3种活血化瘀药对实验性血瘀证模型大鼠作用的比较研究

3种活血化瘀药对实验性血瘀证模型大鼠作用的比较研究
李伦;刘琳;李传钰;赵瑛
【摘要】目的:通过对活血化瘀药活血化瘀作用的分类对比研究,探讨活血化瘀药功效级差的现代科学本质.方法:冰水浸泡加药物法建立大鼠血瘀证模型,以肠系膜微循环、体外血栓形成及血小板聚集为指标,研究3种不同功效的活血化瘀药——川芎、丹参、三棱活血化瘀作用的差异.结果:川芎、丹参、三棱均可以增加血瘀证大鼠肠
系膜微循环的毛细血管数、毛细血管交叉点的个数、微静脉的血管直径、血流速度(P＜0.05)；减少血栓湿重、干重、血栓长度、血栓指数及聚集的血小板数(P＜
0.05).其中三棱在改善血流速度,血栓干重方面作用最强(P＜0.05),三棱与丹参在改
善血小板聚集性方面作用优于川芎(P＜0.05).结论:活血化瘀药的功效级差在大鼠血瘀证模型的改善方面得以印证,在改善微循环、抑制血栓形成及血小板聚集方面,破
血逐瘀药作用最强；活血散瘀药作用次之,在抑制血栓形成,改善血小板聚集性方面,作用优于和血行血药.
【期刊名称】《中医药学报》
【年(卷),期】2011(039)006
【总页数】3页(P37-39)
【关键词】功效级差;血瘀证;川芎;丹参;三棱
【作者】李伦;刘琳;李传钰;赵瑛
【作者单位】哈尔滨商业大学药学院,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院,黑龙江哈尔滨150076;哈尔滨商
业大学药学院,黑龙江哈尔滨150076
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
根据功效对中药进行分类是较为常用的一种分类方法。

同类药在功效上存在一定的区别，如活血化瘀药就根据其作用强弱的不同，可以分为活血行气、活血散瘀、破血逐瘀药。

现代医学对按传统方法分类的中药，如活血化瘀药的药理作用研究很多，基本药理作用较清楚，但对每一类药中的药物对比研究明显不够。

因此本实验分别选取3种不同活血化瘀药的代表药，即活血行气药川芎、活血散瘀药丹参及破血
逐瘀药三棱，通过观察它们对血瘀证大鼠肠系膜微循环、体外血栓形成及血小板聚集的影响，比较这些活血化瘀药的药理作用差异，为传统中医对级差的认识提供现代实验依据。

1 材料与方法
1.1 药物和试剂
川芎为川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，丹参为丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根，三棱为黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.－Ham.的干燥块茎，以上中药各50g，均购自哈尔滨宝丰药店，经本院张德连副教授鉴定。

此三味中药分别加5倍量水，文火煎煮30min，滤去药渣，再加5倍量
水文火煎煮30min，滤去药渣，浓缩至50mL，相当于生药1g/mL。

放置于4℃
冰箱备用。

阿司匹林肠溶片:江苏平光制药有限责任公司，批号:090709。

盐酸肾上腺素注射液:天津金耀氨基酸有限公司，批号:0907231。

水合氯醛:上海化学试剂公司，批号:060707。

高锰酸钾:吉林省博大制药有限责任公司，批号090512。

台式液(NaCl8.0g， KCl0.2g， CaCl20.2g， MgCl20.2g，NaH2PO40.05g，NaHCO31.0g，葡萄糖 1.0g，加双蒸水至1L，pH7.0～7.5)。

1.2 动物
成年健康Wistar雄性大鼠(12～14周龄)48只，体重为150～200g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

合格证号:0102009。

1.3 主要仪器
BI2000医学图像分析系统和恒温彩色微循环显微仪:成都泰盟科技公司。

TM－8803型血栓形成仪:黑龙江中医药大学友情提供。

CKX41SF倒置显微镜:OLYPUS 公司。

1.4 实验分组及造模
将48只大鼠随机分为6组，每组8只，分别为川芎组(8g·kg－1·d－1)、丹参组(12g·kg－1·d－1)、三棱组(8g·kg－1·d－1)、阿司匹林肠溶片阳性对照药组(100mg·kg－1·d－1)、空白对照组(同体积生理盐水)、模型组。

各组动物按临床用药最大剂量折算，即上述剂量灌胃给药，每日2次，连续3日。

从给药第二日起，给药30min后，皮下注射盐酸肾上腺素注射液(0.05mg·kg－1)，2h 后将大鼠置于4℃冰水中 5min，2h后再次皮下注射盐酸肾上腺素注射液(0.05mg·kg－1)，连续2 日，建立血瘀证模型［1］。

实验前 12h 禁食不禁水，大鼠末次给药30min后，水合氯醛(300mg·kg－1)麻醉，进行试验。

1.5 肠系膜微循环实验方法
将末次给药后的大鼠麻醉后，仰位固定于手术台上，沿下腹正中切口，轻轻拉出一段肠袢(回盲端)的肠系膜平铺于小池中固定，37℃生理盐水保持肠系膜湿润，平衡10min后，放在10倍物镜下的固定视野内，固定肠系膜视区，在40倍物镜下观察血管直径，取3次平均值作为微血管的直径、血管数和毛细血管交叉点个数，记录固定视野内毛细血管网点数，观察微血管流态，并选取10μm以下的微血管测取微血管的流速。

通过显微图像处理系统记录大鼠肠系膜毛细血管数、毛细血管交叉点数、微动脉血管管径、微动脉血流速度等指标。

1.6 体外血栓形成实验方法
微循环实验结束后的大鼠，背部固定于手术台上，颈部剪毛，于正中线做一3～
4cm长的切口，找到并分离左侧颈动脉，由颈动脉取血1.8mL，注入硅化胶管中，将胶管两端口对齐形成环状，用硅胶套管固定，置于体外血栓仪上旋转15min，
取出血栓，测量血栓长度。

滤纸吸净血栓水分，称重，得血栓湿重。

将血栓置入烘箱，64℃烘干20min，称重，即血栓干重。

1.7 血小板聚集实验方法
将3.8%枸橼酸钠与血液按1∶9比例混均，用刻度硅化吸管取0.3～0.4mL抗凝血滴于已涂有火棉胶－氯仿液的干燥载玻片。

将血片置恒温箱中，37℃温育8min。

取出血片，用台氏液冲去红细胞、白细胞，置室温中令其风干。

将干燥的血片放入盛有过饱和高锰酸钾溶液的染色缸中，固定4min。

取出蒸馏水冲净载玻片，自然风干。

接通电源，将载玻片放在倒置显微镜下，用40倍物镜观察。

扩大型血小板聚集在一起成一团算一个，记录单位视野下血小板的数量，记录3次血小板数量
取平均值［2］。

1.8 数据统计分析
应用SPSS 16.0 For Windows统计软件中方差分析进行数据资料处理，各组间两两比较采用LSD检验。

结果均以平均值±标准差(±s)表示。

P＜0.05为有显著性差异;P＜0.01为有非常显著性差异。

2 结果
2.1 活血化瘀药对大鼠肠系膜微循环的影响
结果见表1。

结果显示，血瘀证模型组中肠系膜微循环的毛细血管、毛细血管交叉点的个数、微静脉的血管直径、血流速度均减少，提示模型建立成功。

川芎、丹参、三棱及阿司匹林可以显著增加模型组的毛细血管、毛细血管交叉点的个数、微动脉及微静脉的血管直径、血流速度。

此结果提示芎、丹参、三棱及阿司匹林可以显著
改善血瘀证模型大鼠的肠系膜微循环情况。

通过两两比较发现三棱对血流速度的影响最强(P＜0.05，P＜0.01)。

表1 活血化瘀药对大鼠肠系膜微循环的影响(±s，n=8)注:与生理盐水组比较，△P ＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与川芎组比较，☆P ＜0.05，☆☆P＜0.01;与丹参组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

组别毛细血管数/条毛细血管交叉点/个微动脉血管管径/μm微动脉血流速度/μm·s－1微静脉血管管径/μm微静脉血流速度/μm·s －1生理盐水组11.50±1.60 19.13±2.488 10.38±1.22 490.50±53.45 27.88±1.60 248.00±24.93模型组4.38±0.92△△ 7.88±2.42△△ 3.64±0.72△△ 250.50±23.90△△ 10.75±1.49△△ 46.53±7.39△△川芎组7.63±1.41* 14.375±2.56* 7.49±1.83* 370.50±32.07* 16.50±1.77＊＊148.46±10.90＊＊丹参组8.13±1.46* 14.88±1.89*8.20±0.83* 378.00±31.05* 17.5±1.60＊＊150.35±8.09＊＊三棱组7.38±1.41* 13.88±2.03* 7.81±0.91* 403.00±29.15＊☆ 16.38±1.85＊＊162.7±9.90＊＊☆☆▲▲阿司匹林组
8.50±1.31* 16.00±2.67＊＊8.18±0.77* 445.5±25.63＊＊20.75±1.28＊＊181.25±7.17＊＊
表2 活血化瘀药对体外血栓形成的影响(±s，n=8)注:与生理盐水组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与川芎组比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。

生理盐水149.81±15.58 2.70±0.58 24.16±3.93 6.27模型组864.36±48.69△△ 12.23±1.36△△ 182.64±17.60△△ 19.63△△川芎组
443.64±46.73＊＊8.85±1.87＊＊128.48±14.52＊＊ 15.76＊＊丹参组
435.68±33.50＊＊7.72±1.20＊＊107.80±11.86＊＊☆ 14.25＊＊三棱组407.76±37.72＊＊☆ 7.33±1.01＊＊☆ 105.70±11.09＊＊☆ 13.94＊＊☆阿司匹林组319.48±38.90＊＊4.89±0.62＊＊60.81±9.82＊＊ 10.24＊＊
2.2 活血化瘀药对大鼠体外血栓形成的影响
结果见表2。

结果显示，血瘀证模型组血栓湿重、干重、血栓长度及血栓指数增加非常显著。

川芎、丹参、三棱及阿司匹林可以非常显著减少模型组的血栓湿重、干重、血栓长度及血栓指数。

三棱对血栓湿重、血栓长度及血栓指数的影响强于川芎，丹参与三棱对血栓干重的影响强于川芎。

虽然如此，但仍可看出就抗血栓作用而言三棱与丹参基本相似，强于川芎。

结果提示活血化瘀药可以有效改善血瘀证的血栓形成，具有一定的抗血栓作用，其中三棱作用最为显著。

2.3 活血化瘀药对大鼠血小板聚集的影响
结果见表3。

结果显示血瘀证模型组中血小板聚集增多，川芎、丹参、三棱及阿司匹林可以减少模型组的血小板聚集。

与川芎组相比，丹参、三棱及阿司匹林降低血小板聚集的功能更显著，但丹参、三棱及阿司匹林组之间无显著性差异。

结果提示活血化瘀药可以有效改善血瘀证的血小板聚集功能，但川芎作用较丹参及三棱作用稍差。

表3 活血化瘀药对大鼠血小板聚集功能的影响(±s，n=8)注:与生理盐水组比较，
△P＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与川芎组比较，
☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。

生理盐水10.87±1.88模型组－33.83±3.38△△川芎组 8 20.00±2.41＊＊丹参组12 15.67±2.27＊＊☆三棱组8 15.17±1.95＊＊☆阿司匹林组0.1 16.38±2.50－＊＊
3 讨论
血瘀证是多种原因造成的与血液循环障碍有关的诸多疾病的总称，而形成血瘀后又可以引发多种更严重的病变，主要表现在微循环障碍、血液流变学异常及血液动力学异常［3］。

本实验采用皮下注射肾上腺素加冰水的方式建立血瘀证模型，发现模型大鼠微循环异常、血栓形成及血小板聚集加强，提示模型建立成功。

本实验研究结果发现和血行血药川芎、活血散瘀药丹参及破血逐瘀药三棱均可以改善血瘀证模型大鼠的微循环异常、抑制血栓形成及血小板聚集，与以往研究结果相
符［4－7］。

同时本实验在肯定其活血化瘀作用的同时，也反映出这些药在作用
程度上存在一定的差异。

以破血、行气、消积、止痛为主要功效的三棱在改善微循环血流速度、抑制血栓形成及血小板聚集方面作用都最为显著。

由此可以看出三棱药力峻猛，本实验结果在这方面与中医用药特点相符合。

丹参在抗血栓形成及抑制血小板聚集方面作用与三棱基本相当，而改善微循环的作用稍差。

提示活血散瘀与破血的不同在于，活血散瘀药在促进血液流动的同时也避免血行过速，因此其改善微循环的作用大大弱于三棱，而与川芎相似。

川芎在这3种药中药力最弱，造成这一个结果的原因可能有两方面。

第一，川芎
功效为行气开郁，祛风燥湿，和血止痛，根据这一功效描述我们可以看出，川芎更注重的是行气及止痛作用，而非改善微循环或是抗血栓;第二，川芎的主要成分为
阿魏酸，水煎后易分解，因此，其有效成分溶出度可能不高。

本实验为中药功效级差评定的基础研究，希望能为今后中药级差研究的工作提供一定的实验思路及依据。

参考文献:
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