gE抗体-FAMA

运用FAMA法检测人血清中抗VZV 抗体的方法学
1.实验原理：FAMA试验是以感染VZV的细胞为抗原，待检样品为一抗，荧光标记的抗人IgG为二抗，检测样品中的VZV特异性IgG抗体，形成的抗原抗体复合物主要位于感染细胞表面，在荧光显微镜下可见独特的环状膜荧光。

2.仪器设备：生物安全柜、荧光显微镜、移液器等。

3.试剂与耗材：载玻片、胰酶、胎牛血清、异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG、染色液、VZV Oka株病毒、MRC-5人二倍体细胞、人抗VZV-IgG国际标准品、甲醛溶液。

4.实验流程：
1)抗原载玻片的制备：使用VZV 感染单层MRC-5细胞，待细胞病变达50%，
用胰酶消化，将病变细胞转移至离心管中，离心计数，调整细胞密度，将感染细胞加至载玻片上，晾干后将载玻片置于甲醛溶液中固定，固定完成后用PBS洗，-20℃保存；
2)加样：将待检样品稀释后加至感染细胞抗原载玻片，放置湿盒中37℃ 1h，
用PBS浸润洗3次，晾干；
3)将FITC标记的羊抗人IgG使用染色液染色后，放置湿盒中37℃ 1h，用
PBS浸润洗3次，晾干；
4)于荧光显微镜下观察结果，细胞表面出现环状荧光判定为阳性，未出现完
整的环状荧光或仅见灰色背景判定为阴性。

抗体效价≥1:4判定样品为阳性。

运用gE FAMA法检测人血清中抗VZV gE 抗体的方法
学
1.实验原理：使用编码VZV gE的质粒转染HEK293T细胞，消化细胞后重悬，与样本进行孵育，加入带荧光标记的抗人IgG，最后加入载玻片中，检测样品中的VZV gE特异性IgG抗体，形成的抗原抗体复合物主要位于感染细胞表面，在荧光显微镜下可见独特的环状膜荧光。

2.仪器设备：生物安全柜、荧光显微镜、移液器等。

3.试剂与耗材：载玻片、胰酶、胎牛血清、荧光素标记的羊抗人IgG、染色液、VZV gE质粒、HEK293T细胞等。

4.实验流程：
1)使用编码VZV gE的质粒转染HEK293T细胞，转染24h后，用胰酶消化
细胞，重悬细胞后加入待测样本，然后与带荧光标记的抗人IgG孵育，最后细胞被清洗染色后加入到载玻片上；
2)于荧光显微镜下观察结果，细胞表面出现环状荧光判定为阳性，未出现完
整的环状荧光或仅见灰色背景判定为阴性。

抗体效价≥1:8判定样品为阳性或需要通过试验决定阈值。