骨髓基质细胞促进人胚神经干细胞向神经元的分化

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不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｖｅｅｉｃｆｉｅｎｃｙｏｆｄｅｉｒｖｉｎｇｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓｆｒｏｍ
［中图分类号］Ｒ３３１．１
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｏｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
，
ＬＩＵＴｉａｎ．ｃｈｅｎｇ ‘ 一
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（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ＆ＳｔｅｍＣｅｌｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｅｎｔｒａｌｓ０＾Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００７８；２．ＮａｔｉｏｎａｆＥ蛹ｎｅｅｒｉｎｇ＆ＲｅｓｅａｔｃｈＣｅｔｅｎｒｆｏＨｕｍａｎＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００７８，Ｃｈｉｎａ）
ｏｆｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｓｆｒｏｍｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ
ＺＨＡＯＨｕｉ．ｐｉｎｇ ‘ 一ＺＨＯＵＤｉ ‘ 一

人类胚胎发育中的干细胞分化与定向诱导

人类胚胎发育中的干细胞分化与定向诱导随着科学技术的不断进步，人类对于干细胞的研究已经取得长足的进展，而其中胚胎干细胞作为最早被发现的干细胞类型，一直备受关注。

胚胎干细胞来源于早期胚胎的内细胞团，具有多潜能分化能力，能够分化为各种细胞类型。

其能够在治疗重大疾病如癌症、糖尿病、帕金森病等方面具有广阔的应用前景。

本文将从人类胚胎发育、干细胞分化和定向诱导三个方面探讨胚胎干细胞的研究进展。

一、人类胚胎发育人类胚胎发育为受精卵经过多次细胞增殖、分化而形成的胚胎。

受精卵由精子和卵子的结合形成，最初分裂为两个细胞，然后逐渐分裂为四个、八个、16个细胞。

这些细胞组成了早期胚胎的形态单向性，称为内细胞团（ICM）和外细胞团（TE）。

ICM丰富的细胞增殖潜能和多能素（Nanog、Oct4、Sox2等）的表达使其具有形成全部胚层的潜能。

二、干细胞分化干细胞能够分化成多种细胞类型，从而满足一定程度上的组织和器官再生。

细胞分化是干细胞发育的最终目的，其中的途径包括通路、信号等方面。

如何确定干细胞的分化方向，以及如何检测干细胞的分化状态是干细胞领域研究的核心问题。

（一）干细胞分化方向的确定目前干细胞的分化方向可以通过一些外刺激，如生长因子的作用来实现。

例如，神经生长因子可以使干细胞分化成神经细胞，转化生长因子β1（TGF-β1）可以促进肌肉细胞分化，再生成长因子可以促进软骨细胞分化。

同时，传统的化学状态、微环境、形态学、器官对干细胞的诱导方式也能影响干细胞的分化方向。

（二）干细胞分化状态的检测为确定干细胞的分化状态，研究人员采用了很多技术和方法，如单细胞分析和成像技术、流式细胞仪、PCR、酶活性测试、细胞或待分化细胞的免疫组织化学检测等。

三、干细胞定向诱导干细胞定向诱导是指使用化学物质、生物学等外部因素来诱导干细胞向特定细胞类型分化的过程。

目前主要的方法有：（一）化学诱导：在细胞培养的过程中加入特定的诱导因子，可促进干细胞分化。

骨髓基质细胞分离培养、体外向神经细胞诱导分化及其在中枢神经系统疾病中的研究进展

ｌ
流式细胞仪分离法
此法是以荧光抗体与细
胞表面标志物结合，然后用流式细胞仪进行分选。该方法的优点是分离迅速、纯度高，但仪器昂贵，费用较高，且含量太低的痕量细胞难以分离，要获得无菌的细胞制剂较麻烦，分选步骤复杂，流程较长，对细胞损伤大，而且不能处理大量样品，故主要用于细胞鉴定ｕＪ。１．４磁珠分选法此法是将抗体或抗原结合在磁珠上，磁珠上抗体或抗原与特异性抗原或抗体结合后，形成抗原一抗体磁珠免疫复合物，这种复合物在磁力作用下发生力学移动，从而达到分离特异性抗原或抗体的目的。例如，兰玲等＂３依次向ＢＭＳＣｓ悬液中加入ＦＩＴＣ标记的小鼠抗大鼠８２ｍ单克隆抗体、ＦＩＴＣ分选试剂和微粒磁珠，然后将其置于磁性分离器内１０ｍｉｎ，回收上清获得８２ｍ一细胞。该方法可以处理大最的细胞样品，因此在临床和基础研究中有较好的应用前景，但价格昂贵、操作复杂，且易造成污染。目前贴壁筛选法因其操作简单、步骤少、污染机会小，而被认为是分离培养ＢＭＳＣｓ的基本方法。
。【项目基金】深圳市科技局【收稿日期】２００９１０２８。【通讯作者】易黎。Ｔｅｌ：８６—７５５—８３９２３３３３—５７２５。Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｉｌｉｔｊ
＠ｈｏｔｍａｉｌ．ＣＯｒｎ。
ＢＭＳＣｓ的鉴定为了使来自不同实验室的相关研究结果具有一
定的可比性，国际细胞治疗学会问充质及组织干细胞委员会提出了鉴定人来源ＭＳＣｓ的３条最低标准¨Ｊ：①在标准培养条件下，ＭＳＣｓ必须具备对塑料底物的贴附性；②通过流式细胞术检测，ＭＳＣｓ群体表达ＣＤｌ０５、ＣＤ７３及ＣＤ９０阳性率≥９５％，而ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤｌ４或ＣＤｌｌｂ、ＣＤ７９ａ或ＣＤｌ９、
血管密度增大，神经功能也相应得到改善。以上试
综合以上研究推测ＢＭＳＣｓ能分化为神经样细胞，而这种分化会随着诱导方案的变化『ｆｉｉ产生不同的分化结果。化学诱导剂的可靠性与安全性有待进一步研究，而细胞因子、中药、无血清培养液及与神经细胞共培养这几种诱导方法均能成功地将ＢＭ— ＳＣｓ诱导成神经样细胞。Ｙａｎｇ等［１ｕ甚至用ｂ—ＦＧＦ将ＢＭＳＣｓ诱导成具备特征性电生理特性的神经元样细胞，而在与神经细胞共培养过程中很町能存在细胞融合现象。这些诱导而来的神经元样细胞是否具备神经元功能及是否具有释放神经递质的能力还不清楚。基因调控是细胞分化的核心问题，而ＢＭ— ＳＣｓ体外诱导成神经细胞的具体基因调控机制仍需进一步研究。

脊髓发展的原理

脊髓发展的原理脊髓是人体中重要的神经器官之一，它起着传递神经信号和调节机体活动的重要作用。

脊髓发育的原理是一个复杂的过程，涉及多个遗传和环境因素的相互作用。

首先，脊髓的发育始于胚胎早期的神经管形成阶段，也就是在胎儿发育的第三周到第六周。

在这个阶段，胚胎的神经管开始分化为三个部分：前脑、中脑和后脑。

脊髓随后发展自胚胎的后脑。

脊髓的进一步发展涉及两个重要的过程：神经细胞增生（proliferation）和神经细胞迁移（migration）。

神经细胞增生是指神经干细胞分裂并产生新的神经细胞的过程。

这个过程可以通过几个关键的细胞信号传导通路调控，如双子星基因（Sonic hedgehog）、白细胞介素11（IL-11）和鸟苷酸环化酶（cyclic nucleotide phosphodiesterase）等。

这些信号分子在胚胎发育中发挥重要的作用，促进神经细胞增殖和分化。

神经细胞迁移是指新形成的神经细胞沿着脊髓的背侧移动到适当的位置。

这个过程中，胚胎细胞需要感应到环境中的化学物质梯度，并通过呈现运动（amoeboid movement）的方式移动。

这个过程中的细胞-细胞相互作用和细胞外基质分子（如胶原蛋白）的参与非常重要。

细胞表面的黏附分子可以通过与细胞外基质相互作用来调节细胞的迁移方向和速度。

脊髓的最终形态和功能需要通过大量的神经元的生成和突触的形成来实现。

神经元的形成主要发生在胚胎发育的早期阶段，随着神经细胞的增殖和分化。

然后，神经元通过轴突生长和化学分子信号的导向，形成复杂的突触网络。

突触的形成是基于突触前神经元和突触后神经元之间的相互识别和接触，以及神经元间的相互作用。

脊髓的发育过程还涉及神经元轴突的路径选择和导向。

轴突导向被认为是通过分子引导机制实现的，其中一些关键的分子信号参与其中，如Chemoattractants 和Chemorepellants。

这些分子信号引导神经元的轴突生长，使其正确投射到特定的脊髓区域和靶神经元的区域。

人骨髓间充质干细胞诱导分化为RPE样细胞的探讨

可直接应用于移植的视网膜干细胞非常有限，组织工程学的兴起为外源性视网膜干细胞的产生带来了新的希望，骨髓间充质干细胞（BMSCs）是至今研究最值得关注的成体干细胞，骨髓间充质干细胞是来源于中胚层的多能成体干细胞，大量的实验证实体外不同的微环境对 BMSCs 具有不同的诱导分化效果。BMSCs 不仅能向中胚层的成骨细胞等分化，而且能跨胚层分化，如向内胚层的肝细胞样细胞以及外胚层的神经干细胞样细胞等分化。本实验探索诱导 BMSCs 向视网膜色素上皮细胞定向分化的微环境, 现将研究结果报告如下。
1 材料与方法
1. 1 材料 DMEM-LG 培养基、胰蛋白酶、胎牛血清（Hyclone, USA）；
bFGF、EGF、BDNF、PEDF(Peprotech,US A)；Taurine（Sigm a,US A）；淋巴细胞分离液（天津市灏洋生物制品科技有限责任公司）；小鼠抗人巢蛋白单克隆抗体、小鼠抗人角蛋白 8＆18 单克隆抗体、小鼠抗人 RPE65 单克隆抗体（NeoMarkers，USA）；流式细胞术试剂小鼠抗人单抗 CD34-FITC+小鼠抗人 CD90-PE，小鼠抗人单抗 CD34-FITC+小鼠抗人 CD44-PE（Beckman-Coulter， USA）, RT-PCR 试剂盒（Fermentas，USA），transwell 双层共培养系统（Corning，US A）。 1. 2 方法 1.2.1 骨髓的采集、BMSCs 的分离与培养
RPE65 蛋白检测：收集细胞爬片进行 RPE65 蛋白的免疫细胞化学检测：PBS 洗涤，4%多聚甲醛固定，5%正常羊血清封闭，加入小鼠抗人 RPE65 蛋白单克隆抗体（稀释度为 1： 100），4℃过夜，滴加聚合物辅助剂及生物素化山羊抗小鼠 IgG， DAB 显色及苏木素复染，自来水洗涤后干燥，树脂封片，显微镜下观察，拍照。 1.2.5 诱导分化

骨髓基质干细胞向心肌细胞分化的研究进展

ＭａｒｒｏｗＳｔｒｏｍａｌＳｔｅｍ
ＣｅｌｌｓｉｎｔｏＣａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓａｎｄＩｔｓＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ＧＵＡＮＣｈｕｎ—ｙａｎ，ＧＡＯＨａｎｇ
（Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＴｈｅＦｉｒｓｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆＬｉａｏｎｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｊｉｎｚｈｏｕ中图分类号：Ｑ２１
物¨２ｔ１”。５－Ａｚａ为一抗肿瘤药物，早在１９８５年就有人
ｃｅｌｌｓ，ＨＳＣｓ）和ＢＭＳＣｓ，前者可分
化成所有类型的造血细胞旧Ｊ，后者则是一类非造血细胞的多能干细胞，属成体干细胞，可贴壁生长，形态类似成纤维细胞。近年发现，ＢＭＳＣｓ不仅具有体外高度扩增、多向分化潜能，还可被移植和抑制移植物抗宿主病等特性，所以又被称为骨髓间质干细胞。
ｃｅｌｌｓｉｎｔｏｎａｔｉｖｅ
ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｆｉｂｅｒｓ・ａｎａｔｏｍｉｃ
ｆｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＴｈｏｒａｃ
５９０．
Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅ
Ｓｕｒｇ，２００２，１２４（３）：５８４－
［１５］Ｂｅｌｔｒａｍｉ
ｔｅｎｔ
ＡＰ，ＢａｒｈｅｅｈｉＬ，ＴｏｒｅｌｌａＤ。ｅｔａ１．Ａｄｕｌｔｃａｒｄｉａｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ
增后的细胞能保持原有细胞正常的核型和端粒酶活性。虽然ＢＭＳＣｓ约有２０％的细胞处于静止Ｇ０期，但其足以维持增殖分化，满足移植需要。ＢＭＳＣｓ不仅有一定的自我更新能力，可分化为骨、软骨和脂肪等多种
类型的基质细胞０７１，在一定外界环境条件下还能实现跨系统分化（ｔｒａｎｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）。大量实验表明，ＢＭ—

神经干细胞的分化和应用

神经干细胞的分化和应用神经干细胞是一类能够自我更新并且有分化为神经元和神经胶质细胞的细胞。

这种细胞在神经系统的发育、维持和再生中发挥着极其重要的作用。

本文将介绍神经干细胞的分化和应用。

一、神经干细胞的分化神经干细胞的分化可以分为两个方向：一个是向神经元分化，另一个是向神经胶质细胞分化。

1.1 神经干细胞向神经元分化的过程在神经干细胞向神经元分化的过程中，细胞首先经历原始神经前体细胞（NPP）的分化过程，然后再定向分化为特定类型的神经元。

这个过程的关键在于NPP的分化和神经元的定向分化。

NPP的分化是由于某些基因的特异转录，而这个过程需要与其他转录因子和细胞外基质相互作用。

神经元的定向分化则需要受到合适的环境刺激，并且有合适的细胞因子和信号通路参与。

1.2 神经干细胞向神经胶质细胞分化的过程神经干细胞向神经胶质细胞分化的过程可能比向神经元分化的过程更为复杂。

这是因为神经胶质细胞种类繁多，包括了星形胶质细胞、少突胶质细胞、大星形胶质细胞、微胶质细胞等多种类型，每种类型的细胞都有不同的功能和形态特征。

神经干细胞向神经胶质细胞分化的调节机制仍然需要进一步研究。

但是，一些研究表明神经干细胞的分化受到细胞因子和转录因子的调节，同样需要合适的环境刺激和信号通路。

二、神经干细胞的应用神经干细胞可以应用于多种疾病的治疗，例如：2.1 神经退行性疾病的治疗神经干细胞可以通过移植的方式为神经系统提供新的神经元和胶质细胞，帮助受损的神经系统或者退化的神经元恢复功能。

这项治疗方法已经在多个疾病中得到了应用，例如帕金森病、阿尔茨海默病等。

2.2 脊髓损伤的治疗神经干细胞可以应用于脊髓损伤的治疗。

在脊髓受损后，神经干细胞可以通过重塑脊髓的神经回路，促进感觉和运动细胞联结的再生。

2.3 眼科疾病的治疗神经干细胞移植可以促进视网膜和玻璃体的再生和修复，并提高视力。

这种治疗方法可以应用于多种视网膜疾病，例如压迫性视神经病变、黄斑变性等。

骨髓基质细胞向神经细胞分化研究进展

应该更有针对性，效果应该更好。②通常认为，分化程度
形变化。此外，过多的细胞刺激，比如二乙烯四乙酸二钠（ＤＡ）细胞松弛素Ｄ也能刺激ＢＣ引起类似变化。Ｅ１、ＭＳ虽然在这些实验中经免疫染色观察到经典的神经细胞标
志物ＮｅＮ、Ｆ２０水平有所提高，ｕＮ－０但其位于细胞内，蛋白表达水平的提高不能通过逆转录聚合酶链反应（ＴＲ－
术。该文就化合物诱导及潜在问题、白及基因转染问题、髓基质细胞与神经细胞共培养等研究作一蛋骨
经细胞；导分化神诱
骨髓基质细胞（ｏｅｍｒｗｔｍａｃｌＢＣ是ｂｎａｒｓｏｌｅ，ＭＳ）ｏｒｌ
细胞的变化现象，而不是细胞分化，首先从外形变化看没
近年来研究得很热门的一种细胞，它容易从自体获得，既
避免了免疫排斥反应，又不会引起伦理道德问题。ＢＣＭＳ
有见到轴突生长锥，细胞死亡率却很高；更重要的是这种
外形变化发生在数小时内，ＢＣ分化成中胚层来源而ＭＳ的细胞需要数天时间。还有研究认为这些细胞的变化是因为细胞皱缩所致，于细胞骨架肌动蛋白破坏引起的源焦点粘附（ｃｌｏｔｃ的丧失。用低ｐｆａｃｎａｔｏ）Ｈ值或高盐液体处理ＢＣ可以引起类似的细胞外形变化［。其他细胞ＭＳ４］如成纤维细胞，Ｂ／ＭＳ用ＨＡＤＯ处理后可见到类似的外
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国际骨科学杂志２０年５第２卷第３０７月８期Ｉ９ｔ！ｎｒ

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展

３７８陕西中医２０１０年第３１卷第３期药杂志，２００４，３２（３）：１８０—１８２，［７３金静愉，郁仁存．乳腺癌中西医结合诊治方案口］．中国肿瘤，１９９５，４（５）：７－１０。

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神经细胞的增殖和分化研究

神经细胞的增殖和分化研究神经系统是人体中非常重要的一部分，它包括了大脑、脊髓、周围神经等组织，控制着人体的各种生理功能。

而神经细胞则是构成神经系统的基本单位，能够传递神经冲动，实现信息的传递和处理。

然而，由于神经细胞的数量和位置对人体的正常运作至关重要，因此人们已经开始研究神经细胞的增殖和分化，以期更好地了解神经系统的构成和功能。

神经细胞是一种非常特殊的细胞，它具有高度的可塑性，可以通过增殖和分化来不断更新和补充神经系统的组织。

尽管神经细胞在大脑和脊髓中的增殖速度相对缓慢，在其他区域，如嗅球和迷路中，神经细胞的增殖速度则比较快。

研究表明，神经细胞的增殖和分化与神经系统的发育和修复密切相关。

目前，研究神经细胞增殖和分化的方法主要包括以下几个方面：1. 经典的卵壳膜移植法：这种方法主要是通过卵壳膜的移植来诱导神经干细胞分化为神经元。

由于卵壳膜中包含了一些细胞外基质和生长因子，可以帮助神经干细胞转化为神经元，因此这一方法被广泛应用于神经细胞的分化研究。

2. 体外培养法：这种方法主要是将神经干细胞或神经前体细胞在适当的条件下进行培养，使其分化为神经元。

由于体外培养可以控制细胞的条件和环境，因此可以得到较为纯净的神经元群体，从而更好地研究神经细胞的生理和病理过程。

3. 基因编辑技术：这种技术主要是通过基因编辑的方式，改变神经细胞的基因组和表观遗传学特征，从而影响其增殖和分化。

例如，可以针对某些关键基因进行编辑，促进神经干细胞向神经元分化，或者抑制神经干细胞的转化为非神经元细胞。

在研究神经细胞增殖和分化的过程中，科学家们发现了一些重要结论。

首先，神经细胞的增殖和分化与神经干细胞的存在和起始状态密切相关。

在神经干细胞的存在下，神经细胞能够源源不断地增殖和分化，并不断刷新神经系统的组织。

此外，神经干细胞向神经元分化的过程并不是一帆风顺的。

它需要通过各种调节因子和信号通路的作用，进行严格的调控和协调。

因此，如果在神经干细胞分化的过程中出现异常，就会导致神经元数量减少或功能异常，甚至导致神经系统疾病。

骨髓基质细胞治疗颅脑外伤的研究进展

蚌埠医学院学报２１００年３月第３卷第３５期
［文章编号］１０ —２０２１）３０１－３００２０（０００－３３０
・
３１３
综
述・
骨髓基质细胞治疗颅脑外伤的研究进展
王永志综述，冯东福审校
［键词】脑损伤；细胞；植；述关骨移综
的需要。因此，研究ＢＣ的体外培养、增及纯化具有重ＭＳｓ扩要意义。目前ＢＳｓ纯化大多通过密度梯度离心法提取ＭＣ的单核细胞层后，进行贴壁培养，方法可减少造血细胞混再此
干细胞的中枢神经系统损伤修复是近年神经科学研究的热点，使用胚胎干细胞、经干细胞移植治疗颅脑外伤也神取得一定进展¨ 。但由于其潜在的致瘤危险及伦理学限制，］
目前尚不能广泛应用于临床治疗。近年来发现骨髓基质细胞（ｏｅｍｒｗｓｏａｃｌ，ＭＳｓ也具有干细胞特征，ｂｎａｒｒｍｌｅｌＢＣ）ｏｔｓ具
学染色法发现移植的ＢＣ可通过血脑屏障向损伤的脑实ＭＳｓ
质迁移，表达神经元标志物，Ｎｕ和ＭＰ２ＧＡ、并如ｅＮＡ－、ＦＰ少突胶质细胞标志物ＣＰｓ小神经胶质细胞标志物Ｏ－Ｎａｅ及Ｘ
杂，获得的ＢＣ纯度较高。ＭＳｓ
［中国图书资料分类法分类号］Ｒ６１１；２．４５．５Ｒ３９２

骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展

难广泛应用于临床。因此，ＢＣ可能成为细胞移ＭＳｓ植和基因治疗的理想材料，于Ｃ用ＮＳ疾病的治疗。
现将ＢＣＭＳｓ的生物学特性及诱导分化为神经元的研究进展综述如下。１。ＣＢＭＳｓ的生物学特性
患者的生活质量，其功能的修复始终是神经学科领域研究的热点。ＣＮＳ疾病是临床上治疗的难题，物药仅是对症治疗。已有研究表明哺乳动物脑内存引，
在能增殖分化的内源性神经干细胞（ｅｒｌｓｅｎｕａｔｍｃｌ，Ｃ）但数量很少，自身修复的能力极为有ｅｌＮＳｓ，ｓ其限。因此，移植外源性干细胞重塑神经组织是治疗中
面标记物，于分离ＢＣ用ＭＳｓ的方法是在Ｆｉｄｎｒｅ— ｅｓｅ方法上改进的．ｔｉ］ｎ主要有四种：密度梯度离心 ① 法：根据ＢＣＭＳｓ与其它细胞密度不同，采用离心法
将其分离出来。② 贴壁筛选法：据ＢＣｓ塑料根ＭＳ在培养瓶中贴壁生长，而血细胞悬浮生长的特性对其筛选。③流式细胞仪分选法：据ＢＣ根ＭＳｓ体积小，相对缺少颗粒的特性对其筛选。④ 免疫磁珠分选法：根据ＢＣ的某些细胞表面标记进行分选。ＭＳｓ培养ＢＣ时所选用的培养基不尽相同，常ＭＳｓ最用的是ＤＭＭ（ｕｂｃ ’ ｄｆｄｅｇｅＳｍｅｉＤｌｃｏＳｍｏｉｅａｌ’ ｄ— ｉ

骨髓间充质干细胞诱导分化视网膜神经样细胞的研究进展

骨髓间充质干细胞诱导分化视网膜神经样细胞的研究进展骨髓间充质干细胞诱导分化视网膜神经样细胞的研究进展1.福建医科大学第一临床医学院2.福建卫生职业技术学院王珊珊1.2徐国兴1视网膜色素变性及老年性黄斑变性是严重威胁视力的疾病，目前临床上缺乏有效的治疗方法。

骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)有跨胚层分化能力，在一定的条件下可以向神经细胞分化。

大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成为视网膜色素细胞的研究为此类疾病的治疗带来了希望，成为近年来该领域的研究热点。

本文对近年来不同培养条件对大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化的影响以及视网膜前体细胞眼内移植的进展综述如下。

1B M SCs体外诱导实验BMSCs向某一特定细胞的分化，必须依靠相应微环境所提供的各种营养因子来完成。

原始视网膜发育的微环境是最适宜的微环境，这种微环境提供了BMSCs定向诱导分化所具备的各种生长因子以及营养成分。

人工诱导分化干细胞的方法，就是对这种微环境的模拟。

模拟的准确性越高，分化效率也就越高。

1.1单用诱导介质1.1.1碱性成纤维细胞生长因子(bFG F)：碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)诱导方法是诱导BMSCs向神经元方向分化的经典方法，其优点是可以获得较多的神经元样细胞，分化的阳性率为78%。

刘东宁等[1]用bFGF诱导后结果与Woodbury一致。

用bFGF诱导后细胞GFAP表达阴性，认为主要是向成熟神经元方向分化，而不是神经胶质细胞。

诱导后从形态学上在细胞间建立了突触联系，但诱导后细胞难以长期存活，需联合其他神经营养因子进行维持培养，才利于长期存活。

在培养中，刘东宁等用含10ng/mL bFGF进行接触性的诱导，有报道是用20ng/mL bFGF进行接触性的诱导。

1.1.2乳鼠视网膜细胞：采用新出生1~3天的乳鼠视网膜细胞作为诱导剂。

骨髓基质细胞移植治疗神经系统损伤现实价值及机制

② 体外培养能快速扩增；免疫耐受；能够与宿主大脑 ③ ④
或与其他细胞联合输入等不同方式。实践中采取何种方式，应当因地制宜作取舍。
１２ＢＣ移植途经、．ＭＳ移植时间和移植量
细胞移植中最直接的方法是局部定位移植，把即干细胞通过注射方式直接导入损伤局部，情况注射于视
在动物实验中，人们通常取实验动物胫骨和股骨骨髓腔中的骨髓组织并置于细胞培养基进行原代培养，以获得ＢＣＭＳ。分离ＢＣ主要通过３方法ｌ：密度ＭＳ种＿ ① ３一梯度离心法。根据ＢＣ与其他细胞的密度不同，ＭＳ采用ＰｒＪｅ。１ｃ分离液将其分离出来。②贴壁筛选法。根据ＢＭ—
国际骨科学杂志２８年９月第２卷第５期Ｉｔ）ｔｏ，１１！！ ∞ ９ｎｒｈｐｓ１Ｊ（！
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骨髓基质细胞移植治疗神经系统损伤现实价值及机制
邵明毕郑钢
摘要
赵吉成
具有多向分化潜能的骨髓基质细胞（ＢＭＳ在脑神经领域的研究较为深入，可分化为神经Ｃ）其
理、律方面的约束）比。ＭＳ法相ＢＣ在组织工程和细胞治疗
分离。③流式细胞仪分选法。根据ＢＣ细胞体积小，ＭＳ相对缺少颗粒的特性，它进行分选。将ＢＣ应用于对ＭＳ

骨髓基质细胞治疗颅脑外伤的研究进展

［文章编号】１０００－２２００（２０１０）０３－０３１３－０３骨髓基质细胞治疗颅脑外伤的研究进展王永志１综述，冯东福２审校［关键词］脑损伤；骨细胞；移植；综述［中国图书资料分类法分类号］Ｒ６５１．１５；Ｒ３２９．２４［文献标识码］Ａ干细胞的中枢神经系统损伤修复是近年神经科学研究的热点，使用胚胎干细胞、神经干细胞移植治疗颅脑外伤也取得一定进展…。

但由于其潜在的致瘤危险及伦理学限制，目前尚不能广泛应用于临床治疗。

近年来发现骨髓基质细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）也具有干细胞特征，具有强大的增殖能力及多向分化的潜能，可分化为成骨细胞。

２』、成软骨细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、肝细胞【３“１等间充质细胞，在多种因子的诱导下可分化为神经元及神经胶质细胞，可作为颅脑损伤修复的种子细胞‘“。

与其它类型的干细胞相比，ＢＭＳＣｓ具有如下优势：（１）取材方便，无伦理制约；（２）可以自体移植，避免了免疫排斥反应；（３）培养增殖速度较快，可短期内大量增殖；（４）可促进胚胎干细胞和神经干细胞的增殖并向神经元分化。

因此，ＢＭＳＣｓ可作为一种理想的组织工程细胞，为中枢神经系统损伤修复治疗带来新的希望。

１ＢＭＳＣｓ的培养及生物学特性人的ＢＭＳＣｓ多通过骨髓穿刺获得，其含量约占有核细胞的０．００１％～０．０１％，如此少的ＢＭＳＣｓ很难满足移植治疗的需要。

因此，研究ＢＭＳＣｓ的体外培养、扩增及纯化具有重要意义。

目前ＢＭＳＣｓ的纯化大多通过密度梯度离心法提取单核细胞层后，再进行贴壁培养，此方法可减少造血细胞混杂，获得的ＢＭＳＣｓ纯度较高妯ｊ。

强大的增殖能力和多向分化潜能是ＢＭＳＣｓ重要的生物学特性，Ｃｏｌｔｅｒ等＿１以低密度（１．５—３个／ｃｍ２）ＢＭＳＣｓ种植发现其增殖速度较快，１０天可增加２０００倍，６周可达１０９倍。

体外培养的ＢＭＳＣｓ多呈扁平、梭形和小圆形三种形态，且反复增殖后仍可保持正常表型及端粒酶活性哺】。

骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤机制的研究进展

ＣｉｓＪｕｎｌｆｅａｉｔｔｎＭｅｉｎ，Ｏｔ２１，Ｖ１６Ｎ．ｈｎｅｏｒａＲｈｂｉｉｄｃｅｃ０１ｏ２，ｏ１ｅｏｌａｏｉ．．０
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综述・
骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤机制的研究进展
方波马虹脊髓损伤（ｐｎｌｃｒｎｕｙＳＩ是一种严重威胁人类ｓｉａｏｄｉｊｒ，Ｃ）健康及生存质量的疾病。引起脊髓损伤的原因包括脊柱损伤、脊椎退变及脊髓缺血等，中以脊柱损伤最为常见。然其而，目前对脊髓损伤的治疗手段非常有限，尚没有取得代医学研究的一个热点。干细胞作为各种成熟细胞的前体细胞，不仅具有分化能力，还可以在体外方便的扩增自身数量，成为细胞移植的理想材料。目前的干细胞移植主要集中在：胚胎干细胞、神经干细胞、脐带血干
细胞和骨髓基质干细胞。
ＧＡ表达显著增加，ＦＰ而且２％一３％的ＭＳｓ０ＯＣ与神经元融合
表现出阳性ＰＨ一６Ｋ２。这些研究结果提示ＭＳｓ植到ＳＩＣ移Ｃ
ＭＣ注射到脊髓损伤后截瘫１Ｓｓ周的大鼠脊髓内，发现ＭＣＳｓ
形成束并且桥接损伤中心，促进脊髓组织再生和功能恢复。该研究提示ＭＳｓＣ在受损部位的有益作用不仅是分化为再生
养ＭＣ可表现出类似神经元的电生理功能Ｓｓ。但仍存在争
议，ｏｓｔｒ７Ｈｆｅｅ等１ｔｔ］研究表明，内移植ＭＳｓ体Ｃ后虽然能表达神经元表型，是这些细胞缺乏产生动作电位的电压门控通但道。研究表明ＭＳｓＣ移植后与宿主细胞（包括神经元）融合，获得它们的表现型，模拟分化为宿主细胞。近年来分子研究也证实ＭＳｓＣ受外界刺激影响，改变基因表达谱，经细神

干细胞移植在治疗外周神经损伤中的研究进展

干细胞移植在治疗外周神经损伤中的研究进展张金才;温树正;景尚斐;张国荣;韩旭;许鹏程;郭文;韩超前【期刊名称】《实用手外科杂志》【年(卷),期】2018(032)001【总页数】4页(P82-85)【关键词】感觉神经;拇指;指固有动脉;穿支皮瓣【作者】张金才;温树正;景尚斐;张国荣;韩旭;许鹏程;郭文;韩超前【作者单位】内蒙古医科大学,内蒙古自治区呼和浩特 010059;内蒙古医科大学第二附属医院手足显微外科,内蒙古自治区呼和浩特 010030;内蒙古医科大学第二附属医院手足显微外科,内蒙古自治区呼和浩特 010030;内蒙古医科大学,内蒙古自治区呼和浩特 010059;内蒙古医科大学,内蒙古自治区呼和浩特 010059;内蒙古医科大学,内蒙古自治区呼和浩特 010059;内蒙古医科大学,内蒙古自治区呼和浩特010059;内蒙古医科大学第二附属医院手足显微外科,内蒙古自治区呼和浩特010030【正文语种】中文周围神经损伤（peripheral nerve injury,PNI）一直以来是国内外专家学者研究的热点，其修复过程是一个相当复杂的过程，受多种因素影响。

近年来，随着科学技术的快速发展和研究的日臻深入，PNI修复方法越来越丰富多样，修复手段日益完善，各类方法对于修复神经结构上的连续性较为肯定，但功能的恢复往往并不尽人意，同时也都存在其自身局限性。

干细胞移植作为PNI修复的替代疗法，为PNI的治疗提供一个新的策略。

本文围绕近年来关于PNI修复的干细胞移植技术最新进展作一综述。

周围神经损伤是指原发或继发于周围神经系统的病变，其中以创伤最为常见。

创伤常直接导致神经的连续性中断甚至大段缺损等继而导致支配区域产生一系列相应功能障碍表现。

PNI的现有治疗手段是多种多样的，如：外科修复，在PNI中神经缝合术适用于无神经缺损或两断端的缺口相对很小的PNI，尽管显微外科技术不断发展提高，优质的、兼容性更好的缝线越来越多，但因神经自身结构的复杂性，神经端对端的缝合只能是修复其宏观结构的连续性，尚不能取得令人满意的功能恢复[1]。