牛支原体引起奶牛乳房炎的诊断
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关键词 ： 奶牛 ； 牛支 原体 ； 感染 ； 乳房 炎
１６ ９ １年 牛 支 原 体 （ ｃｐａｍ ｏ ｉ） 次 在 美 Ｍｙｏ ｌｓ ａｂ ｖｓ 首 国患 有乳 房炎 的病 牛 中分 离 到［ ” 。据 报道 ， 支原 体 牛 乳 房炎 给奶 牛业造 成 了 巨大 的损失 。湖 北某 奶牛 场
炎 临床 症 状 的奶牛 中采集 牛奶 样本 ， 细 菌培养 和 支原体 培 养 、 异性 Ｐ Ｒ 与环介 导 等温 扩增 （Ａ 经 特 Ｃ Ｌ ＭＰ扩增 ）
和 １ Ｓｒ Ｎ 测序 等病 原 学检 测证 实 为牛 支原体 感 染 ， 时还 有 其他 细 菌的混 合感 染 。 ６ Ａ Ｒ 同
取 新 培 养 的 牛支 原 体 菌 液 ５ ０ Ｌ于 １ ｍ ０￣ ． Ｌ灭 ５ 菌 Ｅ ｐ ｎ ｏｆ 中 ，２Ｏ ０／ ｎ离 心 １ ｍ ｎ 弃上 清 ， ｐ ｅ ｄｒ 管 １ ０ ｒ ｍｉ ５ ｉ， 沉 淀溶 于 ２ ０ ￣ 菌 ｄ Ｈ Ｏ 中。 水浴 １ｍｉ 立 ０ｐ Ｌ灭 ｄ 沸 ０ ｎ后 即 冰 浴 １ ２ ｉ ， Ｅ ｐ ｎ ｏｆ 冷 却 后 一 ０Ｃ 存 ～ ｒ ｎ 待 ｐ ｅ ｄｒ 管 ａ ２ ￣保 备用 。
医学 研 究 。
通 讯 作 者 ： 爱 珍 （９ ５ ， ， 南 源 江 人 ， 授 ， 士 ， 要 从 事 郭 １６ 一） 女 湖 教 博 主
牛传染性疾病研究 。
・
２・
Ｐ Ｒ 反 应 体 系 为 ２ ｔ 其 中 ： ｘ ａ ｘ ｒ Ｃ ０ｚ Ｌ， ２ ｔｑ Ｍｉｔ ｅ ｕ （ ｉ ｇ ｎ ｌ ， 物 Ｕ ｒ 和 Ｕ ｒ ２各 ０８ Ｌ 取 牛 Ｔａ ｅ ）０ Ｌ 引 ｎ ｖＣ１ ｖＣ ．ｔ ， ｘ
照试剂说 明配置 Ｔ Ａ固体培养基 及 Ｔ Ｂ液体培养基 。 Ｓ Ｓ 支 原 体 液 体 与 固体 培 养 基 的配 制 及 支 原 体 的 培 养 鉴 定 参 照文 献 ］ 培 养基 中未 加 １ ， 但 ％醋 酸 铊溶 液 。
ＰＬ Ｐ Ｏ肉汤粉 、 母粉 、 脂粉 等 购 自 Ｂ 酵 琼 Ｄ公 司 ， Ｍ ＭＥ 培养 基 购 自 Ｓｇ ｉ ｍａ公 司 ， 血清 购 自 Ｈ ｃｏ ｅ 司 ， 马 ｙ ｌｎ 公
中 卉 ２１・・ 国 ・ １４ ０ 科技
・１ ・
牛支原体 引起奶 牛乳房炎 的诊 断
彭清洁 ，胡长敏 ¨ ，陈颖钰 ，巴晓亮 ，白智迪 ，郭爱珍
（ ． 中农 业大 学动物 医学院 ， １ 华 武汉 ４ ０ ７ ；． 中农 业大 学农业微 生物 学 国家 重点实验 室 ， 汉 ３ ０ ０ ２华 武 ４ ０７ ） ３００ ４ ０７ ； ３ ０ ０
行 Ｐ Ｒ鉴 定 。Ｕ ｒ １和 Ｕ ｒ ２的序列 为 ： Ｃ ｖＣ ｖＣ
Ｕｖ Ｃｌ： Ｔ ｒ ｒ ５ ＡＡ Ｉ ＴＡＧＡＡＧＣ ＡＡＡ ＧＡＧＣ ３ ＴＩ Ｔ ＧＣ
Ｕｖ Ｃ２： ＣＡＴＡＴＣＴＡＧＧＴＣＡＡ１ｒ ｒ ５ Ｔ ＡＡＧＧＣ１Ｉｒ －丫Ｇ３
作 者 简 介 ： 清 洁 （９ ４ ） 男 ， 北 宜 昌 人 ， 科 ， 彭 １８一 ， 湖 本 主要 从 事 临 床 兽
治 愈而 淘汰 。经 实验 室确 诊该 场奶 牛所 患 疾病 为 牛
支 原 体乳 房 炎 ， 就 该奶 牛场 临 ห้องสมุดไป่ตู้发 病 与病 原 学 鉴 现 定 情况 报告 如 下 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 样 品 ．
吸 １１ ５ｘ 检奶样 涂 于 Ｐ Ｌ 固体 培养 基表 面 。 Ｌ待 ＰＯ 放 于含 ５ ％的 Ｃ ： Ｏ 的细胞 培养 箱 培养 。同时吸 ２ ｔ ０ｘ Ｌ 奶 样 投入 到 Ｐ Ｌ Ｐ Ｏ液体 培 养基 中 。２ ３ ｄ后 ， 光 学 在 显 微镜 下观 察菌 落形 态 。支原 体在 固体 培养 基上 菌
同菌 落形 态 的细 菌 ， 兰 氏染 色后 在 油 镜 下 观察 细 革 菌形态 ， 同时 刮取 少 量 细菌 按 同样 的方 法再 次 在 平 板 上进 行 纯培 养 。 １ 牛 支原 体 的培 养 ． ４
房炎 ， 愈 ２ 治 １头 ， 亡 １ 死 ５头 ， 其余 牛 由 于长 期 不 能
３ 国家 肉牛产 业技 术体 系疾 病控 制 功 能研 究室 ， ． 武汉
中图分类 号 ：８ ８ ３ 文献标 识 码 ： 文 章 编号 ：０ ４ ４ ６ （ ０ １ ０ — ０ １ ０ ￥５． ２ Ａ １ ０ — ２ ４ ２ １ ）４ ０ ０ — ３
摘 要 ： 支原 体 （ 牛
ｍ ｏ ｉ） 引起 成 年 牛乳房 炎和犊 牛肺 炎、 ０ｂ ｖ 是 ｓ 关节 炎 的主要病 原之 一 。本 文从 有乳房
１ ． 牛 支原体 的 Ｐ Ｒ鉴定 ６ Ｃ
精 氨 酸购 自上 海伯 奥 生物科 技 有 限公 司 。
收 稿 日期 ：０ ０ ０ — ８ ２ １ — ９ ２
基金项 目： 代农业（ 现 肉牛 ） 产业 技 术 体 系 专项 经 费 （ｙｙｘ ３ ） 助 。 ｎ ｃｔ一 ８ 资
用 特 异 性 引 物 Ｕ ｒ １和 Ｕ ｒ２对 牛 支 原 体 进 ｖＣ ｖＣ
近 期 购人 约 ３ ０头奶 牛 ， 后 有 １ ６头奶 牛 发 生 乳 ０ 先 ８
１３ 细 菌的分 离培 养 －
按 文献 吸 １ １ ５ Ｌ待 检奶 样 置 Ｔ Ａ 平 板 上划 线 ｘ Ｓ
涂抹 ， 培养 皿 倒置 于 ３ ｃ 温箱 内培 养 。过夜 培养 ７Ｉ ＝恒 后 观 察 划线 处 长 出的菌 落 形态 ， 种 环 小 心 刮取 不 接
落 应 具有 “ 煎蛋 样 ” 型 特 征 ， 典 液体 培 养 基 由红 色 变 为 黄色 ， 并且 透 亮 。
１ ． 收 集并 浓缩 牛 支原体 菌体 ５
湖 北 某 地 奶 牛场 无 菌 采 集 并 送 检 的 患 病 牛 奶
样 ３份 １ ． 培 养基 的制备 ２ 胰蛋 白胨大 豆琼 脂 （ ｒｐｏｅＳ ｙ ｇｒ Ｔ Ａ） Ｔｙ ｔｓ ｏ ａＡ ａ， Ｓ 按
１６ ９ １年 牛 支 原 体 （ ｃｐａｍ ｏ ｉ） 次 在 美 Ｍｙｏ ｌｓ ａｂ ｖｓ 首 国患 有乳 房炎 的病 牛 中分 离 到［ ” 。据 报道 ， 支原 体 牛 乳 房炎 给奶 牛业造 成 了 巨大 的损失 。湖 北某 奶牛 场
炎 临床 症 状 的奶牛 中采集 牛奶 样本 ， 细 菌培养 和 支原体 培 养 、 异性 Ｐ Ｒ 与环介 导 等温 扩增 （Ａ 经 特 Ｃ Ｌ ＭＰ扩增 ）
和 １ Ｓｒ Ｎ 测序 等病 原 学检 测证 实 为牛 支原体 感 染 ， 时还 有 其他 细 菌的混 合感 染 。 ６ Ａ Ｒ 同
取 新 培 养 的 牛支 原 体 菌 液 ５ ０ Ｌ于 １ ｍ ０￣ ． Ｌ灭 ５ 菌 Ｅ ｐ ｎ ｏｆ 中 ，２Ｏ ０／ ｎ离 心 １ ｍ ｎ 弃上 清 ， ｐ ｅ ｄｒ 管 １ ０ ｒ ｍｉ ５ ｉ， 沉 淀溶 于 ２ ０ ￣ 菌 ｄ Ｈ Ｏ 中。 水浴 １ｍｉ 立 ０ｐ Ｌ灭 ｄ 沸 ０ ｎ后 即 冰 浴 １ ２ ｉ ， Ｅ ｐ ｎ ｏｆ 冷 却 后 一 ０Ｃ 存 ～ ｒ ｎ 待 ｐ ｅ ｄｒ 管 ａ ２ ￣保 备用 。
医学 研 究 。
通 讯 作 者 ： 爱 珍 （９ ５ ， ， 南 源 江 人 ， 授 ， 士 ， 要 从 事 郭 １６ 一） 女 湖 教 博 主
牛传染性疾病研究 。
・
２・
Ｐ Ｒ 反 应 体 系 为 ２ ｔ 其 中 ： ｘ ａ ｘ ｒ Ｃ ０ｚ Ｌ， ２ ｔｑ Ｍｉｔ ｅ ｕ （ ｉ ｇ ｎ ｌ ， 物 Ｕ ｒ 和 Ｕ ｒ ２各 ０８ Ｌ 取 牛 Ｔａ ｅ ）０ Ｌ 引 ｎ ｖＣ１ ｖＣ ．ｔ ， ｘ
照试剂说 明配置 Ｔ Ａ固体培养基 及 Ｔ Ｂ液体培养基 。 Ｓ Ｓ 支 原 体 液 体 与 固体 培 养 基 的配 制 及 支 原 体 的 培 养 鉴 定 参 照文 献 ］ 培 养基 中未 加 １ ， 但 ％醋 酸 铊溶 液 。
ＰＬ Ｐ Ｏ肉汤粉 、 母粉 、 脂粉 等 购 自 Ｂ 酵 琼 Ｄ公 司 ， Ｍ ＭＥ 培养 基 购 自 Ｓｇ ｉ ｍａ公 司 ， 血清 购 自 Ｈ ｃｏ ｅ 司 ， 马 ｙ ｌｎ 公
中 卉 ２１・・ 国 ・ １４ ０ 科技
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牛支原体 引起奶 牛乳房炎 的诊 断
彭清洁 ，胡长敏 ¨ ，陈颖钰 ，巴晓亮 ，白智迪 ，郭爱珍
（ ． 中农 业大 学动物 医学院 ， １ 华 武汉 ４ ０ ７ ；． 中农 业大 学农业微 生物 学 国家 重点实验 室 ， 汉 ３ ０ ０ ２华 武 ４ ０７ ） ３００ ４ ０７ ； ３ ０ ０
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Ｕｖ Ｃｌ： Ｔ ｒ ｒ ５ ＡＡ Ｉ ＴＡＧＡＡＧＣ ＡＡＡ ＧＡＧＣ ３ ＴＩ Ｔ ＧＣ
Ｕｖ Ｃ２： ＣＡＴＡＴＣＴＡＧＧＴＣＡＡ１ｒ ｒ ５ Ｔ ＡＡＧＧＣ１Ｉｒ －丫Ｇ３
作 者 简 介 ： 清 洁 （９ ４ ） 男 ， 北 宜 昌 人 ， 科 ， 彭 １８一 ， 湖 本 主要 从 事 临 床 兽
治 愈而 淘汰 。经 实验 室确 诊该 场奶 牛所 患 疾病 为 牛
支 原 体乳 房 炎 ， 就 该奶 牛场 临 ห้องสมุดไป่ตู้发 病 与病 原 学 鉴 现 定 情况 报告 如 下 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 样 品 ．
吸 １１ ５ｘ 检奶样 涂 于 Ｐ Ｌ 固体 培养 基表 面 。 Ｌ待 ＰＯ 放 于含 ５ ％的 Ｃ ： Ｏ 的细胞 培养 箱 培养 。同时吸 ２ ｔ ０ｘ Ｌ 奶 样 投入 到 Ｐ Ｌ Ｐ Ｏ液体 培 养基 中 。２ ３ ｄ后 ， 光 学 在 显 微镜 下观 察菌 落形 态 。支原 体在 固体 培养 基上 菌
同菌 落形 态 的细 菌 ， 兰 氏染 色后 在 油 镜 下 观察 细 革 菌形态 ， 同时 刮取 少 量 细菌 按 同样 的方 法再 次 在 平 板 上进 行 纯培 养 。 １ 牛 支原 体 的培 养 ． ４
房炎 ， 愈 ２ 治 １头 ， 亡 １ 死 ５头 ， 其余 牛 由 于长 期 不 能
３ 国家 肉牛产 业技 术体 系疾 病控 制 功 能研 究室 ， ． 武汉
中图分类 号 ：８ ８ ３ 文献标 识 码 ： 文 章 编号 ：０ ４ ４ ６ （ ０ １ ０ — ０ １ ０ ￥５． ２ Ａ １ ０ — ２ ４ ２ １ ）４ ０ ０ — ３
摘 要 ： 支原 体 （ 牛
ｍ ｏ ｉ） 引起 成 年 牛乳房 炎和犊 牛肺 炎、 ０ｂ ｖ 是 ｓ 关节 炎 的主要病 原之 一 。本 文从 有乳房
１ ． 牛 支原体 的 Ｐ Ｒ鉴定 ６ Ｃ
精 氨 酸购 自上 海伯 奥 生物科 技 有 限公 司 。
收 稿 日期 ：０ ０ ０ — ８ ２ １ — ９ ２
基金项 目： 代农业（ 现 肉牛 ） 产业 技 术 体 系 专项 经 费 （ｙｙｘ ３ ） 助 。 ｎ ｃｔ一 ８ 资
用 特 异 性 引 物 Ｕ ｒ １和 Ｕ ｒ２对 牛 支 原 体 进 ｖＣ ｖＣ
近 期 购人 约 ３ ０头奶 牛 ， 后 有 １ ６头奶 牛 发 生 乳 ０ 先 ８
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按 文献 吸 １ １ ５ Ｌ待 检奶 样 置 Ｔ Ａ 平 板 上划 线 ｘ Ｓ
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落 应 具有 “ 煎蛋 样 ” 型 特 征 ， 典 液体 培 养 基 由红 色 变 为 黄色 ， 并且 透 亮 。
１ ． 收 集并 浓缩 牛 支原体 菌体 ５
湖 北 某 地 奶 牛场 无 菌 采 集 并 送 检 的 患 病 牛 奶
样 ３份 １ ． 培 养基 的制备 ２ 胰蛋 白胨大 豆琼 脂 （ ｒｐｏｅＳ ｙ ｇｒ Ｔ Ａ） Ｔｙ ｔｓ ｏ ａＡ ａ， Ｓ 按