实验一侧孢芽胞杆菌菌种活化及复壮

实验一侧孢芽胞杆菌菌种活化及复壮
一、实验目的
1.了解菌种衰退的原理．
2.熟悉发酵菌种活化和复壮的方法．
二、实验原理
菌种在传代过程中，原有的生产性状会逐渐下降，这就是菌种的衰退。

衰退是菌株的自发突变引起的，一旦发现衰退，就必须进行复壮。

复壮就是通过纯种分离和性能测定等方法从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌种原有性状的一种措施。

菌种活化就是逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。

菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境。

三、实验器材与试剂
1、菌种
侧孢芽胞杆菌斜面保藏菌种
2、实验器材
天平、手提式电热灭菌锅、超净工作台、接种环、电热鼓风干燥箱、生化培养箱、光学显微镜、电炉、酒精灯、铁架台、玻璃漏斗、试管、三角瓶、载玻片等
3、试剂
葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、硫酸镁、硫酸锰、复红染色液、结晶紫染色液、卢哥氏碘液、95%乙醇、番红染色液、香柏油、氢氧化钠、盐酸
四、实验步骤
1、斜面培养基配方：葡萄糖10g、蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、水1000mL、琼脂20g、pH值7.2～7.4。

摇瓶培养基：蔗糖1.5%、蛋白胨0.2%、酵母膏0.4%、碳酸钙0.5%、磷酸氢二钾0.1%、硫酸镁0.03%、硫酸锰0.002%
2、按配方准确称取所需的药品，溶解、过滤、分装、包扎、灭菌（121℃30min）、冷却、摆斜面。

3、斜面无菌检查。

28℃，37℃恒温培养箱培养观察。

4、接种培养：无菌室清洁、紫外灯灭菌、操作人员清洁、消毒、用接种环接种斜面。

37℃恒温培养箱中培养1d。

重复转接3代斜面
5、镜检。

分别用简单染色或革兰氏染色涂片观察，菌的生长情况，是否有杂菌。

6、生长好的菌种置冰箱中保藏备用。

五、注意事项
1、灭菌要彻底，冷气一定排尽，并保证灭菌温度和时间。

2、接种时要严格按无菌操作规程进行。

六、作业
记录实验结果（培养基灭菌效果、斜面生长情况、镜检结果）
七、思考题：无菌操作要注意哪些问题？。