新型无创DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用_杨湘玲

室增宽３例、左心室 强 光 点 ３ 例、单 脐 动 脉 ２ 例、鼻 骨缺失１ 例）；孕 妇 心 理 恐 惧 要 求 直 接 检 查 １０ 例。 唐 筛 高 危 组 及 高 龄 组 共 计 １３４５ 例 孕 妇 ，均 因 担 心 穿 刺手术的 感 染、流 产 风 险 或 孕 周 大 于 ２２＋６ 周 等 原 因 ，未 行 介 入 性 产 前 诊 断 。 排 除 标 准 ：有 染 色 体 异 常 和先天畸形家族史、孕 妇 及 其 配 偶 之 一 为 染 色 体 易 位 或 倒 位 携 带 者 、双 胎 或 多 胎 。 １．２ 研 究 方 法 孕 妇 知 情 同 意 后，于 妊 娠 １３～２６ 周抽外周血 １０ ｍｌ，由 北 京 贝 瑞 和 康 生 物 技 术 有 限 公司和湖南湘雅医 院 产 前 诊 断 中 心 合 作 开 展 的 “大 规模基于新一代测序技术 的 新 型 无 创 ＤＮＡ 产 前 检 测”，对孕 妇 外 周 血 中 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 进 行 序 列 分 析，对检测结果阳性 者 进 行 羊 水 穿 刺 及 胎 儿 染 色 体 核型分析，对检测结 果 阴 性 者 行 电 话 随 访 其 胎 儿 出 生后情况。
１ 资 料 与 方 法
１．１ 一 般 资 料 资 料 来 源 于 ２０１２ 年 ８ 月 １ 日 至 ２０１３年４月３０日在安徽省妇幼保 健 院 接 受 孕 妇 外 周血中 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 检 测 者 １３６５ 例，均 为 单 胎， 孕周（１９．１±５．８）周，纳 入 标 准：按 照 孕 妇 年 龄 及 血 清学筛查结果分为３组，唐 氏 综 合 征 筛 查 １６～１９＋６ 周妇 女 进 行 血 清 标 记 物 ＡＦＰ 和 ｆｒｅｅ－β－ｈＣＧ２ 项 指 标双 标 记 检 测，筛 查 结 果 应 用 ＬｉｆｅＣｙｃｌｅ 和 Ｅｌｉｐｓｅ 软件计算唐氏综合征风险。唐氏筛查风险切割值为 １∶３００，当切割值≥１∶３００ 时 为 唐 氏 高 危 孕 妇，当 １８ 三体风 险 ≥１∶３５０ 时 为 １８ 三 体 高 危 孕 妇。 ① 高 危 组 ：１０５１ 例 ，预 产 年 龄 ＜３５ 岁 ，平 均 年 龄 ２７ 岁 ，唐 氏 综合征血清学筛查 提 示 ２１ 三 体 或 １８ 三 体 高 风 险； ②高龄 组：２９４ 例，预 产 年 龄 ≥３５ 岁，平 均 年 龄 ３８ 岁；③其他原因组：２０ 例，预 产 年 龄 ＜３５ 岁，未 做 母 血 清 学 筛 查 ，超 声 有 异 常 发 现 １０ 例 （脑 积 水 １ 例 、脑
＊ 通 讯 作 者 ：朱 健 生 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｅｎｎｙｔｉｇｅｒ９７＠ｈｏｔｍａｉቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ．ｃｏｍ
１６· 论 著 ·
《中 国 产 前 诊 断 杂 志 （电 子 版 ）》 ２０１３ 年 第 ５ 卷 第 ２ 期
ｏｆ ｆｅｔａｌ Ｄｏｗｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｗａｓ １００％，ａｃｃｕｒａｔｅ ｒａｔｅ ９４．４％．② Ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ８ｃａｓｅｓ ｏｆ １８ ｔｒｉｓｏｍｙ，１ｃａｓｅ ｒｅｆｕｓｅｄ ｆｏｒ ｐｕｎｃｔｕｒｅ，７ｃａｓｅｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．③ ６ｃａｓｅｓ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ｗｅｒｅ ４５，Ｘ０，３ｃａｓｅｓ ｉｎ ｔｅｓｔｉｎｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｃａｖｉｔｙ ｐｕｎｃｔｕｒｅ，２ｃａｓｅｓ ｏｆ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ４５，Ｘ０， １ｃａｓｅ ｏｆ ４６，ＸＸ．④ Ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｔｅｌｅｐｈｏｎｅ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃａｓｅｓ，ｎｏ Ｄｏｗｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂａｂｙ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｆｒｅｅ ＤＮＡ ｉｎ ｐｒｅｇｎａｎｔ ｗｏｍｅｎ ｃａｎ ｄｅｔｅｃｔ ｆｅｔｕｓ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｒａｐｉｄｌｙ，ａｎｄ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｄｏｗｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ；ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ Ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
DOI:10.13470/ki.cjpd.2013.02.008
《中 国 产 前 诊 断 杂 志 （电 子 版 ）》 ２０１３ 年 第 ５ 卷 第 ２ 期
· 论 著 ·１ ５
新型无创 ＤＮＡ 产前检测在诊断胎儿染色体 非整倍体疾病中的应用
杨湘玲 朱健生＊ 刘贤云 （安徽省妇幼保健院，安徽医科大学妇幼保健临床学院，安徽 合肥 ２３０００１）
【摘要】 目的 探讨新一代测序技术的新型无创 ＤＮＡ 产 前 检 测 在 诊 断 胎 儿 染 色 体 非 整 倍 体 疾 病 中 的 应 用 价 值 。 方 法 ２０１２ 年 ８ 月 １ 日 至 ２０１３ 年 ４ 月 ３０ 日 在 安 徽 省 妇 幼 保 健 院 接 受 孕 妇 外 周 血 中 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 检测者１３６５例，均为单胎，孕周（１９．１±５．８）周，按照孕妇年龄及血清学筛查结果分为唐氏综 合 征筛查（唐筛）高危组、高龄组和其他原因组３组由 北 京 贝 瑞 和 康 生 物 技 术 有 限 公 司 和 湖 南 湘 雅 医 院 产 前诊断中心合作开展的“大规模基于新一代测序技术的新型无创 ＤＮＡ 产前检测”，对孕妇外周血中游离 胎儿 ＤＮＡ 进行序列分析，对检测结果阳性者进行羊水 穿 刺 及 胎 儿 染 色 体 核 型 分 析 ；对 检 测 结 果 阴 性 者 行电话随访其胎儿出生后情况。结果 ① ３组孕妇共计 １３６５ 例 均 成 功 完 成 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 检 测，检 测 结 果 为 阳 性 者 共 ３３ 例 ，包 括２１ 三 体１９ 例 、１８ 三 体８ 例 、４５，Ｘ ６ 例 。 其 中 唐 筛 高 危 组 检 出 ２１ 三 体８ 例 、 １８ 三体７例、４５，Ｘ ４例；高龄组检出２１三体９例、１８三体１例、４５，Ｘ ２例；超声侧脑室增宽检出２１三体 １例、鼻骨缺失检出２１三体一例。② 游离胎儿 ＤＮＡ 检测结果异常的３３例孕妇中，２８ 例 进 行 了 羊 膜 腔 穿刺及染色体核型分析。１９例２１三体检测阳性者 １８ 例 进 行 了 羊 膜 腔 穿 刺，１７ 例 染 色 体 核 型 均 为 ４７， ＸＮ，＋２１，另１例核型为４６，ＸＮ（７０）／４７，ＸＮ，＋２１（１０），最 后 经 胎 儿 脐 血 染 色 体 检 测 为 ４６，ＸＮ，随 访 新 生儿正常。胎儿鼻骨缺失发现时已２４周，无创检出２１三体，行脐带血检测结果 为 异 位 型 ２１ 三 体，核 型 ４６，ＸＸ，ｄｅｒ（２１；２１）（ｑ１０；ｑ１０），＋２１。结果检出率 １００％，准 确 率 ９４．４％。８ 例 １８ 三 体 检 测 阳 性 者 中 有 ７例进行了羊膜腔穿刺，７例核型为４７，ＸＮ，＋１８；两者结果完全一致，另ｌ例拒 绝 羊 水 穿 刺，引 产 中 发 现 胎儿全身水肿。③ ６例４５，Ｘ 检测阳性者中有３例进行了羊膜腔 穿 刺，２ 例 核 型 为 ４５，Ｘ，１ 例 为 ４６，ＸＸ （出现了假阳性），另 ３ 例 拒 绝 羊 水 穿 刺，其 敏 感 性 和 准 确 性 无 法 统 计 。 ④ ３ 组 孕 妇 血 浆 中 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 检测结果阴 性 者 １３１２ 例，经 电 话 随 访，截 止 至 ２０１２ 年 ４ 月 ３０ 日，已 出 生 的 新 生 儿 经 检 查 均 未 发 现唐氏综合征患儿。结论 孕 妇 外 周 血 中 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 检 测 对 ２１ 三 体 和 １８ 三 体 的 检 测 准 确 率 达 ９６％，对４５，Ｘ 的检出率也达到了很高水准，准确率有待临 床 配 合 进 一 步 证 实。 但 是 在 其 他 染 色 体 异 常 的检测中还需要进一步研究。此外该方法不能筛查出染色体结构异常。 【关 键 词 】 唐 氏 综 合 征 ；大 规 模 基 于 新 一 代 测 序 技 术 ；染 色 体 ；无 创 产 前 诊 断 【中 图 分 类 号 】 Ｒ３９４．２ 【文 献 标 识 码 】 Ａ
产 前 诊 断 染 色 体 数 目 的 变 异 — 三 体 、单 体 ，常 见 的 遗 传 疾 病 有 唐 氏 综 合 征 （２１－三 体 ）、爱 德 华 综 合 征 （１８三体）、Ｐａｔａｕ 综 合 征 （１３ 三 体）、Ｔｕｒｎｅｒ综 合 征 （４５，Ｘ）、Ｋｌｉｎｅｆｅｌｔｅｒ综 合 征 （４５，ＸＸＹ）占 产 前 遗 传 疾病的８０％～９５％，约占新生儿 所 有 染 色 体 异 常 的 ６５％～８０％。最常 见 的 染 色 体 异 常 是 唐 氏 综 合 征。 《中华人民共和国母 婴 保 健 法 实 施 办 法》规 定，高 龄 初产妇应进行产前诊断。对预产 年 龄 ＜３５ 岁，唐 氏 综合征血清学筛查结果高风险孕妇也应进行产前诊 断。介入性产前诊断羊膜腔穿刺术相关的胎儿丢失 率为０．２％～０．３％［１］，因 此 很 多 孕 妇 不 愿 接 受，尤 其 是 那 些 胎 儿 珍 贵 、已 有 流 产 先 兆 的 孕 妇 ，如 何 进 行 合适的产前筛查和 产 前 诊 断 策 略，已 成 为 产 科 临 床 的一个实际问题。为此本文对在安徽省妇幼保健院 接受孕妇外 周 血 中 游 离 胎 儿 ＤＮＡ 检 测 者 １３６５ 例 结 果 进 行 回 顾 性 分 析 ，现 报 道 如 下 。
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ａ Ｍａｓｓｉｖｅｌｙ Ｐａｒａｌｌｅｌ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａ ｎｅｗ ｔｙｐｅ ｏｆ ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｏｎ ｆｅｔａｌ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄ １３６５ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｐｒｅｇｎａｎｔ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ ａｇｅ ａｍｏｎｇ ｆｒｏｍ １３～２５ ｗｅｅｋｓ ｔｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｆｒｅｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ，ｏｆ ｗｈｏｍ １０５１ｈａｄ ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｉｎ Ｄｏｗｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，２９４ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ３５ ｙｅａｒｓ ｏｌｄ，１０ ｗｅｒｅ ｓｈｏｗｎ ｆｅｔａｌ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｂｙ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ａｎｄ １０ｆｏｒ ｏｔｈｅｒ ｒｅａｓｏｎｓ． Ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｅｔａｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｆｏｒ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｏｎ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ， ｔｅｌｅｐｈｏｎｅ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ ａｆｔｅｒ ｆｅｔｕｓ ｂｉｒｔｈ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ① Ｉｎ １９ｏｕｔ ｏｆ １３６５ｐｒｅｇｎａｎｔ ｗｏｍｅｎ，ｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｏｆ Ｄｏｗｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，１８ｈａｄ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｃａｖｉｔｙ ｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ，１ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｆｅｔｕｓｅｓ ｗａｓ ｍｉｓｄｉａｇｎｏｓｅｄ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ