主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
临床检验技师临床免疫学和免疫检验免疫原和抗血清的制备练习题
临床检验技师临床免疫学和免疫检验免疫原和抗血清的制备练习题临床免疫学是研究机体免疫功能及其与疾病关系的学科。
免疫学检验是通过测定机体内和外的抗原和抗体来判断机体免疫状态和发现病理性免疫反应的一种方法。
其中，免疫原和抗血清的制备是免疫学检验中的基础工作，为保证检测的准确性和可靠性尤为重要。
免疫原的制备是指将免疫系统能够识别和应答的物质（如细菌、病毒、蛋白质等）引入人体，诱导机体产生相应的免疫应答，制备免疫系统产生特异性抗体或细胞免疫应答。
制备免疫原的方法有多种，其中最常见的方法是利用化学方法将地壳元素、有机化合物转变成具有免疫原性的物质。
例如，制备蛋白质免疫原时，可以使用化学交联剂将蛋白质与载体结合，增加蛋白质的免疫原性。
此外，还可以通过部分水解、脱脂、酸碱处理等方法改变蛋白质的结构，增加其免疫原性。
另外，合成多肽也可以作为免疫原使用。
与免疫原制备相对应的是抗血清的制备。
抗血清是在动物体内免疫原的作用下产生的特异性抗体。
制备抗血清的原理是通过将免疫原引入动物体内，刺激机体产生免疫应答，最终获得具有特异性的抗体。
制备抗血清的步骤如下：1.选择合适的动物，如小鼠、兔子、大鼠等，通常选择与免疫原种属不同的物种，以避免交叉反应。
2.注射免疫原进入动物体内，通过合适的途径（如肌肉注射、皮下注射、腹腔注射等）给予适当的剂量。
3.在注射免疫原后，按照一定的时间间隔和剂量，反复免疫动物，增强免疫效果。
4.采集动物的血清，分离其中的抗体。
制备抗血清时需要注意以下几点：1.免疫原的选择和制备要合理，免疫方法要科学可靠，以提高抗体的特异性和亲和力。
2.动物的选择要适当，充分考虑其免疫应答能力、个体差异等因素。
3.在免疫过程中要注意动物的健康状况，避免感染和其他不良反应。
4.采集抗血清时要注意操作的无菌和无酶条件，确保采集到的抗体质量良好。
免疫原和抗血清的制备是临床免疫学和免疫检验中的重要环节，其质量直接影响到后续免疫学检验的准确性和灵敏度。
临床检验免疫主管 (3)
临床检验免疫主管 (3)临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
免疫原相当于抗原。
一.颗粒性抗原的制备颗粒性抗原：各种细胞.细菌.寄生虫。
1.细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
2.细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法，较少加佐剂作皮内注射二.可溶性抗原的制备和纯化（一）可溶性抗原的制备蛋白质.糖蛋白.脂蛋白.酶.补体.细菌毒素.免疫球蛋白片段.核酸等皆为良好的可溶性抗原，免疫前常需提取和纯化。
1.组织细胞抗原的制备细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法（2）研磨法，可用组织匀浆器或乳钵2.组织细胞或培养细胞可溶性抗原制备第一步单个细胞获得的方法（1）机械捣碎（2）酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶第二步细胞破碎方法有：（1）反复冻融法：一般—20℃反复冻融。
（2）超声破碎法：利用超声波机械振动原理使细胞破碎。
（3）自溶法：利用组织.细菌自身酶系统使之裂解。
（4）酶处理法，常用溶菌酶.蜗牛酶.纤维素酶（5）表面活性剂处理法：常用二烷基硫酸钠等表面活性剂处理。
3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段.Fc片段.轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清（1）非共价键解离法：温和条件下离析亚单位，如改变pH；用盐酸胍或脲等强变性剂将亚单位分开。
（2）共价键解离法：用还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：用溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法1）木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段2）胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab’）2片段及数个小片段3）胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链（二）可溶性抗原的纯化1.超速离心法仅适用于少数大分子抗原及一些比重较轻的抗原，而不适用于大多数中小分子抗原。
临床免疫学检验技术考试题库及答案(三)
临床免疫学检验技术考试题库及答案1. 免疫监视功能低下时易发生（）。
A．自身免疫病B．超敏反应C．肿瘤D．免疫缺陷病E．移植排斥反应答案C解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。
2. 免疫自稳功能异常可发生（）。
A．病毒持续感染B．肿瘤C．超敏反应D．自身免疫病E．免疫缺陷病答案D解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。
3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。
A．树突状细胞B．巨噬细胞C．中性粒细胞D． B细胞E． T细胞答案B解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。
4. 免疫应答过程不包括（）。
A． T细胞在胸腺内分化成熟B． B细胞对抗原的特异性识别C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E．效应细胞和效应分子的产生和作用答案A解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。
5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。
A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官C．是免疫应答发生的场所D．是免疫细胞发生和成熟的场所E．是所有淋巴细胞定居的场所答案D解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。
5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。
A． C1B． C3C． C4D． C5E． C4Bp答案B解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。
7. 细胞因子不包括（）。
A．单核因子B．淋巴因子C．生长因子D．抗体E．集落刺激因子答案D解析细胞因子是生物活性的小分子多肽，抗体不是。
8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为（）。
A． IgMB． IgAC． IgGD． IgEE． IgD答案C解析IgG是体内抗感染的最主要的抗体。
临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备讲义
临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备讲义第三章免疫原和抗血清的制备概述：免疫学的研究主要涉及到两个重要的组分：免疫原和抗血清。
免疫原是引发免疫反应的物质，抗血清则是由免疫反应产生的抗体。
制备免疫原和抗血清是研究免疫学的基础，也是开展临床免疫学和免疫检验的前提。
一、免疫原的制备1.病原体免疫原的制备（1）整活病原体的制备：将病原体培养至足够数量，收集后经过消毒杀菌处理，用于动物免疫或制备抗血清。
（2）灭活病原体的制备：将病原体培养至足够数量，用热、化学物质或辐射等方法使其失去活性，避免感染动物或人员，用于动物免疫或制备抗血清。
（3）病原体抗原的提取和纯化：通过培养病原体，收集其代谢产物，经过提取、纯化等步骤得到纯净的抗原物质。
2.细胞免疫原的制备（1）原代细胞制备：从动物或人体中采集组织或器官，通过细胞培养技术将细胞分离并进行传代，得到大量的细胞用于动物免疫或制备抗血清。
（2）细胞株制备：将细胞分离后，在适当的培养环境中进行无限传代，得到大量同源的细胞，用于动物免疫或制备抗血清。
（3）细胞裂解物制备：将细胞离心沉淀后，用适当的缓冲液裂解细胞释放细胞内的免疫原物质，进行纯化处理后得到制备的免疫原。
3.蛋白质免疫原的制备（1）从细胞裂解物中分离：将细胞裂解，经过离心等步骤得到细胞内的蛋白质物质，可以经过分子筛、电泳等技术得到纯净的蛋白质免疫原。
（2）基因工程蛋白质的制备：利用克隆技术将目标蛋白质的基因导入到表达系统中，通过大量表达和纯化，得到目标蛋白质。
二、抗血清的制备抗血清是由免疫原引发的免疫反应产生的抗体。
下面介绍几种常见的抗血清制备方法。
1.动物抗血清的制备选择适宜的动物（如小鼠、兔子、小鸡等），先注射免疫原，然后通过多次免疫，免疫记忆细胞对免疫原做出反应，最后采集动物血液得到抗血清。
2.单克隆抗体的制备将B细胞与病原体或免疫原细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞能够无限制地分裂，并能够产生单一抗体。
2024年主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
1.免疫原的定义和分类2.免疫原的制备方法(1)分离纯化法：通过分离、提取和纯化病原体或其他免疫原物质，得到纯净的免疫原。
(2)生物合成法：通过重组DNA技术或合成化学方法，产生具有免疫原性的物质。
(3)化学修饰法：通过对免疫原物质进行化学修饰，使其具有较强的免疫原性。
(4)特异抗原表达法：将目标抗原的基因导入表达宿主中，使宿主细胞内产生该抗原，并通过表达产物进行免疫。
3.抗血清的制备方法(1)动物免疫法：将免疫原注射给动物，刺激其产生抗体，收集动物体内的抗体血清作为抗血清。
(2)体外免疫法：将免疫原与体外培养的淋巴细胞或骨髓细胞等进行细胞融合，产生混合细胞瘤细胞，该细胞具有免疫能力，可大量产生抗体。
(3)重组技术法：通过将重组DNA导入真核细胞，使细胞表达抗原表位，收集细胞培养上清液得到抗血清。
4.抗血清的性质与应用(1)抗血清的性质：抗血清含有一种或多种单克隆抗体或多克隆抗体，具有特定性和亚型特异性。
(2)抗血清的应用：抗血清可用于免疫组化检测、免疫印迹、免疫染色、酶联免疫吸附分析、流式细胞术等临床检验技术中。
同时，抗血清还可以用于治疗疾病、研究疾病发生机制以及制备诊断试剂等。
5.免疫原和抗血清的质量控制(1)免疫原的质量控制：免疫原的质量控制应包括其纯度、活性、稳定性和安全性等方面的检验。
(2)抗血清的质量控制：抗血清的质量控制包括对其纯度、特异性、活性、稳定性等方面的检验，同时还需进行反应特异性和特异性等的检测。
6.免疫原和抗血清的保存和保管(1)免疫原的保存：免疫原需要在低温和干燥的条件下保存，以保持其稳定性和活性。
(2)抗血清的保管：抗血清需储存在冷库中，以确保其长期保存时不发生抗体失活和细菌污染，同时还需注意避免光照和震荡等不良影响。
本章介绍了免疫原和抗血清的制备方法、性质与应用，以及质量控制与保存保管的要点。
了解免疫原和抗血清的制备与使用对临床检验工作具有重要意义，有助于提高免疫学和免疫检验技术的应用水平。
临床检验技师临床免疫学和免疫检验免疫原和抗血清的制备练习题
临床检验技师临床免疫学和免疫检验免疫原和抗血清的
制备练习题
一、问答题（每题10分，共计50分）
1.什么是免疫原？如何制备免疫原？
2.什么是抗血清？如何制备抗血清？
3.免疫原与抗血清的制备有哪些常见问题？如何防止和解决这些问题？
4.请简要介绍多克隆抗体的制备方法。
5.在实验室中，为了免疫原和抗血清的保存和贮存，有哪些注意事项？
二、案例分析题（每题20分，共计40分）
1.研究人员希望制备一种特异性抗体来检测乙型肝炎病毒（HBV）感染。
请设计一个实验方案，包括免疫原的制备和抗血清的制备步骤。
2.实验室需要制备一种可用于检测甲型流感病毒（IAV）的特异性抗体。
请设计一个实验方案，包括免疫原的制备和抗血清的制备步骤。
三、综合分析题（40分）
近年来，随着免疫学和免疫检验技术的不断发展，越来越多的免疫治
疗方法被应用于临床。
请结合你的学习和实践经验，分析免疫原和抗血清
的制备对于免疫治疗的重要性，并提出你的观点和建议。
写作要求：
1.文档需要包含以上所有问题的答案，并按照每个问题给出相应的分值。
2.对于每个问题，要提供详细的解释和相关实例，确保文档内容完整。
3.综合分析题需要具备一定的学术深度和逻辑性，可以引用相关研究
和资料支持观点和建议。
4.文档字数要求不少于1500字，结构清晰，语言准确，无语法和拼
写错误。
第3章免疫原和抗血清的制备
二、免疫程序
免疫原的剂量
中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 特异性要求高，应小量短程，可溶性抗原加用佐剂。对效价 要求高，则可大量长程加佐剂。
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
一、特异性IgG抗体
盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维 素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层 析柱
二、单价特异性抗血清
亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱 吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗
使包膜的渗透压改变而溶解。
优点是: 作用温和 适用于:破碎细菌、破碎细胞（提取核酸)
3、免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变 性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶
IgG片段的制备
1.酶裂解法：
IgG
木瓜酶
Fc+2Fab
Fc段可用于制备抗重链血清。
透析除去未反应
的半抗原
得人工免疫原 （半抗原+载体）
2.戊二醛法：
半抗 原氨 基
N-CH-(CH2)3-CH-N
载体 氨基
第二节 免疫佐剂
免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与 抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原 的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质 称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。
小结
免疫原是诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的 物质。半抗原是指仅有抗原性而无免疫原性的物质， 与载体结合后可具有免疫原性。
2021临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》讲义精讲
第一章概述考试科目：1.基础知识2.相关专业知识3.专业知识4.专业实践能力考试题型：1.A1型题（最佳选择题）2.A2型题（病历摘要型最佳选择题）3.A3型题（病历组摘要型最佳选择题）4.B型题（配伍题）辅导重点1.找出重点即考点2.360度掌握考点3.结合题型攻破考点花最少的时间，收获最多的知识和能力通过考试是硬道理第一章概述第一节免疫学简介第二节临床免疫学第三节临床免疫学与临床检验第一节免疫学简介一、免疫学概念与免疫应答二、免疫组织与器官三、免疫细胞四、免疫分子一、免疫学概念与免疫应答的基本概念（一）免疫是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能（二）免疫应答是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程1.识别阶段是巨噬细胞等抗原递呈细胞对外来抗原或自身变性抗原进行识别、摄取、降解和递呈抗原信息给T辅助细胞（THc）及相关淋巴细胞的阶段。
2.活化阶段是T、B淋巴细胞在接受抗原信号后，在一系列免疫分子的参与下，发生活化、增殖、分化的阶段。
由于T细胞和B细胞表面表达的细胞膜受体不同，所以对抗原的识别具有严格的特异性。
B细胞接受抗原刺激后活化、增殖、分化为浆细胞，T细胞在接受抗原刺激和协同刺激双信号后活化、增殖、分化为效应细胞。
3.效应阶段是浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫功能。
T细胞中的Th细胞分泌细胞因子等效应分子，T杀伤细胞执行细胞毒效应功能。
另有少量T细胞和B细胞在增殖分化后，不直接执行效应功能，而作为记忆细胞。
当其再次遇到相同抗原时，迅速活化、增殖、分化为效应细胞，执行高效而持久的特异性免疫效应功能。
（三）免疫系统的三大功能1.免疫防御2.免疫自稳3.免疫监视二、免疫组织与器官（一）中枢免疫器官1.骨髓骨髓是重要的造血器官，是成年人和动物所有血细胞及淋巴细胞的发源地，多能造血干细胞（HSC）在骨髓中增殖，生成更多的HSC。
HSC分化、发育、成熟为各种血细胞，骨髓是从HSC分化发育为功能性B细胞的唯一器官。
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-免疫原和抗血清的制备复习资料汇编
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-免疫原和抗血清的制备复习资料汇编一、免疫原和抗血清的制备抗原和抗体是免疫反应的基本条件也是免疫检验的两大重要因素。
抗原是制备特异性抗体的前提条件，抗体可用于纯化抗原和检测抗原，也是医学检验中用于疾病诊断和研究的重要物质。
（一）颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞抗原和细菌抗原,制备的方法较简单,通过分离或纯培养即可得到。
1.细胞抗原——绵羊红细胞。
2.细菌抗原——菌体O抗原。
（二）可溶性抗原的制备可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。
1.组织可溶性抗原的粗提2.可溶性抗原的纯化3.纯化抗原的鉴定（三）组织可溶性抗原的粗提1.组织均浆的制备：高速组织捣碎机法、研磨法；2.细胞的破碎：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法。
（四）可溶性抗原的提取和纯化1.超速离心法；2.选择性沉淀法：核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法；3.凝胶过滤法；4.离子交换层析法；5.亲和层析法；6.电泳法。
（五）纯化抗原的鉴定主要包括蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定等。
二、半抗原性免疫原的制备半抗原只具有抗原性而无免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分子量的药物等。
半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原性。
（一）载体1.蛋白质类：牛血白蛋白等；2.多肽聚合物：多聚赖氨酸等；3.大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯吡咯烷酮等。
（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硫酸葡聚糖、羧甲基纤维素等。
2.化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。
如碳二亚胺法、戊二醛法等。
（三）半抗原性免疫原的鉴定与载体结合的半抗原数目与免疫原性密切相关。
所以，应测定半抗原与载体的比例，方法有：①吸收光谱分析法：②放射性核素标记半抗原渗入法。
三、免疫佐剂指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答的物质。
初级检验技师临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备
初级检验技师临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗
血清的制备
免疫原和抗血清的制备是临床免疫学和免疫检验中非常重要的一环。
免疫原是指引起机体免疫反应的物质，而抗血清是指从动物体内提取的具有特定抗原结合能力的血清。
制备免疫原和抗血清的目的是为了研究免疫学和进行免疫诊断。
一、免疫原的制备
1.天然免疫原的制备
2.人工合成免疫原的制备
人工合成免疫原是通过人工手段合成或改造蛋白质、多肽、核酸或多糖等，以模拟天然免疫原的结构和功能。
常用方法有化学合成、酶切、递归合成等。
1.抗原免疫动物的选择
在制备抗血清之前，首先需要选择合适的动物作为免疫对象。
常用的动物有小鼠、兔、大鼠等。
选择免疫动物时需要考虑其抗原性、稳定性以及生产抗血清的成本和效果等因素。
2.免疫程序
免疫程序分为原位免疫和外位免疫两种。
原位免疫是将免疫原直接注入动物体内，常见的方法有肌肉注射、皮下注射、腹腔注射等。
外位免疫是将免疫原注射到免疫动物前肢的足底或韧带等处，以提高免疫效果。
3.抗血清的采集和分离
免疫程序完成后，可以采集免疫动物的血清进行进一步处理。
采集血清时可以使用静脉置管或心脏穿刺等方法。
采集到的全血需要经过离心分离得到血清，然后经过过滤和冷藏等步骤进行保存。
4.抗血清的纯化
为了获得纯净的抗血清，需要对采集到的血清进行纯化处理。
常用的方法有硫酸铵沉淀、硫酸沉淀、亲和层析、凝胶过滤等。
通过这些方法，可以去除血清中的不想要的成分，得到高纯度的抗血清。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(免疫原和抗血清的
临床医学检验技师初级（师）临床免疫学及检验（免疫原和抗血清的制备）模拟试卷1(题后含答案及解析)题型有：1. A1型题 2. B1型题 3. B1型题 4. B1型题1．组织和细胞粗抗原制备方法不包括A．机械破碎法B．超声破碎法C．酶处理法D．表面活性剂法E．ELISA法正确答案：E解析：常见破碎法包括物理性的机械破碎法、超声破碎法、一20℃的反复冻融法等，也有生物化学类的酶处理法、自溶法和表面活性剂处理法等。
ELISA 法为常用的免疫学检测方法。
知识模块：免疫原和抗血清的制备2．下列属于可溶性抗原的是A．绵羊红细胞B．家兔红细胞C．鼠伤寒沙门菌D．细菌毒素E．鞭虫卵正确答案：D解析：常见的颗粒性抗原包括各种细胞、细菌、寄生虫；常见的可溶性抗原包括各种蛋白质、核酸、细菌毒素等。
知识模块：免疫原和抗血清的制备3．从免疫血清中粗提γ球蛋白最简便的方法为A．亲和层析B．离子交换层析C．凝胶过滤D．超速离心E．硫酸铵盐析正确答案：E解析：免疫球蛋白纯化的方法很多，有单一法，但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵盐析为基础，再经过层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分的纯度最为常用。
知识模块：免疫原和抗血清的制备4．以下具有免疫原性的佐剂是A．石蜡油B．羊毛脂C．磷酸钙D．卡介苗E．表面活性剂正确答案：D解析：卡介苗是结核杆菌经过反复的减毒、传代后，使细菌逐渐失去了致病力，最后制成减毒活疫苗，但仍具有免疫原性，人体接种后，使机体产生对结核的免疫力。
知识模块：免疫原和抗血清的制备5．常用的亲和层析支持物不包括A．琼脂糖珠B．琼脂糖C．聚丙乙烯酰胺D．多空玻璃球E．聚氯乙烯(PVC)保鲜膜正确答案：E解析：常用的亲和层析支持物有琼脂糖珠、琼脂糖、聚丙乙烯酰胺、多空玻璃球，不包括聚氯乙烯(PVC)保鲜膜。
知识模块：免疫原和抗血清的制备6．纯化抗原的纯度鉴定方法不包括A．SDS-PAGEB．毛细管电泳C．醋酸纤维素膜电泳D．高效液相层析法E．双向免疫扩散法正确答案：E解析：常用的纯化抗原的纯度鉴定方法包括SDS-PAGE法、毛细管电泳法、醋酸纤维素膜电泳法、高效液相层析法，而双向免疫扩散法属于免疫活性的鉴定法。
临床医学检验临床免疫技术：免疫原和抗血清制备题库
临床医学检验临床免疫技术：免疫原和抗血清制备题库1、单选抗体特异性鉴定常采用（）A.对流免疫电泳和区带电泳B.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法C.火箭电泳和血凝法D.凝胶电泳和血凝法E.双向免疫扩（江南博哥）散法正确答案：E参考解析：抗体特异性鉴定常采用双向免疫扩散法；抗体的效价的鉴定常采用双向免疫扩散法；抗体的纯度鉴定常用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。
考点：抗血清的鉴定和保存2、单选为提取高纯度特异性IgG通常采用的方法是（）A.超速离心B.区带电泳C.亲和层析D.选择性沉淀E.凝胶过滤正确答案：C3、单选提取高纯度特异性IgG的方法是（）A.亲和层析B.离子交换层析C.凝胶过滤D.超速离心法E.血清区带电泳正确答案：A4、单选沉淀免疫复合物所用PEC6000浓度为（）A.3％～4％B.6％～7％C.8％～12％D.12％～15％E.25％正确答案：A5、单选测定某一种组织抽提物的蛋白质含量，用（）A.双缩脲法B.凯氏定氮法C.酚试剂法D.紫外分光光度法E.染料结合法正确答案：C6、单选制备人血清蛋白与弗氏完全佐剂的乳化抗原时，两者比例最好为（）A.1：1B.2：1C.3：1D.4：1E.0.5：1正确答案：A参考解析：制备人血清蛋白与弗氏完全佐剂的乳化抗原时，两者比例为1：1。
7、单选分离亚细胞成分或大分子蛋白质最常用的方法为（）A.超速离心法B.低速离心法C.高速离心法D.选择性沉淀法E.凝胶过滤法正确答案：A8、单选欲鉴定抗原是否纯化应采用下列哪种方法（）A.单向免疫扩散法B.血凝法C.沉淀试验D.免疫电泳法E.补体结合试验正确答案：D参考解析：纯化抗原的鉴定：主要对纯化抗原的含量、理化性质、纯化及免疫活性进行鉴定，常用方法有酚试剂法、聚丙烯酰凝胶电泳法、免疫电泳法、免疫双扩散法等9、单选长期保存细胞的温度为（）A.－196°FB.－85°FC.－196℃D.－85℃E.20℃正确答案：C参考解析：长期保存细胞的技术要求：液氮深低温（－196℃）环境，加入二甲亚砜为保护剂。
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备1.免疫原的制备免疫原是诱导免疫反应的物质，常用的免疫原有细菌、病毒、细胞组分、蛋白质等。
免疫原的制备需要经过以下几个步骤：(1)选择合适的免疫原：根据实验目的选择合适的免疫原，使其能够诱导出所需的免疫反应。
(2)免疫原的提取和纯化：根据免疫原的性质选择合适的提取和纯化方法，常见的方法有渗透法、离心法、电泳法等。
(3)免疫原的灭活：对一些病原体免疫原进行灭活，以避免使用活病原体引起感染。
(4)免疫原的标记：为了方便检测免疫原是否存在或定量测定其浓度，常常需要对免疫原进行标记，常见的标记方法有荧光标记、酶标记等。
抗血清是由动物接种免疫原后产生的抗体混合物，用于检测和分离相应的抗原。
抗血清的制备需要经过以下几个步骤：(1)动物的选择和免疫程序的制定：根据实验目的选择合适的动物种类和免疫程序，并对免疫程序进行优化。
(2)免疫原的接种：将免疫原注射到动物体内，激发其免疫系统产生抗体。
(3)血清的采集：在免疫原接种后一定时间内采集动物的血清，其中含有抗体。
(4)抗体的纯化和储存：从血清中提取抗体，常见的方法有硫酸铵沉淀、蛋白A/G纯化等。
提取的抗体要进行储存，常用的储存方法有冷冻保存、低温干燥等。
3.免疫原和抗血清的应用免疫原和抗血清在临床免疫学和免疫检验中有广泛的应用。
其中包括：(1)免疫学研究：利用免疫原和抗血清可以研究机体对抗原的免疫反应过程，探索免疫机制和疾病的发生发展规律。
(2)临床诊断：利用抗血清可以检测人体液中的抗原，从而判断是否感染其中一种病原体或患有其中一种疾病。
(3)药物研发和药物监测：利用免疫原和抗血清可以筛选药物靶点，研发新药或进行药物治疗监测。
(4)食品安全监测：利用抗血清可以检测食品中的有害物质或致病微生物，确保食品安全。
总结：免疫原和抗血清的制备是临床检验技师在开展免疫学和免疫检验工作中的基础性工作之一、免疫原的制备需要选择合适的免疫原、提取纯化并标记，而抗血清的制备需要选择合适的动物、制定免疫程序并采集血清，然后对抗体进行纯化和储存。
免疫学和免疫学检验：免疫原和抗血清的制备
免疫学和免疫学检验：免疫原和抗血清的制备抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素，也是整个免疫反应的基本条件。
抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件，制得的抗体可用于纯化抗原和检测抗原。
抗体有单克隆和多克隆两类。
抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素，也是整个免疫反应的基本条件。
抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件，制得的抗体可用于纯化抗原和检测抗原。
抗体有单克隆和多克隆两类。
单克隆抗体用杂交瘤技术制备（详见第十一章），多克隆抗体存在于免疫动物抗血清中。
近年来又出现了基因工程抗体（单链抗体）。
本章仅叙述抗原纯化和多克隆抗血清制备技术。
第一节免疫原的制备免疫原是诱导机体产生抗体、并能与抗体发生反应的物质。
能否制得合格的抗体由许多因素决定，而能否制备合格的免疫原则是其前提条件。
而且作为诊断试剂的抗原也必须是单一特异性的，即纯化的抗原。
自然众多的物质皆可成为免疫原，但绝少是单一成分（除非是合成的基因工程制备的），所以必须将某个抗原从复杂的组分中提取出单一的成分。
下面介绍有代表性的免疫原制备方法。
一、颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞抗原或细菌抗原。
最常用的细胞抗原为制备溶血素用的绵羊红细胞。
这种抗原制备比较简单，采集新鲜绵羊红细胞，以无菌盐水洗涤3次（每次离心2000r/min10min），最后配成106/ml浓度的细胞悬液，即可应用。
细菌抗原多用液体或固体培养物经集菌后处理。
H抗原用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理，而O抗原则需要100℃加温2～2.5h后应用。
Vi抗原则应在杀菌后再加0.5％～1％氯化钙溶液。
有时虫卵也可做成抗原，如日本血吸虫卵抗原可制成悬液供免疫用。
有些细胞膜成分，如组织细胞膜、血细胞膜经打碎后亦可制成颗粒抗原。
颗粒抗原悬液呈乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少使用佐剂作皮内注射。
二、可溶性抗原的制备和纯化蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、细菌毒素、酶、补体等皆为良好的可溶抗原。
但因这些蛋白质多为复杂的蛋白组分，免疫前需进行纯化。
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第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1.组织匀浆的制备通常需要先将来源于人和动物的组织和细胞破碎，再经一定的方法纯化，才能获得所需的抗原。
细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2.细胞的破碎除上述机械捣碎获取外，尚有酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶，可获得游离的单个细胞。
细胞抗原分膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）、细胞核与核膜抗原，制备这些抗原前均需将细胞破碎，方法有：（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab 片段、Fc片段、轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清。
制备方法有：（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂（2）共价键解离法（3）溴化氰裂解法（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶.木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段；胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab′）2个片段及数个小片段；胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化1.超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
2.选择性沉淀法：选择沉淀法是采用各种沉淀剂或某些条件使抗原成分沉淀的方法。
核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法。
其中盐析法是最常被采用，通过硫酸铵使蛋白抗原进行初筛，提取丙种球蛋白及进行抗原浓缩。
3.凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
4.离子交换层析法：根据所带电荷不同进行纯化分离。
5.亲和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
6.电泳法：蛋白质在同一pH环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定1.蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定280nm和260nm的吸光度（A）值。
2.分子量测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法、凝胶过滤法等。
3.纯度鉴定采用醋酸纤维膜电泳、SDS-PAGE、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析法等。
4.免疫活性鉴定采用双向免疫扩散法、免疫电泳法或ELISA法等。
三、半抗原性免疫原的制备半抗原指只具有抗原性而无免疫原性的物质。
多见于分子量小于4000的有机物质。
半抗原与载体相结合具有免疫原性。
（一）载体1.蛋白质：以牛血白蛋白最常见2.多肽聚合物：常用多聚赖氨酸3.大分子聚合物和某些颗粒聚乙烯吡咯烷酮、药用炭、羧甲基纤维素等皆常用。
（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原。
2.化学方法：通过功能基团将半抗原与载体连接。
带有游离氨基或游离羧基以及两种基团都有的半抗原，如多肽激素类（脑啡肽、促胃液素、前列腺素等），可直接与载体连接。
连接方法有碳二亚胺法、戊二醛法、混合酸酐法和过碘酸氧化法。
无羧基和氨基的半抗原，如醇、酚、糖、多糖、核苷以及甾族激素等，它们不能直接与载体连接，需要用化学方法使其转变为带有游离氨基或游离羧基的衍生物后才能与载体连接。
依据半抗原的性质有如下4种方法：（1）琥珀酸酐法（2）O-（羧甲基）羧胺法（3）一氯醋钠法（4）重氮的对氨基苯甲酸法（三）半抗原性免疫原的鉴定20个以上半抗原连接在一个载体分子上，才能有效刺激免疫动物产生抗体。
第二节免疫佐剂一、佐剂的种类1.化合物：包括氢氧化铝、矿物油、吐温-80、弗氏不完全佐剂（羊毛脂与液状石蜡的混合物）以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸、脂质体等。
2.生物制剂：①经处理改造的细菌及其代谢产物，如卡介苗、脂多糖（LPS）和类脂A、源于分枝杆菌的胞壁酰二肽等；②细胞因子及热休克蛋白等。
最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂，弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂（弗氏不完全佐剂加卡介苗）和弗氏不完全佐剂两种。
使用时加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原与佐剂形成油包水乳剂。
佐剂和抗原的比例为1:1。
乳化的方法有两种：①研磨法。
②搅拌混合法：本法优点是无菌操作，节省抗原或佐剂，且可用此注射器直接注射。
缺点是不易乳化完全。
二、佐剂的作用机制1.改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，从而更有效地刺激免疫系统；2.刺激单核-巨噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力；3.刺激淋巴细胞增殖和分化；4.改变抗体的产生类型和诱导迟发型超敏反应。
第三节抗血清的制备抗血清的制备是将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体。
采集动物血液，分离含有抗体的血清，即为抗血清。
一、免疫动物的选择常用的有家兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。
1.抗原来源与动物种属差异越大，免疫原性越强，免疫效果越好。
2.抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物。
抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物。
3.抗血清分为R型和H型抗血清来源合适范围用途R型家兔等小动物较宽诊断试剂H型马等大动物较窄免疫治疗4.对于蛋白质抗原大部分动物皆适合，常用的是山羊和家兔。
在某些动物体内有类似物质时，蛋白质抗原对这些动物免疫原性极差，如IgE对绵羊、胰岛素对家兔、多种酶类对山羊，免疫后均不易产生抗体。
二、免疫程序1.免疫原的剂量：由免疫原性的强弱、动物的个体状态和免疫时间确定。
免疫原剂量过大或过小都可使动物产生免疫耐受，在一定剂量范围内，免疫原剂量越大，产生的抗体效价越高。
2.免疫途径：有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径。
皮内或皮下免疫时一般采用多点注射。
初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。
宝贵抗原可选择淋巴结内微量注射法。
3.间隔时间：首次免疫后，因机体正处于识别抗原和进行B细胞活化增殖阶段，如果很快进行第2次注入抗原，极易造成免疫抑制。
若间隔时间太长，则剌激减弱，抗体效价不高。
第1次与第2次免疫间隔时间以10～20天为好，第3次及以后的间隔一般为7～10天。
三、动物采血法动物经免疫3～5次后，如抗血清鉴定合格，应在末次免疫后5～7天及时采血。
目前较常用的动物采血方法有3种：颈动脉采血法；心脏采血法；静脉采血法。
颈动脉采血法该法最常用，适用于家兔、绵羊、山羊等动物。
用颈动脉采血最多可获70～80ml，—般有50ml左右。
心脏采血法此法多用于家兔、豚鼠、大鼠和鸡等动物。
1只家兔1次可取血20～30ml。
静脉采血法家兔可用耳中心静脉采血，山羊和绵羊可用颈静脉采血。
动物采血后，应尽快分离血清，分离血清的方法常采用室温自然凝固，然后置37℃或4℃使血块收缩后，收集血清。
第四节抗血清的鉴定和保存一、抗血清的鉴定1.抗体特异性的鉴定常用双向免疫扩散法。
观察沉淀线，若粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融合，则证明动物已产生单价特异性抗体；若纯化抗原出现一条，而粗抗原出现多条线，且其中一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，也是成功的免疫，待取血后将杂抗体吸收去除，可以成为单价特异性抗体。
若不出现沉淀线，表示免疫失败。
2.抗体效价的测定颗粒性抗原采用凝集试验，可溶性抗原采用双向免疫扩散试验、ELISA等方法。
测定抗体效价有两种稀释方法，一种是将经过系列稀释的血清分别与一个浓度的抗原反应；另一种是同时稀释抗原和抗血清，分别与不同浓度的抗血清进行双向免疫扩散试验（称为棋盘滴定）。
3.抗体纯度的鉴定采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、双向免疫扩散试验、免疫电泳等。
4.抗体亲和力的鉴定二、抗血清的保存1.2～8℃保存：用于短期保存；2.冷冻保存：是常用的抗体保存方法。
将抗体分为小包装，在-80～-20℃保存，一般可保存5年，效价不会明显下降，但应避免反复冻融；3.真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存5～10年。
第五节抗血清的纯化抗血清纯化的目的是除去不相关成分，防止抗血清中的其他杂抗体干扰试验结果。
最常见的是提取抗血清中的特异性IgG或单价抗体。
一、特异性IgG抗体1.盐析法多采用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法。
2.凝胶过滤法血清蛋白的分级分离常用凝胶过滤法，该法过滤条件温和，不影响IgG活性。
常结合盐析法提取IgG，盐析法可以去除大部分杂蛋白，提高凝胶过滤法的分离效果。
3.离子交换层析法4.亲和层析法二、单价特异性抗血清单价特异性是指血清只与其特异性抗原发生反应。
免疫得到的抗血清总是有抗白蛋白等杂抗体存在。
杂抗体的去除有两种方法：1.亲和层析法2.吸附剂方法制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的是A.反复冻融法B.超声破碎法C.表面活性剂处理法D.自溶法E.酶处理法『正确答案』 A『答案解析』制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的是反复冻融法。
需制备10ml抗血清，应选择何种动物A.家兔B.小白鼠C.马D.绵羊E.猴『正确答案』 A『答案解析』抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物。
抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物。
下列佐剂中具有免疫原性的是A.脂多糖B.氢氧化铝C.石蜡油D.羊毛脂E.多聚核苷酸『正确答案』 A『答案解析』生物制剂具有免疫原性，所以具有免疫原性的是脂多糖。
厂家生产的抗IgG制剂一般的保存方法为A.液体4℃保存B.液体-10℃保存C.真空干燥保存D.25℃保存E.加叠氮钠保存『正确答案』 C『答案解析』抗血清的保存：①2～8℃保存：用于短期保存；②冷冻保存：是常用的抗体保存方法。
将抗体分为小包装，在-80～-20℃保存，一般可保存5年，效价不会明显下降，但应避免反复冻融；③真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存5～10年。
最常用的半抗原载体是A.牛血清白蛋白B.牛甲状腺球蛋白C.人血清白蛋白D.人甲状腺球蛋白E.球蛋白『正确答案』 A『答案解析』半抗原载体常用的有人血白蛋白、牛血白蛋白、血蓝蛋白、牛甲状腺球蛋白等。
以牛血白蛋白最常用。
A.盐析沉淀法B.有机溶剂沉淀法C.凝胶过滤D.离子交换层析E.亲和层析1.经典的蛋白质抗原纯化分离方法为『正确答案』 A『答案解析』经典的蛋白质抗原纯化分离方法为盐析沉淀法。