2011-科研方法-3

观测指标的时间和次数：
应根据试验期限的长短和受试物的特点而定。原则 上应尽量发现最早出现的毒性反应。
（7）几点说明：1、长毒给药的试验期限
毒性试验期限（月）
临床疗程（周）
5天以内 2周以内 2～4周 4～12周 超过12周
啮齿类动物
2周 /免 1个月 3个月 6个月 6个月
非啮齿类动物
2周 /免 1个月 3个月 6个月 9个月
治疗使用
急毒
长毒与特殊毒理
临床前审评
新药申请提出
新药批准
新药开发过程模式简图
（一）急性毒性实验
（1）概念：24小时内单次或多次给药后，连 续7-14天观察实验动物所出现的毒性反应 及死亡情况。
（2）目的
I 剂量与范围 表现及是否可逆 定位靶器官 解毒方法
毒性
（3）观察目标
定性研究
因---果关系 是否存在


1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是
引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及容量条件 下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。 4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。 选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
2、年龄：根据试验期限的长短而定。大鼠一般6～9周龄。 Beagleg狗一般6～12月龄。试验开始时体重差异不应超过或者 低于该次试验动物平均体重的20%. 3、驯养：实验前观察2周。记录动物的行为活动、饮食、体重、 精神状况、心电图、有关血液学及血液生化学等功能指标。选 择正常、健康、雌性无孕动物作为受试动物。

试验方法：
1.估计可能的毒性范围：根据小动物的毒性试验结果、受试药 物的化学结构和其它有关资料，估计可能引起毒性和死亡的 剂量范围。 2.按50%递增法，设计出含10-20个的剂量序列表。 3.根据估计，由剂量序列表中找出可能的致死剂量范围，在此 范围内，每间隔一个剂量给一只动物，测出最低致死剂量和 最高非致死剂量，然后用二者之间的剂量给一只动物，此剂 量即为所要求的近似致死剂量（ALD）。 4.给药途径：原则上应与临床用药途径相同，如有不同，应说 明理由。


试验观察：
观察时间：给受试药物后至少应观察2周，并根据毒
性反应的具体特点可适当延长。对每只动物均应仔细 观察和详细记录各种毒性反应出现和消失的时间。给
受试药物当天至少应观察记录两次，以后可每天一次。
观察内容：包括皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、
循环、自主及中枢神经系统行为表现等。动物死 亡时间的记录要准确。给受试药物前、给受试药
一种为啮齿类动物，另一种为非啮齿类动物。 2、溶于水的药物，啮齿类动物应提供两种给药途径 的毒性试验资料，一种静脉注射途径，一种临床途 径，若临床用静脉注射途径时，可只做静脉注射的
急性毒性试验。
3、试验给药一般按照不等浓度等体积进行。
国际通用的药物分类

创新药（Innovation）
一般为专利注册的新化合物与药品。

试验观察：
给受试药物后观察14天，当天给受试药物后持续 观察30分钟，第1-4小时再观察一次，以后每天观 察一次。仔细观察记录各动物的中毒表现和其出 现和消失时间、毒性反应的特点和死亡时间。中 毒死亡或中毒表现明显者，需作大体解剖检查。 尸检异常的组织器官应作组织病理学检查。
（6）几点说明
1、创新药物应提供两种动物的急性毒性试验资料，
临 床 前试 验(动 物) 合成检验 与筛选
Ⅱ期 Ⅰ期
10,000 – 30,000 化合物
临床前研究与发展
临床研究阶段
新药的申请审查
上市后监督
药学与临床前药理
I期
动物药效学与药动学
I期
IV期临床
不良反应
II 期
III 期
药品检验 抽样检查
动物毒理
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2、血液学指标：红细胞、网织红细胞计数、血红蛋 白、白细胞总数及其分类、血小板。 3、血液生化指标：天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、 丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿
素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、血糖
（GLU）、总胆红素（T-BIL）、肌酐（Crea）、总胆

（6）长期毒性试验
1、概念：观察动物反复给予受试药物后，对机体 产生的毒性反应及其严重程度，主要的毒性靶器官 及其损害的可逆性，提供无毒性反应剂量及临床上 主要的监测指标，为制定人用剂量提供参考。

试验动物
1、品系：一般用两种动物，一种啮齿类动物，另一种为非
啮齿类动物。常用SD或Wister大鼠和Beagle狗或者猴。
物后1周、动物死亡及试验结束时应称取动物的体
重。所有动物包括死亡或处死检查。
（5）非啮齿类动物的急性毒性试验 （近似致死剂量试验）

试验条件
1、动物品系：一般用6只健康的Beagleg狗和猴。 年龄一般为6-8月龄。同批试验中，试验初始动物 的体重应不超过或者低于所用动物平均体重的20%。 试验前至少驯养观察2周，观察记录动物的行为活 动、饮食、体重、心电图及精神状况，择其正常、 健康、雌性无孕者作为受试动物。

试验方法：
1、试验分组：一般设三个剂量组和一个对照组。 低剂量组原则上应高于同种动物药效有效剂量，在 此剂量下，动物不出现毒性反应；高剂量组原则上 应使动物产生明显的或严重的毒性反应，甚至引起 少数动物死亡；为观察毒性反应的剂量关系，在高、 低剂量组之间应再设1个中剂量组。
2、动物数：每组动物的数量应根据给药周期的长
2、动物饲养管理：动物饲料应符合动物的营养 标准。若是购买的饲料，应注明生产单位。同 时，应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

试验方法：
由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、 药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难 观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点， 由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试 验：

仿制药（Generic drugs）
为原注册或专利药品上市后专利过期， 但仍按原法生产。
我国从1950年到现在，上市的新药绝大多数为仿制 产品，仿制药占97%以上。然而，我国的仿制药生 产与美国、印度等国家仿制药生产的差距在于还处 在低水平仿制和低利润混战当中。

仿制药最大的好处是极大降低了药价。如有一种药， 发明者每吨要卖6000美元，过保护期后在印度仿制， 每吨只卖60美元，极大地刺激了消费。
2、是否进行长毒试验：疗程；药物组成
3、试验剂量：高、中、低 4、观察指标：血液学、生化、免疫、脏器重 量；重要器官病理；体重；摄食量；活动量 等。
5、存在问题
缺乏预见性； 样本不足； 指标变化未进行分类处理； 未达到规定动物标准； 仪器误差； 原始数据存在缺陷。
量---效关系 是否明确
定量研究
（4）啮齿类动物单次给药的毒性试验

试验条件
1、动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。年龄一般为 7-9周龄。同批试验中，小鼠（18-22克）或大鼠 （120-150克）的初始体重不应超过或低于所用动物 平均体重的20%。 实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮 食、体重及精神状况。
短决定。大鼠一般为雌、雄各10～30只；Beagle 狗或者猴，一般雌、雄各3～4只。
3、给药途径：原则上应与临床用药途径相同。若
用其他途径应说明原因。

试验观察：
1、一般观察：外观体征、行为活动、腺体分泌、 呼吸、粪便性状、食量、体重、给药局部反应、 狗的心电图变化等。大鼠群养时，应将出现中毒 反应的动物取出单笼饲养。发现死亡或濒死动物， 应及时尸检。试验期间如动物发生非药物性的疾 病反应时，应及时进行隔离处理。
固醇（T-CHO）等。
4、系统尸解和病理组织学检查：

恢复性观察：
最后一次给受试药物后24小时，每组活杀部分动 物检测各指标，留下部分动物，根据受试物的特 点，继续观察一定时间再活杀检查，以了解毒性 反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。 在此期间除了不给受试物外，其它观察内容与给 受试物期间相同。
一、临床前安全性评价的范围和方法
概述 急性毒性试验 长期毒性试验
新药（化合物）的开发过程
一个成功的新药开发经FDA批准 美国费用为6-10亿美元
12 11 10 9 8 年 7 6 5 4 3 2 1 1 0
产品介绍 注册
产品监督
Ⅳ期
1
研究阶段
2-5 5-10
10-20 化合物
Ⅲ期
临床试验 （人 体）