 将凝胶上的蛋白质转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。
2. 在转移过程中，蛋白质通过电荷和疏水作用吸附到膜上，保持原有的相对分子量和特异性。
四、免疫反应
1. 将膜与一抗进行孵育，一抗能够与特定的蛋白质结合。
2. 孵育后清洗掉未结合的一抗，再将膜与二抗孵育。
二抗能够与一抗结合，起到放大的作用。
3. 二抗的标记物可以是酶、荧光物质或放射性同位素等，便于后续的检测和信号放大。
五、检测
1. 根据标记物不同选择相应的检测方法，如化学发光法、荧光法、放射自显影法等。
2. 通过检测器检测膜上的信号强度，分析特定蛋白质的表达情况。
六、结果分析
1. 对电泳图谱和免疫印迹图谱进行比较和分析，确定目标蛋白质的位置和相对表达量。
2. 将实验组与对照组进行比较，判断蛋白质表达的差异。
临床常用免疫学检查
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血清免疫球蛋白的检测
免疫球蛋白是指由浆细胞所产 生的,具有抗体活性和(或)抗体样结构的 球蛋白.
主要分为IgG,IgA,IgM,IgE和IgD五类.
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一 免疫球蛋白G检测
IgG是人体含量最多和最主要的Ig, 占总Ig的70%-80%,是唯一能通过胎盘 的Ig.具有抗细菌、抗病毒和抗寄生虫等 功能。 [参考值]单向免疫扩散法：7.6-16.6g/L
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2. 3个月后不转阴,以变为慢性: 慢性迁延性肝炎、慢性活动性 肝炎、肝硬化、肝癌
3.慢性HBsAg携带者
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HBsAb:针对HBsAg产生,有一定的中和 作用,阳性表明机体有一定免疫力. [参考值]阴性 [临床意义]①阳性提示急性感染后康复, 在发病后转阳或效价升高有意义.一般36月后出现,可持续多年. ②判断疫苗的质量最主要的指标. ③接受HBsAb阳性血的受血者,可出现短 暂阳性.
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HCV-IgG:出现慢,2-6月后阳性 [参考值]阴性 [临床意义] ①抗HCV-IgG阳性表明已有HCV ②献血员筛选
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肿瘤标志物检测
肿瘤标志物(tumor marker):肿瘤 在发生和增殖过程中，由肿瘤细胞 本身合成、释放或机体对肿瘤反应 而产生的一种物质。反映细胞恶变 各阶段表型及基因特征性。
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2 CH50降低：更有意义。见于肾 小球肾炎、自身免疫性疾病 （SLE、RA）、感染性心内膜炎、 病毒性肝炎、慢性肝病和遗传性 血管神经水肿。
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四 补体C3检测
C3是补体系统中含量最多的物质， 在传统途径和旁路途经中发挥重要作用。 [参考值]单向免疫扩散法：1.14+0.27g/l [临床意义]1增高：急性炎症、传染病早期、 肿瘤、排斥反应。 2降低：①消耗增多：肾炎、活动性SLE、 RA。②合成不足：肝病。③大量丧失： 肾病综合症、大面积烧伤等。
蛋白质免疫印迹快速测定猪肺炎支原体抗原含量
142021年 第1期蛋白质免疫印迹快速测定猪肺炎支原体抗原含量车巧林，胡 芳，沈晓红，董彦鹏，靳蒙蒙（江苏南农高科技股份有限公司，江苏 江阴 214400）摘 要：为建立快速测定猪肺炎支原体抗原含量的方法，试验应用P46单抗建立不同CCU含量的猪肺炎支原体抗原蛋白免疫印迹图谱，测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量，并与Western blot（WB）测定的CCU进行比较。
结果显示：曝光5 s，107 CCU/mL含量以上的猪肺炎支原体抗原在46 kDa处有条带，且条带粗细、明暗程度随着CCU含量的增高而增强；中试生产的7批抗原中，有3批抗原CCU和WB 2种方法测定的含量相同，两批抗原测定的含量基本相同；两批抗原测定的含量有差异，但差值在1.5~5.0倍之间。
结果表明，WB可用于猪肺炎支原体抗原含量的快速测定。
关键词：蛋白质免疫印迹；快速测定；猪肺炎支原体；抗原含量中图分类号：S 855 文献标识码：A 文章编号：1672-9692（2021）01-0014-05Rapid determination of mycoplasma hyopneumoniae antigen content by Western blotChe Qiaolin, Hu Fang, Shen Xiaohong, Dong Yanpeng, Jin Mengmeng(Jiangsu Nannong Hi-Tech Co., Ltd., Jiangsu Jiangyin 214400)Abstract: In order to establish a rapid method for the determination of mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae ) antigen content, a P46 monoclonal antibody was used to establish the Western blot (WB) map of M. hyopneumoniae antigen with different content, and then determined the CCU content of M. hyopneumoniae antigen originated from different batches, and compared with the result determined by WB. The results showed that a specific band with a molecular mass of 46 kDa were observed in M. hyopneumoniae (>107 CCU/mL), and the thickness and brightness of the bands increased with the CCU content. Among the seven batches of antigens produced in pilot scale, three batches had the same content determined with the CCU and WB method, and two batches had the essentially similar content. The other two batches had the different content, but the difference was between 1.5~5.0 times. The results indicated that WB could be used for rapid determination of M. hyopneumoniae antigen.Key words: Western blot; Rapid determination; Mycoplasma hyopneumoniae; Antigen content收稿日期：2020-08-28作者简介：车巧林，博士，助理研究员，研究方向为动物疫苗。
免疫组学 ppt课件
源性；基因定位 1q32
化角质细胞 Stat3，与牛皮癣有关
IL-21 131 个 氨 基 酸 ， 基 因 定 位 促进骨髓 NK 细胞的增殖与分化，与抗 CD40 抗体
4q26-q27
协同刺激 B 细胞的增殖，与抗 CD3 抗体协同刺激
T 细胞的增殖。
IL-22 146 个氨基酸，与 IL-10 有同 活化多种细胞系的 STAT1，3，促进炎症时的急性
13
获得性免疫（Adaptive Immunity）
机体特异性识别和排除抗原的免疫系统， 具有记忆性的特点，包括T、B细胞、抗 体等
2021/4/30
14
Humoral Immunity & Cellular Immunity
2021/4/30
15
免疫细胞
2021/4/30
16
B Cells-Plasma Cells
2021/4/30
45
Cambridge大学的免疫基因相关信息数 据库（The Immunogenetic Related Information Source，IRIS）包括1562 基因，大约代表7%人类基因组基因。实 际免疫相关基因数量应该至少1倍以上。
Kelley J et al: Genomics. 2005， 85:503
2021/4/30
17
Cytotoxic T Cell (CD8+)
细胞毒性T细胞（Tc，Cytotoxic T cell；CTL， Cytotoxity T lymphocyte）：具有特异性杀伤靶 细胞作用的T细胞
The kiss of death
2021/4/30
18
Helper T Cells (CD4+)
体液感染免疫检查方法介绍
参考值：血清 t-PSA < 4.0 μg/L，
f-PSA < 0.8 μg/L，
What is 城市轨道交通 urban rail transport
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f-PSA/t-PSA > 0.25
血清PSA升高 ① 前列腺癌患者升高，但大约25%患者，其PSA 水平正常；而大约有50%的良性前列腺疾病患者 PSA水平增高。为增加PSA对前列腺癌检测的敏 感性和特异性，可使用PSA年龄特异性参考范围 ，PSA密度、PSA速率、f-PSA/t-PSA比值等； ② 前列腺肥大，前列腺炎和泌尿生殖系统的疾病 ，也可见血清PSA水平升高，故当PSA在4.0μg/L ～10.0μg/L的灰区时，须进行f-PSA和 f-PSA/tPSA比值的测定。
α2 : 结合珠蛋白, α2 巨球蛋白, α脂蛋白 b: 转铁蛋白, 血液结合素, C3补体, b 脂蛋白 g : 免疫球蛋白 IgA IgM IgG
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正常人
IgG型浆细胞骨髓瘤
原发性巨球蛋白血症
多克隆丙种球蛋白血症
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(CEA carcinoembryonic antigen)
主要产生于胎儿的胚胎期 • 胃肠道 • 胎儿血清
出生后组织含量很低
病理情况
胃肠道的恶性肿瘤会升高 • 结、直肠癌 一些良性疾病也会升高， 但很少会超出10ng/mL
列腺会发生增大，结果导致PSA的合成分泌
增多。（不同年龄段，参考范围不同）
4、性生活：在进行前列腺特异性抗原检查之
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免疫图谱（Immune repertorie，IR）
指基于分子免疫学和高通量测序技术等前沿生物科技，高效可靠的为健康人、各类病患以及实验生物构建的免疫图谱数据库。
免疫图谱分析技术（Immune repertorie sequencing，IR-Seq）
指使用世界领先的生物信息学算法对免疫图谱数据库进行数据分析深度学习，用于对白血病和淋巴瘤的早期诊断､治疗效果评估以及复发追踪，也可为个体做免疫力评估。
免疫介绍
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等），处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞，以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力，是人体识别和排除“异己”的生理反应。
免疫是一个内外防御体系的平衡：
对外要抗击感染，对外太强则为炎症，太弱则有慢性感染；
对内要监视突变，对内太强则产生自身免疫，太弱则产生癌变。
感染和癌症都是细胞的过量增生免疫调控不足导致的，而自身免疫和炎症则是过度的免疫反应产生了不必要的细胞损伤。
人体的免疫力是依靠免疫系统来维护的，免疫系统是人体与生俱来拥有的世界上最好的医生。
免疫系统(Immune system)
是机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统。
由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成。
免疫系统具有识别和排除抗原性异物、与机体其他系统相互协调．共同维持机体内环境稳定和生理平衡的功能。
淋巴细胞（lymphocyte）
是白细胞的一种，是体积最小的白细胞，由淋巴器官产生，是机体免疫应答功能的重要细胞成分。
淋巴细胞是一类具有免疫识别功能的细胞系，按其发生迁移、表面分子和功能的不同，可分为T淋巴细胞（T细胞）、B淋巴细胞（B细胞）和自然杀伤(NK)细胞。
T细胞和B细胞都是抗原特异性淋巴细胞，它们的最初来源是相同的，都来自造血组织。
T细胞随血循环到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，而B细胞在骨髓中分化成熟。
当受抗原刺激后，T淋巴细胞即转化为淋巴母细胞，再分化为致敏T淋巴细胞，参与细胞免疫，其免疫功能主要是抗胞内感染、瘤细胞与异体细胞等；而B 淋巴细胞是先转化为浆母细胞，再分化为浆细胞，产生并分泌免疫球蛋白（抗体），参与体液免疫，其功能是产生抗体，提呈抗原，以及分泌细胞内因子参与免疫调节；NK细胞不依赖抗原刺激而自发地发挥细胞毒效应，具有杀伤靶细胞的作用。
当机体收到外源性入侵时，免疫系统会召集所有免疫细胞亚群通过产生免疫反应与病原体进行对抗，由于病原体存在着多种多样的差异，因为相应产生的免疫反应和每个阶段内涉及的细胞类型也有所不同。
B和T淋巴细胞是获得性免疫系统
中重要的两类细胞。
其中，B细胞在早期发育过程中表达细胞表面抗原受体BCR，在抗原和辅助因子刺激后表达成抗体分泌到细胞外；T细胞表达细胞表面抗原受体TCR。
在B或T淋巴细胞早期发育过程中，由基因重组产生的BCR/抗体和TCR 的多样性是建立正常免疫功能的基础。
正常情况下，每个B或者T 细胞只表达一种BCR或者TCR，因此BCR或TCR多样性越丰富则说明B或T 细胞种类越多。
但是，在各种疾病中，BCR/抗体和TCR的多样性可能被破坏。
TCR中V(D)J基因区域的随机重排，导致了T细胞种类的复杂多样化，这种多样化使T细胞在识别和杀伤特异外源性抗原时更为快速、准确和有效。
TCR的基因由可变区（V），多变区（D），结合区（J）和恒定区（C）四部分基因片段组成，形成互补决定区（complementarities determining region，CDR）和间隔的4个骨架区（framework region，FR）。
在T细胞发育过程中CDR1，CDR2和FR区域相对保守，CDR3区由V,D 和J进行重排而形成具有功能的TCR编码基因。
由于V（65~100种），D（2种），J（13种）基因片段本身具有多样性。
此外，由于在重排的过程中，在VD及DJ的链接区经常有非模板的核苷酸的随机插入或删除，进一步增加了CDR3区的多样性，使TCR得表达多样性高达1016种，以识别各种不同的抗原。
BCR的H链由65~100种可变区（VH），25种多变区（DH）,6种结合区（JH）和恒定区（CH）四部分基因片段组成，L链由可变区（VH），结合区（JH）和恒定区（CH）三部分基因片段组成。
B细胞发育过程中，在重组酶（RAG1，RAG2）作用下，形成1011种BCR。
同时，由其形成互补决定区CDR1，CDR2和CDR3区氨基酸序列的多样性。
特别是编码CDR3的基因，由于基因位于轻链V,J或重链V,D,J片段的连接处，可以通过V(D)J的重排和（或）两个基因片
段的链接间丢失或插入数个核苷酸，显著增加了BCR的多样性，而形成具有功能的BCR编码基因。
此外，在BCR各基因片段重排完成或抗原刺激后，体细胞高频突变也会造成BCR的多样性。
如何判断一个人的免疫状态？
目前市场上用来分析免疫功能的主要方法是利用细胞计数的方法分析外周血中白细胞的数量，白细胞数目的增高表明体内存在炎症反应。
也可以进一步利用流式细胞分析以及PCR技术分析外周血中白细胞各个亚群的数目和相对比例。
但对于各种血液细胞肿瘤来说，因为缺乏明确的细胞表面生物标志物，很难发现早期的血液细胞肿瘤。
利用目前的常规检测手段，只有当恶性增生的淋巴细胞超过一定的比例（>5%）才能检测到。
免疫图谱分析技术以T/B淋巴细胞为研究目标，以5’RACE技术目的性扩增B细胞受体（BCR）或T细胞受体（TCR）多样性的互补决定区（CDR区）,并结合高通量基因测序的方法来全面分析和评估免疫图谱。
此方法可以检测到每104外周血淋巴细胞中含有1个B或者T细胞白血病和淋巴瘤细胞，比常规的流式细胞分析灵感500倍，比常规的PCR方法灵敏100倍以上，而且可以准确计算肿瘤细胞在外周血中所占的比例。
免疫图谱分析技术优势：
采用PCR技术扩增外周血中淋巴细胞含有的基因，所学血液样本少。
同时样本后续处理简便，不需要进行不准确的人孔血细胞观察技术，也不需要操作复杂的免疫标记和流式分析。
对于骨髓瘤检验，因为只需要采取外周血，不需要实施骨髓穿刺，可以减少对病人身体的损伤，具有积极的意义。
和目前普遍应用的，采用分离血液淋巴细胞进行直接观察和流式分析的常规检查的对比如下：
利用高通量测序技术分析免疫球蛋白基因和TCR基因多样性的研究及其在临床上的应用在美国也是刚刚开始。
目前，该技术已经在追踪儿童急性白血病治疗效果和复发中取得了良好的效果。
现在国内也有部分团队将这一国际领先的免疫图谱分析方法用于国内对白血病和淋巴瘤的早期诊断､治疗效果评估以及复发追踪。