毛细管电泳-激光诱导荧光检测法分离检测谷胱甘肽及其构成氨基酸

合集下载

毛细管电泳-间接紫外检测法测定蜂蜜中的氨基酸

限性，而间接检测可克服这些缺点。本文应用高效毛细管电泳（ＨＰＣＥ）一间接紫外
４ｍｏｌ／Ｌ氨水洗脱，洗脱液于６０℃ 下浓缩至干，用超纯水溶解定容至２５ｍＬ。进样前用０．４５ｕｍ微孔滤膜过滤。
无氯离子即可。１．３．２蜂蜜样品预处理
分脉冲安培检测法、高效液相色谱与质谱联用
法 ” 、高效液相色谱一蒸发光散射检测法 … 等技术相继应用于氨基酸分析。这些方法发展成熟并广泛用于生化、医学、生物工程、农业和食品等领域。但是大多会存在着试剂肖耗多、操作成本高、分析方法复杂、分析时间长等问题。由于大部分氨基酸没有紫外吸收，因此不能采用简单、方便的直接紫外检测，需进行衍生化处理。目前使用的柱前衍生试剂主要有邻苯二甲醛（ＯＰＡ） ” 、异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）、氯甲酸芴甲酯（ＦＭＯＣ — ＣＩ）、丹酰氯
・
６６２・
色
谱
１．２标准溶液种和花粉不同而异，尽管依据氨基酸含量不能完全鉴别蜜源，但是不同种类蜂蜜的氨基酸含量的差异在蜜源鉴别方面也能起到一定的作用 ’ 。自动化分析氨基酸是采用阳离子交换色谱分离与柱后茚三酮衍生结合的方法实现的，最初用于分析蛋白质中的氨基酸。随后，人们不断地发展新的氨基酸分析方法，如：氨基酸自动分析仪、柱前衍生反相高效液相色谱法、高效阴离子交换色谱一积

高效毛细管电泳_紫外检测法分离测定氨基酸的含量_孔红星

’2， ) =%> ：迁移时间的相对标准偏差 ?@A 小于
峰面积的 ?@A 在 4"4BC$3.B 之间； -"%!B ， D3 线性范围：甘氨酸、谷氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸为甲硫氨酸、赖氨酸为 #C%&!; 1 ’2，线性相 .C#.&!; 1 ’2，关系数大于 &388.，甲硫氨酸和赖氨酸的检测限为表4 测定平均值缬氨酸亮氨酸进展 5E73 现代医学仪器与应用 6!&&!6#,:#>F8C44"
#&%&#
EF 的选择
在酸性介质中，氨基酸带正电荷，
易被毛细管壁吸附，因而通常在碱性介质中实现氨基
收稿日期： #$$+*$,*#( 作者简介：孔红星（，男，工程师，研究方向：分析化学。 5<$+, ）基金项目：广西教育厅科研基金资助课题，桂教科研 =&###>)<& 。
分离酸的毛细管电泳分离。在碱性介质中， EF 升高，效果提高，但过高的 EF 对毛细管的使用不利，且会使取得了较好的分离效果。基线不稳，本文选取 EF%$，
!$%
定量方法研究
在选定的毛细管电泳分离条件下，对 % 种氨基
酸的定量方法进行了研究： 9" 重现性 : 浓度为 $-!; <
参考文献：
5#7
周琼 6 陈缵光 6 莫金垣 3 毛细管电泳在氨基酸分析中应用的傅若农 6 顾峻岭 " 近代色谱分析 5G7" 北京 F 国防工业出版社 6

毛细管电泳在氨基酸分析中的应用

毛细管电泳在氨基酸分析中的应用大连大学环境与化学工程学院化学112 刘纪程1.概述毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（HPCE）或毛细管电分离法（CESM），是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。

毛细管电泳(CE)的应用包括很多内容。

已在生命科学、生物工程、医药、环境保护、食品检验等领域获得了广泛应用。

被分析的物质有离子、小分子、生物大分子乃至高分子和粒子的分析；分析对象从无机物、有机物、生物体系乃至活体单个细胞的分析；含量测定范围可从常量到微量乃至几个分子的测定电泳技术是蛋白质分离的重要手段，而毛细管电泳技术一经发明，就在多肽、蛋白质等生物活性物质的分离分析方面显示出了巨大的优越性。

1.2 CE 的分离模式CE 基于分离介质和分离原理的不同，常见的有以下几种分离模式[1， 2]：此外，还有毛细管矩阵电泳（CAE）、芯片式毛细管电泳（CCE）及非水毛细管电泳（CNACE）等，对于蛋白质和多肽的检测而言，应用最多的还是CZE和CIEF 这两种。

近年来，一些新型的电泳溶剂也得到了应用，如非水相的或者水相+ 有机相的电解液、等电点缓冲溶液，离子性液体也被用于电泳分离，这大大拓展了其应用范围[3]1.3 CE 的检测技术由于CE 进样量小的特性，对检测器的灵敏度要求很高，通常采用柱上检测。

在蛋白质和多肽的检测中，因为芳香类氨基酸有紫外吸收，故常用紫外检测器；在样品含量较低时，可采用荧光或者激光诱导荧光检测器；由于蛋白质溶液具有导电性，因此对毛细管进行改进以后，采用电导或安培电流也能检测出峰；另外，伴随蛋白质酶谱技术的发展，将CE 与质谱串联定性检测蛋白质水解后的多肽链的技术也得到了较快发展[4]。

2.氨基酸分析由于只有少数几种氨基酸在紫外范围内有吸收，所以对氨基酸分析的主要问题在于检测方式。

虽然也有报道用间接紫外、间接荧光、间接电化学、检测器测定未衍生化的氨基酸，但最灵敏的方法是采用荧光试剂将氨基酸衍生后再进行分离测定。

毛细管电泳法研究进展

毛细管电泳技术研究进展胡晓峰(中国矿业大学化工学院，徐州)摘要：本文对毛细管电泳技术基本原理进行回顾，并简要介绍了当前毛细管电泳技术发展情况。

关键词：毛细管电泳技术；原理；发展毛细管电泳法（capillary electrophoresis，CE）是20世纪80年代发展起来的一种以电场为推动力的高效分离技术，利用离子在电场力作用下迁移速度的不同对组分进行分离和分析，该方法具有成本低、污染小、高效和操作简单等优点[1]。

1.原理离子或带电粒子在外加电场的作用下，在分散介质中定向移动的现象称作电泳。

粒子带电量不同，在电场中电泳速率也不同，因而可以获得分离，因此电泳技术是适合分离离子和带电粒子的技术。

毛细管电泳以毛细管为分离通道，毛细管能有效减少因焦耳热效应导致的区带展宽，以高压电场为驱动力，在外电场作用下，带电粒子在毛细管内电解质溶液中作定向移动，获得很高的分离效率，分析时间也大大缩短，试样分析范围宽，检出限低。

当pH>3时，毛细管内壁的硅羟基Si-OH电离成SiO-，使其带负电荷。

与所接触的电解质溶液形成双电层，于是毛细管内溶液表层形成了一个圆筒形的阳离子套，在高压作用下，该阳离子套将携带整个溶液向负极方向流动。

管内液体在外加电场的作用下朝一个方向移动的现象，称为电渗流（EOF）。

电渗流与溶液成分、浓度及pH、毛细管材质、溶液离子淌度有关。

通过对电渗流大小的控制可以影响电泳分离的效率、选择性和分离度。

带电粒子在毛细管内电解质溶液中的迁移速率等于电泳速率和电渗速率的总和。

电渗流方向正极到负极，阳离子向阴极迁移，与电渗流方向一致，移动速率最快，最先流出；阴离子向阳极运动与电渗流方向相反，但是电渗流移动速率比电泳速率大，所以，阴离子缓慢的在电渗流作用下移向阴极，最后流出：中性分子随电渗流迁移，利用中性分子出峰时间可以测定电渗流迁移速率的大小[2]。

2.毛细管电泳仪组成毛细管电泳仪主要由高压电源、毛细管、电泳槽和检测器等部件组成。

毛细管电泳-激光诱导荧光法分离四种神经递质类氨基酸的条件优化

ＯｐｉｉａｉｎｏｅｒｔｎｕｏｒｎｓｉｔｒＡｍｉｏＡｃｄｙｔｍｚｔｏｆＳｐｅａｉｇ４ＮｅｒｔａｍｔｅｎｉｓｂＣａｌａｙＥｌｃｒｐｈｒｓｓｗｉｈＬａｅ — ｉｄｕｅｕｏｅｃｎｅｐｉｌｒｅｔ００ｅｉｔｓｒｎｃｄＦｌｒｓｅｃ
ｅｔｏｋｃｒｐｈｏｅｉ．Ｍｅｈｓｒｓｓｔｏｄ４ｅｕｏａｍｉｔｒｍｉａｉｓｎｒｔｎｓｔｅａｎｏｃｄｄｅｉｔｚｄｒｒｖａｉｅｗｉｈｔＦＩＣｗｅｅＴｒｄｅｅｍｉｅｂｃｐｉｌｙｌｃｔｒｎｄｙａｌａｒｅｅ —
ｔｅｏｔｍｏｄｔｎｏ５ｍｍｏ／ｏｉａｉ（Ｈ．２ｏｔｎｎｎ０ｈｐｉｍｕｃｎｉｉｆ７ｏｌＬｂｒｃｃｄｐ９４）ｃｎａｉｌｇ１０ｍｍｏ／ＤＳａｔｇａｕｎｎｕｆｒａｄ５ｌＬＳｃｉｓｒｎｉｇｂｆｅｎ０ｎｍｍｏ／ｏｉｃｄ（Ｈ．０ｓｄｖｔａｌｎｂｆｅｎ２ｎＣｎｌｓｏＴｈｏｇｐｉｚｔｎ，ｈｅａａｉｇｅｆｌＬｂｒｃａｉｐ９８）ａｅｉａｉｔｕｆｉ０ｍｉ．ｏｃｕｉｎｒｚｏｒｒｕｈｏｔａｉｔｅｓｐｒｔｆｉｍｉｏｎ —
黄荣，跃国，惠民，忠慧，一红，春兰，少朋王王王黄杨褚
（南通大学附属医院医学检验中心，江苏南通

毛细管电泳-直接紫外测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

３０ｍｍｏ／ｏａｅ１ｌＬｂｒｔ一０ｍｍｏ／ｈｓｈｔｏｕｉｎａｈａｒｅｕｆｒ３（Ｖ）ｍｅｈｎｌｓａｒａｉｌＬｐｏｐａｅｓｌｔｓｔｅｃｒｉｒｂｆｅ，Ｖ／ｏｔａｏｎｏｇｎｃａｍｏｉｅ，０５ｍｍｏ／ｅｙｔｉｔｙｍｍｏｉｍｒｍｉｅａｌｃｒ：ｓｓｓｆｏｍｏｉｅ，ａｄａｊｓｉｇｄｆｒ．ｉｌＬｃｔｌｒｍｅｈｌａｎｕｂｏｄｓｅｅｔｏｏｍｏｉｌｗｄｆｒｎｄｕｔｉｎ
ｄｒｖｔｎｆｔｅｍｉｒｔｏｉｅｎｅｋａｅｓａｏｔｅｃｍｉｏａｉｓａｅｌｓｈｎ０３ｅｉａｉｓｏｈｇａｉｎｔｍｓａｄｐａｒａｂｕａｈａｎｃｄｒｅｓｔａ．ｏ
ＦＡＮａ— ｅＨｉｆｎｇ，ＹＡＮＧｕ，ＳＵＮａｇ—ｉＬＩＣｈｏｇ— ａｇ，ＭＡＯＷＸｉｎｌ，ｎｙｎＸｕｅｆｎｇ —ｅ
（ＣｏｌｅｅｏｆＣｈｅｉｔｙａｌｇｍｓｒｎｄＣｈｅｉａｌＥｎｎｅｒｎｍｃｇｉｅｉｇ，ＮｏｔｒｈｗｅｔＮｏｒａｎｖｒｉｙ，Ｌａｈｏｕ７３７ｓｍｌＵｉｅｓｔｎｚ０００，Ｇａｎｕ，Ｃｈｉａｓｎ）
Ｄｅｅｍｉａｉｎｏｏｏｎｍｉｏａｉｎｔｎｔｒｎｔｆｃｍｐｕｄａｎｃｄｉｊｃｉｏｅｏ
ｂｙｃｐｉｌｒ１ｃｒｐｒｓｓｗｉｈｄｒｃＶｅｅｔｏａｌａｙｅｅｔｏｈｏｅｉｔｉｅｔＵｄｔｃｉｎ

毛细管电泳—间接紫外检测法测定蜂蜜中的氨基酸

毛细管电泳—间接紫外检测法测定蜂蜜中的氨基酸周贤婧;师彦平【摘要】Abstract:A method of capillary electrophoresis with indirect ultraviolet (UV) detection was developed for the separation and determination of nine amino acids such as lysine,tryptophan,glutamic acid,etc.The effects of sodium dihydrogen phosphates concentration,pH of buffer and sample injection type and time on the reproducibility and efficiency were investigated.The optimum injection time was 5 s at 5 kPa.The optimum electrophoretic conditions were as follow:10 mmol/L sodium dihydrogen phosphates (pH 10.2) containing 0.5 mmol/L cetrimonium bromide,20 mmol/L nicotinic acid and 10％ (v/v) methanol as runing buffer,applied voltage of-15 kV,detection wavelength of 220nm.The base line separation of the nine amino acids was achieved successfully within 11 min.The lowest detection limit was 0.3 mg/L.All of the nine analytes showed good linearities within 1.0-1 000 mg/L.The relative standard deviations of migration time and peak area were 0.64％-5.83％.The recoveries of the eight amino acids spiked in a real sample were between 60.00％ and 118.37％.The method was applied in the determination of the amino acids in honey samples from different nectar plants and origins.Prolin,serine and aspartic acid were found in five honey samples,and tryptophan was only found in a litchi honey sample.This method can provide good reference to the evaluation of the quality and nectar origin of honey.%采用毛细管电泳-间接紫外检测法同时分离测定蜂蜜中的赖氨酸、色氨酸、谷氨酸等9种氨基酸.考察了磷酸浓度、进样方式和缓冲液pH 对分离效率和重现性的影响.在分离电压为-15 kV、检测波长为220 nm条件下,以含有0.5 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵、20 mmol/L烟酸、10％甲醇的10 mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(pH10.2)为运行缓冲液,9种组分在11 min内达到基线分离;检出限最低可达到0.3 mg/L;线性范围为1.0～1 000mg/L;日间及日内精密度为0.64％～ 5.83％.实际样品中除甲硫氨酸外的8种氨基酸的加标回收率为60.00％～118.37％.将该方法应用于不同蜜源植物和产地的蜂蜜样品的测定,在市售的5种蜂蜜中均检测到脯氨酸、丝氨酸和天冬氨酸,而只在荔枝蜜中检测到苏氨酸.该方法可以为蜂蜜的蜜源鉴别及质量评估提供借鉴方法.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2013(031)007【总页数】6页(P661-666)【关键词】毛细管电泳;间接紫外检测;氨基酸;蜂蜜【作者】周贤婧;师彦平【作者单位】中国科学院兰州化学物理研究所中国科学院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室,甘肃兰州730000;中国科学院大学,北京100039;中国科学院兰州化学物理研究所中国科学院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室,甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】O658蜂蜜作为一种潜在的生物抗氧化［1，2］、抗菌［3］的功能性食品，其抗氧化能力不仅受黄酮多酚类化合物的影响，同时也受蜂蜜中氨基酸成分的影响，而且相关性强于多酚类化合物［4］。

毛细管电泳-蓝紫光激光诱导荧光检测系统的构建及其分析应用

毛细管电泳-蓝/紫光激光诱导荧光检测系统的构建及其分析应用毛细管电泳(CE)以其分离效率高、分析速度快、分离模式多、样品与试剂用量少等优点,已发展成为一种极为有效的分离技术,在生物医药、食品安全、环境监测等领域获得了广泛应用。

然而,由于毛细管内径较小(25-100μm),导致其进样体积小(纳升级),有效检测光程短(微米级),使得常规CE灵敏度较低。

激光诱导荧光检测(LIF)是目前灵敏度最高的检测技术之一,毛细管电泳-激光诱导荧光检测技术(CE-LIF)结合了二者快速、高效、灵敏的优点,非常适合复杂样品中痕量物质的分析。

但是,商用激光器波长较为单一,以及多数目标分析物自身没有荧光等因素极大地限制了LIF检测器的应用。

近年来,随着激光技术的进步,市面上可选择的激光器种类日益繁多,其中二极管激光由于可选波长种类丰富,体积小,寿命长,且价格低廉,是LIF检测器的理想光源。

但目前二极管激光诱导自身荧光的应用较少,且缺乏与之波长相匹配的荧光标记试剂和衍生方法,这在一定程度上限制了该类LIF检测器的推广应用。

本论文旨在分别以蓝(445 nm)、紫(405 nm)光激光二极管作为光源构建激光诱导荧光检测器,并搭建完整的CE-LIF系统。

在此基础上,以姜黄素类化合物为目标分析物建立445 nm激光诱导自身荧光(LINF)的应用;以香豆素为母体开发适用于405 nm激光诱导荧光检测器的荧光标记试剂,并建立相应的荧光标记方法,来拓展蓝、紫光激光诱导荧光检测器的应用范围。

全文分为四章:第一章:简要介绍了毛细管电泳-激光诱导荧光分析技术,包括毛细管电泳的分离模式、毛细管电泳主要的检测器、激光诱导荧光检测器的原理、构造及相关进展,并对目前激光诱导荧光检测器可用的激光光源进行了总结,对毛细管电泳-激光诱导自身荧光(CE-LINF)相关的应用进行了较为全面的综述,对用于LIF检测器的荧光标记试剂进行了简要的总结。

第二章:以445 nm蓝光激光二极管为光源搭建共聚焦激光诱导荧光检测器,并构建了一套完整的CE-LIF分析系统。

毛细管电泳-电致化学发光检测法分离测定中药马尿泡中的托烷类生物碱成分

，
(
．
佗
=
12
)
．．
并将该法成功地应用于测定中药马尿泡根茎中的山莨
4
．
菪碱和东莨菪碱的含量其含量平均值分别为
中图分类号
0 658
27
8 g ／k g
和
4 3 g ／k g
。
97
～
．
。
关键词：毛细管电泳；电致化学发光检测；修饰电极；托烷类生物碱；马尿泡
u n
P is
r z e w w
a
ls k ia
ta
g
t ic a
e
a x
im h
n
b y
p illa
y
e
l
e c
t
e
r o
ph
e c
it h
l
e c
t
r o c
e m
ilu
in
e s c e n c e
d
h
u
t
t i
R E N X ia
o n a
e
，
MA Y f Ch e m
to r y
o
o n
gj u
de
a
a s a e
the
s
，
w
o r
k in g
is
o
e
le in
c
tr
e
o
e
，
a o
m
e m
o
d
，
th
o
s e
im

毛细管电泳发光二极管诱导荧光对免疫球蛋白G的检测

毛细管电泳发光二极管诱导荧光对免疫球蛋白G的检测甘杰;张丹;罗岳平;胡军;黄东勤【摘要】采用自行设计、组装的毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测装置,建立了一种直接测定免疫球蛋白G(IgG)的方法.以蓝色发光二极管(LED)为荧光检测器的激发光源,荧光素异硫氰酸酯(FITC)为柱前衍生试剂,采用毛细管区带电泳,以20 mmol/L 硼砂缓冲溶液(pH 9.2)为背景电解液进行分离检测.通过对衍生反应条件和电泳分离条件进行优化,确定了最佳实验条件,在该条件下,IgG的线性范围为4.5×10~(-8) ～1.2×10~(-6) g/L,检出限为2.0×10~(-8) g/L.该方法简单、高效、选择性好,无需前处理,可用于人血清中IgG含量的测定.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2010(029)003【总页数】5页(P257-261)【关键词】免疫球蛋白G;毛细管电泳;发光二极管;荧光检测【作者】甘杰;张丹;罗岳平;胡军;黄东勤【作者单位】湖南省环境监测中心站,湖南,长沙,410014;湖南美可达生物资源有限公司,湖南,长沙,410016;湖南省环境监测中心站,湖南,长沙,410014;湖南省环境监测中心站,湖南,长沙,410014;湖南省环境监测中心站,湖南,长沙,410014【正文语种】中文【中图分类】O657.7;TQ937免疫球蛋白(Imm unoglobu lin,Ig)是一类具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白,普遍存在于人类和哺乳动物的血液、组织液及外分泌液中,其中血清中含量最高[1]。

免疫球蛋白作为机体免疫系统的重要组成部分,是所有蛋白质中最不均一的一类,根据其理化性质尤其是免疫学性质,可将其分为 5类,即 IgG、IgA、IgM、IgD及 IgE。

人体内以 IgG为主,其中血清中 IgG含量占 Ig总量的 80%,是免疫学基础研究常用的材料和工具,被广泛应用于医学临床诊断、疾病预防、食品添加、生物制药和疫苗生产领域,而人体血清中 IgG含量的测定是临床诊断的重要指标。

高效毛细管电泳分离氨基酸

高效毛细管电泳的应用
食品
环境
生物医药
石油化工
手性分离
高新技术研究
应用
2.1 电渗现象electroosmosis
当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种定域电荷，因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成高出溶液本体的“自由”离子，即形成双电层，二者之间存在电位差。在液体两端施加电压时，由于定域电荷无法移动，而双电层中的“自由”离子在电泳过程中通过碰撞等作用给溶剂分子施加单向推力，使之同向运动，并通过粘滞阻力带动周围溶剂运动，从而发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。
毛细管电色谱兼具HPCE的高效性和HPLC固定相具有高选择性的特点；分类：开管柱、填充柱、整体柱；
姚老师的课题——毛细管电色谱分离手性化合物
5 习题
请用电渗的原理确定推测本实验中两个样品的出峰顺序。（四）请以本实验为例列举两种色谱定性方法。(十) 请举出两种常用的色谱定量的方法。(十二）查阅文献，请举一毛细管电泳具体应用的实例。(九) 若在本实验的缓冲液中分别加入十二烷基三甲基溴化铵（阳离子表面活性剂），或十二烷基磺酸钠（阴离子表面活性剂），请推测电渗流的大小和方向以及样品的出峰顺序会产生何种变化，为什么。(七) 若在本实验的缓冲液中加入有机溶剂甲醇，请推测电渗流会产生何种变化，为什么。若提高本实验的缓冲液中的磷酸二氢钠的浓度，请推测电渗流会产生何种变化，并且此变化会对样品的检测产生何种影响？(五)
利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。
1
按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳；

毛细管电泳-电化学检测法测定淮山中8种必需氨基酸含量

毛细管电泳-电化学检测法测定淮山中8种必需氨基酸含量胡月芳;黄志强;李金芳【摘要】将8种人体内必需氨基酸(苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、色氨酸)与邻苯二甲醛(OPA)发生衍生化反应,再采用毛细管电泳-电化学检测(CE-ED)方法对其含量进行测定考察了衍生化时间、检测电位、运行缓冲液浓度和pH值、分离电压及进样时间等的影响.在优化条件下,8种氨基酸在12 min内实现了分离,线性范围为0.1～1 500 μg/L;检出限为0.01～0.05 μg/L,峰高的相对标准偏差(RSD)为1.3％～1.8％,迁移时问的RSD为0.6％～ 1.0％该方法已用于淮山样品中8种必需氨基酸的测定,加标回收率为96.8％～102.0％,RSD均不大于2.4％.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2016(035)004【总页数】5页(P471-475)【关键词】毛细管电泳;电化学检测;淮山;氨基酸【作者】胡月芳;黄志强;李金芳【作者单位】贺州学院化学与生物工程学院,广西贺州542899;贺州学院化学与生物工程学院,广西贺州542899;贺州学院化学与生物工程学院,广西贺州542899【正文语种】中文【中图分类】O657.8;O629.7淮山别名山药、怀山药等，含有氨基酸(包括人体必需的8种氨基酸)、活性多糖、薯蓣皂苷、尿囊素、胆碱、黄酮、淀粉等成分，是一种常用药材和较佳的保健食品[1]。

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是化学、生物、医药、农业、食品等领域的重要物质[2-3]。

随着人们对淮山营养成分认识的加深，测定淮山中氨基酸的含量，尤其是8种人体必需的氨基酸含量成为评定淮山营养价值的基本指标之一。

近年来，一般采用传统的液相色谱法或氨基酸分析仪分离氨基酸[4-6]，但色谱法在样品分离前需对色谱柱进行预处理或改性，色谱柱价格昂贵，分离效率不高，检测速度慢，操作较繁琐；氨基酸分析仪分析成本较高。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定细胞中谷胱甘肽

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定细胞中谷胱甘肽门雪;吴成新;陈明丽;王建华【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2023(41)1【摘要】谷胱甘肽(GSH)在抵抗氧化应激和重金属解毒过程中发挥着重要作用,建立灵敏、准确的GSH定量分析方法对于研究细胞重金属毒性机制具有深远意义。

该研究以肝癌细胞(HepG2)为研究对象,以活性基团为芳香邻二醛的2,3-萘二甲醛(NDA)为标记试剂,建立了一种高灵敏度的测定细胞中GSH含量的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法(CE-LIF)。

实验考察了缓冲溶液的种类、pH、添加剂等对GSH与NDA的反应速率和NDA-GSH检测灵敏度的影响。

比较了pH为7.4和9.2的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液、pH为9.2的硼砂和Tris缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度和反应速率,结果显示在pH为9.2的硼砂缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度最高且反应速率最快。

进一步比较了4种添加剂对NDA-GSH灵敏度的影响,结果显示以β-环糊精(β-CD)作为添加剂效果最好。

在最优的实验条件下,GSH与NDA可以在5 min内达到反应平衡,3 min内检测到NDA-GSH电泳信号。

采用外标法对细胞中的GSH进行定量分析,方法线性范围为0.01~20.00 mmol/L,GSH的检出限和定量限分别为0.006μmol/L和0.020μmo l/L,加标回收率和标准偏差分别为95.7%~112.6%和3.8%~5.0%(n=3)。

通过建立的方法对HepG2细胞中的GSH进行定量分析,并研究了As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)刺激细胞后胞内GSH的变化情况。

结果表明,在研究剂量水平下,As(Ⅲ)、As(Ⅴ)和Cr(Ⅲ)不会影响HepG2细胞中GSH的含量,而高剂量Cr(Ⅵ)会导致GSH含量显著降低。

结合元素毒性数据,说明HepG2细胞内GSH含量与细胞毒性相关,GSH含量会随着细胞毒性增大而降低。

氨基酸对映体的芯片毛细管电泳拆分

氨基酸对映体的芯片毛细管电泳拆分王　辉1　戴忠鹏1　王　利2　白吉玲2　林炳承31(中国科学院大连化学物理研究所生化分离分析课题组1,分子反应动力学国家重点实验室2,大连116023)摘　要　在毛细管电泳芯片上,采用C D 2S DS 2MEK C 模式,对FIT C 标记的3种氨基酸对映体进行了手性分离研究。

C D 种类、浓度、S DS 浓度以及各种添加剂对氨基酸对映体拆分有影响,认定γ2C D 对FIT C 标记的氨基酸手性识别能力较强,在含有5mm ol/L γ2C D 和30mm ol/L S DS 的10mm ol/L ,pH 10.0的硼砂缓冲溶液中,3种氨基酸对映体得到了较好的分离。

关键词　芯片毛细管电泳,环糊精,胶束电动色谱,手性拆分　2001207224收稿;2002201224接受本文系国家自然科学基金资助项目(N o.20035010,29975030)1　引言在具有手性中心的生物物质(包括药物)中,每个对映异构体具有不同的三维结构,其生物活性往往有很大的差别。

表现为其中的一种具有生理活性,而另一种是非活性的甚至还带来毒副作用。

因此,以对映体的拆分为前提的手性化合物的分析在药品筛选、食品及农业化学等领域具有十分重要的作用。

手性对映体的物理化学性质十分相似,分离难度很大,高效液相色谱(HP LC )曾是手性分析的主要方法。

80年代以来新兴的毛细管电泳(CE )以其样品消耗量低、高效、快速等特点正逐渐成为手性拆分方法的首选1,2。

90年代以来,分析仪器的微型化得到了迅速发展。

气相色谱(G C )和液相色谱(LC )首先在硅片上实现了微型化,但一直没有得到广泛应用3。

近年来,毛细管电泳技术通过标准光刻蚀技术在几平方厘米的玻璃、石英等基片上实现了微型化,包括荧光染料和荧光标记的氨基酸4,双链DNA 片段5、DNA 测序6等在内的电泳分离均已在芯片毛细管电泳上得到了实现。

固定相键合在管壁上7或者以缓冲溶液中胶束为固定相8的毛细管电动色谱分离模式,也在毛细管电泳芯片上得到了初步的尝试。