液相色谱质谱联用 ppt课件

负离子检测 -[M-H]- 碱性条件 -[M+X]- X=溶剂或缓冲溶液中 的阴离子 -[M-H+S]- 溶剂加合离子
名义分子量和平均分子量
对于分子C6H3Cl3 平均分子量为 6(12.01115)+3(1.000797)+3(35.453) MW=181.428
6(12.000)+3(1.00078)+3(34.9989)=179.9990 精确质量/单同位素质量
小结：流动相的考虑
金属离子缓冲盐影响离子化 表面活性剂影响去溶剂化 离子对试剂可以离子化，而导致高背景噪音 强离子对试剂可与待测物反应，导致待测物不
能离子化 TEA 干扰正离子模式(m/z102) TFA 扰负离子模式(m/z113) 增塑剂（邻苯二甲酸酯）背景干扰，
(m/z149,315, 391)
1 电离模式的选择 2 查阅文献，参考样品前处理的技术路线和色谱分离条件 、质谱参数条件等。 3 MRM 参数优化 使用标准品优化 fragmentor 和 collision energy 4 离子源参数的优化（源温度、流速） 5 LC分离方法的优化，1-3 min为理想
MRM 参数优化
扫描（MS2 Scan）
液相色谱质谱联用
Agilent LC-MS/MS 6420
精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
速和温度 选择母离子：准分子离子，[M+H]+、[M-
H]-优先，避免选择加和离子[M+Na]+,所 需能量较低，灵敏度好。 子离子的选择：高质量端的特征离子。
气相离子的产生
表面活性高（具低溶剂化能）的离子优先转 移至雾滴表面，最终转变为气相离子--竞争 机制
应采用表面活性低的缓冲盐 低浓度的挥发性的酸、碱及缓冲盐
•
有杂原子，可失去质子。如COOH、OH
•
中性偏碱性流动相
Hale Waihona Puke 可正可负•比较灵敏度
溶剂匹配
反相溶剂： 甲醇、乙腈、水
兼容液质的盐（常用）： 甲酸、乙酸(0.01-1%)、甲酸铵、乙酸铵(小于20
mM) 慎用：三氟乙酸等 不兼容盐
硼酸盐、硫酸盐、磷酸盐（不挥发或易形成离子对 ）
流动相中添加剂
正离子模式• 甲酸、乙酸和三氟乙酸（慎用） 负离子模式• 氨水 正离子＆负离子• 甲酸铵或乙酸铵（不高于20 mM）
电喷雾-离子对的形成
对正离子检测，由于离子对的形成，是溶液 或气相中的离子中和！
[M+H]+ + A-
[M+H + A]0
A=B,S,P
有利于中性产物
A=甲/乙酸盐
有利于生成带电物质
离子对强度： B,S,P ＞ 三氟乙酸 ＞ 乙酸盐，甲酸盐
电喷雾-离子对的形成
对负离子，由于离子对的生成，使溶液或气 相中的离子中和！
多反应监测（MRM）
使用已优化好的 fragmentor 和collision energy，优化Dwell time
Dwell time 优化
Dwell time 优化
Dynamic MRM
标准MRM对多组分，出峰时间波动，灵敏 度低。
dMRM适合应用于多组分同时分析，自动优 化分配Dwell Time，兼顾灵敏度与数据采 集质量！
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
内容
1. LC-MS/MS的基本原理 2. 方法开发流程及优化 3. 电离影响因素与溶液化学 4. 注意事项
1. LC-MS/MS的基本原理
ESI ion source
Front-end ion optics
Quadrupole
Collision cell
180.0 daltons ----名义分子量 nominal mass
精确质量计算器
在Masshunter定性分析软件中，有 “mass calculator”可以计算精确质量。
另： 可以计算精确质量
the number of MRMs at any time are many fewer than with time segment methods, allowing much faster MS cycle
3. 电离影响因素与溶液化学
溶液的化学性质
•
流动相
•
被分析物
•
基质的性质
喷针
•
选择离子监测（SIM）
优化毛细管出口电压（ fragmentor），保证母离 子的传输效率
子离子扫描（Product Ion Scan）
使用已优化好的fragmentor，选择定性定量离子， 优化碰撞能量（collision energy），得到/优 化子离子的响应，每个化合物一般选择两个强度最 高的子离子，分别作定性离子与定量离子
[M-H]- + C+
[M-H + C]0
C=Na,K,Li
有利于中性产物
C=NH4+
有利于带电物质
ESI:离子竞争机制
表面竞争 被分析离子与电解质离子转换为气相离子
的竞争使被分析物相应降低。 电荷竞争
OAc﹣+AH+→HOAc+A
4. 注意事项
使用0.22 um孔隙滤膜过滤 流动相含水＞50%,适当提高干燥气体的流
内部针的位置
•
针的状况
•
雾化气压力
高电压电极
•
毛细管和喷雾室电压设置
•
毛细管和喷雾室高压部件的状态
•
绝缘体的状态
离子模式的选择
正离子ES模式
•
适合于碱性样品，amines，amides，aminoacids，
antibiotics等
•
酸性流动相
负离子ES模式
•
适合于酸性样品，acids，hydroxyls，含强负电性基团
Hexapole
Quadrupole：ion focusing Octopole：ion transmission
N2 0.5 ml/min
Rear quadrupole and detector
Pumping system
2torr 10-2 10-3 torr torr
10-5 torr
2. LC/MS/MS 方法开发流程
API质谱图的解释
检测到的离子种类依赖于溶剂添加剂和分析 所用的条件。
正离子检测 -[M+H]+ 酸性条件 -[M+Na]+ ，[M+K]+ -[M+NH4]+ 有铵盐缓冲盐 -[M+X]+ X=溶剂或缓冲溶液中的阳 离子 -[2M+H]+ 高浓度时形成的二聚体离 子 -[M+H+S]+ 溶剂加合离子