生化检验项目校准—盐城市第一人民医院左月媛

可将校准品作为控制品分析，每日测量2次，共10日，绘制
控制图；如需要我室可以做，但有的项目每天都校准怎么做？ 质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有统计显著差异，并必
须对校准品值是否真正正确做出决定。？
校准过程需要讨论的其他问题
试剂因素 应该维持在日常工作状态这样才 能与患者样本同步
贮存稳定性„有效期标准， --10% ？ ‟ 开瓶稳定性„标准， K值cv±2% ？ ！ ‟ 新旧混合使用 不同批号使用
系统，有助于开放系统对测试结果进行追
溯，保证测试结果的准确和可靠。
校准品的浓度 ——校准需哪几个浓度水平？
ISO 11095:1996标准——3个（对于初次校准应该增加校准水平的数量） EURACHEM “分析方法的目标适用性”指南——包括空白至少6个浓度水平 Commission Decision 2002/657/EC规定：包括零浓度至少5个浓度水平 ISO 15302:2007标准规定了4个校准水平 LGC/VAM “校准曲线的制备” 指南规定7个校准水平（包括空白） ISO 8466-1:1990甚至要求10个浓度水平
115(89U/L)
总
4942.04
4983.12
17
354
ALP不同批号校准品
校准品批号 111(109U/L) 112(206U/L) 113(205U/L) 114(216U/L) 115(212U/L) 总 均值 5446.9 5477.8 5398.1 5836.0 5631.2 5545.7 次数 171 89 55 102 17 434 CV 5.13 4.05 2.89 3.97 4.21 3.21
生化检验项目校准
盐城市第一人民医院
2012.12
测量系统
一套组装的和适用于特定量在规定区间内给出测 量值的一台或多台测量仪器，包括任何试剂和 电源。 • 注：一个测量系统可以仅包括一台测量仪器。 • 我们现在研究的是临床化学测量系统的校准。
生化分析仪的准备
1.由厂家根据中华人民共和国医药行业标 准(YYT0654-2008)对生化分析仪进行
溯 源 二级标准品 厂家方法 校 准 品
校 准
常规分析
常规实验室校准（calibration）应做的是
1. 在规定条件下，为确定测量仪器(或测量系统)所指示 的量值，或实物量具(或参考物质)所代表的值，与对应的由 标准所复现的量值之间关系的一组操作。 校准结果可以记录在校准证书或校准报告中。 2.校准品应有溯源性（traceability）通过一条具有规定 不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能 够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起 来的特性。
• 吸光度正确度 • 吸光度重复性 • 吸光度线性误差 • 交叉污染率 • 温度正确度
• 比色杯间差距
• 生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国医药行业标准 YYT0654-2008进行）
• 仪器正常工作环境条件 • 杂散光 OD值不<2.3 ±5%范围内最大OD值不<2.0 OD值0.5允许误差±0.025 OD值1.0允许误差 • 吸光度线性范围 • 吸光度准确度 ±0.07
正准确〔似应改为正确？〕做出决定。决 定中要包括CLIA 88的要求〔特別是PT要 求〕，并咨询厂家。
校准品的处理
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出样本， 置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从-冰箱中取出样本，置室温（1825）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻拍小瓶，以确保 所有物质已沉淀在该小瓶底部，小心拔开胶塞，采用已校 准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水（水 的温度最好控制在18-22℃，移取体积时最好采用称重法控 制），(在常规实验室不易做到）压胶塞到原位后置室温下 使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。
AU5400，AU2700最多可测4次，自动去 除漂移大的一次数值，取另外3次平均值。 较稳定项目可测2次。
空白对校准的影响？如何评价？
要求校准设计包括空白或零浓度水平 如果空白或零样本产生了一个信号，表明与分析物有相同的信号 产生基质；如LP（a），IMA要用专门零浓度水平替代水空白， 否则样本会出项负值，因为零浓度水平OD值比水空白高
• 卫生部临检中心正确度验证计划（小分子代谢物、脂类、 酶、GHB、血细胞） • 与EQA靶值比较 • 此步骤应做的，我室通过观察试剂空白和校准曲线图及室
内质控图，判断校准是否成功。
这是不同批号空白OD值
“校准”的验证
• 如何对“校准”进行验证？ 1. 与以往的K值进行比较（记录每次校准的K值）。 此项我室已在做请看原始数据表但未形成图表 2. 连续校准10日进行验证
5年5批号校准品实测均值 试剂说明书K值 试剂说明书K值范围
347
4923.9 4560.0 3650-5740
433
5545.7 5250 4000-6500
理论K值
校准K值与说明书K值 误差% 校准K值与理论K值 误差% 实测最小值 实测最大值 最小值与最大值误差%
4180.6
9.28 19.1958 4013.1 5548.4 -27.67
更换新批号校准品
• 计算每1批测量的均值。将均值与厂家赋 值比较。从赋值和测量值的差异，可预期 使用新校准品后质控靶值的变化〔以及患 者测试结果变化〕。
• 质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有 统计显著差异，并必须对校准品值是否真
正准确〔似应改为正确？〕做出决定。决 定中要包括CLIA 88的要求〔特別是PT要 求〕，并咨询厂家。
替代校准品的校准值确定
• 临时校准品的选择及校准
目标检测系统 目标检测系 统检测结果 r≥0.975， 斜率很接近1， 截距保持原有水 平或有所改善； 各样本结果差异 在CLIA’88允许 误差的1/4内
多次 测定 均值
一份含量和替代校 准品相近的新鲜血 （临时校准品） 校 准 自建检测系统
一批（20份） 新鲜血（分 析物含量函 概整个检测 范围）
校准方法的选择
线性
• 线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物 质或校准品，1点线性校准通常被定义为K因子校 准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常 用的2点线性校准等同于分析化学中的外标2点法， 需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。
非线 性
• 如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反 应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准模式， 需涉及3至6个校准品，采用曲线拟合、多项式、对 数等方式建立非线性函数。
CV% 0.038 0.160
ALT不同批号校准品
校准品批号 均值 4855.48 5034.18 5074.58 5042.28 次数 106 98 42 91 CV 3.46 4.28 3.91 2.90 2.44 4.08
111(98U/L)
112(87U/L) 113(85.1U/L) 114(90.1U/L)
我室从2007年开始了江苏省参比实验室的建
设活动。在近5年时间内，收集了本室在检项目校 准时的试剂空白与校准品OD值，F值。
试剂空白测量：对校准K值的影响？
校准周期：对校准K值的影响？ 更换不同批号校准品：影响可接受
K值测定
项目 校准周期（正常状态) ALT 1次/每周 ALP 1次/每周
5年5批号校准品实测次数
一批（20份） 新鲜血（分析 物含量函概整 个检测范围）
方法学 比对
自建检测系 统检测结果
更换新批号校准品
• 计算每1批测量的均值。将均值与厂家赋 值比较。从赋值和测量值的差异，可预期 使用新校准品后质控靶值的变化〔以及患 者测试结果变化〕。
• 质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有 统计显著差异，并必须对校准品值是否真
2.由有关计量部门根据国家标准（JJG4942005）对仪器进行检定 3.仪器应每年检定一次，并提供按标准要 求制定的统一格式检定报告，而现在是各色 各样。
生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国生化分析 仪检定规程JJG 494-2005进行） • 零点漂移 • 波长准正确度及重复性
• 杂散光
• 校准品是如何定值的？ 方法不一样（参考方法） 仪器不一样（最好的仪器，每次定值前都必须对仪器进行
校准）
试剂不一样（最好的试剂）
测试次数不一样（多次测定结果）
校准品测量次数：对校准K值的影响？取平 均K值？ 校准K值用理论K值，说明书K值，实测K值？
空白测量：对校准K值的影响？ 校准周期：对校准K值的影响？ 更换不同批号校准品：对校准K值的影响？ 校准的核查：是否有核查程序？
4378.0
5.63 32.62 3145.7 6318 -36.47
校准周期：对校准K值的影响？
同批号校准品 ALT 连续 间隔(145天内） 均值 373278.6 141401.9
同批号校准品 ALP 连续 间隔(131天内） 均值 738389.9 155779.8
周期 个数 77 29
周期 个数 136 24 CV% 0.027 2.860
校准标准物必须在与准备测量或注入样本相
一致的浓度水平。常规实验室有难度
每个浓度水平重复几次？ 至少重复三次
• ISO 11095:1996标准要求每个校准水平至少
重复两次，并建议尽可能多次。
•
为了评价残余标准变异的稳定性，至少
要重复分析两次，需要这种信息来决定哪个 回归模型是最合适。但每个校准水平重复分 析一般不会超过5次。
如果空白或零样本不产生任何信号，则在校准实验中可以排除空
白或零浓度水平。不能，应每日都要添加试剂，应作为对试剂好
坏的检测手段。还可以间接观察灯泡，比色杯等其它情况。
这是不同批号空白OD值曲线图
空白OD值曲线图
校准周期的确定
理想情况下，医学实验室在进行每一批次样本检测前，需 重新对测量系统实施校准。或根据实验室自身检测系统具 体运行情况规定相关项目的校准实施频率。至少应按照制
造商规定的频率下进行校准程序(应验证)。
若检测仪器零件进行更换后，或仪器进行保养后，或检测
试剂批次进行更换后，必须重新进行校准程序。
• 校准系统的有效性检查必须与初次校准清晰地区分开来。 • ISO 11095:1996 认为校准系统的有效性检查，至校准作用的有效性。
• 符合朗伯比尔定律用包括水空白在内的两 点校准 • 抗原抗体及乳胶增强反应用多点校准
这是不同批号空白OD值
• 所选5个项目为水空白与校准品两点线性校 准
校准包含哪个浓度范围？ 应指多点法，范围为线性范围
校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。
校准范围也定义为分析方法的工作范围。
校准过程需要讨论的其他问题
• 人员因素 人员应相对固定
• 科领导是否对校准重视 • 有无制定校准SOP
制定的校准SOP太简单，甚至有错误； 只有校准SOP，无记录或审核要求； 无校准出问题的纠正措施文件和记录，以及评审与改正 的措施； 能否严格要求技术人员执行SOP。
• 为什么用校准品后得到的K值与理论K值不一致？
试剂空白测量：对校准K值的影响？
2021327chenli2021327chenli生化分析仪的性能验证根据中华人民共和国生化分析仪检定规程jjg4942005进行比色杯间差距2021327chenli2021327chenli生化分析仪的性能验证根据中华人民共和国医药行业标准yyt06542008进行杂散光od值不23吸光度线性范围5范围内最大od值不20吸光度准确度od值05允许误差0025od值10允许误差007吸光度稳定性od变化001吸光度重复性cv15温度正确度与波动度设定值03波动度02样品携带污染率052021327chenli附鉴定报告2021327chenli2021327chenli102021327chenli112021327chenli12参考方法参考方法决定性方法决定性方法厂家方法厂家方法常规分析常规分析一级标准品一级标准品一级标准品一级标准品二级标准品二级标准品二级标准品二级标准品校准目的是准确度的传递校准目的是准确度的传递2021327chenli13常规实验室校准calibration应做的是在规定条件下为确定测量仪器或测量系统所指示的量值或实物量具或参考物质所代表的值与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作
• 吸光度稳定性
• 吸光度重复性
OD变化<0.01
CV<1.5% 设定值±0.3℃ 波动度< ±0.2℃
• 温度正确度与波动度
• 样品携带污染率
• 比色杯间差距 无
<0.5%
• 临床项目批内精密度
• 波长准正确度及重复性 无
• 附鉴定报告
校准目的是准确度的传递
一级标准品 决定性方法
参考方法
方法学 比对
自建检测系 统检测结果
替代校准品的校准值确定
经新鲜血校准后 的自建检测系统
多 次 测 定 均 值
目标检测系统
目标检测系 统检测结果 r≥0.975， 斜率很接近1， 截距保持原有水 平或有所改善； 各样本结果差异 在CLIA’88允许 误差的1/4内
替代校准品 重 新 校 准 自建检测系统
仪器: AU2700，AU54OO 试剂：OLIYMPUS ：ALT ALP 科华：ALB 东瓯：TG 中生：HCO3校准品: OLIYMPUS ：ALT ALP 新鲜血传递OLIYMPUS ：ALB TG 中生 : HCO3-
使用新鲜病人血清传递重新赋值校准品，
将生化封闭系统上的溯源性传递给开放