巴豆生物碱抑制卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究_赵小迎

合集下载

巴豆的化学成分和药理活性研究进展

巴豆的化学成分和药理活性研究进展

巴豆的化学成分和药理活性研究进展金锋;张振凌;任玉珍;陈彦琳;杜杰;梁焕;周林;白宗利【摘要】巴豆为常用川产中药,主要含有巴豆油、蛋白质、二萜及其酯类、生物碱等成分,具有泻下、抗肿瘤、抗病原微生物、镇痛等多种药理作用.综述近年来巴豆化学成分和药理的研究概况,为更好地利用和开发巴豆提供依据.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2013(015)005【总页数】4页(P372-375)【关键词】巴豆;化学成分;药理作用【作者】金锋;张振凌;任玉珍;陈彦琳;杜杰;梁焕;周林;白宗利【作者单位】河南中医学院,河南郑州 450008;河南中医学院,河南郑州 450008;中国药材公司,北京 102600;中国药材公司,北京 102600;中国药材公司,北京102600;中国药材公司,北京 102600;中国药材公司,北京 102600;中国药材公司,北京 102600【正文语种】中文巴豆始载于神农本草经,为木部下品,又称猛子仁,刚子,巴菽、双眼龙等。

为大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果实。

主产于西南及福建、湖北、湖南、广东、广西等地,为较常用川产道地中药材,在四川从梁代开始由野生变家种,产量居全国之首,其中又以宜宾的产量最高,占全国产量的90%。

生巴豆味辛,性热;有大毒,归胃、大肠经。

内服泻下寒积,逐水消肿,祛痰利咽,外用蚀疮,可用于恶疮疥癣[1]。

因其毒性较大,多制成霜使用。

作者对国内外有关巴豆的化学成分和药理作用等方面进行了较为系统的综述,为更好地研究巴豆提供了科学依据。

综合文献报道,巴豆的化学成分研究主要集中在种仁上,种仁含脂肪油34%~57%,蛋白质约18%。

主要含二萜及其酯类、生物碱类及植物毒蛋白类[1]。

1.1 脂肪油类巴豆脂肪油为棕榈酸、硬脂酸、油酸、巴豆油酸、巴豆酸等组成的甘油酯。

油中含巴豆醇及16种巴豆醇双酯化合物,其中巴豆醇-12,13-二酯的含量约占巴豆油的4%;巴豆醇三酯的含量约占巴豆油的4%。

巴豆苷药理作用及其机制的研究

巴豆苷药理作用及其机制的研究

WANG An-qi et al(College of Life Scicnce&Tchnology, Hcilongiang Bayi Agriculhual University, Daqing, Heilongjiang 163319)
Abstract Isoguanosine is an important alkaloid component in croton, which has the effects of cooling down, removing swelling, expelling phlegm and throat. It has been found that Isoguanosine can play a variety of pharmacological effects such as anti-cancer, anti-inflammatory, anti-arrhythmia, antiacute myeloid leukemia through a variety of ways. This paper reviews the pharmacological effects and mechanism of Isoguanosine. Key words Isoguanosine; Anticancer; Anti-inflammatory; Anti-arrhythmic; Antiacute myeloid leukemia
3 巴豆苷的抗心律失常作用 心 律 失 常(Cardiac dysrhythmia)
是由于窦房结激动异常、心脏冲动的起 源部位、频率节律、传导速度或激动次 序发生异常所导致的疾病。巴豆苷对抗 心律失常具有显著抑制心室肌细胞增 殖分化作用。Zhang H 等 [9] 通过检测巴 豆苷对家兔心室肌细胞的动作电位发 现,用 10、100、200 μmol/L 的 巴 豆 苷 对 心 室 肌 细 胞 进 行 干 预,不 同 浓 度 的 巴豆苷对心室肌细胞 INa.L(晚钠电流) 呈浓度依赖性抑制增长。Ren Z 等 [10] 通 过应用 Hill 方程研究发现,拟合形成巴 豆苷对 ICa.L(L—型钙电流)抑制百分 比的剂量—反应关系曲线,心室肌细胞 ICa.L 的 IC50 值 为 158.99 μmol/L。同 样复灌后的 ICa.L 基本恢复到原来的幅 度,实验结果表明,巴豆苷对 ICa.L 的 抑制增殖作用是可恢复的。Cao Z Z 等 [11] 研究发现,巴豆苷对 IKr(钾电流)有 显著的抑制增殖作用。以上实验证明巴 豆苷具有显著抑制心室肌细胞增殖分 化作用。

天然药物中生物碱类成分抗肿瘤活性探讨

天然药物中生物碱类成分抗肿瘤活性探讨

天然药物中生物碱类成分抗肿瘤活性探讨
伍蓓
【期刊名称】《湖南中医药大学学报》
【年(卷),期】2016(36)A02
【摘要】目的:探讨天然药物中多种生物碱类成分的抗肿瘤活性.方法:从多种天然药物中提取生物碱类成分,对生物碱类成分的作用机制进行研究,分析生物碱类成分所具有的抗肿瘤活性.结果:长春新碱、长春碱类对非小细胞肺癌、淋巴癌具有良好的抗肿瘤活性.苦参碱类生物碱对肝癌细胞癌具有良好的抗肿瘤活性.槐定碱、龙葵总碱、苦马豆素类生物碱对多种恶性肿瘤疾病具有良好的抗肿瘤活性.小檗碱类对脑部恶性肿瘤疾病、肝癌、食管癌、血液系统恶性肿瘤疾病等多种恶性肿瘤疾病具有良好的抗肿瘤活性.槲寄生类生物碱对原发性肝癌、乳腺癌具有良好的抗肿瘤活性.喜树碱类生物碱对原发性肝癌、膀胱癌、大肠癌等恶性肿瘤疾病具有良好的抗肿瘤活性.结论:天然药物中多种生物碱类成分具有抗肿瘤活性,在多种恶性肿瘤疾病的临床治疗中发挥着重要应用价值.
【总页数】2页(P965-966)
【关键词】天然药物;生物碱类成分;抗肿瘤活性;探讨
【作者】伍蓓
【作者单位】广东药学院附属第一医院医保科,广东省510080
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.天然药物中生物碱类成分抗肿瘤活性 [J], 宫爽;孙佳明;田淋淋;张辉
2.洋紫荆中生物碱类抗肿瘤活性成分的研究 [J], 赵燕燕;崔承彬;蔡兵;韩冰;孙启时
3.天然植物中生物碱类抗肿瘤药物研究进展 [J], 曹明哲;季宇彬;辛国松;李莹琳;张璐;杨祺
4.思茅山橙根中生物碱类成分及其抗肿瘤活性研究 [J], 于金倩;孙晓炜;闫慧娇;方磊;王晓
5.天然药物秃疮花中生物碱类抗肿瘤活性成分研究进展 [J], 田野;倪居;高金鑫因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC_7901的诱导分化作用研究

巴豆生物碱对人胃癌细胞SGC_7901的诱导分化作用研究

(Basic University of TCM ,NangJing China ,210029)


Abstract :Wit h human grastric cancer cells SGC - 7901 as material ,AL P and LDH as index ,t he influence ont he differ2
(下转第 184 页)
中 医 药 学 刊
2005 年第 23 卷
津 ,咽喉失养 ,生理功能减退 ,易为邪毒滞于咽喉而为病 。 对于慢性咽炎的治疗 ,古代医家留有丰富的临证经验 ,如 《重楼玉钥》指出“经治之法 ,不外肺肾 ,总要养阴清热 ,兼 凉血而散为主”。
清咽合剂是我院名老中医何炎焱的临床经验方 ,经 过反复临床验证筛选而成 。该方剂以玄参为主药 ,取其 善于养阴清热 ,增液润燥而利咽《, 本草纲目》云 “: (玄参) 滋阴降火 ,解斑毒 ,利咽喉 ,通小便血滞”;辅以生地 、麦冬 养阴泻火 。生地味甘苦性寒 ,临床一般用其清热凉血 、养 阴生津之功 ,却忽略其活血化瘀散结之效 ,其实早在《神 农本草经》就有生地“逐血痹”的记载 ,痹者 ,闭也 ,结也 , 生地滋阴而通痹散结 ,正适宜慢性咽炎的基本病机 。本 方浙贝母配伍更是独具匠心 ,因阴虚则火炎 ,火炎则熏蒸 咽喉 ,故治本当在滋阴 ,治标则当在解毒 。浙贝母味苦性 寒 ,善长于清热解毒散结 。
组别
AL P
LDH
A
对照组
744101 ±58119
66318 ±97145
B (10ug/ mL 组) 677136 ±32129 542100 ±35186
C (50ug/ mL 组) 511153 ±15175 510140 ±17115

巴豆生物碱对肺腺癌细胞凋亡的影响及机制研究

巴豆生物碱对肺腺癌细胞凋亡的影响及机制研究

巴豆生物碱对肺腺癌细胞凋亡的影响及机制研究武晓;刘凤娟;王鹏飞;张春玲【摘要】目的研究巴豆生物碱(CA)对肺腺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响,推测其抗肺癌作用机制.方法体外培养肺腺癌细胞(A549).用终浓度分别为0(对照组)、10、50、100 μg/mL的CA组处理A549细胞24h后,于相差显微镜下观察细胞的一般形态结构、脱落情况等;MTT法检测细胞的生长活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫法(ELISA)和RT-PCR法检测凋亡相关蛋白及基因Bcl-2、Bax的表达.结果 10、50、100 μg/mL的CA均能抑制A549细胞增殖,其抑制率与作用剂量相关.流式细胞术检测显示不同剂量CA作用于A549细胞24 h后,100μg/mL 的CA可引起细胞凋亡,其余剂量未见凋亡;100 μg/mL的CA组细胞凋亡率为(45.940±0.031)%,对照组细胞凋亡率为(3.450±0.012)%,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA提示不同剂量CA作用于A549细胞24h后,100 μg/mL的CA组促凋亡蛋白Bax为8.940±0.211,较对照组(4.450±0.131)表达增加;抑凋亡蛋白Bcl-2为4.860±0.132,较对照组(7.390±0.181)表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).RT-PCR显示100μg/mL的CA组Bax mRNA为6.881±0.611,较对照组(3.417±0.461)表达增加;Bcl-2 mRNA为2.812±0.342,较对照组(4.243±0.731)表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CA能抑制A549细胞的生长并促进其凋亡,其发生与Bax蛋白及基因的表达上调和Bcl-2蛋白及基因的表达下调有关.CA 抗肺癌的作用机制可能通过Bax/Bcl-2途径促进肿瘤细胞凋亡,从而为临床治疗肺癌提供新的思路和途径.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2016(013)001【总页数】4页(P17-20)【关键词】巴豆生物碱;肺腺癌;凋亡;作用机制【作者】武晓;刘凤娟;王鹏飞;张春玲【作者单位】青岛大学医学院第二附属医院呼吸科,山东青岛266042;青岛大学医学院第二附属医院呼吸科,山东青岛266042;青岛大学医学院第二附属医院呼吸科,山东青岛266042;青岛大学医学院第二附属医院呼吸科,山东青岛266042【正文语种】中文【中图分类】R734.2近年来,大家开始对巴豆及其提取物的抗肿瘤作用进行研究。

生物碱干预肿瘤微环境的研究进展

生物碱干预肿瘤微环境的研究进展

生物碱干预肿瘤微环境的研究进展①胡高勇刘彩艳李勇②邵莹莹胡高升③于海洋(天津中医药大学中医药研究院,天津 301617)中图分类号R329.1 文献标志码 A 文章编号1000-484X(2023)09-1986-07[摘要]恶性肿瘤是指机体在各种致瘤因子的作用下形成的增生组织,对人类生命威胁极大的疾病。

传统的治疗方案包括放疗、化疗、手术切除等,而目前用于治疗癌症的化疗药物副作用较大,这使得寻找有效低毒的新型药物成为当前的研究热点。

生物碱是一类从天然植物中提取出来的小分子化合物,在过去的几十年里,其作为抗癌药物产生抑瘤效果也有很多报道,并且作用于肿瘤微环境能够有效地产生抑制肿瘤细胞发生发展的作用,本文就生物碱在体内通过作用于胶原蛋白、层粘连蛋白、免疫/炎症细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等不同的微环境成分和细胞从而产生抗肿瘤功效进行阐述。

[关键词]生物碱;肿瘤微环境;抗肿瘤Research progress of alkaloids intervention in tumor microenvironmentHU Gaoyong, LIU Caiyan, LI Yong, SHAO Yingying, HU Gaosheng, YU Haiyang. Institute of Traditional Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617,China[Abstract]Malignant tumor refers to the hyperplastic tissue formed by the body under the action of various tumorigenic fac‐tors, and is a disease that poses a great threat to human life.The current side effects of chemotherapy drugs used to treat cancer are large, which makes the search for effective and low-toxic drugs become the current Research hotspots. Alkaloids are a class of small molecular compounds extracted from natural plants. In the past few decades, they have been effective as anti-cancer drugs in inhibiting the development of tumor cells, and there are also many reports on the inhibitory effect of tumor microenvironment. In this paper, the anti-tumor effects of alkaloids on different microenvironment components and cells such as collagen, laminin, immune/inflammatory cells, vascular endothelial cells and fibroblasts are described.[Key words]Alkaloids;Tumor microenvironment;Anti-tumor癌症一直是人类患病致死的主要原因,癌症的病程与实体瘤的生长紧密相连,这个实体瘤就称为肿瘤。

植物提取物诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展

植物提取物诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展

植物提取物诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展
郑晓亮;刘雪莉;钱伯初
【期刊名称】《中国药理学通报》
【年(卷),期】2004(020)011
【摘要】从植物提取物发现大量具有显著生理或药理活性的化合物,其中许多化合物可诱导肿瘤细胞凋亡,具有明显的抗癌活性,这些化合物的活性与其结构有关.本文选取临床应用广泛的代表性药物,以生物碱类、萜类、木脂素类化合物的化学结构为线索,综述近年来植物提取物诱导肿瘤细胞凋亡机制的最新研究进展.
【总页数】5页(P1201-1205)
【作者】郑晓亮;刘雪莉;钱伯初
【作者单位】浙江省医学科学院药物研究所,浙江杭州,310013;浙江省医学科学院药物研究所,浙江杭州,310013;浙江省医学科学院药物研究所,浙江杭州,310013;浙江大学城市学院药物研究所,浙江杭州,310015
【正文语种】中文
【中图分类】R-05;R282.71;R284.1;R287;R329.25;R730.2
【相关文献】
1.黄芪多糖诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展 [J], 李蓉;谭小武
2.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展 [J], 方芳;王爱平
3.黄连素诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展 [J], 孟芳;谭小武
4.蟾毒它灵诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展 [J], 李玮;崔胜楠;周智辉;董昌虎
5.白藜芦醇诱导前列腺肿瘤细胞凋亡机制研究进展 [J], 许爱辉; 吴双; 苏玉环因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

巴豆醛作为抑制剂的研究进展

巴豆醛作为抑制剂的研究进展

巴豆醛作为抑制剂的研究进展巴豆醛(Paclitaxel)是一种重要的生物碱类抗癌药物,广泛应用于临床治疗多种恶性肿瘤,包括卵巢、乳腺、肺、结肠和胃等癌症。

其通过促进微管聚合以及干扰肿瘤细胞有丝分裂过程,从而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖。

随着生物技术的发展,巴豆醛的制备工艺被不断改进,临床应用也取得了显著的进展。

巴豆醛抑制剂的研究是近年来生命科学领域的一个重要研究议题。

随着对巴豆醛的深入研究,人们发现该物质在癌症治疗以外还具有广泛的潜在应用价值。

例如,巴豆醛具有抗炎作用,可以抑制炎症因子的产生和白细胞的活化,从而减轻炎症反应。

此外,巴豆醛还可以通过调节免疫系统发挥免疫调节作用,对于自身免疫性疾病和器官移植排斥反应有一定的治疗潜力。

近年来,巴豆醛作为抑制剂的研究进展主要集中在以下几个方面:1.新型巴豆醛衍生物的研发:为了改善巴豆醛在体内的药代动力学特性和减轻其副作用,许多研究人员致力于合成巴豆醛的结构修饰体,如获得了纳米米粒形式的巴豆醛、巴豆醛结合载体等。

这些新型巴豆醛衍生物在提高药物生物利用度的同时,也降低了副作用,有望成为更有效和安全的抗癌药物。

2.巴豆醛联合其他药物的临床研究:研究人员发现,巴豆醛与其他抗癌药物联合使用可以产生协同抗癌作用,加强抗肿瘤效果。

例如,巴豆醛与顺铂联合治疗卵巢癌具有更好的疗效。

此外,巴豆醛与放射治疗的联合应用也在临床研究中得到了广泛的关注。

3.巴豆醛药物的靶向递送系统:为了提高巴豆醛在肿瘤组织中的富集度,研究人员设计了各种靶向递送系统,如纳米粒、脂质体、胶束等。

这些系统可以通过改变巴豆醛的药物分布和释放特性,提高药物在肿瘤组织中的抗癌效果,同时减轻对正常细胞的毒副作用。

4.巴豆醛的药物耐药机制研究:尽管巴豆醛在抗癌治疗中具有显著的疗效,但长期使用容易导致药物耐药性的产生。

因此,研究人员对巴豆醛的耐药机制进行了深入的研究。

已经发现,巴豆醛通过干扰肿瘤细胞的有丝分裂过程起到抗癌作用,而药物耐药性主要源于肿瘤细胞发生有丝分裂异常以及巴豆醛对肿瘤细胞微管的结合能力下降。

大豆皂苷对卵巢癌细胞耐药性的影响

大豆皂苷对卵巢癌细胞耐药性的影响

大豆皂苷对卵巢癌细胞耐药性的影响陆春晓;崔越;何冬旭;马鑫【摘要】Aim To screen the most effective soyasa-ponins for reversing the drug resistance of ovarian cancer cells, and investigate the possible mechanism. Methods Cell viability assay was used to analyze the drug resistance of A2780/PTX cells treated with four different common soyasaponins respectively,in order to screen out the most effective soyasaponin. Then, the most effective soyasaponin was used to detect the ex-pression of epithelial-mesenchymal transition ( EMT)-related marker proteins, including N-cadherin and E-cadherin,with Western blot and confocal microsco-py. Finally, transwell assay and wound healing assay were applied to observe effect of soyasaponin on regula-ting cancer cell migration. Results Compared with other soyasaponins,soyasaponin Ac most effectively re-versed the drug resistance of A2780/PTX cells. The expression of N-cadherin decreased while that of E-cadherin increased in A2780/PTX cells when treated with soyasaponin Ac for 48 h. The results of transwell and wound healing assay suggested that soyasaponin Ac also reduced the migration of A2780/PTX cells. Con-clusion Soyasaponin Ac can decrease the drug resist-ance via EMT pathway and weaken the migration abili-ty of ovarian cancer cells.%目的筛选逆转卵巢癌细胞耐药性效果最佳的大豆皂苷,并研究其可能的作用机制.方法用4种常见大豆皂苷分别处理耐紫杉醇卵巢癌细胞 A2780/PTX,通过检测细胞IC50值,比较其耐药性变化,从中筛选出逆转耐药性效果最佳的大豆皂苷.应用蛋白免疫印迹和激光共聚焦法检测大豆皂苷处理后,A2780/PTX细胞中上皮-间充质转化( epi-thelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志性蛋白的表达情况;Transwell和划痕实验观察细胞迁移能力的变化.结果细胞活力检测结果显示,4种常见的大豆皂苷中,Ac逆转A2780/PTX细胞耐药性的效果最明显;且经大豆皂苷Ac处理48 h 后, A2780/PTX 细胞中的 N-cadherin 表达降低, E-cadherin表达升高,细胞的迁移能力降低.结论大豆皂苷Ac能有效降低A2780/PTX细胞的EMT进程,减弱细胞的迁移能力,逆转其耐药性.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2018(034)009【总页数】5页(P1249-1253)【关键词】大豆皂苷;卵巢癌;耐药;EMT;N-cadherin;E-cadher-in;细胞迁移【作者】陆春晓;崔越;何冬旭;马鑫【作者单位】江南大学药学院和医学院,江苏无锡 214122;江南大学药学院和医学院,江苏无锡 214122;江南大学国家重点工程实验室,江苏无锡 214122;江南大学药学院和医学院,江苏无锡 214122【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R329.24;R737.310.22;R915越来越多研究表明,食用大豆能预防心血管类疾病以及癌症的发生,这主要得益于大豆中的生物活性物质,如异黄酮、皂苷、植物甾醇等。

巴豆生物碱对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响

巴豆生物碱对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响

巴豆生物碱对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响宋红春;谷雨;陆为民;耿燕楠【摘要】目的:观察巴豆生物碱(Croton Alkaloid,CA)对人胃癌SGC-7901细胞PCNA、Ki-67及Bax、Fas表达的影响,初步探讨其抗肿瘤的分子机制。

方法:体外培养SGC-7901细胞,给予不同浓度的巴豆生物碱干预。

免疫组化法检测不同浓度CA作用于SGC-7901细胞后,PCNA、Ki-67、Bax、Fas蛋白表达的情况。

结果:随着巴豆生物碱浓度的升高,SGC-7901细胞中PCNA、Ki-67表达逐渐下降,Bax、Fas表达逐渐上升,具有剂量依赖性。

结论:巴豆生物碱抑制SGC-7901细胞增殖的作用机制可能与其下调PCNA、Ki-67表达相关,而其上调Bax、Fas表达可能是其诱导SGC-7901细胞凋亡的机制之一。

【期刊名称】《江苏中医药》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】3页(P77-78,79)【关键词】巴豆生物碱;SGC-7901;PCNA;Ki-67;Bax;Fas;体外实验【作者】宋红春;谷雨;陆为民;耿燕楠【作者单位】南京中医药大学,江苏南京210029;江苏省中医院,江苏南京210029;江苏省中医院,江苏南京210029;南京中医药大学,江苏南京210029【正文语种】中文【中图分类】R285.5巴豆,系大戟科植物巴豆的种子,味辛,性热。

巴豆从很早之前就被用于抗肿瘤治疗,巴豆制剂及其复方对胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等多种肿瘤的治疗作用已从化学、药理、临床等多方面研究确定。

有实验研究证实,巴豆生物碱(CA)能诱导SGC-7901细胞分化,抑制细胞增殖,并诱导其凋亡[1-4]。

本文即从体外实验的角度,初步探讨巴豆生物碱抑制SGC-7901细胞增殖及诱导其凋亡的分子机制。

1 实验材料1.1 细胞株人胃癌SGC-7901细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司。

小檗碱抑制人子宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究

小檗碱抑制人子宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究

⼩檗碱抑制⼈⼦宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究·32· Chinese Journal of Information on TCM Aug.2011 Vol.18 No.8⼩檗碱抑制⼈⼦宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究李军,薛晓鸥,刘⼩丽(北京中医药⼤学东直门医院,北京100700)摘要:⽬的探讨⼩檗碱抑制⼈⼦宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和转移的机制。

⽅法四甲基偶氮唑蓝法检测⼩檗碱对⼈⼦宫内膜癌Ishikawa细胞株的抑制作⽤;流式细胞仪观察对细胞周期分布的影响;ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因⼦⽩细胞介素-8(IL-8)的浓度变化;应⽤Western印迹法检测经⼩檗碱⼲预该细胞48 h后,细胞核因⼦-кB(NF-кB)信号途径中p65的变化。

结果⼩檗碱可显著抑制Ishikawa细胞⽣长,呈时间剂量依赖性。

⼩檗碱可阻滞细胞于G0/G1期。

细胞培养上清液中IL-8的浓度随着⼲预时间延长⽽减少(P<0.05)。

⼩檗碱作⽤48 h后,细胞中NF-кB p65表达明显下降(P<0.05)。

结论⼩檗碱具有抗⼈⼦宫内膜癌Ishikawa细胞增殖作⽤,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制细胞产⽣IL-8,并能够阻断NF-кB信号通路,从⽽抑制⼦宫内膜癌的转移。

关键词:⼩檗碱;⼦宫内膜癌;Ishikawa细胞株;细胞周期;细胞核因⼦-кB;⽩细胞介素-8DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2011.08.013中图分类号:R285.5 ⽂献标识码:A ⽂章编号:1005-5304(2011)08-0032-03Effects of Berberine on Proliferation and Metastasis of Human Endometrial Carcinoma Cell Line Ishikawa LI Jun, XUE Xiao-ou, LIU Xiao-li (Dongzhimen Hospital, Beijing University of TCM, Beijing 100700, China) Abstract:Objective To study the effect of Berberine on human endometrial carcinoma cell line Ishikawa. Methods The changes of cell proliferation of Ishikawa cells treated with Berberine were observed by using MTT assay. The cell cycle expressions were determined by flow cytometry. The concentration of IL-8 in the supenmatant fluid was measured by ELISA. And NF-кB p65 were determined by western blot assay. Results Berberine could inhibit the proliferation of Ishikawa cells in vitro significantly in a dose- and time-dependent manner (P<0.05). The G0/G1 phase arrest was induced by treatment after 48 hours (P<0.05). The concentration of IL-8 in the supenmatant fluid were decreased. Cellular NF-кB p65 levels decreased in Berberine-treated cells after 48 hours (P<0.05). Conclusion Berberine could inhibit Ishikawa cell proliferation, induce G0/G1 phase arrest, andinhibit the metastasis of endometrial carcinoma by interfering with the NF-кB signaling pathway.Key words:Berberine;endometrial carcinoma;cell liner Ishikawa;cell cycle;NF-кB;IL-8⼩檗碱是清热解毒中药黄连的主要有效成分,具有抗炎、抗⾼⾎压、抗糖尿病、抑制⾎⼩板聚集、抗肿瘤和免疫调节等基⾦项⽬:教育部⾼等学校博⼠学科点基⾦(20100013110012)通讯作者:薛晓鸥,Tel:010-********,E-mail:xxo123@sina. com 作⽤。

大豆皂苷药理活性及抗癌机制研究进展

大豆皂苷药理活性及抗癌机制研究进展

大豆皂苷药理活性及抗癌机制研究进展刘宏帅;吴晓俊;胡之璧【期刊名称】《国际药学研究杂志》【年(卷),期】2013(040)001【摘要】Soyasaponins are the major bioactive ingredients in plants of Leguminosae, which have been used as food addic-tives, cosmetics and healthy products for a long time and have shown hypolipidemic and anti-aging effects. Recently, pharmacological studies found that soyasaponins have many other effects including anti-inflammation, anti-coagulation,anti-mutagenesis, anti-tumor and renin inhibition. Among these effects, anti-tumor function of soyasaponins is one of the hot research spots. Studies demonstrated that decreasing sialic acid, inhibiting activity of protein kinase, interfering cell cycle, disrupting cell membranes and inducing apoptosis are all the possible underlying mechanisms. In this review, the recent advances in the study on chemical structure, pharmacological activities and anti-tumor mechanism of soyasaponins are reviewed, and the future developmental prospects of soyasaponins are also discussed.%大豆皂苷是豆科植物的主要药效成分之一,作为保健品、食品添加剂及化妆品长期应用,具有降血脂以及抗衰老的作用.近年来发现,其在抗炎、抗凝血、抗诱变、抗肿瘤和抑制肾素等方面亦有广泛的作用.目前大豆皂苷的抗肿瘤作用日益成为研究的热点,其作用机制可能与抑制唾液酸的表达、降低蛋白激酶活性、干扰细胞周期、破坏细胞膜及诱导凋亡有关.本文从化学组成、药理活性和抗癌作用机制等方面综述了近年来国内外大豆皂苷的研究进展,并对其未来的开发前景进行了展望.【总页数】6页(P79-84)【作者】刘宏帅;吴晓俊;胡之璧【作者单位】201203上海,上海市复方中药重点实验室,上海中医药大学中药研究所;201203上海,上海市复方中药重点实验室,上海中医药大学中药研究所;201203上海,上海市复方中药重点实验室,上海中医药大学中药研究所【正文语种】中文【中图分类】R961.1【相关文献】1.大豆皂苷药理活性研究进展 [J], 向辽源;齐晓丽;赵莉;张晓路;李瑶2.基于网络药理学和分子对接的五味子甲素、五味子乙素抗癌机制研究 [J], 温晓雅;刘龙;王博龙3.基于网络药理学和分子对接的五味子甲素、五味子乙素抗癌机制研究 [J], 温晓雅;刘龙;王博龙4.基于网络药理学的山豆根抗癌机制研究 [J], 汪艳平;韦正;蒋利荣;张鹏;陈海林;符益山;覃拥灵5.川芎主要药理活性成分药理研究进展 [J], 李海刚;胡晒平;周意;徐丹丹;马宁;唐靖;鲍美华;郑霞辉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

天然生物碱抗肿瘤药理作用研究进展

天然生物碱抗肿瘤药理作用研究进展

天然生物碱抗肿瘤药理作用研究进展
樊晓霞;赵学增
【期刊名称】《中国现代医药杂志》
【年(卷),期】2006(8)9
【摘要】从天然药物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物已成为国内外学者关注的热点,其中天然生物碱成分是很有前途的一类活性物质,并已成功开发了几种药物,临床上取得了良好疗效。

本文综述各类天然生物碱成分的抗肿瘤药理作用研究进展,为
进一步寻找优良的抗癌药物提供信息和思路。

【总页数】3页(P133-135)
【作者】樊晓霞;赵学增
【作者单位】100061,北京,国家中药品种保护审评委员会办公室;民航总医院
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.抗肿瘤天然生物碱类成分研究进展 [J], 宋保兰
2.七种天然生物碱抗肿瘤作用研究进展 [J], 严淑;刘宝瑞
3.天然生物碱及衍生物抗肿瘤机制研究进展 [J], 欧贤红;刘华钢;徐恒
4.中药生物碱类成分的抗肿瘤药理作用研究进展 [J], 娄雅静
5.天然药物中生物碱类成分抗肿瘤活性探讨 [J], 伍蓓
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

小檗碱对人高转移肺癌细胞系(pg)细胞增殖和转移地影响和机制研究

小檗碱对人高转移肺癌细胞系(pg)细胞增殖和转移地影响和机制研究

』幽!HUVECPGcellsICAM.1PBSROSMTTEDTABRTNF.QCDCadECMSelE.cadL.cadN.cadP.cadCEAECGFVCAMVLAPSGL—lHGFHAFITCFA英文缩略语(Abbreviations)H1.UnaD_umbilicalveinendothelialcellhumanpulmonarycarcinomacellsIntercellularadhesionmolecula-1Phosphatebuffersolutionreactiveoxygenspecies3·(4,5一dimethyll—2-thialzolyl)·2.5一diphenyl-2H-tetrazoliumbromideEthvlenediaminetetraaceticaciddisodiumsaltBerberineTumornacrosisfactorQClusterdifferentiationCadherinExtraeellular/ViatrixSelectinEpithelialcadherinLeucocyteeadherinNeuroeadherinPlateletcadherinCarcinoembryonicantigenEndothelialcellgrowthfactorVascularadhesionmoleculaVeryalteappearingantigenP—selectinglueoproteinligand—lHepatocytegrowthfactorHyaluronan/hyaluronicacidfluoresceinisothiocyanateFluorescenceanisotropy人脐静脉内皮细胞人高转移肺癌细胞系细胞间粘附分子一1磷酸盐缓冲液活性氧自由基四甲基偶氮唑盐乙而铵四乙酸钠小檗碱肿瘤坏死因子c【人类白细胞抗原钙粘着蛋白细胞外基质选择素上皮性钙粘着蛋白白细胞钙粘着蛋白神经钙粘着蛋白血小板钙粘着蛋白癌胚抗原内皮细胞生长因子血管粘附分子很晚出现的抗原P一选择素糖蛋白配体一1肝细胞生长因子跨膜透明质酸异硫氰酸荧光黄荧光各向异性度综述一小檗碱抗肿痛药理作用的研究进展第一部分文献综述综述一小檗碱抗肿瘤药理作用的研究进展小檗碱(BerberineBR)是一种古老的抗菌药,为毛茛科黄连属植物黄连、黄柏的根茎中提取的主要成分,属异喹啉类生物碱,也称黄连素,常用其盐酸盐。

巴豆生物碱诱导人胃癌细胞SGC_7901分化及分子机制的研究

巴豆生物碱诱导人胃癌细胞SGC_7901分化及分子机制的研究

【方药研究】巴豆生物碱诱导人胃癌细胞SGC 27901分化及分子机制的研究Ξ许冬青,詹 ,王明艳,龚婕宁(南京中医药大学基础医学院,江苏南京 210029) 关键词:巴豆生物碱;SG C 27901;分化 中图分类号:R28515 文献标识码:B 文章编号:100623250(2009)0720545202Ξ基金项目:江苏省教育厅资助项目(01K JB360005) 本研究采用体外细胞培养的方法,以人胃癌细胞SG C 27901为研究对象,从细胞增殖及分化相关基因表达的变化来探讨巴豆生物碱的诱导分化作用,以阐明其抗癌分子机理。

1 材料与方法111 材料巴豆由盐城市药材公司提供,人胃癌细胞株SG C 27901由中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(C BTCCC AS )提供,RPM1640为美国G ibco 公司产品,小牛血清由杭州四季清生物工程材料研究所提供,胰酶为Amresco 公司产品,FITC 标记的抗Fas 蛋白的单抗均购自晶美生物工程公司,碘化丙啶购自Sigma 公司。

112 方法11211 人胃癌细胞SG C 27901的培养 将细胞培养于含10%小牛血清的RPM1640培养液中,置37℃5%C O 2培养箱中培养,待长满后以0125%胰酶消化传代。

11212 巴豆生物碱的制备 巴豆生物碱由中国药科大学中药药理教研室提取制备,经鉴定含量达96%。

11213 MTT 法测定细胞的增殖 取培养4d ~5d 处于指数生长期的人胃癌细胞SG C 27901,胰酶消化,用RPM1640培养液(含10%的小牛血清)配成约1×105Πml 细胞悬液。

取96孔平板,每孔加细胞悬液180μl ,培养24h 后将不同浓度的巴豆碱药液20μl 加入各孔细胞悬液中,药液的终浓度分别为0(空白对照组)、10μg Πml 、50μg Πml 、100μg Πml 、200μg Πml ,阳性对照组加入维甲酸(终浓度为10μM ),每个剂量重复3孔。

一种巴豆生物碱在制备治疗肺癌的药物中的应用[发明专利]

一种巴豆生物碱在制备治疗肺癌的药物中的应用[发明专利]

专利名称:一种巴豆生物碱在制备治疗肺癌的药物中的应用专利类型:发明专利
发明人:武晓,张春玲,孙荣丽
申请号:CN201510610072.2
申请日:20150923
公开号:CN105194126A
公开日:
20151230
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种巴豆生物碱在制备治疗肺癌的药物中的应用,属于医药的技术领域。

本发明的药物包括以下重量份的原料:巴豆生物碱5-10份、柚皮苷1-2份、黄芩生物碱2-4份、紫槲皮甙0.5-2份、鹅掌楸生物碱1-2份、黄连生物碱2-5份、裂果薯皂苷1-3份、甘草生物碱2-6份。

本发明中的巴豆生物碱通过Bax/Bcl-2途径抑制肺腺癌A549细胞的生长并促进其凋亡,该滴丸的各个原料药效相辅相成,相得益彰,在各原料的相互协同作用下,具有明显的抑制肺癌细胞生长和促进细胞凋亡的作用,起到了治疗肺癌的效果,其疗效明显,减轻了病人的痛苦,延长了生命期,提高了生活质量,为临床肺癌的医治提供了一种新的方向。

申请人:青岛市中心医院
地址:266042 山东省青岛市四流南路127号
国籍:CN
代理机构:北京一格知识产权代理事务所(普通合伙)
更多信息请下载全文后查看。

巴豆生物碱上调TRAIL配体、caspase-8的表达诱导HeLa细胞凋亡的体外研究

巴豆生物碱上调TRAIL配体、caspase-8的表达诱导HeLa细胞凋亡的体外研究

巴豆生物碱上调TRAIL配体、caspase-8的表达诱导HeLa细胞凋亡的体外研究许群;方轶萍;赵小迎;蔡平生【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2011(023)002【摘要】目的研究巴豆生物碱对人宫颈HeLa细胞诱导凋亡作用,并探讨其作用机制.方法 MTT法观察巴豆生物碱对HeLa细胞的抑制率;流式细胞仪检测HeLa细胞TRAIL及其受体DIL5的表达及其巴豆生物碱对HeLa细胞TRAIL配体表达的影响;Caspase-8活性检测;RT-PCR检测TRAIL配体及Caspase-8、Caspase-3mRNA的表达.结果巴豆生物碱对HeLa细胞生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系.流式细胞仪检测HeLa细胞TRAIL及其受体DR5的表达阳性,巴豆生物碱处理HeLa细胞后发现TRAIL配体的表达明显上调,Caspase-8活性明显增加,TRAIL配体、Caspase-3及Caspase-8 mRNA高表达.结论巴豆生物碱对人宫颈癌HeLa 细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其诱导机制可能与上调TRAIL配体和Caspase-8mRNA的表达有关.【总页数】6页(P179-184)【作者】许群;方轶萍;赵小迎;蔡平生【作者单位】浙江温州市中西医结合医院妇产科,温州325000;浙江温州市中西医结合医院妇产科,温州325000;浙江温州市中西医结合医院妇产科,温州325000;浙江温州市中西医结合医院妇产科,温州325000【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.银杏叶提取物对rhTNF-α诱导HeLa细胞凋亡和Caspase-8活性的影响 [J], 黄迪南;侯敢;刘万策2.奥沙利铂通过上调死亡受体表达增强TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究 [J], 徐玲;刘静;刘云鹏;曲秀娟;张晔;侯科佐;姜又红3.巴豆生物碱诱导Hela细胞凋亡及其作用机制 [J], 许群;方轶萍;赵小迎4.5-Aza-2'-dC通过上调DR4与DR5表达增加TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的敏感性 [J], 仇凤启;赵丹;孙大鹏;刘新莉;李晓曦;马萍5.Caspase-8和DR5在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用 [J], 佟海侠;张继红;马力;陆春伟;张锦华因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

巴豆生物碱抑制卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究

巴豆生物碱抑制卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究
tci n o r tn akaodso u n o a a a c rHO 一891 e lp oie ai na n c d a o t ss; u i g iv re co c p e to fc oo l li n h ma v r n c n e i 0 c l r lfr to nd idu e p p o i sn n et d mi rs o y adi n mmun h so h mi a x r s in o po t i e u ai e e PCNA we e dee td. s t r l fc oo la od h, o itc e c le p e so f a poss r g ltng g n r tce Re uls oe o r tn ak l is 48 c l s rnk g ss e nd ri v re ir s o e, a s l mo nto prutn n h o main o po ttc b dis Appi ain el h i a ewa e n u e n e td m c o c p ma la u fs o i g a d t ef r to fa po i o e . lc to
率 逐 渐 降低 。
【 关键词 】 巴豆生物碱 ;细胞 凋亡;细胞周期 ;卵巢肿 瘤;增殖 细胞核抗原 【 中图分类号 】R7 73 【 3. 1 文献标识码 】A 【 文章编号】10 9 7 (0 0 7— 3 5— 4 0 7— 5 2 2 1 )0 24 0
Efec f Cr t n k o d o Ce lCyce, Apo o i f to o o Al ali n l l pt ssand PCNA ne Ex e so n um a O v in l ZHAO ao— Ge pr s i n i H n ara Ce l Xi

硕士论文--菝葜提取物抗卵巢癌的多重效应及其分子机制

硕士论文--菝葜提取物抗卵巢癌的多重效应及其分子机制

华中科技大学硕士学位论文菝葜提取物抗卵巢癌的多重效应及其分子机制姓名:胡丽玲申请学位级别:硕士专业:药剂学指导教师:陈东生2011-05华中科技大学硕士学位论文摘要目的:研究菝葜提取物抗卵巢癌细胞的作用,并从细胞水平和分子水平讨探其发挥该作用的机制。

方法:用菝葜提取物对卵巢癌细胞进行干预。

首先,采用CCK-8,EdU法以及克隆形成实验对细胞的活性、增殖、克隆形成、以及提取物与传统药物联用后的化疗效应进行考察;接着,分别采用IP单染法和Annexin V-FITC/PI双染法,经流式细胞术检测药物处理后细胞的周期比例和细胞的凋亡特征;然后,通过Transwell小室法考察药物处理后细胞的迁移能力;最后,对NF-κB及多种蛋白的表达水平进行了Western blot 分析,并用免疫荧光染色法观察NF-κB在细胞中的定位。

结果:菝葜正丁醇提取物可有效抑制卵巢癌细胞的活性、增殖能力和克隆形成能力,抑制作用呈浓度依赖性,并且,该提取物对传统化疗药物顺铂和阿霉素具有增敏作用。

流式细胞术分析显示,菝葜正丁醇提取物将A2780细胞周期阻滞在G2/M期并诱导细胞凋亡。

细胞迁移实验显示菝葜正丁醇提取物干预后,细胞的迁移能力减弱。

Western blot分析发现,药物可能通过抑制AKT的活性阻滞NF-κB的核转录,从而使NF-κB 的活性受到抑制,进而抑制其下游因子Bcl-2,Bcl-xL,XIAP,cIAP-1,ICAM-1,VEGF 和Cyclin D1。

实验结果还显示菝葜正丁醇提取物可活化Capase-3、PARP和Bax因子。

结论:上述实验结果表明,菝葜正丁醇提取物在体外可从多方面发挥抗卵巢癌的作用,抑制NF-κB的活性可能是其抗卵巢癌作用的分子机制之一,这为进一步研究菝葜抗卵巢癌的作用打下了理论基础。

关键词:菝葜提取物,卵巢癌细胞,克隆形成,迁移,增敏作用,G2/M期阻滞,凋亡,NF-κB华中科技大学硕士学位论文ABSTRACTObjectiveSmilax china L. rhizome (SCR) has been proposed to act as an anti-inflammatory and chemopreventive agent. In the present study, the antitumor effects of the SCR extracts on ovarian cancer cells and the mechanisms involved were investigated.MethodsOvarian cancer cells were treated with SCR extracts. Firstly, the effect on cell viability,proliferation and colony capability were evaluated by CCK-8 assay, EdU incorporation assay and colony assay, respectively. And the sensitization of ovarian cancer cell A2780 to cisplatin and adriamycin by SCR extracts were also analyzed by CCK-8 assay. Secondly, Cells stained by propidium iodide and Annexin V-FITC/PI, then analyzed by flow cytometry for cell cycle and apoptosis, respectively. Thirdly, Transwell were used to determine cell migration. Finally, several proteins were determined by western blotting, and cellular distribution of NF-κB was observed by immunofluorescence.ResultsSCR extracts from BuOH (SCR-B) suppressed the viability, proliferation and colony capability of A2780 cells in a dose-dependent manner. Furthermore, we discovered that SCR-B promoted chemo-sensitivity to cisplatin and adriamycin in A2780 cells. Both Transwell and wound-healing assay demonstrated that SCR-B attenuated migration of A2780 cells. Treatment of SCR-B resulted in induced G2/M arrest and induced apoptosis in A2780 cells through activation of Bax , caspase-3 and PARP, and the inhibition of NF-κB, which resulted to down-regulation of Bcl-2, Bcl-xL, XIAP, and cIAP-1 via the signaling pathway. AKT, one of NF-κB’s important upstream elements, and the NF-κB -regulated gene products VEGF, ICAM-1 and Cyclin D1 were found to be down-regulated by SCR-B.华中科技大学硕士学位论文ConclusionsOur results suggest that SCR-B is an effective anti-proliferation agent of ovarian cancer cells, the effect is might caused by inhibition of NF-κB, it also found that SCR-B can reduce chemo-resistance. The results from this report will be useful for the further utilization of SCR in ovarian cancer treatment.KeywordsSmilax china L. rhizome extracts, ovarian cancer cells, colony, migration, chemo-sensitivity, G2/M arrest, apoptosis, NF-ĸB华中科技大学硕士学位论文英文缩写词表英文缩写词英文全称中文全称SCR Smilax china L. rhizome菝葜根茎BuOH n-butanol正丁醇SCR-B Smilax china L. rhizome extracts from菝葜正丁醇提取物BuOHEtOAc ethyl acetate乙酸乙酯SCR-E Smilax china L.rhizome extracts from菝葜乙酸乙酯提取物EtOAcBcl-2B-cell lymphoma-2 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-xL B-cell lymphoma-xL B细胞淋巴瘤/白血病-xl Bax Bcl-2–associated X protein Bcl-2相关x蛋白NF-κB nuclear factor-κB核因子-κBPARP Poly-ADP(adenosinediphosphate)-ribose多聚ADP-核糖聚合酶polymeraseVEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子MTT methyl thiazolyl tetrazolium 甲基噻唑基四唑CCK-8Cell Counting Kit-8 细胞计数试剂盒FITC fluorescein isothiocyanate异硫氰酸荧光素PI propidium iodide碘化丙啶ECL enhanced chemiluminescenece增强化学发光DMSO dimethylsulfoxide二甲基亚砜PBS phosphate buffer saline磷酸盐缓冲盐水density 光密度OD opticalSDS soudium dodecyl sulfate 二甲基磺酸钠TCM Traditional Chinese Medicine中药独创性声明本人郑重声明,本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
· 2345·
· 论著 ·
巴豆生物碱抑制卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究
赵小迎 , 陈 俊 , 蔡平生
【摘要 】 目的 了解巴豆生物碱诱导人卵巢癌细胞 HO-8910细胞周期 、 凋亡 效果 , 以及凋亡 与增殖细 胞核抗 原 (PCNA)表达之间的关系 。方法 将 浓度分 别为 50、 100和 150 μg/ml的巴豆 生物 碱作 用于人 卵巢 癌细胞 HO8910细胞后 , 采用流式细胞术检测巴豆生物碱对人卵巢癌细胞 HO-8910细胞的增殖 抑制作用和 诱导细胞凋 亡 ;采用 倒置显微镜及免疫组织化学法对凋亡调节基因 PCNA表达进行检测 。结果 巴豆 生物碱作用 48 h后 , 倒置显 微镜下可 见细胞皱缩 、 出芽及少量凋亡小体形成 。应 用不同剂量 的巴豆生 物碱 (50 ~ 150 μg/ml)分 别作用 于 HO-8910 细胞 24、 48、 72 h后 , 巴豆生物碱抑制了 HO-8910细胞增殖 , 并 呈现剂量 、 时 间依赖性 。随 着巴豆生物 碱的作用 时间延 长 , G0 /G1期细胞比例明显下降 , 而较多的细胞阻滞于 G2/M期 。巴豆生物碱的作用浓度从 50 μg/ml增至 150 μg/ml, 则平均细胞凋亡率从 2.13%上升为 21.89%。结论 巴豆生物碱可以通过时间依赖性和剂量依赖性方式 , 促使细胞 G2/ M期阻滞和抑制细胞有丝分裂 , 从而诱导人卵巢癌细胞 HO-8910细胞凋亡 。由于 PCNA在 G1 ~ S期 进程过度 中起着 重要作用 , PCNA表达的下调也导致细胞周期进程被阻抑 。巴豆生物碱作用 24 h, 随浓度的升高 , PCNA阳性 细胞百分 率逐渐降低 。 【关键词 】 巴豆生物碱 ;细胞凋亡 ;细胞周期 ;卵巢肿瘤 ;增殖细胞核抗原 【中图分类号 】 R737.31 【文献标识码 】 A 【文章编号 】1007 -9572 (2010)07 -2345 -04
· 2346·
院上海细胞所 ; (2)主要 药品 及试剂 :巴豆 生物 碱 (CA), 碘化丙锭 (PI)、 AnnexinV-PI凋亡检 测试剂 盒 、 PCNA免 疫 组化检测试剂盒 、 BeckmanCoultet流式细胞仪 。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养常 规培养 用 RPMI1640培 养基 , 加 入 10% 胎牛血清 , 于 37 ℃、 5%CO2 孵箱孵育 , 密切观察细胞生长情 况 , 每 2 d换液一次 , 待细胞融合达 80% ~ 90%时传代 。倒置 显微镜下观察 发现细 胞贴壁 伸展 , 生长 良好 , 待 80%以上 贴 满瓶壁后倒 掉培养液 , 加入新 鲜的 0.25%胰酶 , 待 细胞脱 壁 后加入新鲜的 含 10%胎 牛血清的 培养液 中止胰 酶消化 , 抽 提 细胞悬液 , 1 000 r/min离心 5 min得细胞沉淀 , 弃上清加入新 鲜培养液 , 轻 轻吹 打制成 细胞 悬液 , 分 置细胞 于新 的培养 瓶 中 , 传代比例为 1:3。先用 胰酶消 化使贴壁 细胞成 为细胞 悬 液 , 离心得到细胞沉 淀 , 弃上 清 , 加入新 鲜培养 基 4 ml制成 细胞悬液 , 吹打均匀 , 取 10 μl悬液加入 90 μl台盼蓝进 行活 细胞计数 , 反复计数 3次 , 按下列公式计算 :活细 胞数 =4个 象限活细胞总数 /4 ×104 稀释倍数 (10)。按照每个冻存管 2 × 106 个细 胞保 种 , 冻 存液 的 配制 :二甲 亚砜 :胎牛 血清 =5: 95 (体积比 )。细胞梯度冷冻 , 最后置于 -80 ℃冰箱中保存 。 1.2.2 药物联合作用 取 4瓶底壁 长满细胞的 培养瓶 , 制成 细胞悬液 72 ml, 分别加到 6个 24孔的培养板 , 置于培养箱中 培养 。待细胞增至 (35 ±5)%后 换液 。倒置显微 镜下取图后 , 除空白对照外 , 其余分别加入 不同浓度的 CA组 (50、 100和 150 μg/ml)继续培养 , 分别在 24、 48、 72 h时在倒置显 微镜 下取图 。将巴 豆生 物碱 注射 液加 入 10%胎 牛血 清 的 RPMI1640培养液中 , 制成 100 mg/L的工作液 , -20 ℃保存 。使用 时将工作液分别稀释成 50、 100和 150 μg/ml。 1.2.3 流式细胞仪检测细 胞周期 分 别收集对 数生长期 的细 胞以 6 ×104 个 /ml, 冰 PBS洗 2次 , 加入 4 ℃乙醇 (75% ) 固定 2 h, 离心 , 去上清液 , 加入 20 μg/ml的 RNA酶 200 μl, 放置 30 min, 加入浓度为 20 μg/ml的 PI1 ml放置 30 min, 将 样品放入 FCM机上 , 机检 , 检测数据采用 ModiFitlTV2.0程 序分析 。
1.2.4 AnnexinⅤ -PI染色检测 T细胞凋亡 分别于 不同时间 收获细胞 , 按 AnnexinⅤ -PI凋亡检测试 剂盒说明书 操作 , 其 中 Annexin+Ⅴ -PI-为凋亡细胞 , Annexin+Ⅴ -PI+为 坏死 细胞 。检测数据采用 ModiFitlTV2.0程序分析 。 1.2.5 CFDA-SE染色 检测 细胞 增殖 CFDA-SE用 PBS稀 释成 2 μmol/L的工作液 , PBS调整 各组 HO-8910 细胞悬 液 密度为 2 ×1010 /L, 加入相应浓度 CFDA-SE工作 液 , 充分混 匀后在 37℃条件下 轻轻 振荡 10 min。然 后用 PBS洗 涤细 胞 2 次 (250 g, 5 min), 悬浮 于 RPMI1640完 全培养 液中 , 并 调 整细胞密度为 2 ×1010 /L, 将细胞接种在 24孔细胞培养板上培 养 , 48 h收获细胞 , 洗涤浓缩后 4 ℃避光作用 30 min, PBS洗 涤细胞 2次 (250 g, 5 min), 以 4%多聚甲醛固定 , 尽快上流 式细胞仪检测 。 1.2.6 免疫组化测 PCNA的表达 :取对数生长期细胞 1 ×105 / ml接种于培养 皿 , 内置 无菌 盖玻 片 , 24h后换液 , 实验组 加 入终浓度为 50 μmol/L、 100 μmol/L、 150 μmol/L的 CA, 对照
组加入等量含相同浓度 DMSO的 1640培养液 。作 用 24 h后终 止培养 。按试剂盒 说明书 进行 操作 , 以 PBS代 替一 抗作阴 性 对照 , 阳性结果为细胞核内出现棕黄色颗粒 , 阴性对照中无上 述颗粒出现 。 PCNA阳性 表达 率 (%) =PCNA阳 性细 胞数 / 总细胞数 ×100%。 1.3 统计学方法 全部数据 经 BeckmanCoultet流式细胞 仪和 Protocol软件获取 , 每管样品检测 10 000 个细胞 , 获得的 数据 用 Protocol软 件 分析 。 统计 方法 用 统计 软件 包 SPSS13.0 for Windows进行处理 , 计量资料 采用 (—x±s)表 示 , 多组间 比 较采用 Oneway-ANOVA, 两组间比较用非配对 t检验 。 2 结果 2.1 巴豆生物碱诱导 HO-8910细 胞凋亡的 形态变 化 倒置 显微镜观察 , 培养中的细胞 在未加任何 干扰的因 素的情况下 , 细胞透明 , 折光 性好 , 边 缘光 滑完整 , 大小 均一 , 形 态一 致 (见图 1A);50 μmol/L巴豆生物碱作用 24 h后 , 细胞形 态变 化不明显 (见图 1B);100 μmol/L、 150 μmol/L巴豆生物碱作 用 48 h后 , 倒置显微镜 下可见 细胞皱 缩 、 出芽及 少量凋 亡小 体形成 (见图 1C, 1D)。
目前对于晚期患者临床应用最广泛的治疗方法是以顺铂为 基础的联合化疗 , 但这些化疗方案对卵巢癌患者的总体生存率 并无明显改善 , 寻找理想的化疗药物和化疗方案已经成为卵巢
基金项目 :温州市 2009 年第二期科技计划项目 (Y20090387) 作者单位 :325000 浙江省温州市 , 温州医学院 (赵小迎 , 现就职
EffectofCrotonAlkaloidonCellCycle, ApoptosisandPCNA GeneExpressioninHumanOvarianCell ZHAO Xiaoying, CHENJun, CAIPing-sheng.WenzhouMedicalCollege, Wenzhou325000, China 【Abstract】 Objective CrotonalkaloidsinduceHO-8910 humanovariancancercellcycle, apoptosiseffectandapoptosisandPCNA(proliferatingcellnuclearantigen)expressionrelationship.Methods concentrationsweronalkaloidsactonthehumanovariancancerHO-8910 cellsbyflowcytometry(Annexing-V-FITC& PI) detectionofcrotonalkaloidsonhumanovariancancerHO-8910 cellproliferationandinducedapoptosis;usinginvertedmicroscopy andimmunohistochemicalexpressionofapoptosisregulatinggenePCNA weredetected.Results roleofcrotonalkaloids48 h, cellshrinkagewasseenunderinvertedmicroscope, asmallamountofsproutingandtheformationofapoptoticbodies.Application ofdifferentdosesofcrotonalkaloids(50 μg/mlto150 μg/ml)wereontheHO-8910 cells24, 48, 72hafterthecrotonalkaloidsHO-8910 inhibitedcellproliferationinadoseandtimedependent.Withtheextendedroleofcrotonalkaloids, G0 /G1 phasecellsdecreased, whilemorecellswerearrestedinG2/M phase.Theroleoftheconcentrationofcrotonalkaloidsfrom 50 μg/mlto150 μg/ml, themeanapoptosisrateincreasedfrom2.13% to21.89%.Crotonalkaloidscanreducetheapoptosis-relatedgenesPCNAexpression.Conclusion Crotonalkaloidscanbetime-dependentanddose-dependentmannertopromote cellG2 /M arrestandinhibitionofcellmitosis, therebyinducinghumanovariancancerHO-8910 cells.BecauseofPCNAinthe G1 ~ Splaysanimportantroleintheprocessover, sothereductionintheexpressionofPCNAalsoresultedininhibitionofcell cycleprocessis.Theroleofcrotonalkaloids24h, withconcentrations, PCNA-positivecellpercentagedecreased. 【Keywords】 Crotonalkaloids;Apoptosis;Cellcycle;Osteosarcomaovariancancer;PCNA
相关文档
最新文档