表达鸡IL2和IL15重组新城疫病毒的免疫增强作用研究_张天援
探讨鸡疫病防治中免疫增强剂的应用
摘 要：人们的生活离不开食物，食物离不开肉类，鸡肉作为价格适中口感较好的肉类来说深受大众喜爱，养鸡也随之成为家禽养殖发家致富的首选。
对于养鸡来说最大的问题就是防治疫病的发生。
鸡疫病由于传播媒介广泛、传播速度快成为很多养殖户心中最大的忧愁，防治鸡疫病是保证大众优质鸡肉供应的基础保障。
为了养鸡业的顺利开展，解决养殖户的后顾之忧，本文就养鸡疫病防治探究，分析免疫增强剂在鸡疫病防治中的作用和应用。
关键词：鸡；疫病；疫苗；免疫增强剂；防疫0 引言现代养殖业随着科技的发展有了很大的进步，一批鸡养殖从小鸡到出栏也就三四个月，是以往养鸡出栏时间的两到三倍。
出栏时间快，回收效益高让养鸡成为很多养殖业的首选，养鸡在为养殖户带来高经济效益的同时也存在很大的风险，一旦发生鸡疫病损失就是不可估量的。
所谓上有政策，下有对策，在鸡疫病多发的现代，也随之有很多防治疫病的办法和药物，免疫增强剂就是一种新的放鸡疫病的药物。
1 鸡疫病防治的方法鸡疫病防治的办法还是要从疫病发生的根源找起。
养鸡容易发生疫病无非是养殖环境空气不流通，养殖密度大造成的。
首先应该改善养殖环境，减小养殖密度，解决外部根源的同时还要外小鸡注射疫苗，从小防治疫病。
一旦发生疫病要快速将有疫病的鸡和其他鸡隔离，情况严重的鸡果断的解决，不要让疫病继续扩大。
就目前来说，注射疫苗是养鸡防疫中最常用的，也是最好用的防疫方法。
但是由于注射疫苗要考虑多种要素，譬如疫苗选择、注射时间、注射流程、间隔时间，这其中有很多的细节，一旦掌握不好也会出现适得其反的现象。
随着医疗的进步，现在又出现了新的疫病防治药物，免疫增强剂。
2 免疫增强剂免疫增强剂是为了达到增强几次免疫力而注射的一类免疫治疗性药物，用于治疗免疫功能低下有关的疾病和免疫缺陷等疾病。
常见的免疫增强剂。
常见的免疫增强剂分为中药和西药两种。
中药免疫增强剂药物有党参、黄芩、柴胡、当归、灵芝、甘草、白术、茯苓等，这些药物的主要作用是为了提高免疫系统组织细胞的活性，增加肌体免疫细胞的生长及抗体的合成。
细胞因子在疫苗中的免疫增强作用
细胞因子在疫苗中的免疫增强作用罗满林;唐明森;鲁俊鹏【摘要】细胞因子是免疫活性细胞和其它细胞分泌的具有多种生物活性的多肽或蛋白质,这些细胞因子是重要的信息传递物质,特别在免疫、炎症和造血系统等生物学反应过程中具有重要的作用.细胞因子用于重组疫苗上的研究已成为生物学研究中最活跃的领域之一.在基因工程疫苗研制中,常把细胞因子基因(如IL-2、IL-1等)和保护抗原基因连接在一起,构成融合蛋白,以增强疫苗的抗体产生和细胞免疫水平.以干扰素和白细胞介素为例,叙述了细胞因子在免疫增强剂和免疫治疗剂、构建新型基因工程苗等方面的主要研究进展.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2010(044)004【总页数】4页(P55-58)【关键词】细胞因子;疫苗;免疫水平【作者】罗满林;唐明森;鲁俊鹏【作者单位】广东大华农动物保健品股份有限公司,广东新兴527400;华南农业大学兽医学院,广州510642;广东大华农动物保健品股份有限公司,广东新兴527400;广东温氏食品集团研究院,广东新兴527400【正文语种】中文【中图分类】S852.4细胞因子(cytokine)是一类由活化的免疫细胞(淋巴细胞、单核巨噬细胞等)和相关细胞(纤维细胞、内皮细胞等)产生的具有调节细胞功能的高活性、多功能蛋白质多肽分子或糖蛋白,能调节细胞分化增殖和诱导细胞发挥功能,它们通过与高亲和力的特异性受体相互作用,在低浓度下发挥作用,是机体发挥免疫功能不可缺少的成分[1]。
在动物体内,绝大多数细胞因子含量很低,其作用主要是提高动物的免疫功能及与动物的生长和代谢有关。
主要包括干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、转化生长因子(TGF)等。
细胞因子通过旁分泌或自分泌方式发挥生物学作用,它有特定的靶细胞,并通过靶细胞膜上的特异性受体发挥作用。
细胞因子具有免疫调节、抑制肿瘤增殖、促进造血与组织修补和参与炎症反应以及神经内分泌效应等多种生物学功能[2]。
鸡IL—2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用
ｌ ７ 淋 巴细 胞 转 化 试 验 ｌ７ １ 淋 巴 细 胞 悬 液 制 备 ．
毒 （ Ｖ） ２ ＮＤ Ｄ ６株 Ｆ基 因真 核 质 粒 联 合 免 疫 Ｓ Ｆ雏 鸡 ， 察 了 Ｐ 观 其 免疫 效 果 ． 以及 不 同免 疫方 式对 免 疫 作 用 的 影 响 。
别用 铜 网 （０ 日） 磨挤 压制 成细 胞 悬 液 ， ２０ 研 加入 Ｈ ｎ ｓ 中 ， ａｋ 液 ５０ｒｍｉ 心 ５ ｎ 除去 红细 胞 ． ０ ／ ｎ离 ． ｍｉ 取上 清 ｌ００ｒｎｉ 心 ５ ０ ／ｌ ｎ离 ｍｉ ． 上 ｝ 以 Ｈａ ｋ ｎ弃 青 ｎ ｓ液 洗 涤沉 淀 ２次 ， 以 ＲＰ ６０培 再 ＭＩｌ４ 养液 （ ２ ０Ｉ 青 霉 素 、０ ｇ Ｌ链 霉 素 、 ｏ／ 各 氨 古 ０ Ｕ ２ ０ｍ ／ ２ ｍｍ ｌＬＬ 酰 胺 、 × １ ｍｏ／ ５ ０ ｌＬ ２琉 基 乙醇 ） 细 胞 稀 释 成 ２ ０ ／ 将 ×１ 个 ｍＩ， 成 单 细 胞 悬 液 。 制
１ ７ ２ Ｓ Ｆ 雏 鸡 Ｔ 淋 巴细 胞 增 磕 反 应 的 捡 洲 取 ９ ． ． Ｐ ６孔 微
１ 材 料 与 方法
１ １ 毒 株 与 质粒 ． Ｎ Ｖ … Ｅ ｃｌ Ｊ ３株 、 ａ ｏａ 毒 Ｄ ＦＦ ．ｏｉ Ｍ８ Ｌ Ｓｔ 弱 苗 、 Ｉ ＤＮ 真 核 表 达 质 粒 （ｃ Ｎ Ｌ ２ ． 由 中 国农 鸡 Ｉ ｅ Ａ ２ ｐＤ Ａ Ｉ一）均 业 科 学 院 哈尔 滨 兽 医研 究所 兽 医 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 陈 奖 励 副研 究 员 提 供 ： Ｎ Ｖ Ｄ ６株 Ｆ 基 因 的 真 核 表 达 质 粒 含 Ｄ ２ （ｃ Ａ Ｆ ， 作者 构 建 。 ｐＤＮ ） 由 １２ 主要试剂 ． 碱 性 磷 酸 酶 标记 免 抗鸡 酶 标抗 体 （ｉｍ Ｓｇ ａ产
鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响
鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响杨发龙;岳华;贾文祥【期刊名称】《中国家禽》【年(卷),期】2005(27)19【摘要】为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响,进行了3个方面的试验。
①对体液免疫及细胞免疫的影响。
结果表明,鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE+细胞百分数;②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。
结果表明使用IL-2与否对巨噬细胞的吞噬功能没有明显的影响;③人工感染法氏囊病的防治试验。
在攻毒前后注射IL-2,均可明显降低发病率和死亡率。
本研究结果表明,鸡IL-2可明显提高特异性免疫应答能力,与疫苗共同注射可作为佐剂提高疫苗的免疫原性,对法氏囊等病毒性疾病具有一定的防治作用。
【总页数】4页(P17-20)【关键词】鸡白细胞介素2;体液免疫;细胞免疫;巨噬细胞;传染性法氏囊病;白细胞介素;免疫功能;雏鸡;鸡IL-2;腹腔巨噬细胞【作者】杨发龙;岳华;贾文祥【作者单位】四川大学基础医学与法医学院;西南民族大学生命科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】S852.4;S858.31【相关文献】1.鸡IL-18复合免疫增强剂对鸡IFN-γ和IL-2表达的影响 [J], 余宁;李银聚;程相朝;张春杰;吴庭才;陈慧敏2.不同营养水平对海兰白蛋鸡育成期增重及效益的影响/鹅、鸡对不同饲料养分利用率的比较/黄羽肉用仔鸡饲料中添加异麦芽低聚糖的效果试验/左旋咪唑对地塞米松预处理鸡免疫功能的影响/高血球粉低蛋白料补充Ile对仔猪的影响/环境低温及L-精氨酸对肉鸡腹水综合征的影响 [J],3.重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β、IL-2和髓细胞生长因子对新城疫La Sota疫苗免疫效果影响 [J], 邵卫星;卢建红;彭大新;刘秀梵4.鸡IL-1β、IL-2、IFN-γ和MGF对表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒免疫效力的影响 [J], 邵卫星;卢建红;彭大新;刘秀梵5.重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β和IL-2以及cMGF对新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响 [J], 邵卫星;卢建红;彭大新;刘秀梵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡γ-干扰素基因克隆、表达及对禽流感灭活苗的免疫增强作用的开题报告
鸡γ-干扰素基因克隆、表达及对禽流感灭活苗的免
疫增强作用的开题报告
一、选题背景
禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性高传染性呼吸道疾病，对家禽养殖业造成了严重的经济损失。
治疗方法有限，预防措施主要是疫苗接种。
但是，常规灭活疫苗接种后的免疫效果不稳定，需要频繁接种。
因此，开发一种高效的禽流感疫苗具有重要意义。
干扰素是一类免疫调节蛋白，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤等生物学活性。
鸡γ-干扰素是鸡体内较为重要的干扰素，能够增强鸡体免疫力。
因此，本研究旨在克隆和表达鸡γ-干扰素基因，探究其对禽流感灭活苗的免疫增强作用，为禽流感疫苗的研发提供理论依据和实践参考。
二、研究内容和方法
1.鸡γ-干扰素基因的克隆与构建
采用PCR扩增鸡γ-干扰素基因，将其克隆至表达载体中，构建表达载体。
2.鸡γ-干扰素基因的表达与纯化
将构建的表达载体转化至大肠杆菌中进行表达，并进行融合蛋白的纯化。
3.免疫增强实验
选取鸡群，分为实验组和对照组。
实验组接种加入鸡γ-干扰素的灭活疫苗，对照组接种普通灭活疫苗。
测定两组鸡的免疫效果及抗体水平的变化，比较免疫增强效果。
三、研究意义
通过克隆和表达鸡γ-干扰素基因，探究其对禽流感灭活苗的免疫增强作用，为禽流感疫苗的研发提供理论依据和实践参考，可以促进禽流感防控工作的发展和进步。
重组鸡IL-2对禽流感灭活苗免疫增强作用试验
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摘 要 ： 用 重 组 鸡 白介 素 一 为免 疫 佐 剂 ， １ 材 料 与 方 法 使 ２作 检 测 ｃＩ－ 禽 流 感 病 毒 Ｈ９亚 型 灭 活 疫 苗 １ １ 主 要 试 剂和 材 料 ｈＬ ２对 ．
的免 疫 增 强 作 用 。将 １ 日龄 的 ＡＡ 肉雏 鸡 ， 重组鸡 Ｉ－ Ｌ２由南京农业大学寄生虫教研 室提 随 机 分 为 ７组 ， 组 １ 每 Ｏ只 ， 用 胸 部 肌 肉注 供； 采 禽流感 Ｈ９ 亚型灭活疫苗 由江苏省农 业科 学院 射 方 式 进 行 免 疫 ， 照 组 仅 接 种 Ｈ９亚 型 禽 畜牧兽医研究所禽 病研究室馈赠 ； 对 １日龄雏鸡 购 自
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动 物 医 学 进 展 。 ０ ６ ２ （ ０ ： ９１ １ ２ ０ ，７ １ ） ９ — ０
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重 组 鸡 Ｉ － 禽 流 感 灭 活 苗 免 疫 增 强 作 用 试 验 Ｌ ２对
徐 前 明 ， 祥 瑞 ¨ 李
（． １南京农 业大 学动物 医学 院 。 江苏南 京 ２ ０ ９ ｝． １ ０５ ２ 安徽农业大 学动 物科 技学院 。 安徽合肥 ２ ０ ３） ３ ０ ６
Hale Waihona Puke 中 圈分 类 号 ： ８ ２ ６ ９ ５ Ｑ７ ￥５．５． ｝ ４
鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展
鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展于新友;赵营;王艳;沈志强【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(38)8【摘要】鸡白细胞介素-2(IL-2)是由激活的T细胞分泌产生的糖蛋白,具有显著的免疫增强作用,不仅在T细胞、B细胞的生长与分化和NK细胞的激活等方面发挥重要作用,而且与其他细胞因子一起发挥免疫功能,是一种能影响机体免疫反应各个方面的调节因子.文章综述了鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展.%Chicken interleukin-2 (IL-2) is a kind of glycoprotein excreted by activated T cells, which significantly enhance the role of the immune. Chicken IL-2, not only has great action on growth and differentiation of T cells and B cells and on the activating of NK cells, but also has immune effect with other cytokines. It is an immune-regulating factor affecting almost every immunoreaction. This article review the research advances on molecular biology and disease prevention of interleukin-2 in chicken.【总页数】4页(P81-84)【作者】于新友;赵营;王艳;沈志强【作者单位】山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州 256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州 256600【正文语种】中文【中图分类】S859.79+7【相关文献】1.鸡白介素的分子生物学和应用研究进展 [J], 徐永莉;王红宁;黄勇;张毅;余协中2.白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗免疫作用的影响 [J], 张艳雯;玉发杨;黄福标;谭春萍;于冬玲3.鸡白介素分子生物学及相关应用研究进展 [J], 王远萍;吴艳秋;唐涛4.鸡白细胞介素-2的分子生物学研究进展 [J], 陈吉刚;周继勇5.禽痘病毒分子生物学Ⅰ鸡痘病毒分子生物学概论 [J], 王志亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
禽IL-2与新城疫病毒HN基因重组融合蛋白及其应用[发明专利]
![禽IL-2与新城疫病毒HN基因重组融合蛋白及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/78479dc9453610661fd9f448.png)
专利名称：禽IL-2与新城疫病毒HN基因重组融合蛋白及其应用
专利类型：发明专利
发明人：张春杰,王臣,程相朝,李银聚,吴庭才,刘一尘,丁轲,余祖华,赵战勤
申请号：CN201010172224.2
申请日：20100514
公开号：CN101870733A
公开日：
20101027
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种重组禽白细胞介素2与新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)融合蛋白(chIL-2-HN融合蛋白)的制备方法和应用，属于生物工程技术领域。
该融合蛋白为禽IL-2蛋白和新城疫病毒HN蛋白通过柔性Linker肽融合而成，编码该融合蛋白的DNA序列插入表达载体pPICZαA，电转化酵母菌X-33,获得高效表达重组chIL-2-HN融合蛋白的基因工程菌，通过液体培养、纯化制得的重组chIL-2-HN融合蛋白，该重组融合蛋白可作为新城疫新型基因工程疫苗，也可作为新城疫常规疫苗的新型免疫佐剂。
本发明的chIL-2-HN融合蛋白经动物免疫实验证实，安全性好，无毒副作用。
能够有效增强机体细胞免疫和体液免疫水平，具有广阔的应用前景。
申请人：河南科技大学
地址：471003 河南省洛阳市涧西区西苑路48号
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：牛爱周
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不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验
不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验（哈尔滨中科生物工程有限公司）免疫调节剂是用于调节和控制免疫功能的药物，包括免疫抑制剂和免疫增强剂。
免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质，可增强机体的免疫功能，缓解由环境造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。
目前在临床上常用的免疫增强剂有黄芪多糖、卡介苗、盐酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白细胞介素-2（白介素-2）等。
本试验选用黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC作为免疫增强剂，以探明不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫免疫效果的影响。
1 材料与方法1.1 试验动物1 日龄健康海兰褐蛋鸡，购于泰安东岳种禽有限公司。
1.2 试验材料96 孔V 型微量反应板、移液器、生理盐水、1%鸡红细胞悬液。
新城疫血凝抑制试验抗原由中国科学院提供；鸡新城疫灭活疫苗（La Sota 株）购于乾元浩生物股份有限公司。
黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康养殖工程中心提供。
RPMI 1640 培养液（Gibco 公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。
小牛血清、Hank′s液、台酚兰、肝素钠。
1.3 试验动物的处理600 只健康海兰褐蛋鸡随机分为A、B、C、D、E 5 组，每组120 只。
试验在相同的环境下，采用同种饲料进行饲喂和同一防疫程序进行免疫预防。
50 日龄防疫新城疫Ⅳ系和新城疫灭活疫苗时，免疫增强剂在防疫前后（48~52 日龄）连用5 d。
A 组使用预防量的黄芪多糖粉剂，B 组盐酸左旋咪唑10 mg/kg 拌料，每天早晚各一次，C 组VE 80 mg/kg 拌料，D 组VC 100 mg/kg 拌料，E 组不加免疫增强剂，作为对照组。
1.4 抗体水平检测分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽样15 只鸡翅静脉采血，分离血清，采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）（《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国国家标准GB/T 18936-2003）检测抗体效价，计算每组平均值，结果以log2表示。
IL-2对免疫新城疫疫苗的固始鸡十二指肠(SIgA)分泌的增强作用
IL-2对免疫新城疫疫苗的固始鸡十二指肠(SIgA)分泌的增强作用张怀;裴淑丽;赵珊珊;黄艳群;徐亚平;肖传斌【期刊名称】《江西农业学报》【年(卷),期】2010(022)001【摘要】研究了白细胞介素-2(IL-2)作为黏膜免疫佐剂对免疫新城疫疫苗的固始鸡十二指肠分泌型免疫球蛋白A(SIgA)分泌的增强作用.将不同浓度的IL-2联合新城疫Ⅳ系弱毒苗经口腔注入8日龄固始鸡,用免疫组织化学技术来检测十二指肠中SIgA阳性细胞及SIgA阳性分泌物的分布和含量.结果表明:①SIgA阳性细胞主要分布于十二指肠肠黏膜固有层及肠腺腔中.②添加IL-2的3个试验组SIgA阳性细胞及SIgA阳性分泌物的含量高于空白对照组和新城疫组.免疫后1～2周,第Ⅳ组SIgA阳性细胞及阳性分泌物的含量最高,与其他组差异不显著.免疫后3～5周,第Ⅲ组SIgA阳性细胞及阳性分泌物的量最高,与其他组差异显著.结论:由结果可知IL-2能增加浆细胞分泌SIgA;延长新城疫疫苗的免疫时间,增强免疫效果,是很好的黏膜免疫佐剂; IL-2的最佳添加剂量免疫后1～2周为50 μg /羽,免疫后3～5周为10 μg /羽.【总页数】4页(P122-125)【作者】张怀;裴淑丽;赵珊珊;黄艳群;徐亚平;肖传斌【作者单位】河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业职业学院,动物科学系,河南,中牟,451450;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】S831【相关文献】1.白细胞介素2对固始鸡空肠中SIgA分泌的影响 [J], 刘诗柱;赵峰;肖传斌2.不同剂型的复合免疫增强剂对鸡新城疫疫苗免疫增强作用的效果观察 [J], 张述斌;刘新瑞;薛掌林;刘瑞生;王必慧3.复方免疫活性因子对新城疫疫苗免疫增强作用的研究 [J], 骆延波;邱长兴;钟平华;徐龙;赵会超;许秋菊4.复方免疫活性因子对鸡新城疫疫苗免疫增强作用的研究 [J], 江楠5.白细胞介素2对固始鸡十二指肠黏膜免疫增强作用 [J], 张书松;刘忠虎;康相涛;赵峰;肖传斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鞭毛蛋白及鸡GM-CSF重组新城疫病毒对鸡的免疫增强作用
鞭毛蛋白及鸡GM-CSF重组新城疫病毒对鸡的免疫增强作用王卉;张天援;吕政;孙田;尹杰超;吴云舟;刘云野;吴金;任桂萍【摘要】为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rClone30-fliC和rClone30-GM-CSF.RT-PCR和ELISA检测结果表明:fliC和chGM-CSF基因正确插入重组病毒,并获得稳定表达;重组病毒免疫7d后重组NDV HI抗体效价检测显示,实验组平均HI效价分别达到4.5 log2和4.8 log2,而rClone30组和空白组HI效价仅为3 log2和1 log2;免疫7d后攻毒,空白组SPF鸡均死亡,rClone30组有两例发病,实验组SPF鸡全部存活并且无任何临床症状.本研究结果表明,FliC和chGM-CSF作为佐剂能够有效提高弱毒疫苗的免疫效果.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2015(037)001【总页数】4页(P40-43)【关键词】鞭毛蛋白;鸡GM-CSF;新城疫病毒;反向遗传操作技术【作者】王卉;张天援;吕政;孙田;尹杰超;吴云舟;刘云野;吴金;任桂萍【作者单位】东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030;吉林和元生物工程有限公司,吉林吉林132000;东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】S852.65新城疫(Newcastle disease，ND)是由ND 病毒(NDV)引起的一种高接触性、致死性的急性败血性的禽类重大烈性传染病[1]。
鸡IL-2和IL-4融合基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性
鸡IL-2和IL-4融合基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性徐彤;贡鑫;郑明学;吕晓玲;郑龙龙;崔凯玲;张雪松;段步婷;白瑞【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2022(58)4【摘要】为提高鸡球虫病活疫苗的免疫效果并降低其副作用,本试验用合成的鸡白介素2(chIL-2)和鸡白介素4(chIL-4)基因片段构建3个融合基因真核表达质粒,并利用脂质体法将其转染至原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其表达水平,MTT法测定其表达的分泌产物活性。
结果显示:成功构建的pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-4-EGFP重组真核表达质粒能在原代鸡胚盲肠上皮细胞中高效表达;3种重组真核表达质粒转染后24~96 h的鸡脾淋巴细胞活性极显著高于空载组(P<0.01),且在72 h时达峰值;而单一因子组鸡脾淋巴细胞增殖活性极显著低于pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP组(P<0.01)。
由此可见,本试验成功构建了能表达分泌chIL-2和chIL-4的融合基因重组质粒;且chIL-4-chIL-2融合蛋白生物学活性显著高于单一因子。
【总页数】5页(P30-34)【作者】徐彤;贡鑫;郑明学;吕晓玲;郑龙龙;崔凯玲;张雪松;段步婷;白瑞【作者单位】山西农业大学动物医学学院【正文语种】中文【中图分类】S855.9【相关文献】1.猪IL-18基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性2.IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达3.鸭白介素-18基因重组真核表达载体的构建及其表达产物的生物学活性4.鸡IL-18基因重组真核表达载体的构建及其表达产物的生物学活性5.颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用
鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用姜永厚;刘忠贵;陈奖励;宋秀龙;童光志【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2002(22)1【摘要】利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。
结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。
【总页数】3页(P22-24)【关键词】新城疫病毒;F基因;鸡IL-2;佐剂;基因疫苗;免疫【作者】姜永厚;刘忠贵;陈奖励;宋秀龙;童光志【作者单位】东北农业大学动物医学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S858.315.3【相关文献】1.磷酸铝和鸡IL-18在新城疫F基因疫苗中的免疫佐剂作用 [J], 尹会方;黄青云;王继文;何英杰;吴思源2.鸡新城疫病毒F基因与鸡白介素-2(IL-2)基因在真核载体中串连表达及免疫原性[J], 亓丽红;朱剑英;艾武;黄兵;于可响;刘涛;秦卓明;宋敏训3.鸡新城疫病毒F基因与鸡白介素-2（IL-2）基因在真核载体中串连表达及免疫原性 [J], 亓丽红4.鸡IL-2和IL-15基因真核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用 [J], 胡慧琼;王红宁;袁斌;周生;李晓英;黄勇;柳萍;徐永莉5.鸡IL-2和IL-15基因核表达质粒对禽流感疫苗的免疫增强作用 [J], 胡慧琼;王红宁;袁斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡IL-2基因克隆及其重组质粒的构建与表达
鸡IL-2基因克隆及其重组质粒的构建与表达许发芝;仲大莲;刘玉华;余为一;李槿年;曾明华【期刊名称】《安徽农业大学学报》【年(卷),期】2004(31)1【摘要】利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT PCR),从ConA 诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL 2)基因片段,其长度为439bp,经酶切鉴定,初步确定为鸡IL 2基因。
再将该IL 2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DNA序列鉴定,表明构建的重组质粒含有IL 2基因,该基因的cDNA序列与Sundick报道的结果基本一致。
然后,将IL 2基因片段插入原核表达载体pGEX 4T 1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS PAGE,获得分子量约为42000的蛋白条带,表明所克隆的鸡IL 2基因在原核细胞中得到表达。
【总页数】5页(P87-91)【关键词】鸡;IL-2基因;基因克隆;重组质粒;基因表达;RT-PCR;白细胞介素2;细胞因子【作者】许发芝;仲大莲;刘玉华;余为一;李槿年;曾明华【作者单位】安徽农业大学畜牧水产学院;中国科学技术大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.4;Q785【相关文献】1.鸡IL-2基因cDNA输卵管组织特异性表达载体的构建与表达 [J], 吴庭才;李银聚;张春杰;程相朝2.CVB3VP1与IL-2基因双表达重组质粒的构建及免疫效果 [J], 房文亮;谢立新;周雪燕;金玉怀;金士香;揣侠;王永祥3.鸡IL-2受体α亚基成熟蛋白基因的克隆及其胞外段的原核表达 [J], 涂真珍;李祥瑞;徐立新;严若峰4.鸡IL-2基因的克隆及GST-chIL2融合蛋白的表达 [J], 王文成;舒秀伟;宣华;陆承平5.弓形虫SAG1、SAG3基因的克隆和复合基因SAG1/SAG3真核表达重组质粒的构建 [J], 陈晓燕;马济宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸡IL-15基因的克隆及序列分析
鸡IL-15基因的克隆及序列分析
张凤;田艳花;牛四坤;台晶杰;刘文娟
【期刊名称】《畜禽业》
【年(卷),期】2024(35)4
【摘要】目的利用基因工程的方法,将鸡白细胞介素15(ChIL-15)基因在原核表达系统中进行表达,为ChIL-15的应用提供科学依据。
方法根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank中已发表的ChIL-15基因,设计引物,用PCR方法扩增目的基因片段。
结果成功从鸡的脾脏中扩增出含编码区的ChIL-15基因,ChIL-15基因为581bp,通过测序进行比对,表明ChIL-15基因克隆成功。
提取的质粒经酶切鉴定、PCR鉴定、测序比对以及编码成氨基酸进行比对均与GenBank中登录号
AF139097.1基本符合,核苷酸的同源性为99.82%。
结论通过使用PCR方法成功扩增出来的ChIL-15基因片段,具有较高的同源性,并与已发表的基因序列相符。
这为进一步研究ChIL-15基因的功能和应用提供了科学依据。
【总页数】4页(P1-4)
【作者】张凤;田艳花;牛四坤;台晶杰;刘文娟
【作者单位】山西药科职业学院
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.四川草科鸡IL-15 cDNA的克隆与序列分析
2.鸡IL-15基因的克隆与序列分析
3.人IL-15/GM-CSF融合基因的克隆及序列测定
4.粤黄鸡IL-15基因真核表达及其多克隆抗体的制备
5.四川草科鸡IL-15 cDNA的克隆与序列分析
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几种鸡新城疫弱毒疫苗的免疫效力试验
几种鸡新城疫弱毒疫苗的免疫效力试验吴清民;裴建武;王开东;张天水;张华;张中直【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2002(038)005【摘要】@@ 鸡新城疫是我国养鸡业中危害最大的疾病之一,也是影响禽产品国际贸易最重要的禽类传染病.长期的疫病防制工作中,我们发现不管是在规模化的养殖场,还是在农村中的个体养殖户,新城疫的防制一旦失败,鸡场所遭受的损失都是非常大的,有时则是毁灭性的.鸡新城疫除其本身能造成鸡群严重的发病和死亡外,还常常并发或继发其他疫病的感染,此时造成的经济损失比单独发生时更加严重 [1] ,因此人们对该病的防制极其重视.【总页数】2页(P12-13)【作者】吴清民;裴建武;王开东;张天水;张华;张中直【作者单位】中国农业大学动物疫病综合防治实验室,北京,海淀,100094;中国农业大学动物疫病综合防治实验室,北京,海淀,100094;山东省临沭县职业技术中等专业学校,山东,临沭,276700;山东省临沭县职业技术中等专业学校,山东,临沭,276700;山东省临沭县职业技术中等专业学校,山东,临沭,276700;中国农业大学动物疫病综合防治实验室,北京,海淀,100094【正文语种】中文【中图分类】S858.312.4【相关文献】1.新城疫V4株弱毒疫苗的研究：口服免疫剂量免疫期及保存期试验 [J], 徐振东;吴保成2.雏鸡新城疫母源抗体保护力及Clone—30弱毒疫苗点眼免疫效果观察试验 [J], 孙荣华;董伟3.鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)经皮下和肌肉接种鸡的效力试验 [J], 宋扬; 李贽; 藏玉婷; 刘鑫莹; 李应鹤; 武啸4.新城疫三种弱毒疫苗对肉用鸡比较免疫试验 [J],5.鸡新城疫V_4株弱毒疫苗免疫试验 [J], 吴启因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组鸡白细胞增多病疫苗获得认可
重组鸡白细胞增多病疫苗获得认可
孙国凤
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】1994(000)004
【摘要】北里研究所宣布于94年5～6月进行基因重组鸡白细胞增多(leukocyto-zone)疫苗的野外试验。
11月22日北里研究所为了作为治疗药制造基因重组鸡白细胞增多病疫苗,得到认可(适应指导方针)。
日本的鸡白细胞增多病是住血孢子虫类(目)Haemosporidia的Leucocytozoidae科的原虫Leucocytozooncaulleryi感染而致。
针对原虫的基因重组动物用疫苗确认适合指导方针还是首次。
【总页数】1页(P21-21)
【作者】孙国凤
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4
【相关文献】
1.重组鸡IL-2作为传染性法氏囊病疫苗免疫增强剂对鸡细胞免疫水平的影响 [J], 李宏梅;郭慧君;李祥瑞;汪志楷
2.表达传染性法氏囊vp2基因的重组马立克病疫苗对SPF鸡和商品鸡的免疫保护试验 [J], 周雪媚;李永清;佘锐萍;章振华;王宏俊;王德成;熊金茂;彭开松
3.重组伪狂犬病诊断用抗原的制造获得认可 [J], 孙国凤
4.首个重组埃博拉病毒病疫苗获得新药注册批准 [J],
5.首个重组埃博拉病毒病疫苗获得新药注册批准 [J],
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鸡的7种细胞因子的一些分子生物学特性
鸡的7种细胞因子的一些分子生物学特性邵卫星;彭大新;卢建红;刘秀梵【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2004(25)4【摘要】细胞因子是免疫系统的重要调节因子,能够影响免疫应答的类型和水平.近年来,禽细胞因子研究取得很大进展,随着更多鸡细胞因子基因的发现及其生物学特性的研究,临床应用细胞因子成为可能.文章对7种鸡细胞因子--干扰素(Ⅰ型和Ⅱ型),白细胞介素(IL-2、IL-6、IL-15和IL-18)和鸡髓细胞生长因子(cMGF)一些生物学特性作了综述,主要包括cDNA克隆的方法、cDNA及其编码蛋白的生物学特性、检测方法、主要生物学功能,并与相应的哺乳动物细胞因子比较,阐明鸡的细胞因子与哺乳动物的异同点.【总页数】5页(P11-15)【作者】邵卫星;彭大新;卢建红;刘秀梵【作者单位】扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室,江苏,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.鸡源和鸭源EDSV某些分子生物学特性的比较 [J], 周锦萍;胡清海2.屈头鸡果预灌胃对哮喘小鼠气道Th1/Th2型细胞因子水平的调节作用 [J], 赵展庆;张万科;符妹垂;周小敏;余秉昌;林奇栋3.柔嫩艾美耳球虫在鸡巨噬细胞中的培养及子孢子感染巨噬细胞细胞因子的mRNA水平 [J], 蒋保余;王文青;曲自刚;肖星星;杨顺利;刘保红;曾巧英;蔡建平4.肾复康颗粒对人工诱发鸡肾肿病理模型的炎性细胞因子及IL-1R/NF-κB信号通路的影响 [J], 罗艺晨;杨庆昌;林春发;叶芮伶;尚杨斐;胡宇;刘娟5.刺五加多糖对鸡血液免疫相关细胞因子mRNA表达水平的影响 [J], 张英楠;徐晶;张桂山;杨树宝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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表达鸡ＩＬ２和ＩＬ１５重组新城疫病毒的免疫增强作用研究张天援1，吕政1，王卉1，朱升龙1，刘云野1，孙田1，尹杰超1，吴云舟1，吴金2，任桂萍1，李德山1*(1.东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室，黑龙江哈尔滨150030；2.吉林和元生物工程有限公司，吉林松原132000)摘要：为提高新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫保护效果，本研究选取鸡IL2(chIL2)和chIL15两个细胞因子作为分子佐剂，通过反向遗传操作技术分别将这两个基因克隆于NDV Clone30株中，构建表达chIL2和chIL15的重组病毒rClone30-chIL2和rClone30-chIL15。
ELISA 法检测结果表明两种细胞因子在重组病毒中均能够稳定表达。
将重组病毒免疫雏鸡，以NDV 强毒BJ 株进行攻毒试验，测定其抗体产生情况和保护效果。
结果表明，两种重组病毒均可以诱导雏鸡产生较高水平抗体；而且两种重组病毒保护率可达100%，具有较好的保护效果。
本研究为进一步提高NDV 重组基因工程疫苗的效果提供了新思路。
关键词：鸡IL2；鸡IL15；反向遗传操作技术；新城疫病毒中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：1008-0589(2014)12-0971-04Expression IL2and IL15of recombinant Newcastle disease virusfor enhancing vaccine immune effectZHANG Tian-yuan 1,LV Zheng 1,WANG Hui 1,ZHU Sheng-long 1,LIU Yun-ye 1,SUN Tian 1,YIN Jie-chao 1,WU Yun-zhou 1,WU Jin 2,REN Gui-ping 1,LI De-shan 1*(1.Biopharmaceutical Laboratory,College of Life Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;2.Jilin Heyuan Bioengineering Co.,Ltd.,Songyuan 132000,China)Abstract :To improve the protective efficacy of attenuated Newcastle disease virus (NDV)vaccine,the genes of chicken IL2(chIL2)and chIL15were amplified by PCR and inserted into the NDV vector of Clone30strain to construct rClone30-chIL2and rClone30-chIL15by reverse genetic system.RT-PCR identifications showed that the recombinant virus of rClone30-chIL2and rClone30-chIL15contained the foreigntarget genes;ELISA assays indicated that the foreigntarget genes of the cytokines were able to be stably expressed in the recombinant virus infected cells.In addition,the HI antibody titers against NDV in chicken groups immunized rClone30-chIL2and rClone30-chIL15were 4log2and 3.6log2at 7days post vaccination (pv),while Clone30group and the control group were 3log2and 1log2,respectively.Furthermore,the recombinant viruses also provided better protections for the chickens than that of the parental virus against the challenge at 7days pv which had potential for early protection against NDV infection.Key words :chIL2;chIL15;reverse genetic system;NDV收稿日期：2014-03-17基金项目：黑龙江省成果产业化项目(1252CGZH29)；国家自然科学基金(J1210069/J0106)；东北农业大学博士启动基金(2012RCB43)作者简介：张天援(1988-)，男，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，主要从事微生物学研究.*通信作者：E-mail ：deshanli@*Corresponding author中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第36卷第12期2014年12月Vol.36，No.12Dec.2014doi:10.3969/j.issn.1008-0589.2014.12.13新城疫(Newcastle disease，ND)是由ND病毒(NDV)引起的禽类烈性传染病[1]，预防ND的主要手段仍为鸡群免疫接种灭活疫苗或活疫苗，而两种疫苗免疫后约14d抗体才能达到较高水平，不能达到较好的提前免疫效果。
大量研究表明将传统疫苗与佐剂相混合注射，能够提高其疫苗的免疫效果，而基因工程疫苗与传统的灭活疫苗相比，基因疫苗的免疫效果还不能满足实际要求，所以通过分子佐剂提高基因疫苗的免疫效率成为基因疫苗研究的热点。
其中，以细胞因子为代表的分子佐剂具有更天然的优势，其在体内能够激活和调节免疫活性细胞，对免疫应答的产生和调节具有重要作用，能够更高效的刺激产生体液免疫、细胞免疫和局部粘膜免疫[2]。
本研究利用鸡IL2(chIL2)和IL15(chIL15)作为分子佐剂并通过反向遗传操作技术获得表达chIL2和chIL15的重组NDV，提高了免疫后雏鸡NDV血凝抑制(HI)抗体水平，为进一步提高NDV 重组疫苗保护性奠定了基础。
１材料和方法１．１病毒株、重组质粒、细胞株和实验动物NDV BJ强毒株由吉林和元生物工程有限公司提供；NDV pClone30感染性质粒及pTM1-NP、pTM1-P、pTM1-L辅助质粒、感受态E.coli DH5α菌株、感受态E.coli STBL-2菌株、BHK-21和DF-1细胞均由本实验室保存；SPF鸡胚购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所SPF实验动物中心。
１．２主要试剂r Taq DNA聚合酶、DNA Marker、T4DNA连接酶、限制性内切酶、pMD18-T载体试剂盒购自TaKaRa公司；DNA凝胶回收试剂盒购自Axygen公司；质粒提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司；Lipofectamine2000脂质体转染试剂盒购自Invitrogen公司；DNA PCR引物均由Invitrogen公司合成。
１．３目的基因的克隆与鉴定从新鲜鸡脾中按常规方法提取细胞总RNA并反转录成cDNA，以其为模板分别进行PCR，扩增chIL2和chIL15基因片段。
IL2上游引物：5'-ATGATGTGCAAAGTACTGATC-3'，下游引物：5'-TTATTTTTGCAGATATCTCA-3'；IL15上游引物：5'-ATGCTGGGGATGGCACAGCCAA-3'，下游引物：5'-TTAGTTAGCGTATTTTTTGCATTC C-3'；PCR扩增参数：94℃10min；94℃1min、54℃50s、72℃1min，35个循环；72℃10min，预期chIL2和chIL15的目的片段分别为432bp和564bp。
将扩增的目的基因克隆于pMD18-T载体中，由Invitrogen公司进行测序。
并将chIL2和chIL15目的基因分别克隆于pClone30载体中，构建重组质粒pClone30-IL2和pClone30-IL15(图1)１．４重组ＮＤＶｒＣｌｏｎｅ３０－ｃｈＩＬ２和ｒＣｌｏｎｅ３０－ｃｈＩＬ１５的拯救采用Lipofectamine2000按照使用说明书方法，分别将pClone30-IL2和pClone30-IL15以及pTM1-NP、pTM1-P、pTM1-L3种辅助质粒共转染60%～80%融合的BHK-21细胞单层中。
培养72h 后，将细胞置于-80℃条件下，冷冻，反复冻融3次。
离心收集上清液，取上清液200μL接种于9日龄SPF级鸡胚尿囊腔中，72h后对尿囊液进行血凝(HA)和HI的检测，冻存于-80℃冰箱中，备用。
１．５重组ＮＤＶ的ＲＴ－ＰＣＲ鉴定采用TRIzol法提取重组病毒尿囊液RNA。
利用基因组的上、下游引物5'-TTAAGAAAAAATACGGGTAG-3'/5'-TCTCTGA AGGCCTCTCAGGC-3'分别对重组病毒所插入的相应片段进行RT-PCR扩增，对所扩增的PCR产物进行测序分析。
１．６ＥＬＩＳＡ检测重组ＮＤＶ外源基因的表达以0.1MOI重组NDV rClone30-chIL2、rClone30-chIL15以及rClone30感染DF-1细胞。
感染72h后，收获细胞上清液，以含有10%FBS的IMDM培养基作为调零对照，Mock对照组为不加任何试剂或者病毒的DF-1细胞，利用ELISA试剂盒检测chIL2和chIL15蛋白表达量。
１．７重组ＮＤＶ细胞增殖稳定性检测将重组NDV按MOI为0.01感染DF-1细胞，37℃培养数天，每间隔24h收获上清液，分别测定收获上清液的TCID50。
１．８ＮＤＶＨＩ抗体检测试验将30日龄SPF雏鸡随机分为4组，分别为rClone30-chIL2组、rClone30-chIL15组、rClone30组和对照组，每组10只。
将重pClone30-IL2/IL15图1重组NDV基因组cDNA的构建Fig.1The construction of recombinant NDV genomic cDNA T7promoter GE/GS Rib/T7terminator pBluescript NP P M F chIL2or chIL15HN LSaclⅠMiuⅠ165151中国预防兽医学报2014年972组病毒尿囊液(TCID 50：105.5/0.1mL)通过滴鼻点眼的方式进行免疫，剂量为200μL/只，对照组以相同剂量的0.9%生理盐水代替。