无创产前筛查PPT课件
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1959年
1866年
John Langdon D own 医生第一次 对唐氏综合征的 典型体征进行完 整的描述并发表。 Down’s syndrome.
法国遗传学家 (Jerome LeJeune)发现 唐氏综合征是 由人体的第21 号染色体的三 体变异造成的 现象。
染色体非整倍体疾病临床表现
• 21、18、13-三体综合征是人类最常见的三 种染色体疾病，患儿面容特殊，绝大多数 为严重智力障碍及器官畸形，对家庭和社 会造成巨大危害和负担。现代医学对胎儿 染色体疾病尚无有效治疗方法，最好的方 法是在孕期通过产前筛查及诊断，发现异 常并及时采取相应措施
样本采集
抽取孕妇外周血5 mL，采用 EDTA 抗凝； 采血完毕后，轻微颠倒采血管4次，并及
时将采血管放置于4℃冰箱中，在4小时 内进行血浆分离工作。 【注意事项】 采血时孕妇无需空腹； 采血管为 5 mL EDTA 抗凝管。做7项检 测需要用10ml抗凝管； 颠倒混匀时动作不能太剧烈，防止溶血。
体胎儿
无创产前基因检测流程
医 院
室枫 林 龙 鼎 实 验
无创产检的优势
早孕期筛查(检出率85%) 中孕期筛查 (检出率81%)
10-13.5周
15-20周
16-22周
24-28周
羊水穿刺
脐带血取样
（流产率0.5-1%）
（流产率1>99%）
适应症和禁忌症
外径宽32cm、外径高35cm。 2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；
无创产检的可信度研究
样本数 T21
T18
T13
XO
XXY XXX XYY
样本总数
26619 272
89
15
13
7
5
3
核型分析 假阳性 假阴性 检出率 假阳性率
3476 — — — —
191 1 0 100% 0.03%
重大出生缺陷无创产 前筛查
内容提要
一 常见染色体疾病概述 二 染色体非整倍体病发病机理 三 传统产前筛查与诊断技术介绍 四 无创产前项目工作流程
一、染色体非整倍体概述（唐氏综 合征为例 ）
7世纪
考古学家挖掘 出典型唐氏综 合征体征颅骨。
16世纪
素描画中见到 具有唐氏综合 征样面容的儿 童。
BRCA1
样本储存与运输
1、全血样本在冰袋(4 ℃)条件下运输，且在4 小时内送达样本接收处，样本接收后要立 即完成血浆分离。
2、血浆样本在干冰（-20 ℃ ）条件下运输， 并确保样本送达时有干冰剩余，到达后及 时存放于-80 ℃冰箱中，禁止将样本在室 温下放置。
【注意事项】 1）泡沫箱的规格：壁厚6cm、外径长39cm、
适应症： 1、经B超确认的单胎、活胎孕妇 2、孕周在12周至24周之间 3、可同时检测18三体，13三体，45,X，47,XXY， 47,XYY，47,XXX等多种染色体非整倍体疾病
禁忌症： 1、双胎或多胎 2、孕妇本人是染色体非整倍体患者 3、孕妇接受过异体输血、移植手术、干细胞或 免疫细胞 治疗
样本前处理
1、将采血管在4 ℃环境下 1600转/分离心10分钟，上清（血浆）分 装到置于冰盒上且已编号的2.0ml的 EP 管中。 【注意事项】 1）严格核对样本编号、确保编号唯一； 2）开启离心管时，不能碰到管内盖； 3）吸取血浆过程中不要吸到中间层的白细胞。
2、上述血浆 4 ℃ 16000转/分离心10 min，冰盒上将上清转入已编 号的2支2.0ml EP 管中，每个离心管转入600ul血浆。同时在每个 2.0ml离心管上标记样本编号、血浆体积、分离日期。 【注意事项】 1）严格核对样本编号、确保样本编号唯一； 2）开启离心管管盖时，不能碰到离心管内盖； 3）将分离好的血浆贴上对应的条码并用封口膜密封，密封结束后立 即将血 浆放入-20 ℃或-80 ℃冰箱中，避免反复冻融。 【注意事项】 全血须保证在4小时内进行血浆分离； 分离后的血浆在-20 ℃冰箱中可保存3天，长期保存需存放于-80 ℃
on chromosomes:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 X Y
Unique reads (单一 序列读取 ）: no mismatch, one location
以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位 来源于母亲， 5个单位来源于胎儿
21三体核型分析图
21三体形成原因
21三体发病率与产妇年龄关系
三、现有的产前筛查与诊断手段
产前筛查
母血清学筛查
风险计算
颈项透明膜厚度筛查
产前诊断
羊水穿刺
侵入性诊断方式
绒毛取样
脐静脉穿刺
传统筛查方式的缺陷
产前筛查 （S） 100,000
筛查结果阳 性 （ SP ） 7,000
筛查结果阴 性 （ SN ） 93,000
基本特点： 1 含量有一定的变化规律。妊娠 第4周开始可检出胎儿游离DNA， 随着孕周增加而增加，存在个体 差异，平均浓度。 2 分娩后短时间内消失，平均半 衰期为16.3min (4-30min)， 2h 就无法检出。再次妊娠不影响检 测结果。
母血浆DNA+高通量测序
母体和 胎儿Ｄ ＮＡ的 混合物
唐氏综合征胎儿
400
真阳性 （TSP） 340
假阴性 （FSN） 60
非唐氏综合征胎儿 99,600
假阳性 6,660 真阴性 92,940
（ FSP ） （ TSN ）
英国的统计显示，1996-2002年全国因羊水穿刺导致的抬儿 流失数为5619名
无创产筛技术原理的提出
胎儿DNA来源和特点
来源： 1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血 中，被母体免疫系统破坏，胎儿 DNA残留下来； 2 胎儿细胞凋亡； 3 胎盘滋养层细胞的凋亡
母亲
正常胎儿
Chr 21： 95×2=190
Chr 21： 5×2=10
母体外周血中 Chr 21=190+10=200
母亲
Chr 21： 95×2=190
21-三体胎儿
Chr 21： 5×3=15
母体外周血中 Chr 21=190+15=205
通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的 核酸片段数量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者 21-三
1866年
John Langdon D own 医生第一次 对唐氏综合征的 典型体征进行完 整的描述并发表。 Down’s syndrome.
法国遗传学家 (Jerome LeJeune)发现 唐氏综合征是 由人体的第21 号染色体的三 体变异造成的 现象。
染色体非整倍体疾病临床表现
• 21、18、13-三体综合征是人类最常见的三 种染色体疾病，患儿面容特殊，绝大多数 为严重智力障碍及器官畸形，对家庭和社 会造成巨大危害和负担。现代医学对胎儿 染色体疾病尚无有效治疗方法，最好的方 法是在孕期通过产前筛查及诊断，发现异 常并及时采取相应措施
样本采集
抽取孕妇外周血5 mL，采用 EDTA 抗凝； 采血完毕后，轻微颠倒采血管4次，并及
时将采血管放置于4℃冰箱中，在4小时 内进行血浆分离工作。 【注意事项】 采血时孕妇无需空腹； 采血管为 5 mL EDTA 抗凝管。做7项检 测需要用10ml抗凝管； 颠倒混匀时动作不能太剧烈，防止溶血。
体胎儿
无创产前基因检测流程
医 院
室枫 林 龙 鼎 实 验
无创产检的优势
早孕期筛查(检出率85%) 中孕期筛查 (检出率81%)
10-13.5周
15-20周
16-22周
24-28周
羊水穿刺
脐带血取样
（流产率0.5-1%）
（流产率1>99%）
适应症和禁忌症
外径宽32cm、外径高35cm。 2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；
无创产检的可信度研究
样本数 T21
T18
T13
XO
XXY XXX XYY
样本总数
26619 272
89
15
13
7
5
3
核型分析 假阳性 假阴性 检出率 假阳性率
3476 — — — —
191 1 0 100% 0.03%
重大出生缺陷无创产 前筛查
内容提要
一 常见染色体疾病概述 二 染色体非整倍体病发病机理 三 传统产前筛查与诊断技术介绍 四 无创产前项目工作流程
一、染色体非整倍体概述（唐氏综 合征为例 ）
7世纪
考古学家挖掘 出典型唐氏综 合征体征颅骨。
16世纪
素描画中见到 具有唐氏综合 征样面容的儿 童。
BRCA1
样本储存与运输
1、全血样本在冰袋(4 ℃)条件下运输，且在4 小时内送达样本接收处，样本接收后要立 即完成血浆分离。
2、血浆样本在干冰（-20 ℃ ）条件下运输， 并确保样本送达时有干冰剩余，到达后及 时存放于-80 ℃冰箱中，禁止将样本在室 温下放置。
【注意事项】 1）泡沫箱的规格：壁厚6cm、外径长39cm、
适应症： 1、经B超确认的单胎、活胎孕妇 2、孕周在12周至24周之间 3、可同时检测18三体，13三体，45,X，47,XXY， 47,XYY，47,XXX等多种染色体非整倍体疾病
禁忌症： 1、双胎或多胎 2、孕妇本人是染色体非整倍体患者 3、孕妇接受过异体输血、移植手术、干细胞或 免疫细胞 治疗
样本前处理
1、将采血管在4 ℃环境下 1600转/分离心10分钟，上清（血浆）分 装到置于冰盒上且已编号的2.0ml的 EP 管中。 【注意事项】 1）严格核对样本编号、确保编号唯一； 2）开启离心管时，不能碰到管内盖； 3）吸取血浆过程中不要吸到中间层的白细胞。
2、上述血浆 4 ℃ 16000转/分离心10 min，冰盒上将上清转入已编 号的2支2.0ml EP 管中，每个离心管转入600ul血浆。同时在每个 2.0ml离心管上标记样本编号、血浆体积、分离日期。 【注意事项】 1）严格核对样本编号、确保样本编号唯一； 2）开启离心管管盖时，不能碰到离心管内盖； 3）将分离好的血浆贴上对应的条码并用封口膜密封，密封结束后立 即将血 浆放入-20 ℃或-80 ℃冰箱中，避免反复冻融。 【注意事项】 全血须保证在4小时内进行血浆分离； 分离后的血浆在-20 ℃冰箱中可保存3天，长期保存需存放于-80 ℃
on chromosomes:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 X Y
Unique reads (单一 序列读取 ）: no mismatch, one location
以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位 来源于母亲， 5个单位来源于胎儿
21三体核型分析图
21三体形成原因
21三体发病率与产妇年龄关系
三、现有的产前筛查与诊断手段
产前筛查
母血清学筛查
风险计算
颈项透明膜厚度筛查
产前诊断
羊水穿刺
侵入性诊断方式
绒毛取样
脐静脉穿刺
传统筛查方式的缺陷
产前筛查 （S） 100,000
筛查结果阳 性 （ SP ） 7,000
筛查结果阴 性 （ SN ） 93,000
基本特点： 1 含量有一定的变化规律。妊娠 第4周开始可检出胎儿游离DNA， 随着孕周增加而增加，存在个体 差异，平均浓度。 2 分娩后短时间内消失，平均半 衰期为16.3min (4-30min)， 2h 就无法检出。再次妊娠不影响检 测结果。
母血浆DNA+高通量测序
母体和 胎儿Ｄ ＮＡ的 混合物
唐氏综合征胎儿
400
真阳性 （TSP） 340
假阴性 （FSN） 60
非唐氏综合征胎儿 99,600
假阳性 6,660 真阴性 92,940
（ FSP ） （ TSN ）
英国的统计显示，1996-2002年全国因羊水穿刺导致的抬儿 流失数为5619名
无创产筛技术原理的提出
胎儿DNA来源和特点
来源： 1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血 中，被母体免疫系统破坏，胎儿 DNA残留下来； 2 胎儿细胞凋亡； 3 胎盘滋养层细胞的凋亡
母亲
正常胎儿
Chr 21： 95×2=190
Chr 21： 5×2=10
母体外周血中 Chr 21=190+10=200
母亲
Chr 21： 95×2=190
21-三体胎儿
Chr 21： 5×3=15
母体外周血中 Chr 21=190+15=205
通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的 核酸片段数量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者 21-三