高效液相快速检验的综述

高效液相色谱法在药品快检中的应用(综述)
1.引言
高效液相色谱法是以经典液相色谱法为基础,引入气相色谱的理论与实验方法,发展而成的分离分析方法。

该法具有分离效能高、分析速度快、应用范围广、流动相可选择性范围宽、灵敏度高、色谱柱可反复使用、流出组分容易收集及安全等特点。

高效液相色谱法分析对象广，它只要求样品能制成溶液，而不需要气化，因此不受样品挥发性的约束。

对于挥发性低、热稳定性差、相对分子质量大的高分子化合物以及离子型化合物尤为有利，如氨基酸、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、类脂、维生素、抗生素等。

相对分子质量较大、沸点较高的有机化合物以及无机盐类，都可用高效液相色谱法进行分析。

高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。

本文综述了高效液相色谱法在药品快检中的应用与发展动向[1]。

2.指导原则与检验方法选择
高效液相色谱法对药品快速检验本着快速的原则；方法具有良好的耐用性，能同时分析多品种、多剂型、多规格的样品所建立的方法；不因色谱柱、仪器的品牌的改变而影响结果判断。

用高校液相色谱法对药品进行快速检验时，其方法的选择十分重要，首先应考虑药品的功能和结构，将药品分组，确定各类药品的最佳色谱体系，流动相一般不用离子对试剂，用尽可能少的色谱系统实现对多种药物的分离分析，少切换或者不切换流动相，从而达到快速检测的目的。

运用相对保留值和光谱相似度双指标定性，即增强定型能力，又适于现场快速鉴别。

选择分组中的一种药品作为参比物质，以实现少用对照品就能达到定性和定量的目的。

3.药品预处理
样品中含有辅料等干扰性物质,影响色谱柱和检测器性能,因此,在用高校液相色谱法分析之前有必要对药品进行预处理出去干扰物质。

预处理方法有膜过滤法[2]膜过滤法具有简便、快速、准确的特点,根据被测样品的不同选择不同的预处理方法,使干扰组分尽可能少,这样才能使柱有较长的使用寿命。

通常采用一定大小孔径的微孔滤膜或超过滤膜过滤，除去一定分子量以上的物质，此法对样品中大分子物质的预处理是很有用的。

该法的应用非常广泛,几乎可以运用到每一种剂型的检验中。

我国药检工作者近几年也开展了大量的有关工作，做了许多实验研究，对于这种方法有了更深刻的认识和更广泛的运用，这对于药品快速检验技术的提高有着重要而深远的意义。

4.高效液相色谱法在药品快检中的应用
4.1在药品快速定性方面的研究。

关于高效液相色谱法用于药品快检中的一些问题，多采用反相HPLC法，一般常用ODS柱[3]。

进行系统适用性试验确定最佳色谱体系，在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别；同时应用紫外光谱相似度进行定性,将对照品进样建立标准物质光谱库，比较不同谱段之间、原始光谱之间、一阶导数光谱之间、二阶导数光谱之间的相似度，选择相似度较高并且与其它物质差异度较大的光谱为定性时使
用的最佳光谱。

两种方法联用既增强定性能力,又适于现场快速鉴别。

4.2 在药品快速定量方面的应用。

HPLC具有专一性强、灵敏、快速、简便等特点，制剂组成复杂，不少有效成分的含量测定也越来越多地采用了HPLC法，常用定量方法有外标法和内标法[4]。

应用外标法时无需知道校正因子，只要被测组分出峰无干扰，保留时间适宜即可，但进样量必须准确，否则定量误差大。

内标法在一定进样量范围，定量结果与进样量的精密度无关，定量准确度与其它组分是否出峰无关，内标法很适用于微量组分的分析。

选择内标时，内标物应与相邻物质分离度良好，并且有较一致的光谱行为。

确定检测波长时，将待测药物和内标物质的紫外光谱图矢量归一化后叠加，选择光谱行为最为相似处为检测波长，计算每个波长点的校正因子，同时计算波长±2nm矫正因子的RSD，RSD最小的波长点是最佳检测波长。

每种药品的检测波长不同，需要在5台仪器上做出数据，其中一台做5次进行验证。

5. HPLC在药品快检中的发展动向
5.1 HPLC分析仪器的发展。

近年来，HPLC的飞速发展与仪器的更新换代密切关系，从仪器本身的发展来看，主要是减低柱外效，研制新型的检测器和提高自动化水平。

现代大多数HPLC仪都具有预处理控制功能，可以对泵的梯度、检测器、进样器、柱加热器以及数据处理系统进行控制，这为HPLC在药检方面的广泛应用打下了坚实的基础。

5.2 从药品快速检验的必要性看高效液相色谱技术的发展。

目前HPLC高灵敏度的检测器不断发展，为遇热不稳定和微量及超微量药品快速检验创造了有利条件。

但每一种分析技术均有其使用范围和方法的局限性，将单一色谱技术联合应用能获得更大的发展，尤其是色谱-色谱联用，色谱-光谱联用，柱切换技术，HPLC-MS联用，HPLC-FTIR联用等高效液相色谱与其它技术联用，将是高效液相色谱今后在药品快检方面主要的发展方向。

5.3 HPLC在药品快检中的国内外研究动向。

[5]国内统计数字指出反相HPLC用于药检中有相当大的比例，[6]国外目前发表的文献展示，离子对反相高效液相色谱法在药检中的应用日益增多，是一门很有发展前途的HPLC技术。

从方法本身的发展来看，大有取代离子交换色谱的趋势。

另外，由于HPLC法的流动相千变万化，加之品种繁多的固定相，因此色谱系统可以有多种多样的组合，从而在极大程度上提高和扩大了HPLC的选择性和应用范围，加之，HPLC可直接测定对热不稳定的药物，不需要经过衍生化，所以近年来HPLC法在药检方面日渐取代了其相色谱法，总之，高效液相色谱法在在医药领域的使用，无论在技术水平还是仪器水平都表现出了较强的优势，随着这一技术的不断发展和进步，我国在药品快检方面将会有更大的突破。

参考文献
[1]河北医学院学报1989年02期.
[2]医药导报2006年3月第25卷第3期.
[3]庄兴江, HPLC在药物检测中的应用.
[4] 孙毓庆.分析化学.北京.科学出版社,2003.
[5]张仁斌,高效液相色谱法在医药研究中的应用,上海科技出版社.
[6]王其昌,国外高效液相色谱技术的发展概况.。