犬牙周膜细胞与骨髓基质细胞组织再生能力比较的实验研究
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选 出较好 的牙 周种 子 细 胞 提 供 实验 依 据 ， 也 有 助 于 深入 探讨 牙周 再生 治疗 的 细胞学 基础 。
１ 材 料 和 方 法 １ ． １ 材 料
１ ． 文 献
［ ４ ］ 的全骨髓 培养 法培养 Ｂ ＭＳ Ｃ ０全 麻 下 从 ６只
胞 生 长融 合后 ， 用 ２ ． ５ ｇ ／ Ｌ的胰 酶 ＋１ ｇ ／ Ｌ的Ｅ ＤＴ Ａ 消化 传代 。（ ２ ） 参照 文献 Ｅ ５ ］ 的改 良组 织块 培养法 培
成 骨样组织多于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ， 而形 成 韧带样 组织 少 于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ 。免疫 组织 化学 染 色显 示 ， Ｂ ＭＳ Ｃ 组 的 ＯＰ Ｇ 表 达 量 高 于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ组 ， 但胶 原 Ⅻ 的 表 达 量 低 于 Ｐ ＤＬ Ｃ组 。
于 Ｐ ＤＩ Ｃ组 。
结论
Ｂ ＭＳ Ｃ体 内成 骨 能 力 高 于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ组 ， 但 成 韧 带 样 组 织 能 力 低
Ｂ ｅ ａ ｇ ｌ ｅ 犬 的股 骨 近端 抽 取 骨髓 １ ５ ｍＬ， 将 其 注 入 含
２ Ｏ ｍＬ 无 血 清 培 养 基 的 离 心 管 中， １ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ
×５ ｍｉ ｎ ， 离心 ２ 次， 置入 无菌 培 养皿 中 ， 于 培养 箱 中
培养 ， ２ ｄ半 量 换 液 ， ５ ｄ 全 量 换 液 。 以 后 常 规 每 ３天 换液 ， 倒 置 显 微 镜 下 观 察 细 胞 生 长 状 况 及 形 态 。 细
工程 研 究 中的 热 点 。 骨 髓 基 质 细 胞 （ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｓ ｔ ｒ ｏ ｍａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ，Ｂ ＭＳ Ｃ） 和牙 周 膜 细胞 （ ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ａ ｌ
ｌ ｉ ｇ ａ ｍｅ ｎ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ， Ｐ ＤＬ Ｃ ） 是 目前 牙 周 组 织 工 程 中应 用
孽攀 Ｊ Ｆ 娑 ０ １ ６ Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ， Ｖ ｏ １ ５ Ｏ Ｎ ｏ ６ ｕ Ｉ ｉ ａ ｎ Ｍｅ ｄ Ｕｎ ｉ ｖ ２ … ’
３６ ５
犬 牙周 膜 细 胞 与骨 髓基 质 细 胞 组 织再 生 能 力 比较 的实 验研 究
黄永 玲 ， 骆 凯 ，李艳 芬 ，闫福 华
种 子细胞 是牙 周 组 织 工 程 学 中最 重 要 的环 节 ， 可 与支架 材料 复合 形 成 具 有 一 定 功 能 的组 织 ， 克 服
ｄ ｅ ｒ ｍａ ｌ ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ ， ＡＤ Ｍ） （ 北 京 桀 亚 莱 福 生 物 技 术 有
限公 司 ） ； 兔 抗 人 骨保 护 素 （ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｇ ｅ ｒ ｉ ｎ ，ＯＰ Ｇ）
多克 隆抗 体 ， 兔 抗 人胶 原 Ⅻ多 克隆 抗 体 （ 美国 Ｓ ａ ｎ ｔ ａ 公 司） ； 羊 抗 兔 超 敏 二 步 法免 疫 组 织 化 学 检 测 试 剂
（ 北 京 中杉 金 桥 生 物 技 术 有 限公 司 ） ； ＤＡＢ显 色 试 剂
人造 骨 粉等 自身无 再 生 能 力 等 特 点 ， 现 已成 为组 织
质（ ＡＤ Ｍ） 膜 复 合 后 植 入 裸 鼠皮 下 ， 以 单 纯 ＡＤ Ｍ 为对 照组 ， 分 别 于 术 后 ４周 和 ８周 进 行 标 本 组 织 学 及 免 疫 组 织 化 学染色分析 ， 比较 骨保 护 素 （ ＯＰ Ｇ） 和 胶 原 Ⅻ 的表 达 。 结 果 复 合 物 植 入 ４周 和 ８周 组 织 学 观 察 显 示 ， Ｂ ＭＳ Ｃ 形
摘要 ： 目的 比较 犬 骨 髓 基 质 细 胞 （ Ｂ ＭＳ Ｃ ） 和牙周膜 细胞 （ Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ ） 体 内 成 骨 及 成 韧 带 样 组 织 的能 力 ， 为 牙 周
组 织工程种子 细 胞 的 选 择 提供 实 验 依 据 。
方 法 将 体 外 培 养 Ｂ ｅ ａ ｇ ｌ ｅ犬 Ｂ ＭＳ Ｃ及 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ 与 脱 细 胞 真 皮 基
司） ； 倒置 相差 显微 镜 （ 广 州 光 学仪 器 厂 ） ； 倒 置 相 差
荧光 显微 镜 （ 日本 Ｏｌ ｙ ｍｐ ｕ ｓ公 司 ） ； 细 胞 培养 箱 （ 德
国 Ｈｅ ｒ ａ ｅ ｕ ｓ公 司 ） 。 １ ． ２ 方 法
了Ｐ ＤＬ Ｃ和 Ｂ ＭＳ Ｃ体 内成 骨及 成韧 带 的能 力 ， 为筛
盒（ 福 州迈 新生 物技 术开 发有 限公 司） 。
１ ． １ ． ３ 仪 器 石 蜡 组 织 切 片 机 （ 美 国 Ｔｈ ｅ ｒ ｍｏ公
最多 的种 子细 胞 。二者 在特 定 的环境 和刺 激 因子作
用下 均有 利 于 牙 周组 织 的再 生［ １ ］ 。本 课 题 组 前 期 研究 比较 了二 者 在牙 周 组 织 再 生 中 的潜 能 ， 实验 表 明， Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ体 外 成骨 能 力低 于 Ｂ ＭＳ Ｃ， 但 具有 较 高 的 成韧 带潜 力ｌ ＿ ３ ］ 。本 研 究 在 原 有研 究 的基 础 上 ， 比较
关 键 词 ： 骨 髓 细胞 ； 牙 周 膜 ；引 导 组 织 再 生 ， 牙周 ；真 皮 ；细胞 外 基 质
中图分类号 ： Ｒ３ ２ ２ ． ４ １；Ｒ３ ２ ９；Ｒ３ ３ ６；Ｒ７ ８ １ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ ４ １ ９ ４ （ ２ ０ １ ６ ） ０ ６ — ０ ３ ６ ５ — ０ ５
１ ． １ ． １ 动 物 雄 性 裸 鼠 １ ２只 ， ６周 龄 ， 体 质 量
１ ６ ～１ ８ ｇ ［ 许 可证 号 ： Ｓ Ｃ ＸＫ（ 沪） ２ ０ ０ ７ — ０ ０ ０ ５ ， 上 海 斯
莱克 实验 动物 有 限公 司］ 。雄 性 Ｂ ｅ ａ ｇ ｌ ｅ 犬 ６只 ， 体 质
１ 材 料 和 方 法 １ ． １ 材 料
１ ． 文 献
［ ４ ］ 的全骨髓 培养 法培养 Ｂ ＭＳ Ｃ ０全 麻 下 从 ６只
胞 生 长融 合后 ， 用 ２ ． ５ ｇ ／ Ｌ的胰 酶 ＋１ ｇ ／ Ｌ的Ｅ ＤＴ Ａ 消化 传代 。（ ２ ） 参照 文献 Ｅ ５ ］ 的改 良组 织块 培养法 培
成 骨样组织多于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ， 而形 成 韧带样 组织 少 于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ 。免疫 组织 化学 染 色显 示 ， Ｂ ＭＳ Ｃ 组 的 ＯＰ Ｇ 表 达 量 高 于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ组 ， 但胶 原 Ⅻ 的 表 达 量 低 于 Ｐ ＤＬ Ｃ组 。
于 Ｐ ＤＩ Ｃ组 。
结论
Ｂ ＭＳ Ｃ体 内成 骨 能 力 高 于 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ组 ， 但 成 韧 带 样 组 织 能 力 低
Ｂ ｅ ａ ｇ ｌ ｅ 犬 的股 骨 近端 抽 取 骨髓 １ ５ ｍＬ， 将 其 注 入 含
２ Ｏ ｍＬ 无 血 清 培 养 基 的 离 心 管 中， １ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ
×５ ｍｉ ｎ ， 离心 ２ 次， 置入 无菌 培 养皿 中 ， 于 培养 箱 中
培养 ， ２ ｄ半 量 换 液 ， ５ ｄ 全 量 换 液 。 以 后 常 规 每 ３天 换液 ， 倒 置 显 微 镜 下 观 察 细 胞 生 长 状 况 及 形 态 。 细
工程 研 究 中的 热 点 。 骨 髓 基 质 细 胞 （ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｓ ｔ ｒ ｏ ｍａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ，Ｂ ＭＳ Ｃ） 和牙 周 膜 细胞 （ ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｎ ｔ ａ ｌ
ｌ ｉ ｇ ａ ｍｅ ｎ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ， Ｐ ＤＬ Ｃ ） 是 目前 牙 周 组 织 工 程 中应 用
孽攀 Ｊ Ｆ 娑 ０ １ ６ Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ， Ｖ ｏ １ ５ Ｏ Ｎ ｏ ６ ｕ Ｉ ｉ ａ ｎ Ｍｅ ｄ Ｕｎ ｉ ｖ ２ … ’
３６ ５
犬 牙周 膜 细 胞 与骨 髓基 质 细 胞 组 织再 生 能 力 比较 的实 验研 究
黄永 玲 ， 骆 凯 ，李艳 芬 ，闫福 华
种 子细胞 是牙 周 组 织 工 程 学 中最 重 要 的环 节 ， 可 与支架 材料 复合 形 成 具 有 一 定 功 能 的组 织 ， 克 服
ｄ ｅ ｒ ｍａ ｌ ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ ， ＡＤ Ｍ） （ 北 京 桀 亚 莱 福 生 物 技 术 有
限公 司 ） ； 兔 抗 人 骨保 护 素 （ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｇ ｅ ｒ ｉ ｎ ，ＯＰ Ｇ）
多克 隆抗 体 ， 兔 抗 人胶 原 Ⅻ多 克隆 抗 体 （ 美国 Ｓ ａ ｎ ｔ ａ 公 司） ； 羊 抗 兔 超 敏 二 步 法免 疫 组 织 化 学 检 测 试 剂
（ 北 京 中杉 金 桥 生 物 技 术 有 限公 司 ） ； ＤＡＢ显 色 试 剂
人造 骨 粉等 自身无 再 生 能 力 等 特 点 ， 现 已成 为组 织
质（ ＡＤ Ｍ） 膜 复 合 后 植 入 裸 鼠皮 下 ， 以 单 纯 ＡＤ Ｍ 为对 照组 ， 分 别 于 术 后 ４周 和 ８周 进 行 标 本 组 织 学 及 免 疫 组 织 化 学染色分析 ， 比较 骨保 护 素 （ ＯＰ Ｇ） 和 胶 原 Ⅻ 的表 达 。 结 果 复 合 物 植 入 ４周 和 ８周 组 织 学 观 察 显 示 ， Ｂ ＭＳ Ｃ 形
摘要 ： 目的 比较 犬 骨 髓 基 质 细 胞 （ Ｂ ＭＳ Ｃ ） 和牙周膜 细胞 （ Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ ） 体 内 成 骨 及 成 韧 带 样 组 织 的能 力 ， 为 牙 周
组 织工程种子 细 胞 的 选 择 提供 实 验 依 据 。
方 法 将 体 外 培 养 Ｂ ｅ ａ ｇ ｌ ｅ犬 Ｂ ＭＳ Ｃ及 Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ 与 脱 细 胞 真 皮 基
司） ； 倒置 相差 显微 镜 （ 广 州 光 学仪 器 厂 ） ； 倒 置 相 差
荧光 显微 镜 （ 日本 Ｏｌ ｙ ｍｐ ｕ ｓ公 司 ） ； 细 胞 培养 箱 （ 德
国 Ｈｅ ｒ ａ ｅ ｕ ｓ公 司 ） 。 １ ． ２ 方 法
了Ｐ ＤＬ Ｃ和 Ｂ ＭＳ Ｃ体 内成 骨及 成韧 带 的能 力 ， 为筛
盒（ 福 州迈 新生 物技 术开 发有 限公 司） 。
１ ． １ ． ３ 仪 器 石 蜡 组 织 切 片 机 （ 美 国 Ｔｈ ｅ ｒ ｍｏ公
最多 的种 子细 胞 。二者 在特 定 的环境 和刺 激 因子作
用下 均有 利 于 牙 周组 织 的再 生［ １ ］ 。本 课 题 组 前 期 研究 比较 了二 者 在牙 周 组 织 再 生 中 的潜 能 ， 实验 表 明， Ｐ Ｄ Ｌ Ｃ体 外 成骨 能 力低 于 Ｂ ＭＳ Ｃ， 但 具有 较 高 的 成韧 带潜 力ｌ ＿ ３ ］ 。本 研 究 在 原 有研 究 的基 础 上 ， 比较
关 键 词 ： 骨 髓 细胞 ； 牙 周 膜 ；引 导 组 织 再 生 ， 牙周 ；真 皮 ；细胞 外 基 质
中图分类号 ： Ｒ３ ２ ２ ． ４ １；Ｒ３ ２ ９；Ｒ３ ３ ６；Ｒ７ ８ １ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ ４ １ ９ ４ （ ２ ０ １ ６ ） ０ ６ — ０ ３ ６ ５ — ０ ５
１ ． １ ． １ 动 物 雄 性 裸 鼠 １ ２只 ， ６周 龄 ， 体 质 量
１ ６ ～１ ８ ｇ ［ 许 可证 号 ： Ｓ Ｃ ＸＫ（ 沪） ２ ０ ０ ７ — ０ ０ ０ ５ ， 上 海 斯
莱克 实验 动物 有 限公 司］ 。雄 性 Ｂ ｅ ａ ｇ ｌ ｅ 犬 ６只 ， 体 质