生物技术综合大实验

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生物技术专业综合实验独立设课的实践与思考

第7期岳慧英，等:生物技术专业综合实验独立设课的实践与思考185・生物技术专业综合实验独立设课的实践与思考岳慧英，吴娜，蔡东晖，胡丽丽*（山西中医药大学基础医学院，山西晋中030619）摘要:生物学以理论研究为基础，是一门实践性很强的学科，提升学生的综合实验技能对创新型人才的培养有重要的促进作用。

对生物技术专业独立设置《生物技术综合实验》实验课，实验内容包含基因工程、细胞工程、发酵工程和蛋白质工程四个模块，实验项目设置以综合性实验为主，考核方式中加入了科技论文写作，学生参与科学研究的全过程，提高了综合素质。

通过《生物技术综合实验》独立设置实验教学实践，取得了良好的教学效果，增强了本科生的自主学习、主动思考、分析问题、解决问题的能力，为培养生物科学创新型人才奠定基础。

关键词:生物技术专业；生物技术综合实验；独立设置实验课中图分类号：G642.0文献标识码：B文章编号：'008-02'X（202'）07-0'85-02随着当今生物技术产业的蓬勃发展，对生物专业人才的专业素质要求不断提升。

生命科学领域的发展要求生物技术本科毕业生不仅具有较扎实的生物技术基础理论知识，更强调具备较强的实验技能、动手能力以及独立分析问题和解决问题等综合科研能力。

当今时代技术发展要求大学素质教育与创新创业相结合的背景下，对生物技术专业实验课程的教学模式和实验内容进行改革大有必要，以适应形势发展的要求。

山西中医药大学（以下简称“我校”）基础医学院生物技术专业为四年制本科,为学生开设了遗传学、细胞生物学、生物化学、分子生物学、发育生物学、微生物学等专业课程，且上述理论课中均设计有紧扣理论的实验课，目的是用理论知识指导实验实践，并在实验中加深对理论知识的理解。

在第6学期，为学生开设了生物技术概论,该课程是一门实践性、综合性很强的学科，包括基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程和酶工程中重要理论和技术的概述，重在突岀五大工程在农业、食品、工业、医学、药学等方面的综合应用，所以该课程理论课后安排有一定学时的实验课。

生化实验技术-综合设计性大实验

通过综合训练，能够系统掌握蛋白质、 DNA制备的基本原理和操作，学习如何进行实验设计，掌握实验过程中的关键环节，对实验中出现的问题进行科学的分析；在学习实验技术的同时，自觉培养分析问题和解决问题能力。
思考题（课前设疑）
1.如何保持生化物质的生物活性？一般生化物质在碱性条件下容易变性，还是在酸性条件下容易变性？
原料选择和预处理
选什么样的原材料应视生产目的而定。一般要注意以下几个方面:
1．要选择有效成分含量高的新鲜材料； 2．来源丰富易得； 3．制造工艺简单易行； 4．成本比较低； 5．经济效果要好。
如蛋白质原料的选择
蛋白质类生化产品的原料来源有动植物组织和微生物等，原则是要选择富含所需蛋白质多肽成分的、易于获得和易于提取的无害生物材料。
实验实施要求：平时按各组计划时间分别进行实验，组长有义务指导下组相关实验内容，每次实验必须登记。
全班交流：实验结束安排课堂讨论交流，每组准备一人汇报，一人记录；要求用 PPT总结汇报项目实施、实验创新、疑难点，其他组学生质疑，教师点评。
指导教师：汪财生、斯越秀
实验项目训练目标
12实验目标?掌握免疫球蛋白igg的原理和方法?掌握利用紫外法单向免疫扩散法等测定igg含量的方法?掌握sdspage电泳法鉴定蛋白质纯度及测定分子量方法?掌握层析透析膜分离电泳等生化分离鉴定技术的应用及操作13实验要求掌握的技术柱层析分离技术sephadexg25分子筛层析deaecellulose离子交换层析蛋白质提取技术硫酸铵盐析透析膜分离技术等蛋白质含量测定消光系数法folin酚法测定igg蛋白质含量蛋白质分子量纯度活性测定sdspage电泳法检测单向免疫扩散法猪脾脏dna提取及含量鉴定实验二21内容提要为了研究dna分子在生命代谢中的作用常常需要从不同的生物材料中提取dna

生物技术实验报告

生物技术实验报告生物技术实验报告引言生物技术是一门涉及生物学和工程学的交叉学科，通过利用生物体的特性和生物分子的相互作用，来解决现实世界中的问题。

本实验旨在探索生物技术在实验室中的应用，以期增进对生物技术的理解和认识。

实验目的本实验的目的是通过使用PCR技术，对特定基因片段进行扩增，并通过凝胶电泳分析扩增产物。

通过这个实验，我们将学习PCR技术的原理和操作步骤，并了解如何使用凝胶电泳进行DNA分析。

实验材料和方法材料：- DNA样本- PCR试剂盒- 扩增引物- DNA电泳仪- 琼脂糖凝胶- DNA标记物方法：1. 准备PCR反应体系：将PCR试剂盒中的反应液与DNA样本、扩增引物混合。

2. 进行PCR扩增：将混合好的反应液放入PCR仪中，按照设定的温度和时间进行扩增。

3. 准备琼脂糖凝胶：将琼脂糖溶解在缓冲液中，倒入电泳仪中，等待凝固。

4. 准备样品：将PCR扩增产物与DNA标记物混合。

5. 进行电泳：将混合好的样品倒入琼脂糖凝胶槽中，进行电泳分析。

6. 分析结果：观察凝胶上的DNA条带，判断扩增是否成功。

实验结果与讨论在进行PCR扩增和凝胶电泳后，我们观察到在琼脂糖凝胶上出现了一些DNA 条带。

这些条带代表了PCR扩增产物的大小和数量。

通过比较这些条带与DNA 标记物的迁移距离，我们可以确定PCR扩增产物的大小。

在实验中，我们使用了PCR技术对特定基因片段进行扩增。

PCR技术通过利用DNA聚合酶酶的特性，在不断变化的温度条件下，使DNA链的两端进行反复扩增。

这种扩增过程可以快速产生大量目标DNA片段，从而使我们能够对其进行进一步分析。

凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，通过利用DNA的负电荷特性，在电场的作用下，使DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移。

由于DNA片段的大小不同，迁移速度也不同，因此在凝胶上形成了不同大小的DNA条带。

通过与DNA标记物的比较，我们可以确定PCR扩增产物的大小。

在本实验中，我们成功地扩增了目标基因片段，并通过凝胶电泳分析得到了相应的结果。

生物技术制药综合实验的探索与实践

生物技术制药综合实验的探索与实践生物技术制药是一门跨学科的领域，涉及生物学、化学、药学等多个学科的知识，其核心在于利用生物技术手段生产药物。

生物技术制药的发展和应用，已经成为推动医药产业发展的重要引擎。

本文将从实验的角度出发，探索生物技术制药的实验方法和实践经验，为广大科研工作者和学生提供借鉴和参考。

一、实验目的生物技术制药综合实验的目的是让学生全面了解和掌握生物技术在制药领域的应用。

通过实验，学生可以了解生物技术制药的原理、实验操作和数据分析方法，培养学生的创新意识和实践能力。

二、实验内容1.基因工程细菌的构建基因工程细菌是制药领域中常用的工具，通过基因工程技术，可以将外源基因导入细菌中，使细菌表达目标蛋白。

实验中，可以选择一种适合表达目标蛋白的细菌菌株，如大肠杆菌等，构建表达载体，将目标基因插入到表达载体中，然后转化到细菌中，进行培养和诱导表达。

2.原核表达蛋白的纯化和鉴定在实验中，可以通过蛋白纯化技术，从转化的细菌中纯化目标蛋白，然后通过SDS-PAGE、Western blot等方法对蛋白进行鉴定。

这一步骤可以让学生了解蛋白纯化的原理和技术，培养学生的动手能力和实验操作技能。

3.细胞培养和药物筛选在制药领域，细胞培养是不可或缺的环节。

在实验中，可以选择适合用于药物筛选的细胞系，如HEK293细胞、Hela细胞等，将药物加入培养基中，观察细胞的生长情况和药物的毒性和活性。

4.药物分子构效关系研究药物分子构效关系研究是生物技术制药的重要内容之一，通过分子生物学和生物化学手段，研究药物分子与靶标的作用机制和关系。

实验中可以选择一种常用药物，通过分子对接、酶活性检测等方法，研究药物分子与靶标的结合特点和作用机制，揭示药物的作用方式和规律。

三、实验方法1.实验前准备在进行生物技术制药综合实验之前，需要充分准备实验材料和仪器设备，包括培养基、细菌菌株、表达载体、药物样品等。

需要对实验步骤和方法进行充分了解和掌握，确保实验的顺利进行。

《生物技术综合实验》教学体系改革及效果评价

第４１卷第２１期２０１３年１１月
广州化工
ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｅｍｉｅＭＩｎｄｕｓｔｒｙ
Ｖｏ１．４１Ｎｏ．２１Ｎｏｖｅｍｂｅｒ．２０１３
《生物技术综合实验》教学体系改革及效果评价水
阎晓菲，童婷，代培红，杨斌，陈琴，谢文华，张新玲
ＹＡＮＸｉａｏ—ｆｅｉ，ＴＯＮＧＴｉｎｇ，ＤＡＩＰｅｉ—ｈｏｎｇ。，ｒＡＮＧＢｉｎ，ＣＨＥＮＱｉｎ，ＸｉｅＷｅｎ—ｈｕａ，ＺＨＡＮＧＸｉｎ—ｌｉｎｇ（１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｒｕｍｑｉ８３００００；２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｒｕｍｑｉ８３００５２，Ｃｈｉｎａ）
学院培养学生的目标。
关键词：生物技术综合实验；教学内容；教学方法；改革；教学效果
中图分类号：Ｇ６４２．４２３
文献标识码：Ａ
文章编号：１００１—９６７７（２０１３）２１—０１４７－０３
ＲｅｆｏｒｍｏｎＣｏｕｒｓｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｄｔｈｅＥｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓＥｖａｌｕａｔｉｏｎ
ｏｂｔａｉｎｅｄｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｉｒｏｗｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｓｕｂｊｅｃｔ，ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｓｔｕｄｅｎｔｓｐｒａｃｔｉｃａｌｓｋｉｌｌｓｗｅｒｅ

生物技术综合性实验教学的探索和实践

近年来，随着现代生物技术的迅猛发展，用功运能基因组学、白质组学、蛋生物信息学等现代生化与
分子生物学技术，合基因工程、白质工程、结蛋细胞
课，一段理论课，排一次实验课，学内容多为上安教
施、效果等方面探讨了生物技术专业综合性实验的教学，以期为生物技术实验教学改革提供借鉴。关键词：生物技术；教学改革；综合性实验
中图分类号：Ｒ１Ｇ４．３８６２０文献标识码：Ａ文章编号：１０７４（０８００８００８— ２９２０）５— ５２— ３
重要性，为此，我们开设基因工程制药综合性实验，
尝试把生物信息学、因工程、酵工艺、白质药基发蛋物分离纯化等课程某些章节中分散的实验课内容汇
编成综合性大实验用于教学，以期帮助学生理清生物技术的专业脉络，进知识的融会贯通，促获得更好
项目以验证性实验为主，验的教学内容和教学方实法陈旧，已不能适应生物技术迅猛发展的需要。随着全国高校实验教学改革的开展，实验向着综合性、创新性等方向发展。近年来，们对生物技术专业我
Ｅｘｌｒｔｏｎｒｃｃｎｃｍｐｒｈｎｉｅｅｅｉｎａｅｃｉｇｏｉｔｃｎｌｇｐｏａｎａｄｐａｔｅｏｏｉｉｅｅｓｖｘｒｍｅｔｌｔａｈｎｆｂｏｅｈｏｏｙｐ

生物技术大实验完整版

生命的基本特征：①细胞是生物的基本组成单位（病毒除外）②新陈代谢、生长和运动是生命的基本功能③生命通过繁殖而延续，DNA是生物遗传的基本物质④生物对外界可产生应激反应和自我调节，对环境具有适应性生物学经历的三个阶段：描述生物学阶段、实验~、创造~生物技术：也称生物工程，是以现代化生命科学为基础，运用先进科学原理和工程技术手段按预先的设计来加工或改造生物材料，从而产生出人类需要的产品或达到某种目的生物技术发展三个阶段：作坊式生物技术、工业化~、现代~生物技术内容：基因工程技术、细胞~、酶~、发酵~、蛋白质~细胞工程：指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传特性，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术蛋白质工程：是以蛋白质结构功能关系的知识为基础，通过周密的分子设计，把蛋白质改造为合乎人类需要的新的突变蛋白质。

蛋白质工程也成为“第二代基因工程”生物技术基本特征：①高效益②高智力③高投入④高竞争⑤高风险⑥高势能透光度t：某一波长的光透过某一物质的溶液时，其入射的角度I0与透过溶液后的强度I相比发生了变化：I与I0的比值（I /I 0)称为透光度实验室常用水的制备：①利息交换法②蒸馏法③反浸法④超纯法消毒灭菌方法：①高压高温灭菌②干热灭菌③滤膜灭菌④化学消毒法⑤紫外线灭菌⑥抗生素灭菌消毒核酸的一级结构：线性结构，核苷酸的排列顺序，也称碱基序列二级结构：双螺旋结构三级结构：超螺旋结构DNA的变形：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程增色效应：核酸变性后，在260nm处吸收值上升DNA的复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象减色效应：DNA复性时，OD260值下降影响复性速度的因素：①溶液温度的高低②单链片段的大小③单链片段浓度④溶液离子强度的大小⑤片段内重复序列的多少OD260的应用：OD260=1.0 相当于①50ug/ml 双链DNA ②40ug/ml 单链DNA或RNA③20 ug/ml 寡核苷酸基因（分子生物学概念）：基因是DNA双螺旋分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列管家基因：某些基因是维持细胞基本代谢所必须的基因，其在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达阅读框架：在DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码子为止的一个连续编码序列基因的结构：外显子、内含子、前导区、尾部区、调控区三个关键因素：①自由复制的DNA序列②着丝粒DNA序列③端粒DNA序列原核生物和真核生物染色体的区别：①原核生物的染色体实质上是一个裸露的DNA双螺旋结构，DNA通常呈环状，且与相对少量的蛋白质结合，长度可打达几厘米，DNA复制从单一复制起点开始②真核生物都有许多线状的染色体，且染色体存在于细胞核内，真核生物染色体由DNA、组蛋白、RNA、非组蛋白等成分组成。

生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选

生物技术综合实验——淀粉酶产生菌的初步筛选一、实验目的学习从自然界中筛选分离淀粉酶产生菌株。

二、实验内容淀粉酶产生菌的筛选和分离。

三、实验原理在筛选培养基平板上，可溶性淀粉被目的菌株产生的淀粉酶水解，形成透明圈。

不同种类的微生物产生的淀粉酶的种类和活力各不相同，对可溶性淀粉的水解能力各不相同，所形成的水解圈与菌落大小比值故而不同，因而根据其比值可初步断定其对可溶性淀粉的水解能力。

许多细菌和霉菌产生淀粉酶，特别是一些芽孢杆菌，因此，本实验将土壤样品加热处理后，将其接种到筛选培养基平板进行培养，根据平板的水解圈做初筛，从中筛选出产淀粉酶活性较好的菌株进行保藏。

四、实验材料和用具1、材料：土壤样品2、试剂：牛肉膏蛋白胨筛选培养基平板（含可溶性淀粉1%）、45mL无菌水瓶3、仪器及用具：恒温培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、摇床、酒精灯、牙签、移液枪、试管、涂布器、量筒等。

五、操作步骤（一）准备材料1、筛选固体培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入可溶性淀粉（1%），配制600mL，制备30个平板。

2、含45mL水的三角瓶5瓶，200ul枪头及枪头盒3盒，牙签3瓶，涂布器3包，灭菌处理。

（二）菌种分离1、土壤采集选取采集地点地表植被根系周围的土壤，首先去除地表浮土，然后挖取2-5cm深的土壤样品，每个样品约取20g土壤，装入塑料袋内，备用。

2、制备菌悬液取5g土壤样品置于含45ml无菌水的三角瓶中，用振荡器震荡10分钟，在90度水浴锅中处理15分钟。

3、涂布平板培养与分离吸取100ul悬浮液，用涂布器涂布于筛选培养基平板，待液体充分被吸收后，置于37℃培养箱中培养48h。

每组做2个平板。

（三）菌种初步筛选在平板中加入少量卢戈氏碘液，观察菌落形成透明水解圈情况，用无菌牙签挑取产水解圈的菌落，转接到新的筛选培养基中，每个平板上接种16个菌种，每组接种2个平板，置于37℃培养24h。

在平板内加入卢戈氏碘液，根据单菌落透明圈直径与菌落直径比值(H/C)大小进行初筛，选择水解圈直径与菌落直径比值大的菌株，从中选取淀粉酶活力相对较高的菌株。

生物技术综合大实验-GFP纯化

生物技术综合大实验实验报告GFP的分离与纯化姓名：专业班级院系：指导教师：完成日期GFP的分离与纯化摘要： GFP，在生物领域应用广泛。

本实验回顾了GFP提取纯化过程，包括细菌破碎、GFP沉淀、疏水过滤层析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析等步骤，来获得较纯的GFP，并运用SDS-PAGE来检测纯化效果。

关键词：GFP 应用进展层析 SDS-PAGE绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于这些腔肠动物体内的生物发光蛋白。

1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequorin victoria)中分离出一种分子量为20kDa的称为Aequorin的蛋白。

由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。

1992年Prasher 等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构；1994年Chalfie 等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GFP，开创了GFP应用研究的先河，之后很快发现GFP能在多种异源细胞中表达，GFP在细胞学、分子生物学和医学、病毒学等领域中迅速掀起了一股热潮；1997年10月18~22日在美国New—Jersey专门召开了一次关于GFP的国际会议。

1994年钱永健改造了GFP，使得GFP的荧光变强、变色。

由此和Shimomura、Martin Chalfie共享了2008年诺贝尔化学。

从此，荧光蛋白带来了生物技术的新革命。

GFP本身是一种酸性，球状，可溶性天然荧光蛋白，分子量约27×103，一级结构为一个由238个氨基酸残基组成的单链多肽。

在395 nm具有最高光吸收峰，肩峰为473 nm；发射光谱λmax=508~509nm。

GFP性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质。

其变性需在90℃或pH<4.0或pH>12.0的条件下用6mol/L盐酸胍处理，一旦恢复中性环境，或去除变性剂，虽然变性的蛋白质并不能完全复性，但是复性蛋白质同天然蛋白质对温度、pH 变化的耐受性、抗胰蛋白酶消解的能力是相同的。

生物技术综合大实验教学探讨

现代生物技术始兴于２０世纪７０年代，一门飞速发是
较多、果较好的方法和技术引入教学中，上游的分子生效把物学技术如功能基因的分离、隆及重组克隆的鉴定及质克粒的提取、化等实验项目和下游的生化技术如生物大分转子的分离、纯化、定技术综合起来．鉴实现传统的验证性实验向综合性、设计性、研究性实验模式的转变。
先进方法和技术充实到教学中，涵盖上游的分子生物学技
术和下游的生化分离、纯化到鉴定的一系列方法和技术。该课程内容设置将学生动手操作、师课堂讲解和示教范、生讨论及课后作业等整合在一起，合性强，目标学综其是培养学生的独立科研能力和协作能力．学生掌握一些使基本的生物化学基础知识，之在现代生物技术领域得到使更加全面的训练，今后从事生物技术及相关学科领域的为研究奠定基础。
进行探讨，增强学生对生物技术实验教学的兴趣，高教以提
学质量。１课程设计的思想及目标
表达蛋白的提取分离及纯化。中蛋白的提取分离主要是其综合运用物理法、械法及生物化学３种方法进行细胞破机碎，量提取目的蛋白粗样品；化方法包括传统的疏水作大纯用层析法、盐析法、子交换层析法、析法、离透凝胶过滤法及聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定法等，实验项目间前后联系紧密，成为有机的整体。这就要求学生必须认真做好每一项实验，从而培养学生细心、严谨的科学态度。此外，该试验选取绿色荧光蛋白ＧＰ作为试验材料，此利用手持紫外灯就可Ｆ因以实时看到每一步的试验结果，强了学生做实验的兴趣增和信心，当每一项试验都有结果也会令学生有成就感，而从而激发学生做实验的热情，高他们思维的积极性，提促使学生形成一种渴求知识的内部动力。生物技术实验内容涉及的知识点较多，具体包括以下

生物技术综合性实验课程初探

识和实验知识，要增加一定的难度，又同时在整个
验准备直至实验结果获取的全过程。通过这种训
练方式，能使学生的动手能力、综合问题的分析对能力得到大大加强。
实验过程中教师不再详细讲解每一个实验环节，主要是给学生指出实验的思想和解决问题的方
的求知欲和探索未知世界的兴趣，还对挖掘学生 ห้องสมุดไป่ตู้
的潜能、高学生的综合素质都具有非常重要的提意义。笔者在实验教学改革的基础上，模块式就生物技术综合性实验的设计、设等问题进行初开
步探讨。
会后的适应能力的提高。
收稿日期：２ｏ－２ｏ０６１－６
１综合性实验的概念、特点及意义
综合性实验是在基础实验和验证性实验的基
基金项目：广西科学基金资助项目（桂科青０４０３。４７６）作者简介：黎海彬（９４，广州城市职业学院副教授、１６一）男，博士，主要研究方向：品生物技术、然产物的提取分食天
Ｖ１３ＮＯ１ｏ．３．
Ｍａ．２００ｒ７
生物技术综合性实验课程初探
黎海彬
（州城市职业学院生物与环境工程系，广东广州５００）广１４５
摘
要：大学实验教学的一个重要目标就是要培养学生的综合素质和创新意识。实验教
维普资讯
第３第１３卷期

生物技术综合大实验教学改革初探

第９卷第４期
２１年８月０１
实验科学与技术
ＥｘｅｉｎｃｅｃｎｅｈｏｏｙｐｒｍｅｔｉｎｅａｄＴｃｎｌｇＳ
Ｖ０．．１９Ｎｏ４
Ａｕｕｔ２ｇｓ．０１１
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
生物技术综合大实验教学改革初探
中图分类号：Ｇ４６２文献标志码：Ａ文章编号：１７４５（０１０６２— ５０２１）４一Ｏ９０ＯＯ一３
ＰｒｍａｙＥｘｌｒｔｏｎｔｅＴｅｃｉｇＲｅｏｍｓｏｏｏｉａｉｒｐｏａｉｎｏｈａｈｎｆｒｆＢｉｌｇｃｌ
ｔｎ，ｅｃｉｅｈｄｎｖｌａｏｅｏｓｅｔｔａｈｎｍｔｓｄｅａｕｔｎｍｔｄ．Ｗｉｅｗｅｅｐｎｃａａｔｒｔｓｏｂｅｔ，ｐｉｉｎｅｃｕｓｓｍ，ｇｏａｉｈｔｔｉｏｎｄｖｌｍｅｔｈｒｅｓｃｆｕｊｃｏｔｚｇｔｏｒｓｔｈｈｒｏｃｉｉｓｓｍｉｈｅｙｅ
ＴｅｈｉｕｎｅｒｔｏｐｒｍｅｔｃｎｑｅＩｔｇａｉｎＥｘｅｉｎ
ＨＵＡｉｒｉＩＸｉｏｌＺｈ —ｕ，Ｌａ —ｉｎｇ（ｅａｔｅｔｆｉｅｉｌｄｉｉｎｉｅｒｇＳａｇｕｎｖｒｔ，Ｓａｇｕ２００，ｈｎ）ＤｐｒｎｏｄｃｍｏＢｍａＭｅｃｅＥｇｎｅｎ，ｈｎｌＵｉｅｓｙｈｎｌｏ７６０Ｃｉｎｉｏｉａ
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ｔｉａｅｘｌｒｓｈｗｔｍｐｏｅｃｍｐｅｅｓｖｒｃｉａｂｌｙｏｉｔｃｍｏｏｙｕｄｒｒｄａｅｔｒｕｈｃｍｐｅｅｓｖｈｓｐｐｒｅｐｏｅｏｏｉｒｖｏｒｈｎｉｅｐａｔｌａｉｔｆｂｏｅｌｌｇｎｅｇａｕｔｈｏｇｏｒｈｎｉｅｃｉｅｐｒｎａｅｃｉｇｘｉｅｍｅｔｔａｈｎ．Ａｃｏｄｎｏａｔａｘｅｉｎａｅｃｉｇｏｉｌｇｃｌｔｃｎｑｅｉｔｇａｉｎｅｐｒｍｅｔｆｒｄｐｒｍｅｔｏｉ— ｌｃｒｉｇｔｃｕｌｅｐｒｍｅｔｌｔａｈｎｆｂｏｏｉａｅｈｉｕｎｅｔｘｉｎｏｅａｔｎｆｂｏｒｏｅｍｅｉａｄｃｎｎｉｅｒｇｔｘｌｒｅｒｌｔｎｈｐｂｔｅｅｏｍｎａｈｎｆｃｉｅｅｓｏｒｅａｐｃｓｏｅｔａｈｎｏ－ｄｃｌｍｅｉｉｅｅｇｎｅｎｅｐｏｅｔｅａｉｓｉｅｗｅｎｒｆｒａｄｔｃｇｅｅｔｎｓｆｈｅｓｔｆｔｅｃｉｇｃｎｉｏｈｏｅｉｖｔｅｈ

生物分离技术综合实验—植物色素提取分离及定量和初步鉴定

脱下来的A值大于0.1的纯化液混匀后才能取液。
实验三、植物色素的定量与初步鉴定
• 一、目的 • 用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，
同时测定黄酮的含量和最后的得率。
• 二、原理 • 黄酮化合物分子结构中具有C5、C6位的酚羟基或邻二
酚羟基可与金属盐试剂铝盐生成有色络合物，黄酮络合物在510nm处有较大的吸收峰，可由分光光度法测出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一些试剂发生特殊的发色反应来检测黄酮。
• 4、实验当中的提取液一定要全部从磨口锥形瓶和离心管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，不要将底部的沉降物倒出来。
实验一、植物色素的制备
• 5、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，若乙醇蒸发较快时（如：80% 以上的高浓度乙醇提取时），可以考虑在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇提取时没有必要加蛇形管。
• 3.2 精密吸取上清液1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加质量分数5％亚硝酸钠0.4 mL，放置6 min后，加质量分数10％硝酸铝0.4 mL，放置6 min，再加质量分数4.3％氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在510nm波长下测得其吸光度值，按V*A值的大小比较得出最优的料液比。
• 6、测量吸光度时，一定要设空白对照（即用 1mL70%的乙醇代替样液以外，的其余试液按 3.2中所述正常加入）
实验一、植物色素的制备—附录
• 1、实验前面准备
• （1）、原料的制备（同学们不需要做）
• 用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过40目以上，40-60目， 60-70目，70-80目，80-90目，90-100目，100目以上，筛后备用。
实验二、植物色素的分离纯化

现代药学生物技术综合大实验存在的问题和解决方法——中山大学药学院《现代药学生物技术综合大实验》改

现代生物技术作为一种综合了生命科学与多种现代科学理论与研究手段的高新技术，已经深人新药研究和开发的各个领域，为新药的顺利研制和发展开辟了广阔的前景。现代生物技术的诞生源于生物化学、遗
传学、免疫学和生理学等的不断发展和重大发现，经历了经典的细胞生物学、分子生物学和现代的分子细胞生物学几个阶段。现代生物技术是以基因Ｔ程为主导的一门实验学科，的实践性非常强，它众多的理论知识必须在实践中进行验证，才能深刻地理解与应用。因
Ｊ奔』、Ｊ验技术包括分子，物学实验（分子克隆）微和个物验（仫纠Ｉ、１胞的培养、定和原俊表达）细胞１、物。验（胞Ｋ、分化衰老特征的观察、ＮＤＡｆＩｆ爪、胞『酸悱：Ｉｎｌ、Ｉｌ｛人ｊ篮ｒ币碱性蛋ｎ的永、线
了一些问题，针对这些问题，我们进行了讨论，并制订
此，现代生物技术实验课程开展得是否顺利，直接关系
到相关课程的教学效果和教学质量。基于对现代生物
方案予以解决。具体的问题及解决方法可概括为如下三点：
一
、
目前的实验内容缺乏自主设计。不能真正体现
课方式虽能突出实验技术本身，但学生上完课后不能把理论知识与实际操作相结合，缺乏掌握知识的连贯性、遇到问题时不清楚何时运用和怎样运用这些技术
解决实际问题。本学院此次暑期实验全面改革了实验
教学方法，加强了实验的综合性和连贯性。实验主要包括＿二大部分：重组质粒的构建、目的基因表达及多克隆抗体制备，过８通次实验完成，共持续三周。综合看来，整个实验课程体系类似一个比较完整的科研过程。也

生物技术综合大实验讲义

1、用 Excel 绘制葡萄糖标准曲线，显示方程和 R 平方值。 2、计算糖化液中还原糖和总糖的浓度，并与手持折光仪测定结果进行比较。分析影响双酶法制糖的因素有哪些？
4
实验三酵母活化和游离酵母细胞发酵生产酒精
一、实验目的学习和掌握酵母菌发酵糖产生酒精的方法，熟悉酒精生产过程和主要的工艺条件。
“生物技术综合大实验---酒精发酵”讲义
本实验以木薯淀粉为原料，利用双酶法水解制备糖化醪液，然后在所得醪液中加入活化好的游离酵母细胞或固定化酵母细胞，采用传统的间歇发酵工艺在无（缺）氧条件下进行发酵得到具有一定酒精浓度的发酵醪液，最后将发酵醪液蒸馏。实验中要测量糖液浓度和发酵液酒精浓度并计算糖醇转化率。
2、糖化液中含糖量的测定糖化液总糖测定：首先检测糖化液中是否还含有淀粉，可取出 1～2 滴糖化液置于白瓷板上，加 1 滴 I-KI 溶液检查，如淀粉完全水解，则不呈现蓝色。接着还需用酸解法将糖化液中非还原糖完全水解成还原糖。做法是取 0.5 mL 糖化液（取糖化液前要充分摇匀）于 50 mL 三角瓶中，加入一定量的硫酸或盐酸（参考值：6 mol/L HCl 5mL，蒸馏水 8 mL），置于沸水浴中加热 30 min。水解毕，冷却至室温后加入 1～2 滴酚酞指示剂，以 6 mol/L NaOH 溶液中和至溶液呈微红色，将三角瓶中溶液全部转移到 250 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容到 250 mL，即为稀释 500 倍的总糖水解液，取 1 mL 用于总糖测定。糖化液还原糖测定：先做预实验确定合适的稀释倍数（稀释倍数参考值：500 倍）。用移液枪取糖化液（取糖化液前要充分摇匀）0.5 mL 于 250 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容到 250
二、实验原理在工业酒精和各种酒类的生产中，酒精发酵作用主要是由酵母菌完成的。酵母菌通过

生物技术综合大实验

生物技术综合大实验work Information Technology Company.2020YEAR2013-2014学年生命科学综合大实验GFP分离与纯化1.文献综述绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）是由238个氨基酸组成，分子量是26.9kDa，最初是从维多利亚多管发光水母(Aequorea victoria )中分离出来的，在蓝光照射下会发出绿色荧光。

来源于水母的野生型GFP在395nm和475nm分别有主要和次要的激发峰，它的发射峰在509nm，处于可见光谱的绿色区域，来源于海肾的GFP只在498nm有单个激发峰。

GFP是典型的β桶形结构，包含β折叠α和螺旋，将荧光基团包含在其中。

严密的桶形结构保护着荧光基团，防止它被周围环境淬灭，内部面向桶形的侧链诱Ser65-Tyr66-Gly67三肽环化，导致荧光基团形成。

北京时间10月8日下午5点45分，2008年诺贝尔化学奖揭晓，三位美国科学家，美国Woods Hole海洋生物学实验室的Osamu Shimomura(下村修)、哥伦比亚大学的Martin Chalfie和加州大学圣地亚哥分校的Roger Y.Tsien（钱永健）因发现并发展了绿色荧光蛋白（GFP）而获得该奖项。

下修村首次从Aequorea victoria中分离出GFP。

他发现该蛋白在紫外线下会发出明亮的绿光。

Martin Chalfie证明了GFP作为多种生物学现象的发光遗传标记的价值。

在最初的一项实验中，他用GFP使秀丽隐杆线虫的6个单独细胞有了颜色。

钱永健的主要成就在于让人们理解了GFP发出荧光的机制。

同时，他拓展出绿色之外的可用于标记的其他颜色，从而使科学家能够对各种蛋白质和细胞施以不同的色彩。

这一切，令在同一时间跟踪多个不同的生物学过程成为了现实。

2.实验器材2.1实验材料：含GFP融合质粒，Top10菌株2.2实验试剂：质粒提取：溶液Ⅰ：50mM葡萄糖/10mM EDTA /25mM Tris-HCl，pH=8.0；溶液Ⅱ：0.2M NaOH/1% SDS；溶液Ⅲ：3M醋酸钾/2M醋酸；无水乙醇，75%乙醇，TE Buffer；转化：0.1M预冷 CaCl2，LB培养基，氨苄青霉素，阿拉伯糖；GFP提取：液氮，Lysis Buffer，饱和(NH4)2SO4溶液，溶菌酶；疏水作用层析柱材：苯基琼脂糖凝胶CL-4B；离子交换柱层析柱材：DEAE+纤维素，Start Buffer(A液20mM Tris-HCl，pH7.0（透析液）)Elution buffer(B液20mM Tris-HCl，1M NaCl，pH7.0) SDS-PAGE电泳：PEG10000，Loading Buffer，溴酚蓝，丙烯酰胺，Tris，SDS，过硫酸铵，TEMED，Gly，SDS，甘油，β-巯基乙醇，溴酚蓝，甲醇，考马斯亮蓝，乙酸等2.3实验仪器高速冷冻离心机,移液枪，超声波破碎仪，梯度混合器，恒流泵,层析柱,色谱仪,自动记录仪,SDS-PAGE电泳装置。

关于生物技术综合实验报告

关于生物技术综合实验报告生物技术综合实验甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学生：学号：同实验者：谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 爱惜细胞膜的完整性等。

γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 能够调控GSH的生物合成量。

GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫进程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆进程紧密相关。

实验一甘薯叶片RNA提取一、实验目的1. 了解真核生物RNA提取的原理；2. 把握Trizol提取的方式和步骤。

二、实验原理Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解进程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成份的同时维持RNA的完整性。

TRIzol 的要紧成份是苯酚。

苯酚的要紧作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚取得释放。

苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。

%的8－羟基喹啉能够抑制RNase，与氯仿联合利用可增强抑制作用。

异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，致使细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

β-巯基乙醇的要紧作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。

用这种方式取得的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。

三、实验材料1. 材料甘薯叶片，品种为徐薯182. 试剂①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处置留宿后高压灭菌；②Trizol试剂；③氯仿；④异丙醇、75％乙醇；⑤TBE缓冲液；⑥上样缓冲液3. 仪器高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP 管架四、实验方式1. 将叶片掏出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充割裂解；2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿，用手猛烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相；3. 4℃12,000 rpm 离心15 min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰凉的异丙醇，室温放置15 min；4. 4℃12,000 rpm 离心10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃8,000 rpm离心2 min，弃上清；6. 室温放置10 min晾干沉淀；7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保留；8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。

注重大学生实践能力、创新意识的培养——《生物技术综合性实验》教学探讨

创新意识的培育，培养高素质的生物技术专业人才，适应
社会发展的需求。
一
设的生物化学实验、微生物学实验等实验课程的基础上，让学生进一步学习、掌握和应用现代生物技术的综合性实
验课程，教学安排在第三学年的第二学期的最后２。这周
、
生物技术综合性实验的内涵及在海洋技术专业教
人才是高等教育的课题和任务，也是社会发展对高校的迫
切要求。在我国传统的教育体制中，学更多是关注科学大文化知识的教育，导致大学生的实践能力和创新能力培养成为我国大学教育的软肋。如何加强大学生综合实践技能和创造能力已成为培养生物技术高端人才的关键。本文以盐城工学院开设的生物技术综合性实验为对象，探讨如何在生物技术综合性实验中注重大学生实践能力和
２１００年第１期１总第１４期６
林区教学
ＴｅｃｉｇｏｒｓｒｇｏａｈｎｆＦｏｅｔｙＲｅｉｎ
Ｎｏ１２１．１００ＧｎｒｌＮ．６ｅｅａｏ１４
注重大学生实践能力、创新意识的培养
产业的快速发展使得生物技术企业急需既具有生物技术应用研究的理论知识（括生物科学技术研发、包产业营销、
业务管理及行政管理等）又有较强实践操作技能的生物，技术高端人才。生物技术人才的培养主要依赖于大学
教育，如何培养素质高、能力强、能适应生物技术全球化的